白介素-1β基因敲除对小鼠行为的影响

白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)是脑内一种常见的促炎因子,在生理水平下由小胶质细胞和神经元释放并维持在较低表达量。文章选用成年小鼠为实验对象,采用不同的行为学范式研究IL-1β基因敲除对小鼠行为的影响。研究发现,IL-1β基因敲除不会影响小鼠的基本运动能力,但显著减少了小鼠进入Y迷宫新臂和新物体识别测试中嗅探新物体的时间和次数,增加了小鼠在悬尾以及强迫游泳测试中的静止时间。结果表明敲除IL-1β基因降低了小鼠的学习记忆能力,同时诱导了小鼠的焦虑抑郁样行为。该研究证明了IL-1β基因敲除会对小鼠的基本认知行为和情绪行为造成损害,为后续研究生理条件下炎症因子的正常表达对脑功能的作用提供了重要依据。

黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)、cAMP和脑组织NF-κB表达的影响

目的:观察黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用并探讨其作用机制。方法:采用背部皮下注射干酵母构建大鼠发热模型,SD雄性大鼠随机分为正常对照,模型组,阳性组(阿司匹林,0.1 g/kg),黄芩苷高、中、低剂量组(160、80、40 mg/kg),连续给药3 d,测定各组大鼠肛温的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))与环磷酸腺苷(cAMP)水平;Western Blot检测各组大鼠脑组织NF-κB p65(核转录因子-κB p65)蛋白表达。结果:黄芩苷高剂量组有显著解热效果(P<0.01),黄芩苷各剂量组均可不同程度降低大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE 2和cAMP含量;与正常组比较,模型组脑组织NF-κB p65蛋白表达增多,黄芩苷高剂量组可明显降低大鼠脑组织NF-κB p65表达(P<0.05)。结论:黄芩苷可显著性降低干酵母引起的体温升高,解热机制可能与抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)与cAMP的分泌和减少脑组织NF-κB p65蛋白表达有关。

miR-185-5p通过靶向抑制IL-1β减轻急性痛风性关节炎的炎症反应

目的 探索白细胞介素1β(IL-1β)在急性痛风性关节炎(AGA)的关节损伤过程中与miR-185-5p的关系。方法 采用实时荧光定量PCR检测89名AGA患者及91名健康志愿者的血清miR-185-5p的水平,采用Pearson相关系数法评估miR-185-5p的表达水平与视觉模拟(VAS)评分以及IL-1β水平之间的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-185-5p对AGA的诊断价值。采用尿酸钠(MSU)诱导THP-1细胞建立体外急性痛风性炎症细胞模型,通过体外转染miR-185-5p模拟物或抑制物增加或降低THP-1细胞miR-185-5p的表达水平后,采用ELISA检测THP-1细胞白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-8及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平;荧光素酶报告基因实验确定miR-185-5p与IL-1β的3′-非翻译区(3′-UTR)的相互作用。结果 与健康对照组相比,AGA患者血清miR-185-5p的水平显著降低;血清miR-185-5p的水平与VAS评分和IL-1β的表达水平均呈负相关;ROC曲线下面积为0.905,敏感性为80.17%,特异性为83.52%。下调miR-185-5p显著促进THP-1细胞IL-1β、 IL-8及TNF-α的表达,而过表达miR-185-5p则呈现相反的结果;荧光素酶报告基因实验显示IL-1β是miR-185-5p的靶基因,并且负调控IL-1β的表达。结论 miR-185-5p通过靶向抑制IL-1β减轻AGA的炎症反应。

过表达miR-144-3p下调感染巨噬细胞 IL-6 mRNA抑制BCG的存活

探究miR-144-3p对巨噬细胞IL-6 mRNA表达量和巨噬细胞免疫能力的影响,为结核诊疗提供理论参考。方法(1)建立BCG感染THP-1巨噬细胞模型,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;(2)瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂来过表达/抑制miR-144-3p后,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;皮尔森相关系数分析miR-144-3p和IL-6 mRNA的相关性;(3)CCK-8检测瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂后,CCK-8检测BCG感染的巨噬细胞增殖能力;CFU检测BCG存活状态。结果显示:(1)巨噬细胞感染BCG后,miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-144-3p表达量在12 h达到峰值,IL-6 mRNA表达量在24 h达到峰值;(2)巨噬细胞感染BCG后,过表达miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著下降(P<0.01);抑制miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著上升(P<0.01);皮尔森相关系数分析结果显示两者存在负相关性;(3)过表达/抑制miR-144-3p不影响巨噬细胞增殖能力,但过表达miR-144-3p能抑制巨噬细胞中BCG的存活。结论:BCG感染巨噬细胞后miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升;过表达/抑制巨噬细胞miR-144-3p,miR-144-3p可能负调控IL-6 mRNA表达;过表达miR-144-3p能抑制BCG存活,进而增强巨噬细胞的先天免疫能力。

