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多拷贝毕赤酵母重组菌表达GCL摇瓶优化和高密度发酵
被引量:
4
1
作者
智晓燕
汪小锋
+3 位作者
孙永川
柯锋
代敏
闫云君
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期82-89,共8页
目的:构建高效表达白地霉脂肪酶的毕赤酵母重组菌株,并对筛选得到的菌株进行摇瓶发酵条件优化和分批补料高密度发酵工艺研究。方法:将诱导型表达载体pPIC9K-gcl电转化至毕赤酵母GS115。通过橄榄油-罗丹明B平板和摇瓶发酵筛选高脂肪酶活...
目的:构建高效表达白地霉脂肪酶的毕赤酵母重组菌株,并对筛选得到的菌株进行摇瓶发酵条件优化和分批补料高密度发酵工艺研究。方法:将诱导型表达载体pPIC9K-gcl电转化至毕赤酵母GS115。通过橄榄油-罗丹明B平板和摇瓶发酵筛选高脂肪酶活力的重组菌株,运用基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR法确定其拷贝数,并对菌株进行摇瓶发酵条件优化。在此基础上,研究重组菌在3L发酵罐中的高密度发酵工艺。结果:筛选得到一株具有3个白地霉脂肪酶基因拷贝的菌株GS115/pPIC9K-gcl 78#,初始酶活力为220 U/ml。当摇瓶发酵条件为甲醇诱导96 h,每24 h甲醇添加量1%,接种量2%,培养基初始pH 7.0,500 ml摇瓶装液量50 ml,甲醇诱导温度25℃时酶活力达735 U/ml。3L发酵罐高密度发酵176.5 h,酶活力达到3360 U/ml,总蛋白含量达到4.30 g/L,且发酵过程中细胞活性一直保持在96%以上。结论:基因拷贝数与重组菌株的产酶水平呈正相关,摇瓶优化可显著提高重组菌株的产酶能力,为白地霉脂肪酶的工业化生产奠定了技术基础。
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关键词
巴斯德毕赤酵母
白地霉脂肪酶基因拷贝数摇瓶优化
高密度发酵
原文传递
题名
多拷贝毕赤酵母重组菌表达GCL摇瓶优化和高密度发酵
被引量:
4
1
作者
智晓燕
汪小锋
孙永川
柯锋
代敏
闫云君
机构
分子生物物理教育部重点实验室、华中科技大学生命科学与技术学院
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期82-89,共8页
基金
国家自然科学基金(31070089)
国家"863"计划(2006AA020203
+4 种基金
2007AA05Z417
2007AA100703
2009AA03Z232)
教育部新世纪人才基金(NCET 070336)
湖北省自然科学基金(2009CDA046)资助项目
文摘
目的:构建高效表达白地霉脂肪酶的毕赤酵母重组菌株,并对筛选得到的菌株进行摇瓶发酵条件优化和分批补料高密度发酵工艺研究。方法:将诱导型表达载体pPIC9K-gcl电转化至毕赤酵母GS115。通过橄榄油-罗丹明B平板和摇瓶发酵筛选高脂肪酶活力的重组菌株,运用基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR法确定其拷贝数,并对菌株进行摇瓶发酵条件优化。在此基础上,研究重组菌在3L发酵罐中的高密度发酵工艺。结果:筛选得到一株具有3个白地霉脂肪酶基因拷贝的菌株GS115/pPIC9K-gcl 78#,初始酶活力为220 U/ml。当摇瓶发酵条件为甲醇诱导96 h,每24 h甲醇添加量1%,接种量2%,培养基初始pH 7.0,500 ml摇瓶装液量50 ml,甲醇诱导温度25℃时酶活力达735 U/ml。3L发酵罐高密度发酵176.5 h,酶活力达到3360 U/ml,总蛋白含量达到4.30 g/L,且发酵过程中细胞活性一直保持在96%以上。结论:基因拷贝数与重组菌株的产酶水平呈正相关,摇瓶优化可显著提高重组菌株的产酶能力,为白地霉脂肪酶的工业化生产奠定了技术基础。
关键词
巴斯德毕赤酵母
白地霉脂肪酶基因拷贝数摇瓶优化
高密度发酵
Keywords
Pichia pastoris Geotrichum candidum lipase Gene copy number Shaking flask cultivationoptimization High cell-density fermentation
分类号
Q814.1 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
多拷贝毕赤酵母重组菌表达GCL摇瓶优化和高密度发酵
智晓燕
汪小锋
孙永川
柯锋
代敏
闫云君
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
4
原文传递
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