中国人群白介素1受体相关激酶4基因多态性与脓毒症易感性的相关性研究

目的探讨白介素1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK4)多态性位点与脓毒症发生风险及疾病严重程度的关联性。方法采用Hapmap单倍型标签SNPs(htSNPs)策略和SNPstream分型方法,对255例脓毒症患者和260例对照个体进行分型。采用Logistic回归分析,校正性别、年龄、吸烟和饮酒、慢性病状态、A-PACHEⅡ评分和脓毒症病因等混杂因素的影响,评价IRAK4多态性位点与脓毒症的发生风险,以及脓毒症性休克、死亡和多器官功能障碍的遗传相关性。结果 IRAK4基因在中国人群中共捕获6个htSNPs。rs4251431 G/T,rs4251460A/C,rs4251513 G/C和rs4251545 G/A最终用于分型研究。4个htSNPs位点在病例和对照组中的基因型分布均呈Hardy-Weinberg平衡状态。IRAK4多态性位点及单倍体与脓毒症的发生风险和疾病严重程度均无明显相关性。结论在中国人群中,IRAK4基因多态性位点在脓毒症的发生、发展和病程转归中可能不发挥重要作用。

白介素1受体相关激酶1(IRAK1)和NF-κB在苯扎氯铵诱导的干眼症小鼠角膜和结膜组织中的表达

目的探讨白介素-1受体相关激酶1(interleukin-1 receptor-associated kinase 1,IRAK1)和NF-κB在苯扎氯铵诱导的干眼症小鼠角膜和结膜组织中的表达。方法选取6～8周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠60只。将小鼠分为对照组(15只)和干眼症模型组(45只)。向干眼症模型组小鼠双眼各滴入5μL浓度为0.75 g·L^(-1)的苯扎氯铵溶液,每天2次,持续7 d,诱导小鼠干眼模型;对照组小鼠不做处理。酚红棉线法测定泪液分泌量,分析各组小鼠各时间泪膜破裂时间,并行角膜和结膜HE染色。qRT-PCR检测角膜和结膜组织IL-1β、IL-6、IRAK1和NF-κB mRNA表达水平。免疫荧光染色检测IRAK1和NF-κB的表达和定位。结果干眼症模型组小鼠实验造模后1周和2周时,酚红棉线湿长降低,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。此外,干眼症小鼠泪液分泌量在造模后1周和2周增加了1.2～1.3倍,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。HE染色结果显示,与对照组小鼠相比,干眼症模型组小鼠结膜上皮细胞数增加,细胞排列欠整齐,同时伴有缺损。对照组角膜上皮细胞、基质胶原纤维排列整齐。干眼症模型组小鼠结膜组织IL-6 mRNA表达水平在造模后2周高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);4周时表达量比对照组增加了1倍,差异有统计学意义(P<0.05);干眼症模型组小鼠角膜组织中IL-6 mRNA表达量在造模后2周高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。干眼症模型组小鼠结膜组织中IL-1βmRNA在造模后1周和2周均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);4周时下降,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);而角膜组织中IL-1βmRNA在造模后1～4周内均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。干眼症模型组小鼠角膜组织中IRAK1 mRNA的表达水平在造模后1周和2周时均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),4周时降低;而结膜组织中IRAK1 mRNA表达水平在造模后1周和2周时与对照组相比无明显变化(均为P>0.05),4周时低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。干眼症小鼠角膜组织中NF-κB mRNA表达水平在造模后1周和2周时均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),4周时降低;而结膜组织中NF-κB mRNA表达水平仅在造模后2周时高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 IRAK1的表达随着干眼症病程动态变化,IRAK1可能通过促进NF-κB的核转移参与对干眼症炎症进程的调控。

