年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中miR-181a和SIRT1的表达关系及意义

目的探讨白内障晶状体上皮细胞微小RNA-181a(miR-181a)与沉默信息调节因子(SIRT)1的表达关系,研究其在年龄相关性白内障患者的诊治及病情评估方面的临床意义。方法选取诊断为年龄相关性白内障患者62例为白内障组,另选取同期近视矫正手术患者42例为对照组,利用RT q-PCR法,检测两组晶状体上皮细胞miR-181a与SIRT1表达水平;Pearson法测定miR-181a与SIRT1相关性;利用Lipofectamine 2000转染miR-181a模拟物和抑制剂,调节人晶状体上皮细胞miR-181a表达水平,RT q-PCR法检测SIRT1表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测晶状体上皮细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱氨酸(GSH)、谷胱氨酸过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果与对照组相比,白内障组miR-181a表达水平显著升高,SIRT1表达水平显著降低(P<0.05);Pearson相关分析显示,miR-181a和SIRT1呈负相关关系(r=-0.719,P<0.05);miR-181a模拟物组SIRT1表达水平显著低于模拟物阳性对照组(P<0.05),miR-181a抑制剂组,SIRT1表达水平显著高于抑制剂阴性对照组(P<0.05);白内障组SOD、GSH、GSH-Px水平明显低于正常组(P<0.05),MDA水平明显高于正常组(P<0.05);miR-181a表达水平与SOD、GSH、GSH-Px因子呈负相关关系(r=-0.702,-0.739,-0.776),与MDA水平呈正相关关系(r=0.679);SIRT1表达水平与SOD、GSH、GSH-Px呈正相关关系(r=0.699,0.743,0.763),与MDA水平呈负相关关系(r=-0.684)。结论白内障晶状体上皮细胞中miR-181a高表达,SIRT1低表达,miR-181a可调控人晶状体上皮细胞中SIRT1表达;SIRT1低表达可促使晶状体上皮细胞凋亡,从而影响或导致了年龄相关性白内障的发病。

年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的超微结构研究

目的:研究年龄相关性白内障晶状体上皮的超微结构变化。方法:用日本产HU-12A型电镜对8例年龄相关性白内障及3例正常透明晶状体上皮细胞的超微结构进行观察。结果:7例年龄相关性白内障晶状体前囊上皮细胞形状不规则,相邻细胞间以许多复杂的指状突超紧密镶嵌,部分上皮细胞内水肿,细胞间隙亦水肿呈较大的空泡状,细胞内线粒体等细胞器肿胀,个别区域上皮细胞坏死脱落,1例年龄相关性白内障晶状体前囊上皮细胞体积固缩,细胞核染色质分裂并出现凝聚的凋亡小体。结论:晶状体上皮细胞超微结构的病理形态学改变是年龄相关性白内障发生发展的重要原因之一。

透明晶状体和老年性白内障晶状体上皮细胞水通道蛋白1的表达

目的 探讨透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞水通道蛋白 1(aquaporin 1,AQP1)的表达水平。方法 收集 5例透明晶状体和 4 0例老年性白内障患者的前囊膜。应用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术对前囊膜下晶状体上皮细胞AQP1进行检测。结果 AQP1阳性表达在透明晶状体和老年性白内障患者前囊膜下晶状体上皮细胞的细胞膜。图像分析透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值低于透明晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值。结论 透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞的细胞膜表达AQP1,AQP1可能在老年性白内障发生发展中起一定作用。

