白介素29体外抗乙肝病毒作用

目的研究白介素29(IL-29)体外抗乙肝病毒的效果。方法从RNA水平探讨了IL-29抗乙肝病毒的效果。RT-PCR分析IL-29诱导抗病毒蛋白MxA、2′,5-′OAS、PKR和RNase L mRNA水平表达;同时Western blot分析IL-29激活的信号通路以探讨其抗乙肝病毒的机理。结果IL-29能明显降低HepG2.2.15细胞中乙肝病毒mRNA的水平,且能够上调抗病毒蛋白MxA和2′,5-′OAS的mRNA表达并激活ERK1/2、AKT信号途径。结论在HepG2.2.15细胞中IL-29有显著的抗乙肝病毒作用。

重组人白介素-29-Fc融合蛋白在HEK-293F细胞中的表达及体外抗肿瘤活性分析

目的在人胚肾293F(human embryonic kidney 293F,HEK-293F)细胞中表达重组人白介素-29-Fc(recombinant human interleukin-29-Fc,rhIL-29-Fc)融合蛋白,并分析其体外抗肿瘤活性。方法构建重组UCOE-IL-29-Fc表达质粒,瞬时转染HEK-293F细胞,经表达、纯化后获得rhIL-29-Fc融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定;将rhIL-29和rhIL-29-Fc蛋白分别经左耳皮下免疫雌性日本大耳白兔,每组2只,0.5 mg/只,右耳静脉采血,分离血清,ELISA法检测半衰期;CCK-8试验检测rhIL-29-Fc蛋白对人结肠癌HT-29、人结肠癌HCT-116、人Burkkit淋巴瘤Daudi、人非小细胞肺癌NCI-H1975、人小细胞肺癌NCI-H209、人食管癌EC109和人胰腺癌PANC-1细胞的体外抗增殖效果,并计算半数抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC_(50))。结果重组表达质粒UCOE-IL-29-Fc经双酶切及测序鉴定证明构建正确,瞬时转染HEK-293细胞6 d后,收获培养上清,经纯化获得的rhIL-29-Fc融合蛋白相对分子质量与预期相符,蛋白浓度为1.5 mg/mL,纯度为93%,可与小鼠抗人IL-29抗体特异性结合。rhIL-29-Fc蛋白半衰期为25 h,对7种肿瘤细胞显示出不同程度的增殖抑制效应,对不同细胞的IC50也不同。结论利用HEK-293F细胞成功表达rhIL-29-Fc融合蛋白,该融合蛋白半衰期比rhIL-29延长了20 h。根据7种肿瘤细胞显示出不同程度的体外增殖抑制效应和IC50测定结果,发现rhIL-29-Fc融合蛋白的抗肿瘤活性高于rhIL-29。该研究为IL-29蛋白治疗肿瘤的开发奠定了基础。

干扰素-λ1/白介素-29抑制脓毒症患者血清C5a诱导的中性粒细胞胞外诱捕网相关的凝血酶生成

目的探讨脓毒症血栓形成的炎症环境中血清来源C5a补体能否激活多型核中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMNs)释放中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs),以及干扰素-λ1/白介素29(interferon-λ1/interleukin 29,IFN-λ1/IL-29)是否具有抑制NETs相关凝血酶生成的作用。方法健康志愿者和脓毒症患者的外周血样分别来自2018—2019年苏州大学附属第二医院门诊和住院部,体外研究脓毒症患者血清C5a刺激的健康志愿者外周血分离的PMNs细胞,IL-29和抗CD88单抗作为NETs释放调节因子,免疫荧光分析(immunofluorescence,IF)PMNs上NETs的释放水平,免疫印迹技术(immuno blot,IB)评估PMNs上组织因子(tissue factor,TF)的表达,荧光光谱法(fluorescence spectroscopy,FS)测定上清液中循环DNA水平,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定凝血酶-抗凝血酶(thrombin-antithrombin,TAT)复合物水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果以脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs释放的NETs表达水平(20.5±3.7)%为对照组,IL-29和抗CD88单抗抑制了脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs上TF表达的NETs释放,采用IF技术测定的表达水平分别为(5.0±1.5)%、(7.3±3.1)%,差异均有统计学意义(q=9.23和8.73,均P<0.01)。IL-29和抗CD88单抗抑制了脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs上TF水平,IB测定的TF表达水平分别为(0.52±0.03)%、(0.57±0.02)%,与脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs的TF表达水平(0.81±0.03)%进行比较,差异均有统计学意义(q=3.44和3.21,均P<0.05)。IL-29和抗CD88单抗降低了NETs相关的TAT复合物的水平,分别为(3.3±0.4)ng/mL、(4.6±0.7)ng/mL,与脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs释放的NETs相关的TAT复合物水平(7.8±0.7)ng/mL比较,差异均有统计学意义(q=6.77和5.27,均P<0.01)。结论脓毒症患者血清来源的C5a诱导健康志愿者PMNs内TF的累积和表达TF的NETs释放,血清C5a促进了NETs依赖性凝血酶的生成。IL-29具有抑制C5a诱导的NETs释放及其相关的凝血酶生成。

IL-29和TGF-β_1在肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨肺癌组织中白介素-29(IL-29)和转化生长因子-β1(TGF-β_1)的表达与肺癌临床病理特征间的关系。方法:选取62例肺癌组织和24例癌旁组织,采用免疫组织化学法测定IL-29和TGF-β_1的表达,并探讨其与病理分期、组织类型及分化程度之间的关系。结果:IL-29在肺癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.05),其表达与临床分期呈负相关,与分化程度呈正相关;TGF-β_1在肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),其表达与临床分期呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05);在肺癌组织中,IL-29与TGF-β_1二者表达呈负相关(P<0.05)。结论:肺癌组织中IL-29呈低表达,TGF-β_1呈高表达,前者与肿瘤生长呈负相关,后者与肿瘤生长呈正相关。

