黄芪提取物对帕金森病小鼠黑质区白介素-17通路的影响

目的:探究黄芪提取物干预白介素-17(IL-17)信号通路治疗帕金森病(PD)作用机制。方法:将30只雄性C57BL/6小鼠均分为五组。除对照组之外均采用MPTP诱导PD模型,建模成功后,低、中、高浓度黄芪组分别以50、100、200 mg/kg黄芪提取物持续灌胃14 d,模型组和对照组采用等量0.9%氯化钠溶液灌胃。灌胃后结束后采用转棍实验和爬杆实验评估各组小鼠行为表现。免疫组化法测定各组脑黑质致密区(SNpc)酪氨酸羟化酶(TH)和Th17细胞数目;Western blot测定纹状体区IL-17、抗肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、核因子-κB(NF-κB)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,模型组和各浓度黄芪组小鼠转棍掉落潜伏期明显缩短,爬杆实验头向下时间(T1)、由杆顶爬至杆底所用时间(T-LA)明显延长,SNpc区TH表达水平下降,Th17细胞数目增多,纹状体区IL-17、TRAF-6、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2蛋白相对表达水平明显升高(均P<0.05)。与模型组比较,各浓度黄芪组小鼠转棍掉落潜伏期明显延长,爬杆实验T1和T-LA明显缩短,SNpc区TH表达水平升高,Th17细胞数目减少,纹状体区IL-17、TRAF-6、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2蛋白相对表达水平明显下降(均P<0.05),且与黄芪提取物浓度呈正相关。结论:黄芪提取物能有效改善PD模型小鼠转棍和爬杆活动能力,保护SNpc区TH阳性神经元,其机制可能与抑制IL-17/TRAF-6/NF-κB信号通路,减少多巴胺神经元炎症性损伤凋亡有关。

中和白介素-17对博来霉素诱导的特发性肺纤维化及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:研究中和白介素-17(interleukin-17,IL-17)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导特发性肺纤维化及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、BLM组、中和抗体组和自噬抑制组。BLM组、中和抗体组和自噬抑制组利用BLM(5 U/kg)诱导特发性肺纤维化模型形成,对照组给予等量生理盐水。造模第1天起自噬抑制组小鼠腹腔注射3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA),每周5次,连用4周,其他3组则注射等量的生理盐水。中和抗体组和自噬抑制组小鼠分别从造模后第3 d起,每隔3 d尾静脉注射抗鼠IL-17抗体,于28 d取材,采用Masson三色染色和羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量测定评价肺纤维化程度和胶原蛋白的表达变化,利用ELISA检测肺泡灌洗液中转化生长因子-β1(transform growth factor-β1,TGF-β1)的含量,Western blot分析LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、p62、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR的蛋白表达。结果:与BLM组相比,中和抗体组羟脯氨酸和TGF-β1含量显著下降(P<0.01),肺纤维化程度明显降低(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin-1表达明显上调(P<0.01,P<0.05),p62表达减少(P<0.05),而p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值显著降低(P<0.05)。结论:IL-17在肺纤维化中的作用与抑制细胞自噬有关。中和内源性IL-17,能显著改善BLM诱导的肺纤维化,降低TGF-β1产生,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,激活细胞自噬。

寻常型银屑病皮损中磷酸化信号转导和转录激活因子-3与白介素-17的表达及意义

目的研究寻常型银屑病皮损中磷酸化信号转导和转录激活因子-3(phosphorylated signal transducer and acti-vator of transcription-3,P-Stat3)与白介素-17(Interleukin-17,IL-17)的表达及意义。方法实验组23例,对照组14例。两组均采用免疫组织化学法检测寻常型银屑病皮损组织和正常皮肤组织中P-Stat3与IL-17的表达。结果实验组银屑病皮损中P-Stat3和IL-17均高于对照组(Z值分别为-5.043和-4.324,均P<0.01),并且与PASI评分呈正相关(分别为rs=0.713和rs=0.797,均P<0.001),P-Stat3和IL-17呈正相关(rs=0.762,P<0.001)。结论 P-Stat3和IL-17在银屑病皮损中明显升高,且与疾病的严重程度呈正相关。