白介素-1和白介素-2对人甲状腺细胞cAMP生成的调节作用

免疫与内分泌调控的相互关系是医学界近年关注的热点，细胞因子在甲状腺生长、功能和自身免疫性甲状腺疾病(AITD)发病机理中的作用也日益受到人们的重视，但这方面的研究尚处于初级阶段，结论仍有较大分歧。本文在国内率先研究IL-1和IL-2对人甲状腺细胞cAMP生成的影响，旨在探讨细胞因子与甲状腺功能的内在联系，及其在AITD发病中的作用和意义。

猫眼草提取物通过miR-30a-5p/NF-κB抑制白介素-1β诱导结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究猫眼草提取物是否通过miR-30a-5p/核因子κB(NF-κB)调节白介素-1β(IL-1β)诱导的结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法将HT29细胞分为:NC组、IL-1β组、低剂量(2.5 mg·L^(-1))+IL-1β组、中剂量(5 mg·L^(-1))+IL-1β组、高剂量(10 mg·L^(-1))+IL-1β组、miR-NC+IL-1β组、miR-30a-5p+IL-1β组、anti-miR-NC+高剂量+IL-1β组、anti-miR-30a-5p+高剂量+IL-1β组。采用细胞计数试剂盒-8法检测各组细胞增殖活性,克隆形成实验检测细胞克隆,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞蛋白的表达水平,qRT-PCR检测miR-30a-5p表达水平。结果与NC组比较,IL-1β组结直肠癌细胞HT29的增殖活性、细胞克隆数、迁移及侵袭数量增多,miR-30a-5p表达水平减弱(均P<0.01)。与IL-1β组比较,低剂量+IL-1β组、中剂量+IL-1β组、高剂量+IL-1β组结直肠癌细胞HT29的增殖活性、细胞克隆数、迁移及侵袭数量降低,miR-30a-5p表达水平提升(均P<0.01);高剂量+IL-1β组中p-p65表达水平低于IL-1β组(P<0.01)。miR-30a-5p+IL-1β组结直肠癌细胞HT29的增殖活性、细胞克隆数、迁移和侵袭数量比miR-NC+IL-1β组降低(均P<0.01)。anti-miR-30a-5p+高剂量+IL-1β组结直肠癌细胞HT29的增殖活性、细胞克隆数、迁移和侵袭数量高于anti-miR-NC+高剂量+IL-1β组(均P<0.01)。结论猫眼草提取物通过上调miR-30a-5p、下调NF-κB信号通路活性,抑制IL-1β诱导的结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

IRAK-4在白介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLRs)介导的炎症信号通路中的关键作用

白介素-1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4;IRAK-4)是近年来发现的参与机体先天性免疫反应过程中的关键分子。它与另外3个成员IRAK-1、IRAK-2、IRAK-M同属于IRAK家族,目前经过对IRAK-4分子的激酶活性以及其对炎症反应的正向和负向的调控作用的研究表明,IRAK-4分子联系着上下游的信号转导,在TLRs/IL-1R介导的炎症信号通路中的作用更为关键。本文就IRAK-4分子的活性、以及IRAK-4分子在TLRs/IL-1R介导的炎症信号转导通路中的作用作一综述。以期设计出针对IRAK-4特异性的药物,或者通过基因治疗手段干预IRAK-4表达,为感染控制提供新的思路,开发出新的抗炎药物。

转化生长因子-β1和白介素-12p40在过敏性紫癜发病中的作用

目的:探讨转化生长因子(TGF)-β1和白介素12p40亚单位(IL-12p40)在过敏性紫癜(AP)发病中的作用及意义。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测AP患者(急性期49例,恢复期15例)与30名正常人TGF-β1和IL-12p40水平。结果:①急性期AP患者血清TGF-β1显著高于正常人(P<0.05),患者组治疗前高于治疗后(P<0.01),混合型组TGF-β1值显著升高(P<0.05);②复发组IL-12p40显著高于首发组和对照组(P<0.01)。结论:TGF-β1和IL-12p40可能是介导过敏性紫癜血管炎症损伤过程中的重要细胞因子;TGF-β1与AP的病情严重程度和病程有显著相关性,IL-12p40检测对于监测AP复发有一定意义。

