“三法三穴”推拿手法干预早期对Minor CCI模型大鼠脊髓背角IL-17A/RA、C/EBPβ信号通路影响的研究

目的 通过观察“三法三穴”推拿手法干预早期对轻度坐骨神经慢性压迫性损伤(Minor chronic compression injury of sciatic nerve, Minor CCI)模型大鼠脊髓背角中白介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)、白介素-17A受体(interleukin-17A receptor, IL-17RA)、转录因子CCAAT增强子结合蛋白β(transcription factor CCAAT/enhancer binding protein β, C/EBPβ)表达的影响,明确推拿对周围神经病理性疼痛(peripherally neuropathic pain, pNP)的即刻镇痛机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、推拿组,8只/组,模型组、推拿组复制Minor CCI模型。使用按摩推拿手法模拟仪模拟点法、拨法、揉法,对推拿组大鼠患侧殷门、承山、阳陵泉进行定时、定性、定量干预1次,通过机械缩足反射阈值(paw mechanical withdraw threshold, PMWT)与冷敏阈值(cold sensitivity threshold, CST)评价干预后即刻对大鼠机械痛觉、温度觉敏化情况变化;通过蛋白免疫印迹法(Western Bolt, WB)检测脊髓背角中IL-17A、C/EBPβ表达;通过荧光定量聚合酶链式反应(real time-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测脊髓背角中IL-17A、IL-17RA、C/EBPβ表达。结果 与假手术组、模型组相比,推拿干预1次后可提高Minor CCI模型大鼠PMWT与CST(P<0.01);WB结果显示,与模型组相比,推拿可降低IL-17A、C/EBPβ在脊髓背角中蛋白的表达(P<0.05);RT-PCR结果显示,与模型组相比,推拿可降低IL-17A、IL-17RA、C/EBPβ在脊髓背角中mRNA的表达(P<0.05)。结论 推拿干预1次后,可通过抑制脊髓背角中IL-17A、IL-17RA、C/EBPβ信号通路的表达,改善机械痛觉及冷刺激敏化情况,从而实现即刻镇痛的作用。

白细胞介素17受体A在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系

目的研究白细胞介素17受体A(Interleukin-17receptor type A,IL-17RA)在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系。方法收集2010年1月1日-2013年12月31日在新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科接受标准肺癌根治术且随访资料完整的131例肺鳞癌和腺癌患者的术后标本,采用免疫组织化学法检测癌组织、癌旁组织中IL-17RA的表达情况。Kaplan-Meier法比较癌组织IL-17RA高表达和低表达对患者3年无病生存期(Disease-free survival,DFS)的影响。结果 IL-17RA在癌组织的表达高于癌旁组织(P<0.001);IL-17RA的表达与病理类型、肿瘤直径和术后病理分期(pTNM stages,pTNM)有关(P<0.05);生存分析显示,癌组织IL-17RA低表达患者的DFS均优于IL-17RA高表达者(P=0.032);COX回归分析结果显示,IL-17RA阳性表达是肺鳞癌、腺癌患者DFS的重要影响因素(P=0.041,HR=1.683)。结论 IL-17RA表达是非小细胞肺癌患者独立预后因素,高表达提示预后差。