IRAK-4在白介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLRs)介导的炎症信号通路中的关键作用

白介素-1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4;IRAK-4)是近年来发现的参与机体先天性免疫反应过程中的关键分子。它与另外3个成员IRAK-1、IRAK-2、IRAK-M同属于IRAK家族,目前经过对IRAK-4分子的激酶活性以及其对炎症反应的正向和负向的调控作用的研究表明,IRAK-4分子联系着上下游的信号转导,在TLRs/IL-1R介导的炎症信号通路中的作用更为关键。本文就IRAK-4分子的活性、以及IRAK-4分子在TLRs/IL-1R介导的炎症信号转导通路中的作用作一综述。以期设计出针对IRAK-4特异性的药物,或者通过基因治疗手段干预IRAK-4表达,为感染控制提供新的思路,开发出新的抗炎药物。

右美托咪定通过调控白细胞介素-17及转化生长因子-β1/Smad蛋白3信号通路对脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨右美托咪定介导白细胞介素(IL)-17对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞(以下简称“A549细胞”)炎症、增殖、迁移、上皮间质转化及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白3(Smad3)信号通路的调控作用。方法体外培养A549细胞,将其分为对照组(不做干预)、LPS组(10.00μg/ml LPS)和实验组(10.00μg/ml LPS+1.25、2.50、5.00、10.00μg/ml右美托咪定),分别采用CCK-8试剂盒和反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定细胞活力和IL-17 mRNA表达水平以筛选右美托咪定最适实验浓度;随后将细胞分为对照组、LPS组、IL-17组、右美托咪定组和IL-17+右美托咪定组,干预24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-17、IL-8和IL-6的表达水平;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)试剂盒用来检测细胞增殖率;划痕实验用来检测细胞迁移率;蛋白免疫印迹(WB)法测定肺泡上皮间质转化(EMT)相关蛋白、TGF-β1/Smad3通路相关蛋白及IL-17蛋白表达水平。结果右美托咪定逆转了LPS对A549细胞活力的抑制作用和IL-17 mRNA表达水平的促进作用,且10.00μg/ml浓度的右美托咪定组的效果最好,因此选择10.00μg/ml右美托咪定用于后续实验。LPS组细胞中IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维粘连蛋白(FN)、Smad3的磷酸化(p-Smad3)/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-17+右美托咪定组IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN、p-Smad3/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-17+右美托咪定组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平高于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定通过抑制IL-17的分泌恢复LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤,促进LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖并抑制其迁移和EMT进程,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad3通路的信号转导有关。

外源性白介素17A激活PLC/PRF/5细胞内PI3K/AKT信号转导通路抑制HBsAg表达的研究

目的:研究外源性白介素17A(IL-17A)抗HBV活性及其可能存在的机制。方法:以分泌乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的PLC/PRF/5细胞为模型,通过外源性IL-17A处理细胞48 h,化学发光微粒子免疫技术和细胞免疫荧光技术分析细胞上清液和细胞内HBsAg含量,并以荧光定量PCR法(FQ-PCR)和Western blot检测细胞内抗病毒基因及其蛋白含量;pISRE-TA-luc转染至细胞并以IL-17A处理细胞48 h,荧光素酶活性检测干扰素刺激反应元件(ISRE)活性;以Western blot分析IL-17A处理细胞48 h后PI3K/AKT信号转导通路分子蛋白表达水平,并以信号转导通路抑制剂LY294002进一步验证IL-17A能否通过PI3K/AKT信号转导通路发挥抗HBV活性。结果:外源性IL-17A处理PLC/PRF/5细胞后,细胞上清液和细胞内HBsAg含量显著降低,同时细胞内抗病毒蛋白MxA和OAS表达明显升高;IL-17A不能增强细胞内ISRE活性,但激活PI3K/AKT信号转导通路;通过LY294002抑制PI3K/AKT信号转导通路后,IL-17A抗HBV活性及其诱导抗病毒蛋白MxA和OAS表达效应显著被抑制。结论:IL-17A能够通过激活PLC/PRF/5细胞内PI3K/AKT信号转导通路诱导抗病毒蛋白表达,从而发挥抗HBV活性。