鱼类白介素(IL-1β)及干扰素(IFN)重组质粒构建及联合应用研究

为增强鱼类自身防病抗病能力,本研究人工合成了细胞因子白介素(IL-1β)及干扰素(IFN)基因序列,分别与p IRES2-EGFP真核表达载体连接,构建荧光表达质粒。两种质粒分别接种Hela细胞,倒置于荧光显微镜下观察,确定质粒在细胞内的表达情况。之后将两种质粒注射免疫鱼体,于免疫后第2周抽样采集腹水、肌肉组织及血清,通过荧光、RT-PCR及SDS-PAGE方法检测目的蛋白表达情况。最后将两种质粒联合免疫待产虹鳟亲鱼,同时在人工授精过程中进行二次免疫,抽样采集孵化出的虹鳟鱼苗,检测目的蛋白表达情况。结果表明,两种质粒转染Hela细胞均可见荧光反应,空白对照无荧光,表明两种质粒在细胞内成功表达;室内动物试验结果表明只有两试验组腹水中检测到荧光信号,RT-PCR结果可见两试验组每组10尾均可检测到目的片段,空白组未检测到目的片段。SDS-PAGE显示,两试验组在40KD处可见目的条带;中试试验幼鱼可检测到荧光蛋白表达;试验组繁殖成活率97%,空白对照组繁殖成活率56%。以上结果证明人工合成IL-1β、IFN荧光质粒免疫鱼体,显著提高了鱼体自身免疫力,可有效的增强鱼体自身防病抗病能力。

左归丸对5/6肾切除大鼠IL-1β、p65及胸主动脉钙化的影响

目的:观察左归丸对5/6肾切除大鼠IL-1β、p65及胸主动脉钙化的影响。方法:SPF级Wistar雄性大鼠予以5/6肾切除并给予高磷饮食造模,造模大鼠分为模型组、左归丸组,并同时设空白对照组。术后空白对照组予以普通饮水,模型组和左归丸组予以高磷饮水。术后4周空白对照组和模型组给予灭菌注射用水灌胃,左归丸组行左归丸水溶液灌胃,共8周。灌胃8周后处死大鼠,检测血清BUN、Scr、IL-1β,免疫组化检测胸主动脉IL-1β、p65表达,von kossa染色观察胸主动脉钙化情况。结果:给药8周后,空白对照组和左归丸组BUN与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组和左归丸组Scr与模型组比较,差异有统计学意义(分别为P<0.01,0.05)。空白对照组和左归丸组IL-1β与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。空白对照组大鼠各组IL-1β、p65在动脉血管壁几乎无表达,模型组大鼠表达明显,左归丸组大鼠与空白对照组比较增加,但明显少于模型组;von kossa染色观察空白对照组大鼠胸主动脉中内膜层无明显钙盐沉积,模型组大鼠主动脉钙盐沉积明显,左归丸组钙盐沉积较模型组明显减轻。结论:中药左归丸能够改善5/6肾切除大鼠胸主动脉钙化,其机制可能与抑制IL-1β、p65炎性因子表达有关。

白介素-1β对膀胱癌MMP9表达的影响及其信号传导通路的研究

目的 :研究白介素 -1β(IL -1β)对膀胱癌细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)表达的影响及其信号传导途径。方法 :明胶电泳酶谱分析法检测IL -1β对膀胱癌T24细胞MMP9表达的影响 ;蛋白印迹分析T24细胞丝裂原激活蛋白激酶 (MAPK)和磷酸肌醇3羟基激酶 (PI3K)传导通路在IL -1β作用下的磷酸化状态 ;用MAPK和PI3K传导通路的特异性抑制剂 ,对IL -1β 调控膀胱癌细胞MMP9表达的阻断研究。结果 :IL -1β 对膀胱癌T24细胞的MMP9表达有剂量依赖性调节作用 ;IL -1β 介导PI3K下游转录因子NF -κB时间依赖性激活 ;PI3K传导通路抑制剂Wortmannin阻断IL -1β 对MMP9表达上调作用。结论 :PI3K传导通路的激活介导IL -1β对膀胱癌T24细胞MMP9表达的上调作用。