白介素1受体相关激酶1在乳腺癌紫杉醇耐受患者治疗中的作用机制研究

目的探讨白介素1受体相关激酶1(IRAK1)在乳腺癌紫杉醇耐受患者治疗中的作用机制。方法选取2013年5月—2015年9月赣南医学院第一附属医院肿瘤科收集的乳腺组织(对照)及乳腺癌组织,其中对照女性16例,Basal-like型乳腺癌患者38例,Luminal-A型乳腺癌患者25例,Luminal-B型乳腺癌患者31例,HER2过表达型乳腺癌患者31例,三阴乳腺癌患者58例。取对照乳腺组织及乳腺癌组织,采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测IRAK1 mRNA的相对表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎性因子白介素(IL)-6、IL-8和CXC趋化因子配体1(CXCL-1)表达水平。培养乳腺癌细胞株HMEC、MCF7、MB415、MB436、MB468、BT549、SUM159,采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导乳腺癌细胞株产生紫杉醇耐受性,检测未经处理的细胞株和紫杉醇耐受细胞株IRAK1 mRNA相对表达水平。经shRNA或空白序列NC-shRNA转染紫杉醇耐受乳腺癌细胞株,采用q PCR检测增殖相关基因细胞周期蛋白(Cyclin)D1、增殖细胞核抗原(PCNA)和Cyclin A相对表达水平,凋亡相关基因p53、c-myc、Bcl-2、c-erb-2相对表达水平,迁移相关基因Cullin 1、Bcl-6和KLF6相对表达水平,采用ALDEFLUOR实验检测醛脱氢酶(ALDH)活性。结果各类型乳腺癌紫杉醇耐受患者IRAK1 mRNA相对表达水平均高于不耐受患者(P<0.05),三阴乳腺癌紫杉醇耐受患者IRAK1 mRNA相对表达水平均高于其他类型乳腺癌紫杉醇耐受患者(P<0.05)。对照者及各类型乳腺癌紫杉醇耐受患者IL-6、IL-8、CXCL-1表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。紫杉醇耐受的各乳腺癌细胞株IRAK1 mRNA相对表达水平均高于未经紫杉醇处理的细胞株(P<0.05)。经shRNA转染的紫杉醇耐受的各乳腺癌细胞株Cyclin D1、PCNA、Cyclin A相对表达水平均低于经NC-shRNA转染的各乳腺癌细胞株,p53、c-myc、Bcl-2、c-erb-2相对表达水平均高于经NC-shRNA转染的各乳腺癌细胞株,Cullin 1、Bcl-6相对表达水平、ALDH活性均低于经NC-shRNA转染的各乳腺癌细胞株,KLF6相对表达水平高于经NC-shRNA转染的各乳腺癌细胞株(P<0.05)。结论 IRAK1在紫杉醇耐受的乳腺癌细胞,尤其是三阴乳腺癌细胞中发挥重要作用。抑制IRAK1表达可显著降低乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,诱导癌细胞凋亡,IRAK1抑制剂可用于乳腺癌尤其是三阴乳腺癌的治疗。

白介素受体相关激酶-1基因多态性与类风湿关节炎的相关性

目的探讨白介素受体相关激酶-1(IRAK1)rs3027898和rs1059703多态性性与类风湿关节炎(RA)易感性及临床参数的关系。方法收集RA患者123例和体检的220名健康对照者外周血标本,采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)方法检测IRAK1 rs3027898和rs1059703基因多态性,收集并计算RA患者临床参数:发病年龄、性别、RF抗体、抗CCP抗体、RA疾病活动(DAS28≥3.2)、骨破坏和用药情况。结果 RA组IRAK1 rs3027898和rs1059703的基因型频率和等位基因频率与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。RA患者IRAK1 rs3027898和rs1059703基因型与发病年龄、性别、RF抗体和抗CCP抗体阳性率、骨破坏阳性率均无相关性(P>0.05)。RA患者IRAK1 rs3027898基因型与RA疾病活动无相关性(P>0.05),RA患者IRAK1 rs1059703基因型与RA疾病活动存在相关性(P<0.05),携带CT+TT基因型RA患者疾病活动的风险是携带CC基因型RA患者4.243倍(P=0.023,OR=4.243,95%CI为1.223～14.715)。结论我国汉族人群中,IRAK1 rs3027898和rs1059703多态性与RA的易感性无关,但IRAK1 rs1059703多态性可能是RA患者疾病活动的一个遗传危险因素。

IRAK-4在白介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLRs)介导的炎症信号通路中的关键作用

