新西兰白兔BMP 15基因的真核表达载体构建、表达模式及其在卵巢组织的表达

旨在获得新西兰白兔BMP 15基因序列及其组织表达规律,构建其真核表达载体,预测BMP15的生物学功能。本研究选择180日龄性成熟的健康新西兰白兔作为研究对象,采用RT-PCR技术扩增BMP 15基因CDS区序列,利用T4连接方法将目的片段连接至线性化的Pmcherry-N1和pCMV-Myc空载体,构建真核表达载体,利用生物信息学分析其编码蛋白的性质及结构。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术与Western blotting技术检测pCMV-Myc-BMP 15过表达情况。接下来,使用qRT-PCR检测BMP 15基因在不同组织中的表达水平。激光共聚焦方法检测BMP 15基因的亚细胞定位。利用免疫荧光技术检测内源BMP15在新西兰白兔卵巢组织定位情况。结果表明:克隆得到新西兰白兔BMP 15基因CDS区序列长1182 bp,PCR及测序结果表明pCMV-Myc-BMP 15和Pmcherry-N1-BMP 15真核表达载体构建成功。生物信息学分析显示,BMP 15基因编码393个氨基酸;BMP15蛋白不稳定系数为55.32,等电点大小为9.69,是一种稳定的碱性蛋白质。BMP15蛋白共有26个磷酸化位点,15个糖基化位点,存在信号肽,不存在跨膜结构域。系统进化树表明,新西兰白兔与猪亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。二级结构和三级结构分析结果表明,BMP15蛋白主要由α-螺旋(38.68%)、无规则卷曲(37.4%)、延伸链(15.52%)、β-转角(8.40%)组成,为混合型蛋白。蛋白互作关系预测发现,BMP15蛋白与FSHR、FIGLA、BMPR1B、AMHR2、NOBOX等卵巢生长发育的相关蛋白之间存在相互作用。不同组织表达分析显示,BMP 15基因在卵巢组织中特异性表达;激光共聚焦结果显示,BMP15主要存在于在细胞质中。将pCMV-Myc-BMP 15转染至HEK293T细胞内,BMP15的mRNA水平和蛋白水平均显著上调。卵巢组织免疫荧光检测结果显示,BMP15主要定位在卵巢颗粒细胞的细胞质中。本研究成功构建了BMP15的真核表达载体,对BMP 15基因及其编码的蛋白的理化性质和生物学特性进行了预测分析,在HEK293T细胞内成功过表达,并得到了该基因的亚细胞定位情况、组织表达情况及在卵巢组织的分布情况。为后续开展BMP 15基因在卵巢生长发育中的功能及机制研究提供了理论依据。

推拿滚法治疗白兔股四头肌损伤模型的效果观察

目的:分析应用推拿滚法干预股四头肌损伤白兔对其血清炎症因子表达水平的影响。方法:健康成年新西兰大白兔30只,雌雄各半,随机分为健康组、模型组、干预组,每组10只,健康组实验动物不做任何处理,作为正常对照;模型组和干预组实验动物用自制重力铅锤打击兔右后肢股四头肌肌腹中段,建立股四头肌损伤模型;干预组于造模后第8天开始,用推拿手法对白兔进行局部滚法治疗,模型组不进行后续操作。干预结束后取3组实验动物血清样本,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中白介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)和C-反应蛋白(CRP)含量的统计学差异。结果:与健康组比较,模型组和干预组股四头肌损伤白兔血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NO和CRP水平显著升高(P<0.05);推拿滚法干预结束后,与模型组相比,干预组的股四头肌损伤白兔血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NO和CRP水平显著下降但仍较健康组升高(P<0.05)。结论:推拿滚法能通过调节IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NO和CRP炎性细胞因子的表达水平,减轻股四头肌炎症反应,改善受损股四头肌组织。