不同类型年龄相关性白内障晶状体上皮细胞衰老标记蛋白30的表达及与细胞凋亡的关系

背景随着人口的老龄化，白内障的发病率逐年上升，研究表明，衰老标记蛋白30（SMP-30）与白内障的发生发展关系密切。目的了解不同类型白内障晶状体上皮细胞（LECs）中SMP-30的表达及LECs的凋亡情况，探讨不同类型年龄相关性白内障的发病机制。方法收集2010年3—10月在武汉大学中南医院眼科行白内障超声乳化摘出术的年龄相关性皮质性白内障59例80眼和核性白内障53例70眼，2个组患者年龄匹配（P〉0．05）。白内障手术中环形撕取晶状体前囊膜，应用免疫组织化学法和实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）技术分别定性、定量检测SMP-30蛋白及其mRNA在2个组白内障LECs中的表达。用TUNEL标记法观察LECs的凋亡情况，对比分析两种类型白内障晶状体前囊膜中SMP-30的表达及细胞凋亡的差异。结果免疫组织化学法检测表明，SMP-30主要表达于晶状体囊膜的细胞质中，在晶状体囊膜中央部表达较弱，越近周边表达越强，差异均有统计学意义（核性：45．21±2．79vs76．42±11．21，P=0．042；皮质性：108．32±4．32vs206．34±15．67，P=0．037）。核性白内障LECs中SMP-30 mRNA的表达少于皮质性，差异有统计学意义（60．02±9．08vs157．33±13．01，P=0．034）。TUNEL染色显示，2个组白内障LECs凋亡百分率中央部明显高于周边部，差异均有统计学意义（核性：19．34％±0．11％vs8．32％±0．57％，P=0．025；皮质性：42．07％±0．86％vs13．55％±0．64％，P=0．010），细胞凋亡百分率低于皮质性，差异有统计学意义（14．05％±0．22％vs27．70％±0．81％，P=0．007）。结论两种类型年龄相关性白内障的发生均与LECs凋亡有关，SMP-30的表达与其密切相关。

年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的Smac、caspase-3表达及死亡方式

目的探讨年龄相关性白内障晶状体上皮细胞(LECs)中Smac、caspase-3的表达和LECs超微结构变化及死亡方式。方法收集皮质性(30例)、核性(24例)、后囊下性(28例)年龄相关性白内障患者晶状体前囊片,以12例高度近视摘出的透明晶状体的晶状体前囊片为对照,应用免疫组织化学链酶菌抗生素蛋白-过氧化物酶法检测Smac、caspase-3蛋白在LECs中的表达,并采用透射电镜观察LECs超微结构的改变及死亡方式。结果Smac、caspase-3蛋白在年龄相关性白内障组LECs中的阳性表达率分别为81.71%、78.05%,与透明晶状体组比较染色阳性率及染色强度差异均有统计学意义(P<0.05)。3种类型年龄相关性白内障透射电镜下均可见LECs多表现为肿胀,线粒体嵴缺失、空泡变、髓样化,粗面内质网扩张、颗粒融合和脱颗粒现象,仅1例核性白内障中可见到核膜皱缩向外呈锐角凸起,部分双层核膜融合,模糊不清,细胞核内染色质浓缩,未见凋亡小体。结论Smac、caspase-3蛋白可能参与了年龄相关性白内障的形成。年龄相关性白内障LECs存在凋亡、胀亡等多种细胞死亡方式,细胞凋亡与细胞胀亡的发生可能存在部分分子机制的重叠。LECs超微结构的改变表明线粒体形态改变和功能异常在年龄相关性白内障发生中起重要作用。

老年白内障晶状体上皮细胞凋亡及凋亡基因的表达

目的探讨老年白内障与晶状体上皮细胞凋亡的关系。方法TUNEL法检测凋亡细胞百分率;免疫组化法检测P53、bax在老年白内障晶状体上皮细胞中的蛋白表达;RT-PCR检测p53、bcl-2在老年白内障晶状体上皮细胞中的mRNA的表达水平。结果凋亡细胞百分率为5%～47.4%,P53蛋白在老年白内障晶状体上皮细胞中的表达率为15%～28%,bax蛋白的表达率为5%～16%,p53mRNA的表达率为0.48～0.78,baxmRNA的表达率为0.34～0.67。结论老年白内障的发生与晶状体上皮细胞凋亡存在一定的相关性。