NLRP3炎症小体/白介素-1β信号通路与糖尿病视网膜病变

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病严重的眼部并发症之一,多由于长期的高血糖状态引起的视网膜微血管病变。目前对DR的发病机制尚无定论,近年来研究发现,炎症反应贯穿DR发生发展的全病程。而由核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、白介素-1β(IL-1β)等介导的炎症反应在DR病理过程中充当重要角色。故以NLRP3炎症小体/IL-1β信号通路介导的炎症反应为切入点开展治疗DR的机制研究,有望为防治DR提供新策略。本文就NLRP3炎症小体/白介素-1β信号通路介导糖尿病视网膜病变发病的研究进展做一综述。

JAK/STAT3信号通路参与白细胞介素-17诱导的支气管平滑肌细胞增殖与迁移

【目的】探讨白介素-17(IL-17)促进支气管平滑肌细胞(BSMC)的增殖与迁移作用及JAK/STAT3相关信号通路在其中的作用机制。【方法】使用不同浓度IL-17处理BSMC不同时间,以确定最佳实验条件。随后使用MTT检测细胞活力,BrdU染色观察细胞增殖状态,并使用PI染色流式细胞仪检测细胞周期。进一步利用细胞迁移实验检测细胞迁移能力。使用Western blot实验检测IL-17处理后BSMC的JAK、p-JAK、STAT3、p-STAT3蛋白表达量。利用JAK/STAT3信号通路特异性阻断剂AG490来特异性阻断JAK/STAT3信号通路,检测阻断JAK/STAT3信号后IL-17对细胞增殖、迁移以及JAK/STAT3信号通路蛋白表达量的影响。【结果】IL-17可促进BSMC增殖(P <0.05),促进细胞周期进程(P <0.05)并使细胞迁移能力增强(P <0.05)。这一过程伴随着BSMC的JAK/STAT3信号通路的增强(P <0.05)。抑制JAK/STAT3信号通路缓解了IL-17对BSMC的促进增殖和迁移的作用(P <0.05)。【结论】JAK/STAT3信号通路参与了IL-17诱导的BSMC增殖与迁移作用,AG490对IL-17引起的BSMC JAK/STAT3信号通路的增强起到了抑制作用。

针灸对帕金森病小鼠黑质白细胞介素-17受体A/核因子κB信号通路的影响

目的:观察针灸对帕金森病(PD)小鼠中脑黑质部白细胞介素-17受体A/核因子κB(IL-17RA/NF-κB)信号通路相关分子表达的影响,探讨针刺改善PD症状的可能机制。方法:无特定病原体(SPF)级8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、针刺艾灸组和雷沙吉兰组。1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射建立PD动物模型,模型组不治疗,仅作抓取固定;针刺组针刺百会、阳陵泉穴;针刺艾灸组在针刺组基础上艾灸关元穴;雷沙吉兰组给予雷沙吉兰溶液灌胃。观测各组小鼠总体转棒评分(ORP),采用免疫荧光染色技术检测各组小鼠中脑黑质部酪氨酸羟化酶(TH)和α-突触核蛋白表达,采用蛋白质免疫印迹法检测黑质致密部白细胞介素-17(IL-17)受体A及下游分子表达状况。结果:与空白组比较,模型组小鼠ORP评分和TH表达显著降低;与模型组比较,针刺组、针刺艾灸组ORP评分和TH表达量均显著升高(均P<0.05);与空白组比较,模型组小鼠黑质α-突触核蛋白荧光强度显著增高(P<0.05);模型组小鼠黑质p-核因子κB抑制剂α(IκBα)表达和p-IκBα/IκBα比值显著上升(P<0.05)。与模型组比较,针刺组、针刺艾灸组与雷沙吉兰组α-突触核蛋白免疫荧光强度明显降低(P<0.05);针刺艾灸组小鼠黑质IL-17受体A表达显著降低(P<0.05);针刺组、针刺艾灸组与雷沙吉兰组p-IκBα表达和p-IκBα/IκBα比值显著下调。结论:针刺组和针刺艾灸组均可改善PD模型小鼠转棒活动能力,可保护黑质TH阳性神经元,抑制α-突触核蛋白的表达,其机制可能与调节IL-17受体通路,尤其是IκBα的磷酸化有关。