饲养密度对新西兰白兔生长性能、行为、免疫器官指数和血清抗氧化指标的影响

试验旨在探讨饲养密度对家兔生长性能、行为方式、免疫器官指数和血清抗氧化指标的影响。试验选取35日龄体重相近(943.86±51.13)g,健康的雄性新西兰白兔120只,随机分为4组,每组6个重复(笼),即Ⅰ组每个重复(笼)2只(5只/m^(2))、Ⅱ组每个重复(笼)4只(10只/m^(2))、Ⅲ组每个重复(笼)6只(15只/m^(2))、Ⅳ组每个重复(笼)8只(20只/m^(2))。预饲期5 d,试验期35 d。结果显示:在生长性能方面,Ⅰ组和Ⅱ组家兔的末重和平均日增重显著高于Ⅲ组(P<0.05),且极显著高于Ⅳ组(P<0.01),Ⅲ组的末重和平均日增重显著高于Ⅳ组(P<0.05);平均日采食量Ⅰ组和Ⅱ组极显著高于Ⅲ组(P<0.01),Ⅲ组高于Ⅳ组(P<0.01)。在趴卧行为发生率方面,家兔的趴卧行为Ⅰ组和Ⅱ组极显著低于Ⅲ组(P<0.01),Ⅲ组极显著低于Ⅳ组(P<0.01);Ⅰ组和Ⅱ组的运动和站立行为发生率差异均不显著(P>0.05),其余各组之间差异均极显著(P<0.01);Ⅰ组和Ⅱ组的采食行为发生率均极显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.01);Ⅰ组和Ⅱ组的修饰行为发生率极显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.01),而啃咬行为发生率则显著低于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05)。在免疫器官指数方面,Ⅰ组和Ⅱ组家兔的脾脏指数显著高于Ⅳ组(P<0.05),胸腺指数均显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05)。在血清抗氧化能力方面,Ⅱ组和Ⅲ组家兔的血清T-AOC浓度和SOD活性均显著高于Ⅳ组(P<0.05);Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组血清中MDA含量均显著低于Ⅳ组(P<0.05)。以上结果表明,适当降低饲养密度能够改善家兔的生长性能和行为状态,提高其免疫和抗氧化能力,在考虑饲养笼具利用率的基础上,以Ⅱ组4只/笼(10只/m^(2))的饲养密度效果最佳。

大耳白兔骨髓间充质干细胞的分离培养与生物学鉴定

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源于发育早期的中胚层和外胚层,作为干细胞中的种子细胞,具有强大的自我复制和更新能力,并对治疗、修复、补充受损或缺损的肝、肌肉等组织有修复和治疗作用。为了研究BMSCs的生物学特性和多化潜能,对日本大耳白兔BMSCs进行体外分离培养及生物学鉴定研究。取日本大耳白胎兔骨髓组织,采用全骨髓贴壁法分离纯化、体外培养,鉴定日本大耳白兔BMSCs生物学特性,并进行细胞形态学观察、生长动力学检测及其成骨、成软骨、成脂肪能力鉴定。结果表明,采用全骨髓贴壁法成功从日本大耳白胎兔骨髓中分离得到生长状态良好的大耳白兔BMSCs,细胞形态为长梭形,生长曲线呈典型“S”形;免疫荧光和RT-PCR结果显示,大耳白兔BMSCs表达CD29、CD44、CD73、CD105间充质干细胞表面标记物基因,但不表达原始造血祖细胞标志物CD45;经特异性染色和RT-PCR分析表明,分离的细胞是间充质干细胞;体外诱导大耳白兔BMSCs能够分化为骨骼细胞、软骨细胞、脂肪细胞。建立了大耳白兔BMSCs体外分离培养体系,为利用骨髓间充质干细胞进行组织与工程学研究和动物遗传资源保存研究奠定了一定的理论基础。

新西兰白兔CTSB、CTSS基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究

【目的】克隆新西兰白兔组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)与CTSS基因CDS区序列并进行生物信息学分析,探究其在新西兰白兔不同组织中的表达规律。【方法】采用PCR法扩增并克隆CTSB、CTSS基因CDS区序列,使用Mega 7.0软件构建系统进化树并分析氨基酸序列相似性;利用生物信息学软件分析CTSB、CTSS蛋白理化性质、跨膜结构、信号肽位点及亚细胞定位情况;用实时荧光定量PCR检测CTSB、CTSS基因在新西兰白兔不同组织中的表达量。【结果】新西兰白兔CTSB、CTSS基因CDS区序列长分别为1020、1023 bp,共编码339、340个氨基酸,蛋白分子质量分别为37.627、38.253 ku,理论等电点为5.53、8.40,不稳定系数为30.76、32.38,分别为酸性及碱性蛋白。新西兰白兔CTSB、CTSS基因氨基酸序列分别与猪、马的亲缘关系最近,与鸡亲缘关系较远。CTSB、CTSS蛋白二级结构均主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,二者三级结构预测结果与二级结构一致,均为亲水性蛋白;CTSB蛋白信号肽剪切位点位于第17—18位氨基酸处,含有1个N-端Propeptide-C1结构域与1个Peptidase-C1A-C结构域;CTSS蛋白信号肽剪切位点位于第25—26位氨基酸处,含有1个Inhibitor-129结构域与1个Peptidase-C1结构域。亚细胞定位结果表明,CTSB、CTSS蛋白均主要分布于细胞质(包括细胞壁)内。实时荧光定量PCR结果显示,CTSB基因在腹脂和肝脏组织中表达量较高,CTSS基因在脾脏组织中表达量最高,均显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】成功克隆新西兰白兔CTSB、CTSS基因CDS全长序列,揭示了CTSB、CTSS基因在新西兰白兔不同组织中的表达水平并初步分析了其生物学功能,为进一步研究家兔CTSB、CTSS基因功能及调控机制提供了基础和参考。

