姜黄素对癫痫持续状态后海马内质网应激相关分子表达的影响

目的探讨姜黄素对癫痫持续状态(SE)后海马内质网应激(ERS)标志分子免疫球蛋白结合蛋白(BiP)和ERS相关促凋亡分子如生长停滞、DNA损害可诱导基因153(GADD153)表达的影响。方法将90只SD大鼠随机分入SE组、姜黄素组和对照组。建立氯化锂-匹罗卡品大鼠SE模型。应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)动态观察SE后海马BiP和GADD153的转录状况。结果(1)与对照组相比,SE组SE后2、4、6、24h BiP mRNA表达升高(P<0.01),6 h达高峰,24 h开始下降(P<0.01),72 h恢复至正常水平;姜黄素组BiPmRNA表达的动态变化同SE组类似,但显著低于SE组(P<0.05或0.01)。(2)与对照组比,SE组SE后2、4、6、247、2 h GADD153 mRNA显著上调(P<0.01),SE后2 h达高峰,24 h开始下降(P<0.01)。姜黄素组仅于SE后2、4 h GADD153 mRNA表达明显高于对照组(P<0.01),且较SE组低(P<0.01)。结论姜黄素有可能成为在体抑制ERS的有效药物;减轻ERS、抑制GADD153表达可能是姜黄素在SE后发挥神经元保护作用的重要机制。

海马局部注射人骨髓间充质干细胞对癫痫持续状态后大鼠视空间记忆的影响

目的探讨海马局部移植人骨髓间充质干细胞(hMSC)对癫痫持续状态(SE)后大鼠视空间记忆功能的影响。方法雄性SD大鼠随机分为hMSC移植组、人成纤维细胞组、磷酸盐缓冲液(PBS)组、假手术组和正常对照组,采用氯化锂-匹罗卡品诱导SE模型。SE 3 d后通过立体定位方法分别向海马CA1区注射hMSC(1.5×107个/ml)、人成纤维细胞(1.5×107个/ml)和PBS各3μl,假手术组不进行立体定向注射。2周后部分大鼠行灌流取脑组织,MAB1281免疫组化染色观察示踪细胞。剩余大鼠在4周后进行水迷宫实验。结果免疫组化染色显示仅在hMSC移植组见到CA1区有染棕黄色的细胞,而人成纤维细胞组、PBS组和假手术组均未见到染色阳性细胞。水迷宫试验显示hMSC移植组的逃逸潜伏期短于人成纤维细胞组和PBS组,仅略长于假手术组,虽与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),但除正常对照组以外,其余4组组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论hMSC可在SE大鼠海马CA1区局部存活,移植后4周未发现hMSC能明显改善SE大鼠的视空间记忆功能。

白藜芦醇调控癫痫持续状态大鼠海马内源性巯醇抗氧化剂(酶)的作用

目的探讨白藜芦醇(Res)在氯化锂联合重复低剂量匹罗卡品诱导癫痫持续状态大鼠模型中的抗氧化作用及其机制。方法 54只SD大鼠随机分为3组:对照组、癫痫模型组和Res治疗组,采用氯化锂联合重复低剂量匹罗卡品腹腔注射制备癫痫持续状态大鼠模型,Res治疗组同时给予白藜芦醇预防性治疗。对大鼠按痫性分级标准进行行为学观测;采用化学比色法检测痫性发作90min后大鼠海马超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)含量变化;采用免疫组织化学和免疫印迹法检测痫性发作90min后大鼠海马中凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3和Bax的表达变化。结果癫痫大鼠海马SOD、GSH、GSH-PX和GR的含量较对照组显著减少,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bcl-2阳性细胞数量减少,而Caspase-3和Bax表达显著上调,Caspase-3和Bax阳性细胞数量增多。白藜芦醇预防性治疗后,大鼠痫性发作潜伏期较模型组显著延长;大脑海马中巯醇抗氧化剂(酶)SOD、GSH、GSH-PX和GR的含量明显上调;海马中抗凋亡蛋白Bcl-2表达量和Bcl-2阳性细胞数量均增加,同时促凋亡因子Caspase-3和Bax的表达被抑制,Caspase-3和Bax阳性细胞数量减少。结论白藜芦醇能通过上调癫痫模型大鼠海马内源性巯醇抗氧化剂(酶)SOD、GSH、GSH-PX和GR的含量,调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3和Bax的表达,对抗癫痫持续状态诱导的神经细胞氧化损伤,发挥神经保护作用。

