5-Fu诱导Eca-109细胞凋亡过程中白介素1β转化酶的表达

用５氟尿嘧啶（５Ｆｕ）在体外诱导人食管癌Ｅｃａ１０９细胞凋亡，并用免疫细胞化学方法检测了白介素１β转化酶（ＩＣＥ）在５Ｆｕ作用前后的表达情况。结果表明：①光镜及电镜的形态学方法证实，５Ｆｕ引起细胞死亡的形式为凋亡；②未用药处理的对照细胞ＩＣＥ呈阴性表达，而５Ｆｕ作用后阳性表达的细胞数目增加，表达强度增强。结果提示：ＩＣＥ基因可能参与５Ｆｕ诱导细胞凋亡的调节，ＩＣＥ蛋白介导５Ｆｕ引起的细胞凋亡。

白介素-1β转化酶抑制剂的高通量筛选

目的筛选具有白介素-1β转化酶(ICE)抑制活性的化合物。方法通过体外克隆ICE原酶全长基因、质粒原核表达及蛋白纯化等方式,应用酶与特异性底物的荧光反应,建立ICE抑制剂高通量筛选平台;通过紫外、质谱及核磁等理化数据分析对所筛选的化合物进行结构鉴定,同时进行了初步的药理毒理学活性验证。结果筛选得到1种具有较强ICE抑制活性的化合物LX1986,该化合物与已知化合物棕曲菌素D(Aspochalasin D)结构相同。结论 LX1986为活性较强的微生物来源ICE抑制剂,其抑制活性为首次报道。

支持向量机在构建白介素-1β转化酶抑制剂药效团模型中的应用

以24个作用于人体外围血单核细胞药理模型的白介素-1β转化酶抑制剂作为研究对象,计算了其表征分子的拓扑、电子、几何结构等物理化学性质的1209个分子描述符,用CfsSubsetEval评价方法和BestFirst-D1-N5搜索方法筛选描述符,用Kennard-Stone方法选择训练集和测试集。分别采用支持向量机、决策树、贝叶斯网络、人工神经网络等机器学习方法建立分类预测模型并使用Catalyst/HipHop系统建立药效团模型。结果表明支持向量机优于其他分类模型,正、负样本的预测正确率均达到100%。最优药效团模型具有5个特征:2个疏水基团、2个脂性氢键受体、1个氢键给体;以此药效团进行中药数据库筛选得到384个候选白介素-1β转化酶抑制剂。利用支持向量机建立的分类预测模型对候选化合物的活性进行了预测,其中高活性化合物占96.6%,表明白介素-1β转化酶抑制剂药效团模型较准确地反映了高活性化合物的公共特征。该模型的建立有助于从中草药筛选新型白介素-1β转化酶抑制剂。

脑缺血再灌注后脑组织白介素-1β转化酶基因的表达

为探讨白介素 -1 β转化酶mRNA在前脑缺血再灌注后 1～ 4d被诱导表达及定位的情况 ,应用逆转录PCR方法检测沙土鼠前脑缺血再灌注模型白介素 -1 β转化酶mRNA的诱导情况 ;同时应用免疫组化方法对白介素 -1 β转化酶定位表达进行观察。结果白介素 -1 β转化酶mRNA在脑缺血再灌注后的 1～ 4d被诱导表达 ;非缺血海马区及皮层仅见锥体细胞及中间神经元白介素 -1 β转化酶的轻度表达 ;而白介素 -1 β转化酶在胶质细胞的表达在缺血后的 1～ 4d均可观察到 ,且逐渐增加 ,以第 3d最明显。结果证实了白介素 -1 β转化酶基因在脑缺血再灌注后的表达和定位 ,说明白介素 -1 β转化酶可能参与脑组织因缺血而发生的凋亡的发生过程。

Caspase-1抑制剂对大鼠局灶脑缺血再灌注后神经元损伤的影响

目的：研究YVAD-FMK(Caspase-1抑制剂)对大鼠局灶脑缺血再灌注后神经元损伤的影响。方法：采用大鼠局灶脑缺血再灌注模型，动态测量脑组织中IL—1β含量、脑含水量及血清NSE含量的变化以及YVAD-FMK对上述指标的影响。结果：YVAD-FMK能够减少脑组织IL-1β的含量，减轻脑水肿及能显著降低血清NSE升高的幅度。结论：YV4D-FMK对局灶脑缺血再灌注后神经元的损伤具有保护的作用。

YVAD-FMK对大鼠全脑缺血再灌注后神经元损伤的影响

目的 研究YVAD -FMK对大鼠全脑缺血再灌注后神经元的影响。方法 采用大鼠全脑缺血再灌注模型 ,动态测量脑组织中Ⅱ - 1β含量、脑水含量及海马CA1区神经元计数的变化以及YVAD -FMK对上述指标的影响。 结果 YVAD-FMK能够减少脑组织IL - 1β的含量 ,减轻脑水肿及能显著降低海马CA1区神经元减少的幅度。 结论 YVAD

大鼠脑损伤后脑细胞凋亡及ICE基因表达的变化

目的 研究创伤性脑损伤（TBI）后脑细胞凋亡的发生规律及白介素1-β转化酶（ICE）基因表达的变化，了解其变化规律及内在联系，揭示TBI后继发性脑损伤的发生机制。方法 于TBI模型上，运用组织原位标记凋亡细胞及免疫组化技术，观察TBI后1-14天大鼠大脑伤侧皮层、海马、白质等脑区细胞凋亡的发生及ICE基因表达的变化。结果 TBI后，伤侧大脑广泛存在凋亡现象，伤后1天即可出现凋亡细胞，3天达高峰，14天恢复正常；TBI后，ICE基因表达增高，其增高的时相与凋亡规律相似，ICE表达与细胞凋亡发生呈正相关。结论 细胞凋亡参与了大鼠TBI后脑细胞的死亡机制，凋亡是脑损伤后细胞死亡的一个重要原因；ICE基因在大鼠TBI后脑组织中表达增加，可能参与了TBI后细胞凋亡发生的正向调节。

脑缺血再灌注后ICE、Bcl-2的表达及丹参的神经保护作用研究

目的 观察凋亡相关基因白介素 - 1β转化酶 (ICE)、Bcl- 2在脑缺血后的表达情况以及丹参(RSM )对其影响。方法 健康沙土鼠 6 3只 ,随机分成三组 :假手术组、对照组和丹参组。采用沙土鼠前脑缺血再灌注模型 ,在沙土鼠脑缺血再灌注后的 2h、6h、12h、1d、3d、5d及 7d分别处死沙土鼠 ,将脑组织进行免疫组织化学染色观察。结果 ICE的蛋白表达主要在海马CA1区、CA4 区及皮质 ,免疫阳性细胞呈褐色 ,第 3天达高峰 ,第 5天后减少 ;丹参组ICE的蛋白表达明显减少 (P <0 .0 1)。Bcl- 2的蛋白表达主要在大脑皮层、纹状体、丘脑及海马等广泛区域 ,并于 6h达高峰 ,其后减少 ;丹参组Bcl - 2的蛋白表达明显增加 ,特别是在海马CA1区及大脑皮层区 (P <0 .0 1)。结论 ICE在调节脑缺血中可能发挥重要作用 ;Bcl- 2主要通过抑制细胞凋亡的早期环节而发挥作用 ;丹参能下调脑缺血后的ICE表达、上调脑缺血后的Bcl- 2表达进而发挥其神经保护作用。