白介素-1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4;IRAK-4)是近年来发现的参与机体先天性免疫反应过程中的关键分子。它与另外3个成员IRAK-1、IRAK-2、IRAK-M同属于IRAK家族,目前经过对IRAK-4分子的激酶活性以及其对炎症反应的正向和负向的调控作用的研究表明,IRAK-4分子联系着上下游的信号转导,在TLRs/IL-1R介导的炎症信号通路中的作用更为关键。本文就IRAK-4分子的活性、以及IRAK-4分子在TLRs/IL-1R介导的炎症信号转导通路中的作用作一综述。以期设计出针对IRAK-4特异性的药物,或者通过基因治疗手段干预IRAK-4表达,为感染控制提供新的思路,开发出新的抗炎药物。

白介素-1受体相关激酶-M在脂多糖预处理减轻慢性肝损伤机制中的作用

目的:探讨脂多糖(LPS)预处理对四氯化碳(CCl4)诱导的慢性肝损伤的影响及肝组织中白介素-1受体相关激酶-M(I-RAK-M)表达的变化。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、肝损伤组和LPS预处理组。制备肝切片,计数浸润肝组织的淋巴细胞;测定血浆内毒素水平和丙氨酸转氨酶(ALT)活性、肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫印迹法测定肝组织中p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)和IRAK-M表达。结果:LPS预处理可明显减轻CCl4所致的慢性肝损伤,经LPS预处理动物肝组织切片淋巴细胞计数、血浆ALT水平与肝损伤组比较均显著降低;肝匀浆的TNF-α测定结果表明,LPS预处理组TNF-α含量明显低于肝损伤组。LPS处理组pp38MAPK的表达比肝损伤组显著减弱,而IRAK-M表达显著增强。结论:LPS预处理可以减轻CCl4诱导的慢性肝损伤,其机制可能是IRAK-M负性调节LPS信号转导通路,致使致炎因子分泌减少。

白介素1受体相关激酶1在乳腺癌紫杉醇耐受患者治疗中的作用机制

目的:探讨白介素1受体相关激酶1在乳腺癌紫杉醇耐受患者治疗中的作用机制并作分析。方法:选取乳腺癌患者150例,其中包括Basal-like型乳腺癌、Luminal-A型乳腺癌、Luminal-B型乳腺癌、HER2过表达型乳腺癌及三阴乳腺癌各30例。获取所有参与对象的乳腺组织、乳腺癌组织,并应用实时荧光定量检测方法进行白介素1受体相关激酶1检测,并作比较分析。结果:五类型乳腺癌(Basal-like型、Luminal-A型、Luminal-B型、HER2过表达型、三阴)有紫杉醇耐受的IRAK1 m RNA相对表达水平均高于无紫杉醇耐受的IRAK1 m RNA相对表达水平,P<0.05。结论:在乳腺癌紫杉醇耐受患者治疗中白介素1受体相关激酶1有着重要作用意义及应用价值。

