支气管哮喘患儿白介素1受体1基因RS1041973及RS10208293位点单核苷酸多态性观察

目的观察支气管哮喘患儿白介素1受体1(Interleukin 1 receptor-like 1,IL1RL1)基因RS1041973、RS10208293位点的单核苷酸多态性。方法 86例哮喘患儿为哮喘组,100例健康婴幼儿为对照组,收集两组外周血,ARMS-qPCR法检测分析IL1RL1基因RS1041973、RS10208293位点的基因型和等位基因。结果哮喘组IL1RL1基因RS1041973位点基因型AA、AC、CC的分布频率分别为3. 5%(3/86)、23. 3%(20/86)、73. 2%(63/86),等位基因A、C的分布频率分别为15. 2%(26/172)、84. 8%(146/172);对照组分别为8. 0%(8/100)、26. 0%(26/100)、66. 0%(66/100)、21%(42/200)、79%(158/200);两组AC、CC基因型分布频率及等位基因A、C的分布频率差异存在统计学意义(P均<0. 05)。与RS1041973位点基因型AA基因人群比较,RS1041973位点AC、CC基因型的个体患支气管哮喘的风险性增加(校正OR=1. 769,2. 212; 95%CI:0. 47～6. 655,0. 637～7. 687);且携带C等位基因的个体患支气管哮喘的危险度是A基因的1. 506倍(95%CI:0. 726～3. 126,P <0. 05)。哮喘组IL1RL1基因RS10208293位点基因型AA、AG、GG的分布频率分别为4. 6%(4/86)、25. 6%(22/86)、69. 8%(60/86),等位基因A、G的分布频率分别为17. 4%(30/172)、82. 6%(142/172);对照组分别为7. 0%(7/100)、29. 0%(29/100)、64. 0%(64/100)、21. 5%(43/200)、78. 5%(157/200);两组AG、GG基因型分布频率及等位基因A、G的分布频率差异存在统计学意义(P均<0. 05)。与RS10208293位点基因型AA基因人群比较,RS10208293位点AG、GG基因型的个体患哮喘的风险性增加(校正OR=1. 255,1. 531; 95%CI:0. 355～-4. 442,0. 463～-5. 067);且携带G等位基因的个体患哮喘的危险度是A基因的1. 36倍(95%CI:0. 673～2. 749,P <0. 05)。结论支气管哮喘患儿IL1RL1基因RS1041973位点C等位基因、RS10208293位点G等位基因突变频率较高。IL1RL1基因RS1041973位点A/C的C等位基因、RS10208293位点A/G的G等位基因的突变可能与支气管哮喘的易感性有关。

miR-146b调控甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的机制研究

目的探讨miR-146b在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞增殖、转移和凋亡中的作用及相关机制。方法qRT-PCR检测miR-146b在PTC细胞(NPA、GLAG-66、ONCNO-DG1和B-CPAP)和正常人甲状腺细胞系HTori3中的表达水平。miR-146b抑制剂转染B-CPAP细胞后,通过qRT-PCR检测其抑制效率,利用MTT实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测miR-146b对PTC细胞增殖、侵袭能力及凋亡率的影响。SiRNA-IRAK1转染B-CPAP细胞后,利用MTT实验、细胞划痕实验和流式细胞术分别检测IRAK1对PTC细胞增殖率、转移及凋亡率的影响。利用生物信息学软件预测miR-146b的靶基因白介素1关联受体激酶1(interleukin-1 receptor-associated kinases,IRAK1),并通过双荧光素报告基因实验验证miR-146b对IRAK1的调控作用。应用SPSS 20.0软件进行分析,组间对比采用两独立样本t检验。结果qRT-PCR结果表明,与正常细胞HTori3相比,miR-146b在NPA87、KAT-5、FTC-133和B-CPAP细胞系中表达显著升高,尤以B-CPAP较高[相对表达量1 vs(1.61±0.11)、(1.92±0.21)、(1.93±0.22)、(2.43±0.31),P<0.05]。miR-146b抑制剂转染后可显著降低B-CPAP细胞中miR-146b的表达水平[相对表达量1 vs(0.41±0.12,P<0.01]。MTT结果发现,miR-146b抑制剂可抑制B-CPAP细胞的增殖能力[相对增殖率值1.00 vs(0.52±0.12)、(0.56±0.11)、(0.62±0.12),P<0.05]。流式细胞仪检测发现,miR-146b抑制剂可促进B-CPAP细胞的凋亡能力[(3.74%±0.12%)vs(7.62%±0.21%),P<0.05]。Transwell结果表明,miR-146b抑制剂可减弱B-CPAP细胞的侵袭能力[侵袭细胞数目(280.00±67.00)vs(82.00±32.00),P<0.05]。转染入siRNA-IRAK1后,B-CPAP细胞增殖率显著升高[MTT实验,相对增殖率1 vs(2.11±0.21)、(2.33±0.18)、(2.21±0.16)]、转移能力增强[细胞划痕实验,24 h相对迁移率(0.58%±0.11%)vs(0.81%±0.21%)]且细胞凋亡率显著降低[流式细胞术,相对凋亡率(6.96%±1.12%)vs(24.30±1.52%),P<0.05]。双荧光素酶报告基因结果显示,IRAK1是miR-146b的靶基因[相对荧光素酶活性(0.85±0.11)vs(1.19±0.17),P<0.05],miR-146b抑制剂可显著上调B-CPAP细胞中IRAK1蛋白的表达水平[相对灰度值1.00 vs(2.76±0.99),P<0.05)]。结论miR-146b可能通过抑制下游靶蛋白IRAK1的表达来促进PTC细胞增殖、转移和抑制细胞凋亡的作用。