p53和bcl-2在老年性白内障晶状体上皮细胞中的蛋白表达

目的 研究 p5 3、bcl- 2基因在老年性白内障晶状体上皮细胞中的蛋白表达 ,探讨p5 3、bcl- 2在老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡中的作用。方法 应用免疫组织化学方法 ,对 30例老年性白内障及 10例正常透明晶状体上皮细胞进行 p5 3、bcl- 2基因蛋白表达的检测 ,计算 p5 3、bcl- 2基因蛋白表达阳性细胞百分率。结果 p5 3在正常晶状体上皮细胞中无蛋白表达 ,在老年性白内障晶状体上皮细胞中蛋白表达率为 16 .9%～ 19.1% ,bcl- 2在 2组中均无蛋白表达。结论 p5 3在老年性白内障晶状体上皮细胞中蛋白高表达 ,p5

老年性及先天性白内障晶状体上皮细胞凋亡及相关基因的表达

目的探讨老年性及先天性白内障患者晶状体上皮细胞(LECs)凋亡及其相关基因表达的关系。方法采用原位末端标记及免疫组织化学的方法,对30例老年性白内障患者、15例先天性白内障患者及15例正常人LECs中的凋亡细胞及c-fos、c-jun等相关基因蛋白的表达进行检测。结果30例老年性白内障患者LECs凋亡率为15·10%±7·83%,正常对照组为0(P<0·01),先天性白内障组0·01%±0·028%(P>0·05)。老年性白内障组中c-fos及c-jun阳性表达的细胞率均明显高于对照组(P<0·01),与凋亡细胞率呈正相关(r=0·8660,0.4021);先天性白内障及正常组中均极少或未见相关基因的表达。结论LECs凋亡与老年性白内障密切相关,c-fos与c-jun蛋白的表达可能与LECs凋亡有关。

MRG15的克隆及其在正常和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达

目的克隆死亡因子相关基因15(MRG15)并研究其在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达,比较二者的差异。方法用改良的消减杂交法克隆死亡因子相关基因15,地高辛标记MRG15cDNA片断制作探针,用原位杂交法研究其在晶状体前囊膜切片上的表达,并作统计学处理。结果克隆到了死亡因子相关基因15的cDNA片断,长约639bp,死亡因子相关基因15在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中均有表达;经统计分析,其在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达高于其在正常晶状体上皮细胞中的表达。结论MRG15在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中均有表达;在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中,其表达较正常晶状体增高,提示其可能在白内障的发生中起重要作用。

糖尿病性白内障晶状体上皮细胞凋亡与增殖特性的实验研究

目的 观察糖尿病性白内障晶状体上皮细胞 (lensepithelialcells ,LECs)凋亡、增殖特性的变化 ,探讨糖尿病性白内障发生的相关机制。方法 采用四氧嘧啶诱发兔糖尿病性白内障模型 ,定期监测血糖和观察晶状体的变化。TUNEL技术标记凋亡的LECs,测定凋亡百分率和晶状体上皮细胞密度 ,并用免疫组化SABC法检测LECs中增殖细胞核抗原的表达及积分光密度 (A)值。结果 TUNEL染色显示模型组兔晶状体上皮细胞中有凋亡阳性细胞 ,糖尿病性白内障模型组与同期正常对照组比较 ,其LECs凋亡百分率显著升高 (P <0 .0 1) ,且随观察期内时间推移和晶状体混浊程度的加重呈明显上升趋势 ;早期 2组晶状体上皮细胞密度和增殖细胞核抗原积分光密度 (A)值的变化无显著性 ,但随着观察期内高血糖持续时间的延长 (8周后 ) ,2组间差异日趋显著 (P <0 .0 1)。结论 糖尿病性白内障的发生与晶状体上皮细胞凋亡及增殖特性的改变有关。