祛风扶阳汤对支气管哮喘大鼠TGF-β_(1)/Smad信号通路与Th17/Treg失衡的影响

目的观察祛风扶阳汤对支气管哮喘大鼠气道炎症、气道重塑、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad信号通路及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡的影响,探究其作用及机制。方法将45只SD大鼠随机分为空白组、哮喘组、地塞米松组、祛风扶阳汤中剂量组、祛风扶阳汤高剂量组,每组9只。除空白组外,其余组大鼠均采用卵蛋白腹腔注射和雾化吸入方法建立支气管哮喘模型。建模成功后,地塞米松组给予地塞米松0.001 g/kg灌胃,祛风扶阳汤中、高剂量组分别给予祛风扶阳汤9.95 g/kg和19.9 g/kg灌胃,空白组和哮喘组灌胃等量生理盐水,均1次/d,连续灌胃4周。记录各组大鼠末次灌胃后咳嗽次数,HE染色观察肺组织病理形态,ELISA法检测肺泡灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)、TGF-β_(1)水平,Western blot法检测肺组织中TGF-β_(1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达情况,流式细胞仪检测肺组织中IL-17A^(+)CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg比例。结果与空白组比较,哮喘组大鼠咳嗽次数明显增加(P<0.05),肺泡灌洗液中IL-6、IL-17A、TGF-β_(1)水平和肺组织中TGF-β_(1)、α-SMA、p-Smad2/3蛋白相对表达量及IL-17A^(+)CD4^(+)比例均明显升高(P均<0.05),肺泡灌洗液中IL-10水平和肺组织中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg比例均明显降低(P均<0.05);肺组织胶原纤维沉积、炎性细胞浸润明显。与哮喘组比较,各药物组大鼠的咳嗽次数均明显减少(P均<0.05),地塞米松组和祛风扶阳汤高剂量组肺泡灌洗液中IL-6、IL-17A、TGF-β_(1)水平和肺组织中TGF-β_(1)、α-SMA、p-Smad2/3蛋白相对表达量及IL-17A^(+)CD4^(+)比例均明显降低(P均<0.05),地塞米松组和祛风扶阳汤高剂量组肺泡灌洗液中IL-10水平和祛风扶阳汤高剂量组肺组织中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg比例均明显升高(P均<0.05);各药物组肺组织损伤、胶原纤维沉积、炎性细胞浸润均减轻。结论祛风扶阳汤可以通过调节TGF-β_(1)/Smad信号通路以及Th17/Treg细胞平衡,从而减轻支气管哮喘大鼠气道炎症反应与气道重塑。