miR-148a-3p对软骨细胞炎性和凋亡的影响及其机制

目的研究miR-148a-3p对软骨细胞炎症因子、细胞凋亡和软骨细胞表型的影响。方法2周龄大耳兔处死后提取原代软骨细胞。为了探究炎症对软骨细胞相关标志物及其胞内miR-148a-3p表达水平的影响,建立IL-1β-诱导的OA细胞模型,软骨细胞分为control组和IL-1β组。为了探究miR-148a-3p对软骨细胞相关标志物及细胞凋亡相关因子表达水平的影响,软骨细胞分为blank组、IL-1β组、IL-1β+NC组、IL-1β+mimics组、IL-1β+inhibitor组。qRT-PCR检测IL-1β、SOX9、COL-Ⅱ、ACAN、MMP-13 mRNA水平;采用免疫蛋白印迹法检测软骨相关标志物MMP-13、COL-Ⅱ、ACAN、SOX9以及细胞凋亡相关因子Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达水平。采用ELISA法检测细胞上清中IL-6和IL-10的含量。结果①与control组比较,IL-1β组细胞MMP-13蛋白表达升高(P<0.05),COL-Ⅱ和ACAN蛋白表达降低(P<0.05);miR-148a-3p表达水平升高(P<0.0001);②与blank组比较,IL-1β组细胞上清液IL-6水平升高,IL-10水平降低(P<0.05);MMP-13 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),COL-Ⅱ和ACAN mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与IL-1β组比较,IL-1β+mimics组细胞上清液IL-6水平、MMP-13 mRNA和蛋白、Bax、Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05);上清液IL-10水平、SOX9、COL-Ⅱ、ACAN mRNA和蛋白,以及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。IL-1β+inhibitor组和IL-1β组间上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论IL-1β诱导体外软骨细胞中miR-148a-3p表达上调,可导致软骨细胞炎症性改变、细胞凋亡、软骨细胞表型改变和细胞外基质(ECM)降解。

针刺对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠磷酸化P38丝裂原活化蛋白酶和血清白介素1β的影响

目的观察针刺对实验性自身免疫性脑脊髓炎(encephalomyelitis,EAE)小鼠神经系统损伤症状的改善程度和脊髓磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated P38 mitogen-activated protease,p-p38MAPK)及血清IL-1β的影响,初步探究针刺对多发性硬化(multiple sclerosis,MS)实验动物模型-EAE小鼠的治疗作用和机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、模型+针刺组(针刺组)、模型+激素组(激素组),每组10只。除空白组外,其余各组小鼠采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白33-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 33-55,MOG 33-55 )与完全弗氏佐剂诱导建立EAE模型。各组自造模第14天开始,每日上午同一时间干预治疗。空白组和模型组每日抓取、固定,并用生理盐水[0.1 mL/(10 g·d)]灌胃;针刺组针刺小鼠“大椎”、双侧“足三里”“肾俞”穴15分钟;激素组用醋酸泼尼松龙(0.6 mg/mL)灌胃[0.1 mL/(10 g·d)]治疗;以上各组均连续干预治疗15天。从造模当天开始,隔日测量体质量和神经功能评分评价小鼠行为学变化;于免疫第28天对各组小鼠进行眼球采血并留取脊髓组织,采用LFB染色技术检测小鼠脊髓脱髓鞘损伤程度;分别采用酶联免疫吸附法和蛋白质免疫印迹法检测小鼠血清IL-1β的含量及脊髓组织p-p38MAPK蛋白表达。结果针刺组和激素组小鼠体质量明显增加,神经功能评分明显降低,与模型组比较差异有统计学意义( P <0.05);与模型组相比,针刺组及激素组小鼠脊髓脱髓鞘程度明显减轻;免疫第28天时,模型组小鼠血清IL-1β表达与空白组相比水平升高( P <0.05);针刺组与激素组小鼠血清IL-1β水平与模型组相比均降低( P <0.05);模型组小鼠脊髓p-p38MAPK蛋白表达水平比空白组表达水平升高( P <0.05);而针刺组与激素组小鼠脊髓p-p38MAPK蛋白水平与模型组相比均降低( P <0.05)。结论针刺可以明显改善EAE小鼠神经系统损伤症状,降低EAE小鼠的神经功能评分;针刺缓解EAE模型小鼠神经系统损伤症状的机制可能与其能抑制EAE小鼠脊髓p38MAPK蛋白激活及其能降低小鼠血清IL-1β的表达水平有关。