老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡的DNA片段分析及TUNEL检测

目的 探讨老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡的生化特征。 方法 用ＤＮＡ 片段分析及ＴＵＮＥＬ 法共检测３１例老年性白内障患者晶状体上皮细胞凋亡。 结果 ＤＮＡ 片段分析显示，老年性白内障患者晶状体上皮细胞有ＤＮＡ“梯状”图谱，而健康成年人晶状体上皮细胞未见ＤＮＡ 断裂现象；ＴＵＮＥＬ 检测发现，老年性白内障患者晶状体上皮细胞中有凋亡细胞，而健康成年人晶状体上皮细胞中无明显的凋亡细胞。

热休克蛋白-70在人类糖尿病性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的 :探讨热休克蛋白 70在人类糖性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义。方法 :采用链霉菌抗生物素蛋白碱性磷酸酶 (streptavidin alkalinephosphatase ,S P)免疫组化技术检测热休克蛋白 70 (heatshockprotin 70 ,HSP 70 )在人类糖性白内障 (2 5例 )和正常晶状体 (7例 )上皮细胞中的表达情况。结果 :热休克蛋白 70在人类糖性白内障晶状体上皮中全部为阳性表达 ,而在正常晶状体上皮细胞中全部为阴性表达 ,二者差异有显著性 (χ2 =2 6 .4 2 ,P <0 .0 1)。结论 :热休克蛋白 70在人类糖尿病性白内障发生、发展中起重要作用。

MMP-3和TIMP-1在白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-3(matrixmetalloproteinase-3,MMP-3)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1)与白内障发病机制的关系。方法采用免疫组织化学方法测定MMP-3和TIMP-1在前囊下性白内障31眼、核性白内障28眼和正常晶状体12眼上皮细胞(lensepithelialcell,LEC)中的表达。结果MMP-3在前囊下性白内障的表达分别与核性白内障、正常晶状体比较,差异有显著意义(χ2=31.490,34.479;P=0.000),而核性白内障与正常晶状体相比较,差异无显著意义(χ2=2.449,P=0.118);TIMP-1表达在3组LEC中差异均无显著意义(P>0.05);MMP-3与TIMP-1在前囊下性白内障LEC中的表达没有相关性(r=0.121,P=0.516),而在核性白内障中有相关性(r=-0.513,P=0.005)。结论MMP-3表达增强及MMP-3/TIMP-1的表达失衡可能与前囊下性白内障的形成密切有关。

波形蛋白在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达及其意义

目的 :进一步明确波形蛋白的异常表达在老年性白内障形成中所起的作用。方法 :用链酶菌抗生物素蛋白 碱性磷酸酶 (streptavidin alkalinephosphatase,S P)免疫组化方法检测波形蛋白在 31例皮质性白内障、2 0例核性白内障及5例正常透明晶体上皮中的表达情况。结果 :波形蛋白在皮质性白内障晶体上皮中的表达比在核性白内障及正常透明晶状体中高。结论 :老年性皮质性白内障与老年性核性白内障的发生有不同的发病机制 。

老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡及相关基因蛋白的表达

目的 探讨老年性白内障与晶状体上皮细胞凋亡的关系。方法 透射电镜下观察老年性白内障晶状体上皮细胞的超微结构 ;Tunel法检测凋亡细胞百分率 ;并对其晶状体上皮细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳 ;免疫组化法检测P5 3 、bcl 2在老年性白内障晶状体上皮细胞中的蛋白表达。结果 透射电镜下发现老年性白内障晶状体上皮细胞中有凋亡细胞 ;凋亡细胞百分率为 8 4%～ 3 7 8% ,琼脂糖凝胶电泳出现梯状条带 ;P5 3 在老年白内障晶状体上皮细胞中蛋白表达率为 16 9%～ 19 1% ,bcl 2无蛋白表达。

HSP70在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的探讨热休克蛋白(HSPs)70在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞(LECs)中的表达及意义。方法采用Western blot蛋白印迹法,检测68例(其中皮质型23例、核型29例、后囊下型16例)年龄相关性白内障前囊膜上皮细胞中HSP70的表达,以8例正常成人晶状体前囊膜上皮细胞中HSP70含量为对照。结果HSP70在年龄相关性白内障(1.454±0.241)和正常人(0.713±0.009)LECs中的表达差异有统计学意义,年龄相关性白内障皮质型、核型、后囊下型HSP70表达也不相同。结论HSP70在年龄相关性白内障的发生、发展中可能起一定的细胞保护作用,HSP70在年龄相关性白内障皮质型、核型、后囊下型的作用机制可能不完全相同。