发育期大鼠癫痫持续状态后海马内HIF-1α表达对Notch信号通路的影响

目的:探究发育期大鼠癫痫持续状态(SE)后海马内低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达对Notch信号通路的影响。方法:出生后21 d SD大鼠168只按随机数字表法分为对照组(NS,n=56)、模型组(SE,n=56)和干预组(2ME2,n=56)。其中SE组腹腔注射10 mg/ml戊四氮(PTZ,80 mg/kg)溶液制作癫痫持续状态模型,NS组腹腔注射等剂量生理盐水,2ME2组在癫痫持续状态模型建立后立即腹腔注射2-甲氧基雌二醇(2ME2,15 mg/kg)溶液。分别于造模成功后1、4、6、8、12 h和24 h处死大鼠取出海马组织,应用Western Blot方法检测HIF-1α、Notch-1蛋白含量;另外将各组造模成功后6 h的大鼠进行灌注并取脑,应用免疫组化染色法检测海马齿状回(DG)区HIF-1α和Notch-1的阳性细胞数。结果:HIF-1α、Notch-1蛋白在NS组均平稳表达;在SE组存在明显的表达时程和表达高峰,1 h时表达即开始增多,8 h达高峰,然后逐渐减少,且各个时间点的表达均明显高于NS组,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α被特异性抑制剂2ME2干预后,HIF-1α、Notch-1的表达均较SE组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),其中6 h时达最低值。在此时间点,SE组HIF-1α、Notch-1的阳性细胞数均明显高于NS组和2ME2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:发育期大鼠癫痫持续状态后HIF-1α可能部分参与了Notch信号通路的激活与调控。

他罗利姆对癫痫大鼠海马氧化应激、凋亡诱导因子及神经元凋亡的影响

目的研究免疫抑制剂他罗利姆(FK506)对癫痫持续状态(SE)大鼠海马组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)及线粒体膜电位、凋亡诱导因子(AIF)的影响。方法 (1)将126只Wistar大鼠随机分为癫痫组、FK506干预组、对照组各42只。建立氯化锂-匹鲁卡品癫痫模型,FK506干预组在注射匹鲁卡品之前24、1 h 2次腹腔注射FK506,采用比色法和羟胺法分别检测海马组织中NO、MDA含量、NOS活性;采用免疫组化法检测海马组织神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达;尼氏染色观察神经元形态变化。(2)24只Wistar大鼠随机分为癫痫组、FK506干预组、生理盐水干预组、对照组,每组6只。FK506干预组在注射匹鲁卡品之前24 h、1 h 2次腹腔注射FK506,生理盐水干预组注射等体积生理盐水;于癫痫发作24 h后处死,应用流式细胞仪测定线粒体内罗丹明123的荧光强度和线粒体的大小;Western印迹检测大鼠海马线粒体和细胞核AIF的水平。结果与癫痫组相比,FK506干预组NO、MDA含量、NOS活性明显降低(P均<0.01);海马nNOS、iNOS的表达降低(P<0.01);线粒体膜电位升高(P<0.05);海马线粒体AIF水平显著增高,而细胞核AIF水平显著降低(P均<0.05);海马存活神经元增加。结论 FK506可能通过抑制NO引起的氧化应激损伤,稳定线粒体膜电位,抑制AIF的易位,发挥脑保护作用。

核转录因子-κB/低氧诱导因子-1α通路活化对癫痫持续状态大鼠海马神经元损伤的影响

目的 观察核转录因子-κB p65（NF-κB p65）和低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在癫痫持续状态（status epilepticus,SE）大鼠海马神经元损伤中的作用,探讨NF-κB p65对HIF-1α的调控作用.方法 选择110只成年雄性SD大鼠,随机数字表法分成7组：生理盐水对照组15只、假手术组15只、SE模型组20只、NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）组15只、SE＋ PDTC干预组（SE ＋PDTC）15只、SE＋ HIF-1α siRNA侧脑室注射干预组（SE＋ HIF-1α siRNA）15只、SE＋对照siRNA侧脑室注射假性干预组（SE＋对照siRNA）15只.采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射法制作SE模型,观察大鼠癫痫发作情况,造模后24 h采用蛋白免疫印迹分析检测海马中NF-κB p65和HIF-1α的表达水平;采用Fluoro-Jade C（FJC）染色法检测海马退行性变神经元.结果 SE后24 h,海马NF-κB p65和HIF-1α核蛋白含量（0.57 ±0.06、0.47 ±0.07）比对照组（0.23 ±0.03、0.20 ±0.03）增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;PDTC干预后,海马核蛋白NF-κB p65和HIF-1α含量（0.23 ±0.03、0.14 ±0.03）比SE组降低,CA1区FJC阳性细胞（28.33±5.03）比SE组（76.67±13.32）也减少,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;SE大鼠侧脑室注射HIF-1αsiRNA后,海马HIF-1α全蛋白含量（0.22±0.03）比SE组（0.39±0.06）降低,CA1区FJC阳性细胞（27.34±7.02）比SE组（76.67±13.32）也减少,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 癫痫持续发作可导致脑内NF-κB/HIF-1α通路活化,抑制NF-κB/HIF-1α通路的活化能减轻SE所致的海马神经元损伤,具有脑保护作用.

