人单个中性粒细胞IL-8Rβ mRNA丰度的相对半定量研究

目的:探讨单个中性粒细胞中白介素-8β型受体(IL-8Rβ)mRNA的表达丰度。方法:采用倍比稀释相对定量单细胞RT-PCR方法分离纯化人外周血中性粒细胞并提取总RNA,针对IL-8RβmRNA设计引物,进行RT-PCR确认IL-8Rβ在中性粒细胞中的基因表达并优化反应条件。收集单个中性粒细胞胞内容物或完整细胞,以相同引物进行RT反应,再将后者所得的cDNA倍比稀释后,与前者共同经过两轮PCR扩增,并将最终产物以BamHI内切酶酶切鉴定产物的特异性。结果:IL-8RβmRNA在人中性粒细胞中有大量表达,单个中性粒细胞中亦能扩增出特异性的IL-8Rβ目的条带,并且将单个细胞内mRNA稀释104倍后仍可扩增出目的条带,BamHI内切酶酶切反应证实为目的产物。结论:人中性粒细胞表达IL-8RβmRNA,mRNA倍比稀释单细胞RT-PCR方法确认其丰度远高于一般mRNA含量,且此方法可在单细胞水平比较细胞内mRNA的丰度。