白介素-17、转化生长因子-β1在烟雾暴露大鼠肺组织中的表达及与肺血管重塑的关系

目的观察烟雾暴露大鼠肺组织中IL-17表达及对肺血管重塑的影响,并探讨其作用机制。方法将72只健康SD雄性大鼠随机分为对照组、烟雾暴露组和烟雾暴露+药物干预组,每组各24只。分别在造模成功后8周、12周取组织行苏木精-伊红染色和Masson染色,观察大鼠肺血管重塑的程度,并采用免疫组化法检测大鼠肺组织中IL-17、Smad3的表达及肺动脉中转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,采用ELISA法检测大鼠血清中IL-17水平。结果与同期对照组相比,烟雾暴露组8周、12周大鼠肺血管管壁面积/血管总面积比值(WA%)及管壁厚度和血管直径的比值(WT%)都明显增大(P<0.05);血清IL-17水平,肺组织中IL-17、Smad3及肺动脉中TGF-β1表达量明显增加(P<0.05);且烟雾暴露组12周时,上述指标水平均明显高于8周的大鼠(P<0.05)。烟雾暴露+药物干预组除TGF-β1水平外,其余上述指标水平均高于同期对照组,但低于同期烟雾暴露组。烟雾暴露组肺动脉中TGF-β1表达水平与WA%、WT%以及肺组织IL-17、Smad3表达水平均呈正相关(P<0.01)。结论烟雾暴露后大鼠肺组织及血清中IL-17表达增高,IL-17可能参与了肺血管重塑过程,而TGF-β/Smad信号转导途径可能是调节血管重塑工程的关键之一。

TRAF5通过调控IL-17A/NF-κB信号通路减轻氧-糖剥夺/再灌注引起的心肌细胞炎症和细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子5(tumor necrosis factor receptor-associated factor 5,TRAF5)对氧-葡萄糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)引起的心肌细胞炎症和细胞凋亡的影响及相关分子机制。方法 体外培养大鼠心肌细胞系H9c2细胞,构建OGD/R诱导的H9c2细胞模型,以脂质体转染法将TRAF5过表达质粒(pcDNA-TRAF5)和空载质粒(pcDNA-NC)转染至OGD/R诱导的H9c2细胞。采用实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测细胞中TRAF5基因表达,CCK-8法测定细胞活力,试剂盒法检测细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)和炎性因子水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中相关蛋白表达。结果 与对照组比较,OGD/R组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达量降低,细胞活力降低,细胞中LDH、cTnT、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)浓度升高,细胞凋亡率升高,细胞中B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达量降低,Bcl-2相关蛋白(B-cell-lymphoma-2 related protein,Bax)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteine aspartate proteolytic enzyme-3,cleaved caspase-3)、白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)蛋白表达量及磷酸化核转录因子-κB(phosphorylated nuclear factor-κB,p-NF-κB)/NF-κB比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+pcDNA-TRAF5组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达量升高,细胞活力升高,细胞中LDH、c TnT、TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1浓度降低,细胞凋亡率降低,细胞中Bcl-2蛋白表达量升高,Bax、cleaved caspase-3、IL-17A蛋白表达量及p-NF-κB/NF-κB比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAF5可减轻OGD/R引起的心肌细胞炎症和细胞凋亡,其作用机制可能与调控IL-17A/NF-κB信号通路有关。

白细胞介素17C通过IKK/NF-κB通路调控慢性鼻窦炎的作用机制

[目的]探讨白细胞介素17C(IL-17C)通过IKK/NF-κB通路调控慢性鼻窦炎(CRS)的作用机制,旨在为临床治疗CRS提供参考.[方法]选择IL-17C刺激人鼻黏膜原代上皮细胞(HNEPCs),采用CCK-8法检测不同质量浓度的IL-17C对HNEPCs活力的影响;利用ELISA法检测IL-17C诱导的HNEPCs中相关因子的表达水平;采用Western blot法检测IL-17C诱导的HNEPCs中IKK/NF-κB信号通路中相关蛋白的表达情况.[结果]与对照组比较,不同质量浓度的IL-17C对HNEPCs活力无显著影响(P>0.05);IL-17C干预组HNEPCs中IL-4、IL-5、IL-13、IL-17及p-IKK表达水平均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);IL-17C干预组HNEPCs中p-IKK、p-IκBα及p-NF-κB表达均明显升高(P<0.05),IKK、IκBα及NF-κB蛋白表达无明显改变(P>0.05).与IL-17C干预组比较,IL-17C+地塞米松组p-IKK、p-IκBα及p-NF-κB蛋白表达均明显降低(P<0.05).[结论]IL-17C可诱导HNEPCs中Th2及Th17相关炎症因子的产生,机制认为可能是调控IKK/NF-κB信号通路.