促炎性白介素因子对动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是我国常见的心血管疾病之一,近年发现,炎症是导致其主要发病机制。促炎性细胞因子的表达是早期AS形成的特征之一,其中IL-1β、IL-6和IL-18等因子发挥重要作用。在AS炎症形成过程中,涉及的关键细胞种类包括平滑肌细胞(smoothmusclecell,SMC)、内皮细胞(endothelialcell,EC)、巨噬细胞(macrophage,m)、淋巴细胞(lymphocyte,LY)等。因此,本文从这三种白介素因子出发,综述其对AS炎症中平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞和淋巴细胞的影响,深入研究白介素因子在AS中的作用机制,将有助于开发靶向AS炎症的治疗策略。

吴茱萸碱部分通过人白介素1所介导的途径诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)诱导人黑色素瘤A375S2细胞死亡的作用机制及其与细胞因子人白介素1(interleukin1,IL1)信号转导途径之间的关系。方法MTT检测法,DNA凝胶电泳法及Westernblot法。结果IL1受体拮抗因子(IL1receptorantagonist,IL1ra)在24h时能够部分抑制吴茱萸碱诱导的A375S2细胞死亡。吴茱萸碱在诱导A375S2细胞死亡的过程中,Fas配体(Fasligand,FasL)的蛋白表达量升高,激活其下游的caspase8和caspase3,进而引起DNA的损伤并激活p53蛋白,同时Bax/Bcl2的蛋白表达比例被上调。在经过IL1ra预处理后,这些变化均被部分的抑制或逆转。结论吴茱萸碱诱导A375S2细胞死亡的作用是部分通过IL1介导的信号转导途径而实现的。

小白菊内酯对膝骨性关节炎兔模型血清及关节液肿瘤坏死因子-α和白介素-1β水平的影响

目的通过观察小白菊内酯对兔膝骨性关节炎(OA)模型血清及关节液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β水平的影响,探讨其治疗OA的作用机制。方法健康纯种新西兰兔32只,随机8只为正常组,其余的24只采用右后肢伸直位管型石膏固定法,建立OA模型。造模后随机分为3组:模型组、小白菊内酯组、盐酸氨基葡萄糖组,每组8只。小白菊内酯组兔予小白菊内酯灌胃,盐酸氨基葡萄糖组予盐酸氨基葡萄糖灌胃,其余两组予生理盐水灌胃,连续治疗6 w后,测定各组兔治疗前后血清、膝关节液TNF-α、IL-1β表达水平。结果小白菊内酯组、盐酸氨基葡萄糖组关节液及血清中的TNF-α、IL-1β浓度均明显降低(P<0.05或P<0.01),且小白菊内酯组降低幅度明显大于盐酸氨基葡萄糖组(P<0.05)。结论小白菊内酯可能通过抑制TNF-α、IL-1β的分泌而产生免疫调节作用,其抗炎疗效优于盐酸氨基葡萄糖。

白介素1α和白介素1受体拮抗剂对培养的Graves’眼眶成纤维细胞增殖作用的影响

目的 探讨白介素 1α(IL 1α)和白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)对培养的Graves’眼病 (GO)患者眼眶成纤维细胞增殖的影响。方法 以下述方法分别处理培养的GO和正常人眼眶成纤维细胞 :不同浓度的IL 1α刺激成纤维细胞48h ;3 0U/ml的IL 1α刺激成纤维细胞 2 4～ 72h ;不同浓度的IL 1ra或 /和 3 0U/ml的IL 1α处理成纤维细胞 48h ;75ng/ml的IL 1ra和 3 0U/ml的IL 1α处理成纤维细胞 2 4～ 72h。用MTT法测定成纤维细胞增殖的刺激或抑制率。结果 IL 1α以剂量和时间依赖的方式刺激GO和正常人眼眶成纤维细胞增殖 ,而IL 1ra以剂量和时间依赖的方式抑制IL 1α诱导的GO和正常人眼眶成纤维细胞的增殖活性 ,刺激和抑制作用在GO和正常人眼眶成纤维细胞之间无明显差异。结论 IL 1ra是IL 1α诱导的人眼眶成纤维细胞增殖的强有力的抑制剂 。