白三烯D_4和白介素13对人肺成纤维细胞白三烯受体1 mRNA表达及嗜酸粒细胞趋化因子产生的影响

探讨白三烯D4(LTD4)和白介素13(IL-13)对人肺成纤维细胞白三烯受体(CysLT1R)表达和eotaxin产生的影响。采用培养人肺成纤维细胞株(MRC-5),以不同浓度的IL-13进行刺激,用实时定量RT-PCR法测定CysLT1R mRNA表达的变化。再以不同浓度的LTD4和IL-13刺激,用ELISA法测定上清液中eotaxin的浓度,并观察Montelukast对eotaxin的产生是否有抑制作用。结果显示,培养的人肺成纤维细胞上存在着CysLT1R mRNA的低表达,以10 ng/ml IL-13刺激时,随着刺激时间延长,CysLT1R mRNA表达逐渐增高,48 h达高峰,较未刺激时表达增加(18.56±7.41)倍(P<0.01)。当以10 ng/ml和100 ng/ml的IL-13浓度刺激48 h时,较未刺激细胞CysLT1R mRNA表达分别增加(17.33±3.81)倍和(20.11±5.05)倍(P<0.01)。IL-13也能促进成纤维细胞产生eotaxin,以10 ng/ml和100 ng/ml的IL-13刺激成纤维细胞时,eotaxin浓度分别为(155.43±15.95)pg/ml和(221.31±17.23)pg/ml,较未刺激细胞(31.67±3.49)pg/ml明显增加(P<0.01)。单独给予LTD4刺激时,eotaxin浓度则无明显变化。但是以1×10-7mol/L和1×10-6mol/L浓度的LTD4分别联合10 ng/ml的IL-13共同刺激时,产生eotaxin的浓度分别为(204.4±25.4)pg/m和(255.1±38.3)pg/ml;较仅给予10 ng/ml的IL-13刺激时(155.4±16.0)pg/ml明显增加(P<0.01)。在LTD4+IL-13刺激组中,加入Mointelukast后eotaxin浓度为(148.3±15.7)pg/ml,较不加Montelukast(204.4±25.4)pg/ml明显降低(P<0.01)。人肺纤维细胞存在着CysLT1R mRNA的低表达,IL-13能够上调其表达,呈现时间与浓度依赖性。IL-13和LTD4对人肺成纤维细胞分泌的eoitaxin具有协同刺激作用,这可能与IL-13上调成纤维细胞CysLT1R mRNA表达有关,而Montelukast对这种刺激具有拮抗作用。

白介素-1受体相关激酶与神经系统疾病的研究进展

白介素-1受体相关激酶(the interleukin-1 receptor associated kinases,IRAK)是一类细胞内激酶,在Toll样受体及白介素-1受体介导的信号通路中发挥重要作用,对炎症反应起正向或负向调节作用。近年来的研究表明IRAK参与了脑缺血、脑出血、癫痫、阿尔茨海默病等神经系统疾病的发生发展。本文就IRAK与神经系统疾病的关系研究进展加以综述,有助于研究神经系统疾病的发病机制及寻找新的治疗方向。

白介素-1受体相关激酶的免疫调控及其在炎症性肠病中的研究进展

白介素-1受体相关激酶家族(IRAKs)是一类丝氨酸-苏氨酸激酶,介导来自TLRs和白介素-1受体(IL-1R)的信号激活。IRAKs由4名成员组成:IRAK1、IRAK2、IRAKM、IRAK4,与先天免疫、适应性免疫和炎症的正向或负向调节密切相关。越来越多证据表明,IRAKs在炎症性肠病(IBD)发生发展中起重要免疫调节作用。本文就IRAKs的结构、功能、转录和调控及其在IBD中的作用进行综述,以期寻找新的IBD诊治靶点。

白细胞介素1受体相关激酶4活性在皮瓣缺血再灌注损伤中的作用

背景:白细胞介素1受体相关激酶4活性引发炎症及感染的作用已得到广泛认可,但其对皮瓣缺血再灌注损伤是否有影响尚无文献报道。目的:探讨白细胞介素1受体相关激酶4活性在皮瓣缺血再灌注损伤中的意义。方法:将36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注损伤组、白细胞介素1受体相关激酶4抑制剂组,每组12只。制备右下腹岛状皮瓣缺血再灌注损伤模型,白细胞介素1受体相关激酶4抑制剂处理组于再灌注前腹腔注射1 mL白细胞介素1受体相关激酶1/4抑制剂(100μmol/L),分别采集缺血再灌注后1,2,4,6 h的皮瓣行组织病理学观察,取缺血再灌注后1 h的皮瓣组织行白细胞介素1受体相关激酶4的蛋白表达量,并于术后7 d计算皮瓣存活比例。结果与结论:组织病理学观察显示,与缺血再灌注损伤组相比,白细胞介素1受体相关激酶4抑制剂组中性粒细胞浸润及组织水肿程度明显改善,白细胞介素1受体相关激酶4的蛋白表达量逐渐降低。术后7 d缺血再灌注损伤组皮瓣存活比例为(51.70±7.62)%,白细胞介素1受体相关激酶4抑制剂组皮瓣存活比例高达(86.56±12.23)%,两组比较差异有显著性意义(P<0.01)。提示大鼠皮瓣缺血再灌注损伤后,可以通过抑制白细胞介素1受体相关激酶4活化提高移植皮瓣的成活率。