白介素-17诱导自噬促进破骨前体细胞分化的机制

目的:探讨白介素-17(IL-17)诱导的自噬及其相关蛋白在促进牙槽骨破坏过程中的具体机制。方法:对照组以含30 ng/m L巨噬细胞集落刺激因子、50 ng/m L核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的培养基诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM),IL-17组分别以0.01、0.1、1.0、10 ng/m L IL-17处理,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP阳性多核破骨细胞;鬼笔环肽荧光染色检测肌动蛋白环周长;甲苯胺蓝染色分析骨吸收陷窝形成情况。另设对照组使用含50 ng/m L RANKL的培养基诱导RAW264.7细胞,IL-17组分别以0.01、0.1、1.0、10 ng/m L的IL-17处理,采用蛋白质印迹法检测不同浓度IL-17处理后自噬相关蛋白Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及破骨细胞相关蛋白c-fos、活化T细胞核因子1(NFATc1)的表达;检测1.0 ng/m L IL-17处理及加入自噬抑制剂3-MA后RAW264.7细胞LC3、NFATc1、TRAF6/ERK/p38信号通路相关蛋白的表达。结果:0.01、0.1、1.0 ng/m L IL-17处理BMM后,TRAP阳性多核破骨细胞数量、肌动蛋白环周长以及骨吸收陷窝面积较对照组均增加,且1.0 ng/m LIL-17处理RAW264.7细胞后,c-fos、NFATc1、Beclin-1、LC3、TRAF6、磷酸化ERK、磷酸化p38蛋白表达均上调(均P<0.05);而采用自噬抑制剂3-MA处理后,LC3、NFATc1、TRAF6、磷酸化ERK、磷酸化p38的表达水平均下降(均P<0.05)。结论:IL-17可促进Beclin-1、LC3等自噬关键蛋白表达,增强破骨前体细胞的分化能力,TRAF6/ERK/p38信号通路参与该过程。

栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响

目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠脾脏中Th17细胞百分比升高,Treg细胞百分比降低(P<0.05)。栀子苷处理恢复了AS小鼠Th17和Treg细胞的平衡。栀子苷抑制PI3K的表达及AKT和mTOR的磷酸化,MHY1485(mTOR活化剂)减弱了栀子苷对T细胞分化的影响。结论:栀子苷抗AS作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号引起的Treg细胞增多和Th17细胞减少有关。