HIL-29通过激活MAPK信号途径上调Hela细胞TLR3表达

目的探讨人白细胞介素29（hIL-29）对Hela细胞TLR3受体表达的影响。方法重组的hIL-29加入Hela细胞中，以RT—PCR分析Toll样受体3（TLR3）、2’5’-寡聚腺苷酸合成酶（2＇5＇-OAS）、MXA蛋白的mRNA表达水平变化，western—blot分析TLR3受体蛋白质水平变化及信号蛋白MAPK（ERK1／2）激活变化。结果hIL-29显著上调TLR3受体的mRNA水平和蛋白质水平的表达，并且具有剂量依赖性。hIL-29刺激Hela细胞18h后，2’5’-OAS、MXA蛋白的mRNA表达水平显著升高（P〈0.01）。western—blot分析hIL-29刺激Hela细胞5～30min后，信号蛋白ERK1／2磷酸化水平显著升高（P〈0.01）。结论hIL-29可能通过激活ERK1／2上调（2＇5＇-OAS）、MXA和TLR3的表达。

血清IL-29及TLR4在小儿过敏性紫癜临床诊断中的应用价值研究

目的探讨血清白介素-29(IL-29)及钟样受体4(Toll receptor 4,TLR4)在小儿过敏性紫癜(许兰-亨诺综合征,Henoch-Schonlein purpura,HSP)临床诊断中的应用价值。方法选取2014年9月至2019年2月秦皇岛市第一医院儿科就诊的200例HSP患儿作为研究组,另选取150例健康儿童为对照组,比较两组TLR4表达量及IL-29水平、外周血Th17、Treg及Th17/Treg、TLR4、IL-29与Th17/Treg相关性。结果(1)观察组患儿外周血TLR4及IL-29水平均分别显著高于对照组(P<0.05);(2)观察组Th17及Th17/Treg水平均分别显著高于对照组(P均<0.05),观察组Treg水平显著低于对照组(P<0.05);(3)经Pearson分析,TLR4、IL-29与Th17/Treg均存在相关性(P均<0.05)。结论血清IL-29及TLR4在小儿HSP临床诊断中具有较高的应用价值,可能与机体免疫应答之间存在一定的关联性。

IL-29通过调控lncRNA DLEU1/miR-149-5p通路影响结肠癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨白介素-29(IL-29)对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法IL-29诱导SW480细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测lncRNA DLEU1和miR-149-5p表达,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。双荧光素酶实验验证lncRNA DLEU1和miR-149-5p靶向关系。转染DLEU1小干扰RNA或miR-149-5p模拟物至SW480细胞,上述相同方法观察抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结果IL-29、抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p均可降低SW480细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达(P<0.05),提高细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达(P<0.05)。IL-29可降低SW480细胞DLEU1表达(P<0.05),促进miR-149-5p表达(P<0.05)。DLEU1靶向负调控miR-149-5p表达。过表达DLEU1可逆转IL-29对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结论IL-29可能通过调控DLEU1/miR-149-5p通路抑制结肠癌细胞增殖,并诱导其凋亡。

新型的干扰素λ家族

干扰素λ为一类新型的干扰素家族,分IFN-λ1、IFN-λ2和IFN-λ3等3种,也分别称为IL-29,IL-28A和IL-28B;其功能受体复合物是由新鉴定的CRF2-12和IL-10R2组成的异二聚体。配体与受体相互作用能活化Jak-STAT通路,并起抗病毒或其他防御功能作用。

白细胞介素分子改造的研究进展

目的白细胞介素(interleukin,IL)是一类由多种细胞产生的具有重要免疫调节作用的细胞因子,在临床应用中发现,IL类药物的副作用大,半衰期短,清除率高,使其在临床的广泛应用受限。因此,对IL的分子结构进行改造,改善其理化性质和药代动力学性质,以获得生物学活性和稳定性更高而副作用更低的IL,是该类药物研发的重要发展方向。本文就近年对IL-2、IL-18、IL-28及IL-29分子改造的研究进展作一综述。

人IL-29第43位Lys的定点突变及抗肿瘤活性初步分析

为获得人白介素-29(h IL-29)变异体并考察其对肿瘤细胞增殖的影响,基于对h IL-29成熟肽生物信息学的分析结果,通过大引物PCR方法将其肽链第43位赖氨酸(Lys)编码基因进行定点突变。将得到的h IL-29变异体基因插入质粒p PIC9KM,构建重组真核表达质粒p PIC9KM-h IL-29^(mut43),导入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,经G418筛选得到高产菌株p PIC9KM-h IL-29^(mut43)/GS115,用甲醇诱导表达重组蛋白rh IL-29^(mut43)。检测rh IL-29^(mut43)对肿瘤细胞增殖的影响,结果显示该重组蛋白对结肠癌细胞HCT8、肺腺癌细胞A549、胃癌细胞SGC7901和肝癌细胞BEL7402的增殖均有抑制作用,且高浓度(1 000 ng/ml)下对上述4种肿瘤细胞的增殖抑制作用更强,增殖抑制率分别为(18.45±0.83)%、(27.14±2.99)%、(29.94±1.95)%和(25.22±0.42)%。与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。且其抑制增殖效应强于野生型h IL-29和阳性对照药人干扰素(IFN)-a2b。