白细胞介素1受体相关激酶4基因沉默抑制人成骨样细胞相关基因的表达

背景:造成假体周围骨溶解的完整分子机制目前尚未完全清楚。假体周围骨溶解、吸收是人工关节松动的典型病理生理过程。白细胞介素1通过MAPK信号通路影响骨吸收进程。目的:实验通过观察siRNA沉默白细胞介素1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase-4,IRAK-4)基因表达对人成骨样细胞株MG63的MAPK信号转导通路的影响,为防治人工关节置换后假体周围骨溶解提供实验基础。方法:以Lipofectamine 2000为载体将IRAK-4-siRNA转染入MG63细胞。实验分为3组,空白组不加入任何转染试剂;对照组以scrambled siRNA序列进行转染;沉默组以特异性IRAK-4-siRNA序列进行转染。Western blot检测靶细胞细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK基因的表达。结果与结论:与对照组相比,靶基因沉默组的IRAK-4 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。MG63细胞IRAK-4表达下调后,与空白组和对照组相比,c-Jun氨基末端激酶1/2P46、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2、磷酸化p38MAPK表达下调分别为62%,64%,68%(P<0.05)。结果证实,siRNA沉默IRAK-4基因抑制人成骨样细胞株MG63细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK基因的表达。

饲粮中添加不同比例黄芪副产物对绵羊脾脏中Toll样受体2和白细胞介素-1受体相关激酶4表达的影响

本试验旨在研究基础饲粮中添加不同比例黄芪副产物对绵羊脾脏中Toll样受体2(TLR2)和白细胞介素-1受体相关激酶4(IRAK4)表达的影响。选取健康、体重[(27.43±3.61)kg]接近的3月龄澳洲白与湖羊杂交F1公羔68只,随机分为4组,每组17只羊。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加2%(2%组)、4%(4%组)、6%(6%组)的黄芪副产物。预试期10 d,正试期60 d。结果表明:1)各组绵羊的终末体重、平均日增重和平均干物质采食量差异不显著(P>0.05)。2%组羔羊的脾脏指数显著高于对照组、4%组和6%组(P<0.05),而4%组、6%组与对照组之间差异不显著(P>0.05)。2)2%组绵羊脾脏中TLR2和IRAK4的mRNA和蛋白相对表达量显著高于对照组、4%组和6%组(P<0.05)。3)免疫组化染色发现TLR2蛋白主要定位在饲喂不同比例黄芪副产物绵羊脾脏红髓的脾窦中,IRAK4蛋白主要定位在饲喂不同比例黄芪副产物绵羊脾脏红髓的脾索中。由此可见,基础饲粮中添加2%的黄芪副产物不仅可以增加绵羊的脾脏指数,还可以上调脾脏中TLR2和IRAK4基因的表达,从而在机体的免疫调节中发挥作用。

荔枝核总黄酮通过抑制TLR4-TAK1抗大鼠肝纤维化的机制分析

目的探讨荔枝核总黄酮对四氯化碳(CCl 4)诱导的肝纤维化模型的抗肝纤维化作用机制。方法利用40%CCl 4-花生油溶液背部皮下注射构建肝纤维化大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组、扶正化瘀组、荔枝核总黄酮低、中、高剂量组,另设空白组。连续灌胃给药8周后,取肝左大叶进行HE染色,观察肝脏组织病理变化;RT-qPCR法检测各组大鼠肝脏ColⅠ、ColⅢ、α-SMA mRNA的表达水平;并通过Western blotting检测大鼠肝脏Toll样受体-4(TLR4)、转化生长因子β激活激酶1(TAK1)、磷酸化转化生长因子β激活激酶1(P-TAK1)、氨基末端蛋白激酶(JNK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(P-JNK)的表达情况。结果肝组织HE染色显示,与肝纤维化模型大鼠比较,荔枝核总黄酮各剂量均能不同程度的改善大鼠肝脏炎症浸润情况。肝纤维化相关因子检测显示,荔枝核总黄酮各剂量肝脏ColⅠ、ColⅢ与α-SMA mRNA表达下降(P<0.05或P<0.01)。Western blotting检测结果显示,与模型组比较,荔枝核总黄酮低、中剂量组肝脏TLR4、P-TAK1蛋白表达下降(P<0.05),低剂量组的肝脏P-JNK蛋白也降低(P<0.05)。结论荔枝核总黄酮能减轻CCl 4诱发的大鼠肝纤维化,此作用可能与抑制肝脏TLR4-TAK1通路有关。