中药降脂复方对新西兰白兔胆固醇-胆汁酸代谢的调节

目的:探讨中药降脂复方对新西兰白兔胆固醇-胆汁酸代谢的调节机制。方法:采用随机数字表法将60只新西兰白兔分为对照组、模型组、中药降脂复方低剂量组和中药降脂复方高剂量组,每组15只。除对照组外,其余组新西兰白兔给予高胆固醇饮食,同时给予相应药物进行灌胃,每天1次,连续4周。ELISA法检测肝脏胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α hydroxylase, CYP7A1)的水平;酶水解法测定血清总胆固醇(total cholesterol, TC)、总胆红素(total bilirubin, TBIL)的水平;酶循环法测定血清总胆汁酸(total bile acid, TBA)水平;HE染色检测肝脏病理变化;RT-PCR检测小异源二聚体伴侣(small heterodimer partner, SHP)、胆盐输出泵(bile salt export pump, BSEP)和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1) mRNA相对表达量。结果:与对照组相比,模型组TC、TBIL水平及SHP mRNA、BSEP mRNA、ABCA1 mRNA相对表达量升高,TBA水平及CYP7A1活性降低;与模型组相比,中药降脂复方组TBA水平及CYP7A1活性升高,TC、TBIL水平及SHP mRNA、BSEP mRNA、ABCA1 mRNA相对表达量降低,且呈剂量依赖性,差异均具有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示,模型组新西兰白兔肝细胞肿大,有炎性细胞浸润;给予中药降脂复方后,各组新西兰白兔肝脏病理改变有所改善。结论:中药降脂复方能有效调节新西兰白兔胆固醇-胆汁酸代谢,其作用机制可能与调控SHP、BSEP及ABCA1表达有关。

医用自交联透明质酸钠凝胶预防盆腔术后粘连的作用——白兔子宫角模型研究

目的:观察医用自交联透明质酸钠凝胶(自交联凝胶)预防盆腔术后粘连的效果。方法:将24只新西兰白兔随机分为四组,其中一组为假手术对照组,其余三组制备双侧子宫角损伤模型,包括PBS对照组、自交联凝胶5 mL组、自交联凝胶10 mL组。术后2周处死动物,测量、比较四组白兔盆腔术后的粘连以及输卵管通畅情况。结果:术后2周,假手术对照组无粘连;与假手术对照组相比,PBS对照组的粘连长度[(17.93±10.89)mm]更大(P<0.001);5 mL自交联凝胶组的粘连长度[(4.17±6.46)mm]和10 mL自交联凝胶组的粘连长度[(1.50±2.51)mm]与PBS对照组相比,均有显著减小(均为P<0.01);但两组之间没有统计学差异(P>0.05)。PBS对照组的输卵管通畅指数最小(0.67±0.52),而5 mL和10 mL自交联凝胶组的通畅指数(均为1.67±0.52)显著大于PBS对照组(均为P<0.05)。结论:在白兔子宫角模型中,自交联凝胶的作用显著减少了术后子宫和输卵管的粘连,并有效预防了术后输卵管的阻塞。

“峨眉伤科膀胱经推拿”对LIDD模型白兔神经及血管内皮生长因子的影响

目的从神经和血管内皮生长因子探讨“峨眉伤科膀胱经推拿”对腰椎间盘退行性病变(lumbar intervertebral disc degeneration,LIDD)的作用机制。方法将15只雄性新西兰大白兔随机分为对照组、模型组和推拿组,每组5只。除对照组外,模型组和推拿组白兔采用经腹膜后间隙穿刺纤维环的方法建立LIDD模型。造模5 d后,推拿组白兔采用“峨眉伤科膀胱经推拿”进行干预,对照组和模型组白兔仅抓取固定。苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色检测椎间盘(intervertebral disc,IVD)组织病理学形态,ELISA法检测血清中神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)、血浆P物质(substance P,SP)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)、5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)的表达,Western blot和荧光定量PCR分别检测IVD组织中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase receptor,Trk)A、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体VEGFR1、VEGFR2的蛋白和mRNA表达。结果HE染色结果显示,模型组白兔髓核和纤维软骨板退变明显,推拿组白兔髓核形状、髓核细胞数量和纤维软骨板排列情况均有显著改善。与对照组比较,模型组白兔血清中NPY、SP、CGRP、5-HT的含量和IVD组织中NGF、TrkA、VEGF、VEGFR1及VEGFR2的蛋白和mRNA表达水平均显著增加(P<0.01);与模型组比较,推拿组白兔除IVD组织中TrkA的蛋白和mRNA表达差异无统计学意义,其余指标表达水平均显著降低(P<0.05)。结论“峨眉伤科膀胱经推拿”能显著延缓LIDD模型白兔的IVD退变进展,其作用机制可能与下调IVD组织中神经和血管内皮生长因子有关。