白细胞介素-17介导核转录因子-κB信号通路在敌草快中毒大鼠急性肾脏损伤中的作用机制

目的探讨白细胞介素-17(IL-17)介导核转录因子-κB(NF-κB)信号通路在敌草快(diquat,DQ)中毒大鼠急性肾损伤(AKI)中的作用机制。方法将120只雄性SD大鼠随机分为四组:正常对照(N)组、DQ染毒(DQ)组、IL-17对照(N+IL-17i)组和IL-17阻断(IL-17i)组,再按照观察时间点分为12 h、24 h及72 h亚组(每亚组10只);N组和N+IL-17i组一次性腹腔注射3 m L生理盐水,30 min后N+IL+17i组腹腔注射3 mg/kg IL-17阻断剂(Y-320);DQ组和IL-17i组一次性腹腔注射0.2%敌草快溶液30 mg/kg建模,建模成功30 min后,IL-17i组腹腔注射3 mg/kg Y-320。给药组每隔12 h给药1次,直至被处死,最长连续用药3 d。按上述三个时间点,观察各组大鼠行为学表现,观察肾脏组织病理变化及评分,全自动生化仪检测血清肌酐(Cr)含量,ELISA法检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NAGL)、肾损伤分子(KIM-1)、IL-17含量,实时荧光定量PCR检测肾组织中JLP、PINK1 mRNA表达量,Western blot法检测大鼠肾组织NF-κB、抑制蛋白-α(IκB-α)蛋白含量,及各组大鼠72 h时JNK-亮氨酸拉链相关蛋白(JLP)、PTEN诱导激酶1(PINK1)蛋白含量。结果①与N组比较,DQ组肾小管上皮细胞肿胀,管腔变窄,肾小球毛细血管网淤血,肾损伤病理评分逐渐升高,Cr、NGAL、KIM-1含量及IL-17水平明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05);②与DQ组比较,IL-17i组充血、水肿较DQ组减轻,肾损伤病理评分降低,Cr、NGAL、KIM-1含量及IL-17水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);③与N组比较,DQ组IκB-α蛋白含量在12、24、72 h均下降,NF-κB p65蛋白含量在24、72 h明显升高;与DQ组比较,IL-17i组IκB-α含量在24、72 h明显上升,NF-κB p65含量在24、72 h明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);④与N组比较,DQ组72 h时JLP蛋白及mRNA表达明显下降,PINK1蛋白及mRNA表达明显升高,与DQ组比较,IL-17i组72 h时JLP蛋白及mRNA表达明显升高,PINK1蛋白及mRNA表达明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DQ中毒肾损伤的机制可能与IL-17激活了NF-κB信号通路,同时还增加了PINK1蛋白表达,诱发线粒体功能障碍,降低JLP蛋白表达有关。

IL-17A在食管腺癌中的表达及其对NF-κB/COX-2信号轴的调控作用

目的探讨白细胞介素17A(IL-17A)在食管腺癌中的表达情况及其通过核转录因子κB(NF-κB)信号通路对环氧合酶-2(COX-2)的调控作用及机制。方法收集10例食管腺癌组织、癌旁组织和血清,同时收集10例做胃镜检查的健康体检者的食管上皮组织和血清,免疫组化法检测组织中IL-17A和COX-2蛋白的表达,real time-PCR法检测癌组织和癌旁组织中IL-17A mRNA和Th17细胞的特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体c(RORc)mRNA的表达,ELISA法检测食管腺癌患者和健康对照者血清中IL-17A的含量。选取对数生长期的人食管腺癌OE19细胞,分为对照组、IL-17A(100 ng/mL)组和IL-17A(100 ng/mL)+PDTC(100μmol/L,NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵)组,Western blot法检测OE19细胞中p50、p65、p-IκB-α和COX-2蛋白的表达水平。结果食管腺癌组织中IL-17A阳性染色细胞数高于癌旁组织;相较于癌旁组织,食管腺癌组织中IL-17A和RORc mRNA水平增多(P<0.05)。与健康对照者相比,食管腺癌患者血清中IL-17A的含量明显升高(P<0.05)。与正常食管上皮组织比较,食管腺癌组织中COX-2蛋白阳性染色面积更大更深。与对照组相比,IL-17A组OE19细胞中p-IκB-α和COX-2蛋白的表达量明显增加(P<0.05);与IL-17A组相比较,IL-17A+PDTC组细胞中p-IκB-α和COX-2蛋白的表达量明显降低(P<0.05)。结论IL-17A表达在食管腺癌患者组织和血清中均增加。在食管腺癌OE19细胞中,IL-17A可能通过激活NF-κB信号通路上调COX-2的表达量。

