含人乳癌DF3/MUC1启动子转录调控序列和白喉毒素A链基因表达载体的构建

目的:构建含人乳癌DF3/MUC1启动子转录调控序列和白喉毒素A链(DTA)基因的重组表达载体。方法:利用PCR技术从人乳癌细胞MCF7中扩增出DF3/MUC1启动子的转录调控序列并克隆入pMD18T载体中,再从pMD18T-DF3重组质粒中切下DF3/MUC1启动子的转录调控序列并亚克隆入pGL3Basic载体,构建重组质粒pGL3-DF3。从质粒pIBI30DTA中切下DTA片断,以DTA基因替换重组质粒pGL3-DF3中的虫荧光素酶基因,构建重组质粒pGL3DF3DTA。结果:构建了含人乳癌DF3/MUC1启动子转录调控序列和DTA的表达载体,酶切和测序结果与预期完全相符。结论:重组质粒pGL3-DF3-DTA构建成功。

白喉毒素A链基因在植物中的表达能抑制蛋白质合成

利用原生质体瞬间表达系统证实,即使用大量蓖麻毒素A链基因DNA导入诸葛莱(Ory-chophoragmus violaceus)原生质体,其蛋白质合成仍不被抑制。但是诸葛菜和灰叶烟草(Nicotiana plumbagenifolia)原生质体的蛋白质合成却容易被表达的白喉毒素A链所抑制。用CaMV 35 S启动子和Kozak序列控制的白喉毒素A链嵌合基因DNA在3h内能完全中止灰叶烟草原生质体蛋白质合成,此期间蛋白合成总量仅为正常时5%左右。

携带尤文肉瘤EWS-FLI-1结合序列的DTA表达载体构建及其对尤文肉瘤细胞杀伤作用的研究

目的 研究尤文氏肉瘤EWS FLI 1融合蛋白的特异结合序列与DTA基因融合后的表达及对尤文肉瘤细胞的杀伤作用 ,为肿瘤基因治疗探索新的治疗方法。方法 构建含有EWS FLI 1特异结合序列和白喉毒素A链基因的表达载体pS2 DTA。转染尤文肉瘤细胞以及对照细胞后检测DTA表达及其对细胞的杀伤作用。结果 表达载体pS2 DTA在尤文肉瘤细胞系中高表达并产生强烈的杀伤作用。结论 pS2 DTA可以对尤文肉瘤细胞产生选择性杀伤作用 ,抑制其生长 。

含EWS-FLI1结合序列的DTA载体对报告基因表达抑制的研究

目的 研究含尤文家族肿瘤EWS FLI1结合序列的DTA载体对报告基因表达的抑制作用。方法 构建含有EWS FLI1结合序列和白喉毒素A链基因的表达载体 pS2 DTA。共同转染不同剂量梯度的 pS2 DTA和pS2到尤文肉瘤细胞和对照细胞 ,检测荧光强度。结果 每增加一个 pS2 DTA剂量梯度 ,在尤文肉瘤细胞中都可以检测到虫荧光素酶的表达显著降低 ,而在对照细胞中这种作用却不明显 ;在同一个pS2 DTA剂量梯度下 ,虫荧光素酶在尤文肉瘤细胞的表达都显著高于非尤文肉瘤细胞。结论 pS2 DTA转染可以抑制尤文肉瘤细胞内其它基因表达。

EWS-FLI1介导DTA基因在尤文肉瘤移植瘤裸鼠模型体内特异表达研究

目的观察EW S-FLI1介导的白喉毒素A链基因(d iphtheria toxin A cha in gene,DTA)在尤文肉瘤裸鼠移植瘤模型体内特异表达情况。方法采用尾静脉注射给药,将含有EW S-FLI1特异结合序列ACCGGAAGT和白喉毒素A链基因的真核表达载体pS2-DTA导入尤文肉瘤裸鼠移植瘤模型体内,通过免疫组化及RT-PCR检测DTA的表达情况。结果DTA在肿瘤组织中有高表达,肝组织中有弱表达,心肌组织中表达结果为阴性。结论EW S-FLI1介导的DTA可在尤文肉瘤裸鼠移植瘤内特异表达。