基于白兔时间同步协议的加速器节点时钟同步系统

提出了一种基于白兔时间同步协议,利用SPARTAN-6系列现场可编程门阵列(Field-Programmable Gate Array,FPGA)实现多节点亚纳秒级别时间同步,并通过测量触发信号到达时间,根据设置的延迟进行恢复,从而实现高于120 ps时间分辨率。该方法能够精确控制多节点信号发生的绝对时间,具有广泛的应用前景。特别地,该方法可应用于同步辐射加速器中,提高实验数据的准确性和稳定性,有望在材料科学、生物学和化学等领域中得到广泛应用。该研究成果为同步辐射加速器的研究和实验提供了新的解决方案,有望推动同步辐射技术的发展,为科学研究和工程应用提供更多可能。

老字号“大白兔”品牌视觉形象

通过对老字号“大白兔”品牌进行视觉形象研究,使消费群体重新拾起对“大白兔”品牌的儿时美好回忆,让老字号品牌保持新鲜感和吸引力,在市场中不断焕发出勃勃生机。

中华老字号品牌"大白兔"新时代焕新之路

为帮助中华老字号品牌"大白兔"活化焕新,从营销创新的角度出发,不断挖掘"大白兔"独特的品牌属性和价值,寻找大白兔品牌年轻化路径,以适应市场消费升级、业态更新等竞争环境,为老字号品牌打造新的增长曲线."大白兔"品牌焕新之路的探索对于本土老字号品牌突破原有行业壁垒与限制,打造年轻、时尚、多元消费品牌具有一定的借鉴意义,也为推动食品制造业高质量发展、加快品牌强国建设注入创新动力.

白兔与苓兔:还珠楼主的珍视生态资源意识

还珠楼主小说多角度地表现了剑侠与动植物的关系,展现出山林自然生态系统面临的危机。其小说以白兔活动引出故事主人公的新际遇。白兔可爱可悯,能烘衬人物的性情类型,表现能否与动物结友、有节制地获取和保护生态资源。苓兔作为仙草茯苓的化身,已初步修炼且是进一步修道的资源。追捕苓兔成为正邪双方对修道资源的争夺。如何夺取与保护苓兔,代表着剑侠对修道资源的不同理念。苓兔意象昭示取宝过程中的艰辛、凶险,还珠楼主在小说中主张珍惜资源,不能危及生态系统,不能因灵药而运用威力过大的宝物,导致地底崩裂。解救苓兔,也是阻止资源供妖人炼制邪法。夺取山野中的白兔和仙草茯苓的化身苓兔,代表了外来入侵者强势争夺生存资源、残害生命的民族生存危机。生态伦理精神被投射到动物资源上,是还珠楼主在“战争思维”和民族危机支配下的“以仙比俗”。这与其深海图景、北极严寒世界等构成多元互动的组合,描绘了人与动物共存的理想文学空间,提醒人们要珍惜资源。

Vc-獭兔、日本大耳白兔与新西兰白兔血液蛋白多态性研究

为给加速 Vc-獭兔育种提供理论依据 ,利用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对 Vc- 系、 系獭兔、日本大耳白兔和新西兰白兔血液中的红细胞酯酶 (Es-1、Es-2和 Es-3 )、血清前转铁蛋白 (Prt)、后白蛋白 (Po)等 5个蛋白位点的多态性进行了测定 ,结果表明 :在 4个群体中 ,Es-1、Es-2、Es-3和 Po各有 3种表型 ,分别受 2个共显性等位基因控制 ,Prt有 6种表型 ,受 3个共显性等位基因控制。计算表型频率及基因频率。并根据基因频率计算遗传距离和聚类分析 ,分析结果 :Vc- 系、Vc- 系獭兔的亲缘关系最近 ;Vc-獭兔与日本大耳白兔的亲缘关系较近 ,与新西兰白兔的亲缘关系较远 ,日本大耳白与新西兰白兔的亲缘关系最远。