戊四氮诱导发育鼠癫痫持续状态后海马区HIF-1α的表达及其与神经干细胞增殖的关系

目的研究低氧诱导因子-1α（HIF-1α及nestin蛋白在戊四氮（PTZ）诱导发育期大鼠癫痫持续状态（SE）后海马区的表达变化，探讨HIF-1α与神经干细胞州SCs）增殖的关系。方法出生后7、14、21、28dSD大鼠各192只，按随机数字表法分为模型组（96只）和对照组（96只），腹腔注射10g／L戊四氮（PTZ）溶液制作SE模型，对照组注射等剂量生理盐水，造模后6h、12h、1d、2d、3d、7d采用RT．PCR、免疫组化分别检测各组大鼠海马区HIF．1dmRNA和蛋白的表达：出生后21d大鼠48只按随机数字表法分为模型组（24只）和干预组（24只），其中干预组大鼠右侧海马齿状区微量注射1μL HIF-1α反义寡聚核苷酸（ASODN），左侧注射等体积生理盐水，6h后2组大鼠均造模。造模后2d采用RT．PCR检测大鼠海马区HIF-1α mRNA的表达．造模后7d、14d免疫组化检测海马区HIF-1α、nesfin的表达。结果与对照组（未检测到）比较，各日龄大鼠SE后海马区HIF．1amRNA的表达明显升高，表达趋势一致。SE后6h时HIF-1α mRNA的表达随日龄增大而下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。各日龄大鼠SE后各时间点海马区H1F-1α阳性细胞分布的部位随时间变化而不同；与模型组和干预组注射生理盐水侧比较，SE后2d干预组注射ASODN侧HIF-1α mRNA的表达明显降低，SE后7d、14d海马区nestin阳性细胞计数较少，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论发育期大鼠SE后海马区HIF-1α mRNA及其蛋白的表达增强．与日龄有关；SE后HIF-1α对NSCs增殖可能存在调控作用。

凋亡诱导因子在戊四氮致痫大鼠海马组织中的表达

目的研究凋亡诱导因子(AIF)mRNA在戊四氮(PTZ)点燃癫痫持续状态(SE)大鼠海马组织中的表达情况。方法通过腹腔注射戊四氮建立急性点燃大鼠模型,运用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)分析AIFmRNA在大鼠癫痫发作后的表达情况。结果癫痫发作后海马组织AIFmRNA的表达水平早期即出现升高(6h组与对照组相比,P<0.05),且持续较长一段时间(48h组与对照组相比,P<0.01)。结论AIF可能参与了戊四氮致痫大鼠海马神经元的凋亡过程。

姜黄素对氯化锂-匹罗卡品诱导癫癎持续状态的预防作用

目的探讨姜黄素对氯化锂-匹罗卡品诱导大鼠癫持续状态(SE)的预防作用及其神经元保护作用。方法Spra-gue-Daw ley(SD)大鼠45只随机均分成3组:预防组(n=15)、非预防组(n=15)和对照组(n=15)。观察各组SE的发生情况;SE后24 h,用焦油紫尼氏染色检查海马CA3区的存活神经元,用DNA片段原位末端标记技术(TUNEL)检查CA3区细胞程序化死亡情况。结果预防组SE发生率为66.7%,明显低于非预防组(100%)(P<0.05);预防组SE潜伏期为(41.0±18.1)m in,明显长于非预防组的(21.5±8.2)m in(P<0.01)。SE后24 h,CA3区存活神经元数量和程序化死亡细胞数量在预防组和非预防组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论预先给予姜黄素能抑制氯化锂-匹罗卡品诱导的SE,但无明显神经元保护作用,其机制和潜在的临床应用价值值得深入研究。

