广州市2018年输入性登革病毒4型全基因组序列特征分析

目的本文对广州市2018年输入性DENV-4型病毒的生物学来源进行分析,为本地登革热的防控提供科学依据并累积基线数据。方法通过传染病监测网络收集广州市2018年输入性DENV-4病例,对急性期患者血清进行病毒分离培养并对分离到的DENV-4毒株进行全基因组测序、系统发生树重建和生物信息学分析。结果共分离得到5株DENV-4毒株,其中4株由泰国和柬埔寨输入的分离株均属于DENV-4基因Ⅰ型;菲律宾输入的病例分离株与其他4株亲缘性较低,属于DENV-4基因Ⅱa型;5株分离株间的核苷酸(氨基酸)同源性为90.8%(96.7%~96.9%);经过比对,5株分离株和6株参考株的E蛋白区域有9个位点出现差异,NS1蛋白区域有14个位点出现差异,NS5蛋白区域有25个位点出现差异。结论本研究对广州地区输入性DENV-4毒株进行全基因组测定,间接地掌握周边国家地区DENV-4的基因特征,为本地登革热的防控和溯源提供基线数据,具有重要的公共卫生意义。

登革病毒4型E蛋白的表达与多克隆抗体的制备

目的在原核细胞中表达登革病毒4型E蛋白及E蛋白III区,分别以两种蛋白免疫家兔,获得可检测登革病毒的多克隆抗体。方法将登革病毒4型E蛋白与E蛋白III区编码序列克隆到pET-32a(+)质粒中,分别构建两种蛋白的表达载体,以IPTG诱导其在Rosetta细胞中的大量表达,并进行SDS-PAGE检测。分别以两种蛋白免疫家兔,制备出针对E蛋白与E蛋白III区的多克隆抗体,并对其进行Western blot鉴定。结果登革病毒4型E蛋白与E蛋白III区在Rosetta细胞中以包涵体的形式大量表达;利用所制备的多克隆抗体对登革病毒进行检测,出现了预期的条带。结论本研究制备获得的多克隆抗体可用于登革病毒的检测,为登革病毒相关研究奠定了基础。

4型登革病毒NS2A蛋白通过UXT-V1逃避宿主免疫的机制研究

目的探讨4型登革病毒NS2A蛋白通过泛转录表达因子剪接变异体1(UXT-V1)逃避宿主免疫的机制。方法在HEK-293T细胞中,4型登革病毒感染后过表达NS2A蛋白,通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测干扰素-β(IFN-β)、白细胞介素-8(IL-8)、干扰素诱导蛋白54(ISG54)的表达量;通过荧光素酶报告实验检测NS2A蛋白对IFN-β与核因子κB(NF-κB)通路的影响;通过免疫共沉淀检测NS2A蛋白与UXT-V1的相互作用;通过核蛋白抽取检测IRF3和p65的核定位。结果4型登革病毒NS2A蛋白与宿主UXT-V1存在相互作用。此外,4型登革病毒NS2A蛋白抑制宿主IFN-β、IL-8和ISG54的mRNA水平,阻断IRF3和p65的核转移,抑制宿主IFN-β与NF-κB通路。结论4型登革病毒NS2A蛋白通过与UXT-V1的相关作用阻断宿主固有免疫关键因子IRF3和p65的核定位,抑制宿主IFN-β与NF-κB通路,最终到达其免疫逃避的目的。

广州市2010年登革4型病毒的分离及其E基因进化分析

登革病毒（DEN）E蛋白在病毒与宿主细胞融合和诱导机体产生抗体等过程中发挥重要作用[1]。本研究通过对分离株E基因全序列测定，从分子水平确定其型别，并与广州市历年同型DEN流行株及相关国际流行株进行同源性比较，构建系统进化树，追踪其可能输入来源。

广东省东莞市2017—2018年登革病毒E基因进化分析

目的测定广东省东莞市2017—2018年Ⅰ~Ⅳ型登革病毒(DENV-1~DENV-4)的E基因序列,分析其系统进化情况及流行基因亚型,从分子水平探讨病毒来源。方法收集东莞市2017—2018年140例可疑登革热患者急性期血清,用实时荧光PCR方法检测病毒核酸,阳性血清用C6/36细胞分离培养登革病毒,测定分离株E基因序列,绘制系统进化树,结合流行病学资料进行分子流行病学分析。结果140份急性期血清中DENV核酸阳性54份,阳性率38.6%,DENV-1阳性占53.7%。分离得到17株毒株。序列比对和系统进化分析显示,10株DENV-1分离株间核苷酸同源性为90.0%~99.9%,氨基酸同源性为96.6%~99.8%,分属基因Ⅰ型和基因Ⅴ型。7株基因Ⅰ型分离株与泰国2015年、缅甸2015年、中山2015年及越南2016年流行株核苷酸同源性较高(99.3%~99.9%),其中2018年本地株D2018078与2017年输入株D2017008核苷酸同源性达99.8%;3株基因Ⅴ型分离株与印度2014年、2017年株及新加坡2014年流行株核苷酸同源性较高(97.7%~99.1%)。4株DENV-2分离株间核苷酸同源性为91.0%~98.6%,推导氨基酸同源性为97.6%~99.8%,分属混合型和亚洲Ⅰ型,2株混合型分离株与马来西亚2014年、台湾2015年流行株核苷酸同源性较高(99.6%~99.7%);2株亚洲Ⅰ型分离株分别与越南2015年、泰国2011年流行株核苷酸同源性较高(99.3%~99.5%)。2株DENV-3分离株间核苷酸同源性为98.4%,氨基酸同源性为99.4%,均属基因Ⅰ型,与缅甸2017年、马来西亚2015年流行株核苷酸同源性较高(99.3%~99.7%)。1株DENV-4分离株与越南2013、2016年流行株同源性较高(99.3%~99.5%),属基因Ⅰ型。结论2017—2018年东莞市登革热的病原体主要为DENV-1,其次是DENV-2,各至少有2种基因亚型同时在流行;DENV-3和DENV-4各至少有1种基因亚型在流行。流行方式主要为南亚和东南亚国家及我国中山、台湾等地输入病例引起的本地暴发流行,存在输入引起本地感染的风险。