IL-17/NF-κBp65 信号通路在老年急性脑出血发病及组织损伤中的机制研究

目的探讨IL-17/NF-κBp65信号通路在老年患者急性脑出血发病及组织损伤中的作用。方法选择2012年7月至2015年7月宁夏回族自治区人民医院收治的58例急性脑出血老年患者作为脑出血（ICH组）,按照发病至手术时间分为〈6h组（18例）,6h-组（14例）,25h-组（10例）,49h-组（10例）和〉72h组（6例）,ICH患者均行开颅血肿清除术;另选择同期医院行第三脑室造瘘术的12例阻塞性脑积水患者作为对照组。两组患者术中取病灶周围脑组织,免疫组化染色检查IL-17、NF-κBp65阳性表达情况,免疫印迹法检测IL-17、NF-κBp65蛋白表达,实时定量RT-PCR检测IL-17、NF-κBp65mRNA表达。结果 NF-κBp65主要在细胞核中表达,IL-17主要在细胞质中表达;对照组胶质细胞和神经元细胞少见IL-17、NF-κBp65表达,ICH组胶质细胞和神经元细胞可见大量IL-17、NF-κBp65表达,脑出血后随着时间的延长,IL-17、NF-κBp65阳性细胞数量呈先上升后降低趋势。ICH各组IL-17、NF-κBp65蛋白及mRNA表达水平均显著高于对照组（均P〈0.05）;其中6h-组IL-17蛋白及mRNA表达最高,分别为（0.81±0.11）和（0.83±0.13）;25h-组NF-κBp65蛋白及mRNA表达最高,分别为（0.77±0.12）和（0.81±0.11）。结论 IL-17/NF-κBp65信号通路参与调节老年急性脑出血后炎症反应,提示调控IL-17/NF-κBp65信号通路可能缓解急性脑出血后脑组织损伤。

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞ERK1/2信号转导通路活化的影响

目的研究17β-雌二醇（17β-E2）对子宫内膜异位症（内异症）患者在位子宫内膜间质细胞胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号转导通路活化的影响,探讨ERK1/2信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用1×10^-6mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间（0~120 min）,然后用MTT法和免疫印迹法（Western blot）检测子宫内膜间质细胞的活性和ERK1/2的活化情况,检测出子宫内膜间质细胞活性最强的时间点。用Western blot和MTT法分别检测不同浓度ERK1/2抑制剂PD98059对1×10^-6mol/L 17β-E2作用20 min后子宫内膜间质细胞活性及ERK1/2活性的变化。结果 1×10^-6mol/L的17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,ERK1/2活化在17-βE2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着PD98059作用浓度的增加,ERK1/2活化水平逐渐下降,浓度为50μmol/L时已被完全阻断;随着PD98059作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50μmol/L和100μmol/L时,活性最低,但此时仍高于空白对照组。结论 17β-E2增强子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的ERK1/2信号转导通路有关。

17β-雌二醇通过PI3K-Akt信号通路抑制丙泊酚诱导皮层神经元凋亡

目的:探讨17β-雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法:原代培养7d的大鼠皮层神经元,给予不同浓度丙泊酚和或17β-雌二醇处理12 h,用MTT法检测神经元存活率变化,Hoechst33258核染色法检测神经元调亡,Western blot法测定神经元p-Akt蛋白的变化。结果:与溶剂对照组比较,丙泊酚呈剂量依赖性降低神经元存活率(P<0.05);与丙泊酚组比较,17β-雌二醇呈剂量依赖性提高神经元存活率(P<0.05),PI3K/Akt激动剂IGF组神经元存活率显著增加(P<0.01)。与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元凋亡率显著增加(P<0.01),丙泊酚+17β-雌二醇组神经元凋亡率较丙泊酚组显著下降(P<0.01),LY294002预处理可阻断17β-雌二醇的作用,使细胞凋亡率增加(P<0.01)。与溶剂对照组比较,丙泊酚呈剂量依赖性降低神经元p-Akt蛋白水平(P<0.05);与丙泊酚组比较,17β-雌二醇呈剂量依赖性提高神经元p-Akt蛋白水平(P<0.05);与丙泊酚+17β-雌二醇组比较,LY294002预处理组p-Akt蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论:17β-雌二醇可抑制丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与激活PI3K-Akt信号通路有关。