PI3K／Akt信号通路在发育期大鼠癫痫持续状态后海马内HIF一1α表达中的作用

目的探讨发育期大鼠癫痫持续状态后海马内低氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达与磷脂酰肌醇．3激酶（P13K1／丝氨酸一苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路之间的关系。方法21d龄SD大鼠54只按随机数字表法分为生理盐水组（n=24）、模型组（n=24）和渥曼青霉素干预组（n=6），其中模型组腹腔注射戊四氮（PTZ）诱导建立癫痫持续状态模型，生理盐水组腹腔注射等量生理盐水，渥曼青霉素干预组于癫痫持续状态模型建立前30min腹腔注射0．5mg/kg渥曼青霉素。分别于建模后1、4、8、24h处死大鼠取出海马，应用免疫组化染色检测HIF-1α、Akt阳性细胞表达，Westernblottiong检测HIF-1α、Akt及磷酸化Akt（p-Akt）蛋白含量。结果模型组海马内HIF-1α阳性细胞及蛋白于建模后lh即开始表达，4h明显升高，8h达高峰，24h后下降；Akt阳性细胞及蛋白表达在各时间点间无明显变化；P-Akt蛋白于建模后lh即明显升高，4h达高峰，8h开始下降。生理盐水组各时间点HIF—let阳性细胞及蛋白、P-Akt蛋白仅有极少量表达，其中模型组各时间点HIF-let阳性细胞及蛋白表达均明显高于生理盐水组，差异有统计学意义fP〈O．05）；Akt阳性细胞与蛋白表达与生理盐水组比较差异无统计学意义（pO．05）；建模后1、4、8hP．Akt蛋白表达明显高于生理盐水组，差异有统计学意义（氏0．05）。渥曼青霉素干预组HIF-1α、p-Akt蛋白表达于建模后4h有明显下降，与模型组比较差异均有统计学意义（p＜0．05）。结论发育期大鼠癫痫持续状态后可激活P13K／Akt信号通路，并参与调控海马内HIF—1α的表达。

发热诱导的学龄期儿童难治性癫痫性脑病急性期的脑电图监测

发热诱导的学龄期儿童难治性癫痫性脑病（fever-induced refractory epileptic encephalopathy in school-aged children,FIRES）是一类儿童期与发热感染相关的癫痫性脑病,通常表现为发热后出现癫痫持续状态.2012年8月,国内8家医院组成的协作组首次报道了13例FIRES患儿的临床特点、预后分析和随访期脑电图改变[1].本院于2011年9月、2013年2月和2013年5月在重症监护病房（intensive care unit,ICU）中完成3例FIRES患儿急性期的4次动态脑电图（ambulatory electroencephalogram,AEEG）监测并进行相关研究,现将结果,报道如下.

细胞外信号调节激酶信号通路对癫痫大鼠海马内HIF—1α表达的调控作用

目的探讨细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路是否参与调节癫痫大鼠海马内低氧诱导因子．1a（HIF．1d）的表达。方法208只21d龄SD大鼠按随机数字表法分为癫痫持续状态（SE）组（96只）、对照组（96只）和PD98059组（16只），SE组腹腔注射戊四氮（PTZ）溶液制作SE模型，对照组注射等剂量生理盐水，造模后0．5、1、1．5、6、12、24h采用RT—PCR、Westem blotting分别检测2组大鼠海马内HIF-1α、ERKl／2mRNA和蛋白的表达；PD98059组大鼠腹腔注射PD98059，10min后腹腔注射PTZ溶液制作SE模型，造模成功后1h采用RT—PCR检测大鼠海马内HIF-1α、ERK1／2mRNA的表达，造模成功后1．5h采用Western blotting检测其相应蛋白的表达。结果与对照组比较，SE组大鼠海马内HIF-1α、ERK1／2mRNA及其蛋白的表达明显升高．差异均有统计学意义（P〈0．05）；其中ERK1／2mRNA的表达高峰（1．112±0．126）在SE后1h，蛋白的表达高峰（1．127±0．155）在SE后1．5h；而HIF-1α mRNA的表达高峰f0．589±0．090）在SE后1．5h，蛋白的表达高峰（0．230±0．052）在SE后6h。与SE组相比，PD98059组大鼠海马内HIF-1α mRNA、ERK1／2mRNA和蛋白的表达均降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。SE组大鼠中，T-ERK1／2与HIF-1α mRNA的表达呈正相关（r=0．688，P=0．000）。结论戊四氮诱导发育期大鼠SE后ERK信号通路被激活，参与了海马内HIF-1α的表达调控。