白及醇提物中5种主要活性成分的在体肠吸收特征研究

目的:考察白及醇提物中主要活性成分4-(葡萄糖氧基)-肉桂酸葡萄糖氧基苄酯(A1)、2-异丁基苹果酸(A2)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(A3)、二氢菲1(A4)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-O-肉桂酰基-6-O-乙酰基)葡萄糖苷(A5)在大鼠肠道中的吸收动力学特征。方法:以葛根素为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测肠循环液中A1～A5的质量浓度。色谱柱为Acquity UPLC BEH C_(18),流动相为乙腈(含0.1%甲酸)-水(含0.1%甲酸)(梯度洗脱),流速为0.35 mL/min,柱温为45℃,进样量为3μL;采用电喷雾离子源,以多反应监测模式进行正、负离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 593.2→431.1(A1)、m/z 189.0→129.0(A2)、m/z 725.3→457.2(A3)、m/z 347.1→332.1(A4)、m/z 1 059.3→793.1(A5)、m/z 417.0→267.0(内标)。采用大鼠在体肠循环灌流模型,以累计吸收转化率(A)和吸收转化速率常数(Ka)为指标,考察不同剂量白及醇提物(低、中、高剂量分别为166、333、667μg/mL)、胆汁、P-糖蛋白(P-gp)抑制剂(维拉帕米)、不同肠段对上述5种成分肠吸收的影响。结果:A1、A2、A3、A4、A5检测质量浓度的线性范围分别为0.22～14.00、0.34～21.75、1.99～127.16、0.15～9.75、0.16～10.00μg/mL(r>0.99),定量下限分别为0.22、0.34、1.99、0.15、0.16μg/mL,最低检测限分别为0.028、0.085、0.251、0.035、0.010μg/mL,日内、日间RSD均小于10%,方法回收率为83.60%～106.91%,基质效应不影响待测物的测定。白及醇提物低、中剂量组A1的A、K_a值均显著高于高剂量组,低剂量组A3的A值显著高于中、高剂量组(P<0.05或P<0.01)。不结扎组A1、A3的A、K_a值均显著低于对照组,而A4的A、K_a值均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);P-gp抑制剂组A1、A3的A、K_a值均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。空肠组、回肠组、结肠组A1的A值以及结肠组A1的K_a值,结肠组A2的A、Ka值,回肠组A3的A值,回肠组、结肠组A4的A、K_a值,空肠组、回肠组A5的A值以及空肠组A5的K_a值均显著低于十二指肠组;而空肠组、回肠组、结肠组A3的K_a值均显著高于十二指肠组(P<0.05或P<0.01)。结论:本研究建立的UPLC-MS/MS法专属性强、灵敏度高、操作简便,可用于A1～A5的定量分析及药动学研究。白及醇提物中5种活性成分均为全肠道吸收,且吸收肠段各有不同;A1、A3在肠道中的吸收较多,可能已达饱和;胆汁可抑制A1、A2的肠吸收,但可促进A4的肠吸收;A1～A5可能均不是P-gp的底物。

白及醇提物对PM_(2.5)诱导J774a.1细胞损伤的保护作用

目的:研究白及醇提物对PM_(2.5)所致J774a.1细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用MTS检测不同浓度PM_(2.5)(0、25、50、100、200、400μg/mL)和不同浓度白及醇提物(0、1.25、2.5、5、10、20μg/mL)对J774a.1细胞活力的影响,确定合适的造模浓度和给药浓度。以PM2.5诱导J774a.1细胞损伤,将细胞分为空白对照组、模型组及白及醇提物组物低、中、高浓度组,采用DCFH-DA荧光探针检测活性氧水平;NO试剂盒检测NO的表达量;实时荧光定量PCR法测定促炎介质iNOS、IL-18 mRNA水平;流式细胞术检测炎症因子TNF-α、IL-6水平;Western blot检测TLR4、COX2蛋白表达及NF-κBp65蛋白磷酸化水平。结果:PM_(2.5)浓度为200μg/mL,白及醇提物浓度为5~20μg/mL时,未见明显细胞毒性。与模型组比较,各浓度白及醇提物均可显著降低细胞上清中NO、IL-6、TNF-α释放量及细胞内活性氧水平(P<0.01),5、10μg/mL白及醇提物可显著抑制细胞中iNOS、IL-18 mRNA表达(P<0.05或P<0.01),低浓度白及醇提物可显著抑制胞内TLR4、COX2蛋白表达及NF-κBp65蛋白的磷酸化(P<0.05或P<0.01)。结论:白及醇提物对PM_(2.5)染毒J774a.1细胞损伤有显著的保护作用,其作用机制可能与TLR4/NF-κB通路相关,通过减轻细胞炎症损伤及氧化应激发挥药效。

白及须根醇提物诱导肺腺癌细胞A549凋亡研究

目的研究白及须根醇提物(Alcohol extract of fibrous root part of Bletilla striata,AEFB)诱导肺腺癌细胞A549凋亡及相关作用机制。方法运用MTs、hoechst-PI双染及流式细胞术检测白及须根醇提物对A549细胞的增殖及凋亡影响;二维水平的细胞迁移检测白及须根醇提物对A549细胞转移的影响;RT-PCR法检测白及须根醇提物对肺腺癌细胞凋亡和转移相关基因bcl-2、bax、ICAM-1 m RNA的影响。结果白及须根醇提物能够抑制肺腺癌细胞的增殖,并且有浓度效应,随着药物浓度的提高,bcl-2、ICAM-1 m RNA表达下调,bax m RNA表达上调。结论白及须根醇提物能够明显的抑制肺腺癌细胞的生长作用,具有明显的促进肿瘤细胞凋亡作用和抑制肿瘤细胞的转移作用,其机制可能是通过下调bcl-2、ICAM-1及上调bax的表达相关。

白及茎秆抗肿瘤作用的初步研究

目的：初步研究白及茎秆醇提物的化学成分和抗肿瘤作用,更好地开发利用白及药用资源。方法：采用乙醇回流法提取白及茎秆和块茎醇提物,对醇提物进行化学成分分析。不同剂量白及茎秆醇提物处理体外培养的肺腺癌细胞（A549）,用MTS法检测A549细胞的增殖情况,划痕法检测A549细胞的迁移率,Hoechst-PI染色法检测白及茎秆醇提物对A549细胞凋亡的影响,RT-PCR法检测白及茎秆醇提物对A549细胞Bcl-2、Bax和ICAM-1基因mRNA表达的影响。结果：白及茎秆醇提物化学成分同块茎类似,并能抑制A549细胞的增殖,且存在剂量依赖关系。随着药物浓度的增加,Bcl-2、ICAM-1 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调。结论：白及茎秆醇提物可通过抑制A549细胞的生长增殖,影响细胞凋亡相关基因的表达发挥抗肿瘤作用。白及茎杆有潜力成为块茎的补充资源。