乳腺癌组织中免疫共刺激分子B7-H1与受体酪氨酸激酶EphA4蛋白的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中免疫共刺激分子B7-H1与受体酪氨酸激酶Eph A4蛋白的表达及意义。方法 82例病理诊断为乳腺癌患者,乳腺癌TNM分期Ⅰ期23例、Ⅱ期38例、Ⅲ期15例、Ⅳ期6例,分析B7-H1、Eph A4蛋白与乳腺癌TNM分期的相关性。以同期良性乳腺病变55例患者为对照,观察B7-H1、Eph A4蛋白的阳性率。结果与乳腺良性病变患者相比,乳腺癌患者B7-H1阳性率高(P<0.05)、Eph A4蛋白阳性率低(P<0.05)。Spearman分析发现B7-H1与TNM分期呈正相关(r=0.4682,P<0.05),Eph A4蛋白与TNM分期呈负相关(r=-0.3402,P<0.05)。结论 B7-H1促进肿瘤细胞免疫逃逸、Eph A4蛋白抑制癌细胞活化增殖能力降低,均参与了乳腺癌病理发展,均可作为乳腺癌诊断和治疗的潜在靶点。

白藜芦醇对人白细胞介素-1受体相关激酶-M基因表达的抑制作用及其机制

目的探讨白藜芦醇对人白细胞介素-1受体相关激酶-M(IRAK-M)基因表达的抑制作用及其分子机制。方法用不同浓度的白藜芦醇分别作用于转染神经前体细胞表达发育调控样蛋白4(Nedd4L)-HA或IRAK-M-Flag质粒的Hela细胞和人单核细胞株THP1细胞,处理20 h后采用Western印迹法检测其Nedd4L和IRAK-M的表达。在A549和Hela细胞中分别共转染IRAK-M-Flag和不同浓度的Nedd4L-HA表达质粒,36 h后采用Western印迹法检测IRAK-M和Nedd4L的表达。用IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA表达质粒分别单独转染、共同转染至Hela细胞,36 h后用细胞裂解液处理细胞,采用免疫共沉淀法检测IRAK-M与Nedd4L的相互作用。在A549细胞中分别共转染IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA表达质粒,36 h后采用免疫荧光法检测IRAK-M和Nedd4L的共定位情况。结果 Hela细胞中分别转染2μg外源Nedd4L-HA或IRAK-M-Flag质粒24 h后,0、10、20μmol/L白藜芦醇处理20 h,Western印迹法检测结果显示,10、20μmol/L白藜芦醇处理组的Nedd4L-HA蛋白质相对表达量均显著高于0μmol/L白藜芦醇处理组(P值均<0.01),而10、20μmol/L白藜芦醇处理组IRAK-M-Flag蛋白质相对表达量均显著低于0μmol/L白藜芦醇处理组(P值均<0.05),且20μmol/L白藜芦醇处理组显著低于10μmol/L白藜芦醇处理组(P<0.01)。0、10、20μmol/L白藜芦醇处理THP1细胞20 h,Western印迹法检测结果显示,10、20μmol/L白藜芦醇处理组的Nedd4L蛋白质相对表达量均显著高于0μmol/L白藜芦醇处理组(P值均<0.01),而IRAK-M蛋白质相对表达量均显著低于0μmol/L白藜芦醇处理组(P值均<0.05)。在A549和Hela细胞中分别转染1μg的IRAK-M-Flag和不同质量(0、0.5、1μg)的Nedd4L-HA表达质粒,Western印迹法结果显示,在A549细胞中,0.5、1μg Nedd4L-HA转染组的IRAK-M-Flag蛋白质相对表达量均显著低于0μg Nedd4L-HA转染组(P值均<0.01);在Hela细胞中,0.5、1μg Nedd4L-HA转染组的IRAK-M-Flag蛋白质相对表达量均显著低于0μg Nedd4L-HA转染组(P值均<0.01)。用IRAK-M-Flag、Nedd4L-HA表达质粒分别单独转染、共同转染至Hela细胞中,免疫共沉淀检测结果显示,在共表达IRAK-M和Nedd4L的细胞裂解物中,用抗Flag的抗体能将Nedd4L-HA沉淀下来,用抗HA的抗体同样能将IRAK-M-Flag沉淀下来。将表达质粒IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA共同转染至A549细胞中,36 h后免疫荧光检测结果显示,在共转染的细胞中,可观察到绿色荧光和红色荧光以重叠形式分布于细胞膜和细胞质中。结论白藜芦醇可抑制IRAK-M蛋白的表达,其作用机制可能与Nedd4L蛋白的表达上调有关。