日本大耳白兔、新西兰白兔的遗传分化研究

应用平均基因杂合度、平均基因纯合度、等位基因有效数、基因均质度、Lewontin的Shannon信息测度 ,对日本大耳白兔、新西兰免两个群体存在的血液蛋白位点的基因频率进行遗传分析 ,研究表明 :日本大耳白兔的基因杂合度、等位基因有效数指标和Shannon信息测度值均高于新西兰白兔 。

福建白兔与新西兰白兔生长和生化指标比较

【目的】了解福建白兔的生长与生化特性及其与新西兰白兔的差异,为进一步开发利用福建白兔提供科学数据支持。【方法】测定福建白兔与新西兰白兔不同日龄的生长发育情况和90日龄的生化指标,并分别进行品种内性别比较和品种间比较。【结果】福建白兔公兔体重均大于同期母兔体重但差异不显著,35~90日龄日增重公兔显著高于母兔(P<0.05)。两个品种兔相比,90日龄福建白兔的体重、体长、胸围、耳长、耳宽、免疫球蛋白IgM、IgG、球蛋白、谷氨酰转肽酶、总胆固醇、低密度脂蛋白都低于新西兰白兔,且除低密度脂蛋白差异显著外(P<0.05),其他差异极显著(P<0.01);而福建白兔白蛋白、乳酸脱氢酶和总胆红素极显著高于新西兰白兔(P<0.01)。【结论】福建白兔与新西兰白兔相比,其体型小,生长速度慢,血液生化指标具有总胆固醇低、低密度脂蛋白低和白蛋白高等优点。

WHBE兔血气-电解质分析及与日本大耳白兔和新西兰白兔比较研究

目的探讨WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰白兔血气、电解质指标的差异性。方法取WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰白兔经耳中动脉取肝素抗凝血，在NOVA血气电解质分析仪上测定血气、电解质指标。结果与日本大耳白兔比较，WHBE兔pH值、PCO2、PO2、SO2、BE-ECF、BE-B、SBC、HCO3^-、TCO2、a／A和P02／FI11个指标均明显低于日本大耳白兔（P〈0．05，P〈0．01），而Osm、Na^＋和Mg^＋＋明显高于日本大耳白兔（P〈0．01）；与新西兰白兔比较，WHBE兔pH值明显低于新西兰白兔（P〈0．01）。而Mg^＋＋明显高于新西兰白兔（P〈0．01）。结论上述结果为WHBE兔标准化提供可靠的生物学数据，同时为WHBE兔在呼吸系统和心血管疾病中的应用提供了实验依据。

小白兔卖胡萝卜

小白兔家的胡萝卜大丰收了,兔爸爸忙着收胡萝卜,兔妈妈因为要照顾小宝宝,就把卖胡萝卜的任务交给了小白兔。临出门前,兔妈妈告诉小白兔,我们的胡萝卜可以卖2元一根,如果客人买得多,可以适当优惠一些,但是要记住,不能低于1元5角一根,毕竟是兔爸爸辛勤劳动才收获的果实。小白兔开心地说记住了,蹦蹦跳跳地出门了。

四川白兔遗传资源保护与开发利用

四川白兔为小型皮肉兼用兔,具有抗病力强、适应性广、耐粗饲、繁殖力强等优点,是宝贵的遗传资源和优良的育种材料,被列入国家畜禽遗传资源保护目录,也是目前中国白兔仅存的唯一代表,具有极其重要的开发潜力和应用价值。详细阐明了加强四川白兔遗传资源保护的重要性,同时对四川白兔的保护和开发利用情况进行了阐述。

聪明的小白兔

一天,小白兔在河边散步,看到胖胖熊和朋友们正在河边聚餐。“唉,为了聚餐,我三天跑了四家商店才把这些东西买齐,真是累死了!”胖胖熊抱怨。小白兔听了,心里忽然有了一个念头:“如果我开一家物品齐全的超市,一定能红火起来。”

大白兔品牌的IP营销策略分析

数字媒体环境下,消费市场发生了巨大的变化,传统品牌的发展迎来了前所未有的挑战。大白兔奶糖是70后、80后的童年回忆,媒体升级的背景下,大白兔品牌进行了大量的数字营销,其中IP营销策略较为成功。本论文将深度剖析数字媒体时期,大白兔品牌的IP营销策略,并分析其营销的成功及不足之处,为其他传统品牌的转型提供思路及建议。