苦参碱可抑制Th17所诱导的角质形成细胞IL-17RA、IL-21R及IL-22R1的表达

目的考察苦参碱(matrine,Mat)对Th17诱导的角质形成细胞(keratinocytes,KC)系HaCaT细胞白细胞介素-17受体A(IL-17RA)、白细胞介素-21受体(IL-21R)及白细胞介素-22受体1(IL-22R1)表达的影响。方法培养HaCaT细胞,用Th17分泌的主要效应因子IL-17A(10ng/mL)、IL-21(10ng/mL)及IL-22(10ng/mL)联合刺激HaCaT细胞模拟类银屑病样细胞模型,再用10μg/mL及100μg/mL的Mat干预此细胞模型,采用RT-qPCR及Western blot方法检测IL-17RA、IL-21R及IL-22R1的表达变化。结果 IL-17RA、IL-21R及IL-22R1的mRNA及蛋白在HaCaT细胞上有表达。IL-17A、IL-21及IL-22联合刺激可以显著促进HaCaT细胞IL-17RA、IL-21RmRNA及蛋白表达,IL-22R1蛋白的表达量升高(P<0.05)。Mat单独干预或与上述细胞因子联合干预组与未处理的HaCaT细胞组相比,IL-17RA、IL-21R及IL-22R1表达无显著下降(P>0.05),但可以显著降低IL-17A、IL-21及IL-22联合刺激后所升高的受体蛋白表达(P<0.05)。结论 IL-17A、IL-21及IL-22联合刺激角质形成细胞可以增强IL-17RA、IL-21R及IL-22R1的表达,Mat可抑制这种增强作用,可能在多种Th17介导的免疫性皮肤病中发挥抗炎作用。

IL-17RA基因过表达对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨白介素-17受体A(interleukin-17 receptor A,IL-17RA)对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:构建IL-17RA基因过表达慢病毒载体并感染A549细胞,采用RT-qPCR法和Western blot方法检测IL-17RA、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达。MTT实验、划痕实验及Transwell侵袭实验检测IL-17RA过表达对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:IL-17RA过表达A549细胞中IL-17RA mRNA和蛋白表达显著上调。IL-17RA过表达细胞的增殖活性同对照组无明显变化,但过表达组细胞的迁移距离较空载病毒组及空白对照组明显增多(P<0.05),过表达组穿膜细胞数较空载病毒组及空白对照组明显增多(P<0.05)。IL-17RA高表达可明显上调MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论:成功构建IL-17RA过表达A549细胞,IL-17RA具有增强A549细胞迁移及侵袭的作用,其机制可能与上调MMP-2和MMP-9表达有关。

IL-17RA基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建白介素17受体A(IL-17RA)基因过表达慢病毒载体。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增制备IL-17RA cDNA;将IL-17RA c DNA连接于用Age1酶切消化获得的线性化GV358载体;对PCR法鉴定为阳性克隆的IL-17RAGV358载体进行测序;将IL-17RA-GV 358载体用pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染到293T细胞获得IL-17RA慢病毒包装,运用荧光法行滴度检测;用IL-17RA-GV358重组慢病毒转染293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,运用RT-PCR、Western blot检测IL-17RA mRNA及蛋白的表达。结果 IL-17RA-GV358重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光,结果显示在稳定转染的细胞中IL-17RA mRNA及蛋白的表达水平较未转染细胞显著增高。结论成功构建IL-17RA-GV358慢病毒载体,为IL-17RA基因的后期研究提供了实验基础。

湿疹患儿1,25(OH)2D 3/VDR与IL-17/IL-17R的相关性分析

目的:检测湿疹患儿1,25-二羟维生素D 3[1,25(OH)2D 3]和维生素D受体(VDR),白介素-17(IL-17)和白介素-17受体(IL-17R),并探讨其相互关系。方法:采用电化学发光法检测受试者外周血1,25(OH)2D 3浓度,采用RT-PCR方法检测皮损处VDR表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血IL-17和IL-17R浓度。结果:湿疹患儿1,25(OH)2D 3及VDR明显低于健康儿童;湿疹患者IL-17/IL-17R的表达明显上升。结论:湿疹患儿1,25(OH)2D 3和VDR表达异常,且与IL-17/IL-17R水平相关。

苦参碱对皮肤角质形成细胞IL-17R、p-p38 MAPK和炎症因子的影响

目的考察苦参碱(matrine,Mat)对皮肤角质形成细胞(keratinocytes,KC)系HaCaT细胞白细胞介素-17受体(IL-17R)、p-p38 MAPK表达的影响,及其对HaCaT细胞分泌白细胞介素(IL)-6、IL-8、MIP-3α等炎症因子的影响。方法采用RT-PCR方法检测Mat对皮肤KCIL-17R mRNA表达的影响;采用流式细胞术检测Mat对HaCaT细胞IL-17R蛋白含量的影响;采用Western blot方法检测Mat对HaCaT细胞表达p-p38 MAPK的影响;ELISA法检测Mat对HaCaT细胞分泌炎症因子IL-6、IL-8及MIP-3α的影响。结果Mat可降低HaCaT细胞表达IL-17R和p-p38 MAPK,以及降低HaCaT细胞IL-6、IL-8、MIP-3α等炎症因子的分泌。结论Mat可通过抑制IL-17R的表达,阻止p38MAPK的磷酸化过程而具有抗炎作用。