miR-485-5p通过靶向白介素-1受体关联激酶4调控巨噬细胞炎症反应

目的探究miR-485-5p对白介素-1受体关联激酶4(IRAK-4)的靶向作用,研究其在巨噬细胞模型炎症反应中的调控作用。方法合成miR-485-5p模拟物(mimics)及其抑制剂(inhibitors),分别转染HEK-293T细胞,RT-PCR检测miR-485-5p的表达水平。根据miRNA靶向作用预测数据分析选定IRAK-4作为研究的靶基因,构建IRAK-43'UTR及其突变体萤火虫-海肾双荧光素酶报告基因系统,通过检测在细胞模型中过表达/抑制表达miR-485-5p后对荧光素酶活力的影响,验证miR-485-5p与IRAK-4之间的靶向关系,Westernblot检测IRAK-4蛋白质表达水平。构建巨噬细胞模型,将miR-485-5pmimics及inhibitors分别转染巨噬细胞,RT-PCR检测靶基因IRAK-4mRNA的表达水平,ELISA检测上清中下游致病因子IL-6、IL-17、IL-18的表达。结果通过实验证实miR-485-5p与IRAK-4存在靶向作用。细胞模型中,与对照组相比,转染miR-485-5pmimics后miR-485-5p表达水平升高了17.15倍(P<0.01),转染miR-485-5pinhibitors后miR-485-5p表达水平降低了79.80%(P<0.05)。过表达miR-485-5p后明显抑制IRAK-4的蛋白水平表达及mRNA相对含量,抑制下游炎性因子IL-6、IL-17、IL-18的表达(P<0.05);抑制表达miR-485-5p,则上调IRAK-4的蛋白水平及mRNA相对含量,可显著提高IL-6、IL-17、IL-18的释放(P<0.05)。结论证实miR-485-5p可以通过对靶向IRAK-4的特异性序列,调控下游炎性细胞因子的表达,进而调控细胞的炎症反应。

G蛋白偶联受体激酶4突变A142V基因对大鼠血管平滑肌细胞AT_1受体的影响

目的研究人G蛋白偶联受体激酶4(GRK4)变异体A142V对大鼠血管平滑肌细胞(VMSCs)血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体及其介导的VMSCs增殖的影响,以期了解GRK4引起原发性高血压的原因。方法构建与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的慢病毒载体,包装慢病毒,感染A10细胞并进行鉴定;免疫印迹方法检测AT1受体蛋白变化;采用分光光度法检测GRK4活性,免疫共沉淀检测GRK4和AT1受体的共连接;[3 H]胸腺嘧啶掺入的方法检测增殖变化。结果转染hGRK4γA142V细胞的GRK4酶活性显著升高,AT1受体表达显著升高,GRK4和AT1受体共连接作用降低,AngⅡ刺激细胞增殖效应显著增强。结论转染hGRK4变异体A142V增加GRK4活性,引起AT1受体的功能增强和VMSCs的增殖作用增加。