Ca^(2+)ATP酶在透明晶状体及白内障晶状体上皮细胞上的表达

目的通过研究Ca2+ATP酶在透明晶状体及白内障晶状体上皮细胞上的表达情况,从分子水平探讨老年性白内障的发生机制。方法利用半定量RTPCR技术测定6种Ca2+ATP酶的mRNA在透明晶状体和3种常见类型老年性白内障晶状体上皮细胞上的表达。结果6种Ca2+ATP酶在透明晶状体和白内障晶状体上皮细胞上均有表达,但表达的量不同,其中PMCA3在白内障晶状体上皮细胞上的表达明显减少,差异有显著性(P<0.01)。不同类型的老年性白内障晶状体上皮细胞上Ca2+ATP酶的表达形式亦不相同。结论PMCA3在老年性白内障的发生中可能起着关键性作用;不同形式的Ca2+ATP酶表达的减少可能导致不同类型老年性白内障的发生。

白内障晶状体上皮细胞中miR-126和caspase-3的表达关系及意义

目的检测白内障晶状体上皮细胞(LECs)中miR-126、caspase-3的表达情况,探讨二者在白内障晶状体上皮细胞凋亡中作用及表达关系。方法选取2017年5月至2018年6月收治的78例白内障患者为观察组,同期选取52例正常人(角膜移植术供体)为对照组,采用实时荧光PCR(qRT-PCR)法检测晶状体上皮细胞中miR-126、Caspase-3 mRNA表达水平;Western blot检测晶状体上皮细胞中Caspase-3蛋白表达水平;流式细胞仪测定细胞凋亡率;分析miR-126、caspase-3与晶状体上皮细胞凋亡率的相关性;分析miR-126与Caspase-3在白内障晶状体上皮细胞中表达的相关性。结果观察组白内障患者晶状体上皮细胞中miR-126、Caspase-3 mRNA及蛋白水平、晶状体上皮细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05);白内障患者晶状体上皮细胞中miR-126、caspase-3表达与晶状体上皮细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.669,P<0.05;r=0.633,P<0.05);白内障患者晶状体上皮细胞中miR-126水平与caspase-3表达水平呈显著正相关(r=0.599,P<0.05)。结论miR-126、caspase-3在白内障晶状体上皮细胞中高表达,二者与晶状体上皮细胞凋亡有关,提示二者可能通过影响晶状体上皮细胞凋亡参与白内障疾病发生及发展。

老年性白内障晶状体上皮细胞的形态学变化

目的 观察老年性白内障晶状体上皮细胞的形态学改变 ,探讨其与白内障形成的关系 .方法 采集老年性白内障晶状体囊外摘除术中取出的前囊膜 ,采用铺片及 HE染色、平板包埋及制备超薄切片等技术 ,分别在光镜和电镜下观察晶状体上皮细胞的密度、细胞形态和超微结构变化 .结果 白内障晶状体上皮细胞密度较正常晶状体明显减小 (P<0 .0 1) ,6 0岁以上组细胞密度低于 6 0岁以下组 (P<0 .0 1) .光镜下 ,形态异常的细胞散在分布 ,胞质疏松、淡染、空泡形成 ,细胞核大小不等 ,染色质淡染或浓染成块状 .在电镜下 ,异常细胞之间间隙增大 ,胞质中中间丝稀疏 ,细胞器变性 ,有空泡形成 .结论 老年性白内障晶状体上皮细胞密度降低 ,并与年龄有关 ,年龄增大 ,细胞数量减少 .细胞发生退行性改变 ,异常的细胞散在分布 .提示白内障的形成与晶状体上皮细胞数量减少 ,细胞变性、功能降低有关 .