IL-17在鼻息肉形成中的作用机制

目的检测白介素-17(IL-17)及其受体(IL-17R)在鼻息肉和正常鼻黏膜中的表达及IL-17在鼻息肉患者血清中的表达,观察IL-17在鼻息肉发病过程中可能的作用机制和意义。方法鼻息肉组织及血清标本来自青岛大学附属医院耳鼻咽喉科2016年11月~2017年11月行鼻息肉切除术的42例患者,选取10例同期行上颌窦囊肿手术切除的正常中鼻道黏膜组织作为正常鼻粘膜对照,10例健康成年人血清作为正常对照。HE染色用于常规组织病理学检查,免疫组织化学染色观察IL-17及其受体表达水平及部位,双重免疫组织化学染色观察表达IL-17的细胞,ELISA法检测血清中IL-17蛋白表达水平。结果①42例鼻息肉组织中IL-17和IL-17R阳性细胞数较正常鼻黏膜组织中多,差异有统计学意义(P<0.05);巨噬细胞表面标志(CD68)在鼻息肉组织中的表达比正常鼻黏膜组织高,差异有统计学意义(P<0.05)。②IL-17及CD68双重免疫组化染色显示IL-17主要表达于鼻息肉巨噬细胞上,IL-17R主要表达于上皮层基底细胞、腺管基底细胞及血管内皮细胞。③42例鼻息肉患者血清中IL-17蛋白水平和健康成年人比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论IL-17对鼻息肉的形成作用可能是通过影响巨噬细胞的功能及相关细胞因子实现的,IL-17与IL-17受体的相互作用可能参与鼻息肉的病理改变,如上皮细胞基底膜增厚及腺体增生等。

硫唑嘌呤片结合微生态制剂对炎症性肠病患者的肠屏障功能、菌群及IL-17BR水平的影响

目的:观察硫唑嘌呤片结合微生态制剂对炎症性肠病(IBD)患者的肠屏障功能、肠道菌群及白介素-17B受体(IL-17BR)水平的影响。方法:选取96例IBD患者按照随机数字表法分为对照组和研究组。对照组患者给予英夫利昔单抗,研究组在对照组基础上联合硫唑嘌呤片结合微生态制剂,观察2组患者肠屏障功能指标包括内毒素、D-乳酸,炎性相关指标包括C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、粪便钙卫蛋白(FCP),粪便培养并分析肠道菌群的变化,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中IL-BR的表达情况以及比较2组不良反应的发生情况。结果:治疗前2组患者各项观察指标水平之间差异无统计学意义(P>0.05);与同组治疗前比较,2组患者治疗后的内毒素、D-乳酸、CRP、PCT、FCP、IL-17BR水平均显著降低(P<0.05);研究组治疗后与对照组治疗后比较,血清内毒素、D-乳酸、CRP、PCT、FCP、IL-17BR水平降低更为显著(P<0.05)。肠道菌群检测结果显示,与同组治疗前比较,2组患者肠球菌、大肠埃希氏菌显著降低,乳杆菌、双歧杆菌显著升高(P<0.05),差异有统计学意义,研究组治疗后与对照组治疗后比较,肠球菌、大肠埃希氏菌降低更为显著,而乳杆菌、双歧杆菌升高更为显著(P<0.05)。2组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义。结论:硫唑嘌呤片结合微生态制剂能够改善IBD患者的肠屏障功能,抑制体内炎性指标,改善肠道菌群,降低IL-17BR水平,且不增加不良反应发生率,具有临床推广应用的价值。