血清穿透素-3 载脂蛋白B/载脂蛋白A1 可溶性白细胞介素2受体水平变化与重症急性胰腺炎患者Ranson评分的关联性分析

目的探讨血清穿透素-3(PTX-3)、载脂蛋白(Apo)B/A1、可溶性白细胞介素2受体(SIL-2R)水平变化与重症急性胰腺炎(SAP)患者Ranson评分的关联性。方法选取2019年3月至2020年3月我院SAP患者71例及同期急性胰腺炎非重症(非SAP)患者60例,均检测血清PTX-3、ApoB/A1、SIL-2R水平,评估Ranson评分。比较SAP、非SAP患者一般资料、血清PTX-3、ApoB/A1、SIL-2R水平及Ranson评分,分析血清PTX-3、ApoB/A1、SIL-2R水平与Ranson评分的相关性、SAP发生的影响因素及联合检测对SAP患者的诊断价值。结果SAP患者血清PTX-3、ApoB/A1、SIL-2R水平、Ranson评分高于非SAP患者(P<0.05);SAP患者血清PTX-3、ApoB/A1、SIL-2R水平与Ranson评分均呈正相关(P<0.05);血清PTX-3、ApoB/A1、SIL-2R水平升高是发生SAP的危险因素(P<0.05);联合检测曲线下面积(AUC)值(0.834)大于PTX-3检测(0.726)、ApoB/A1检测(0.753)、SIL-2R检测(0.719)(P<0.05)。结论SAP患者血清PTX-3、ApoB/A1、SIL-2R水平与Ranson评分具有密切相关性,联合检测可提高诊断效能,临床应用价值较高。

射血分数保留性心力衰竭患者血清miR-146a,IRAK-1表达水平与血管内皮功能、心室重构的相关性分析

目的探讨射血分数保留性心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)患者血清微小RNA(micro RNA,miR)-146a、白介素1受体相关激酶1(interleukin-1 receptor-associated kinase 1,IRAK-1)表达水平及其与血管内皮功能、心室重构的相关性。方法选择2021年6月~2022年3月在内蒙古医科大学附属医院收治的93例HFpEF患者为观察对象,选择同期门诊体检健康者(无心血管病史)90例为对照组,收集患者资料,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测血清mi R-146a和IRAK-1 mRNA表达,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清内皮素-1(endothelin-1,ET-1)水平,化学发光法检测血清一氧化氮(nitric oxide,NO)水平,超声心动图检查左室射血分数(LVEF)、二尖瓣口舒张早期最大血流速度E峰与舒张晚期最大血流速度A峰的比值(E/A)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心房内径(LAD)和左室质量指数(LVMI)。Pearson法分析HFpEF患者血清miR-146a和IRAK-1 mRNA表达水平的相关性及miR-146a,IRAK-1与血管内皮功能、心室重构相关性指标的相关性,ROC曲线分析血清miR-146a和IRAK-1对HFpEF的诊断价值。结果与对照组比较,HFpEF组血清miR-146a(2.13±0.35 vs 1.05±0.21)表达水平升高,IRAK-1 mRNA(0.65±0.10 vs 1.03±0.12)表达水平降低,差异有统计学意义(t=25.209,23.302,均P<0.05);HFpEF患者血清miR-146a与IRAK-1 mRNA水平呈负相关(r=-0.473,P<0.001),血清miR-146a与ET-1,LVEDD,LAD,LVMI呈正相关(r=0.501,0.556,0.391,0.601,均P<0.001),与血清NO,LVEF,E/A呈负相关(r=-0.453,-0.623,-0.613,均P<0.001);IRAK-1 mRNA与血清ET-1,LVEDD,LAD,LVMI呈负相关(r=-0.369,-0.478,-0.551,-0.457,均P<0.001),与血清NO,LVEF,E/A呈正相关(r=0.447,0.605,0.567,均P<0.001)。血清miR-146a,IRAK-1联合诊断HFpEF的AUC显著高于miR-146a,IRAK-1单独诊断(Z=2.122,2.067,P=0.033,0.038)。结论HFpEF患者血清miR-146a表达水平升高,IRAK-1表达水平降低,与血管内皮功能、心室重构相关,可能成为HFpEF诊断与病情评估的指标。