白头翁皂苷A调控circ-0001742对鼻咽癌C666-1细胞恶性生物学行为影响实验研究

目的:探讨白头翁皂苷A对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响及分子机制。方法:体外培养人鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞系(HK-1、HONE1、CNE2、SUNE1、C666-1),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中circ-0001742表达水平;将C666-1细胞分为si-circ-0001742组、si-NC组、对照组、白头翁皂苷A-L、M、H组、白头翁皂苷A-H+pcDNA-circ-0001742组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移数,克隆形成实验检测细胞克隆数,蛋白质印迹法检测蛋白表达。结果:鼻咽癌细胞(HK-1、HONE1、CNE2、SUNE1、C666-1)中circ-0001742表达水平升高(均P<0.05)。沉默circ-0001742后,C666-1细胞增殖抑制率、细胞凋亡率以及活化的半胱天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)表达水平升高,C666-1细胞迁移和克隆细胞数减少(均P<0.05)。不同浓度白头翁皂苷A处理后,C666-1细胞增殖抑制率、细胞凋亡率以及Cleaved caspase-3表达水平升高,C666-1细胞迁移和克隆细胞数减少,circ-0001742表达水平降低,呈浓度依赖性(均P<0.05)。circ-0001742过表达可逆转白头翁皂苷A对C666-1细胞的抑制作用。结论:白头翁皂苷A通过下调circ-0001742抑制鼻咽癌C666-1细胞恶性生物学行为。

白头翁皂苷A对K562细胞红系诱导分化作用的研究

目的:探讨白头翁皂苷A对K562细胞向红系诱导分化的作用。方法:应用不同浓度的白头翁皂苷A作用于K562细胞后,采用联苯胺染色阳性细胞计数、细胞内血红蛋白测定及流式细胞术检测细胞膜表面CD71及GPA分化抗原表达等方法评价白头翁皂苷A对K562细胞的诱导分化作用。结果:不同浓度的白头翁皂苷A均可提高K562细胞内血红蛋白的含量;上调K562细胞膜表面CD71及GPA分化抗原的表达。其中以4μg/ml的白头翁皂苷A的作用最为显著。结论:白头翁皂苷A可诱导K562细胞向红系分化。

白头翁皂苷A通过调控miR-24-3p/RNF2的表达影响乳腺癌细胞增殖及放射敏感性

目的:探讨白头翁皂苷A对乳腺癌细胞增殖及放射敏感性的影响及其作用机制。方法:用浓度为0、5、10、15和20 mg/L的白头翁皂苷A作用于人乳腺癌MCF-7细胞,并转染微小RNA-24-3p(miR-24-3p)过表达载体或抑制表达载体。用MTT法检测细胞活力的变化;集落形成实验检测细胞放射敏感性;RT-qPCR分析miR-24-3p和环指蛋白2(RNF2)的mRNA表达水平;Western blot检测RNF2的蛋白表达;萤光素酶报告基因实验检测miR-24-3p和RNF2的靶向关系。结果:与对照组(0 mg/L)相比,5、10、15和20 mg/L的白头翁皂苷A组MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P<0.05),白头翁皂苷A处理的MCF-7细胞经射线照射后存活分数显著降低,RNF2表达水平显著降低(P<0.05);miR-24-3p靶向负调控RNF2。白头翁皂苷A和miR-24-3p同时处理的MCF-7细胞经射线照射后,存活曲线下移;抑制miR-24-3p表达可逆转白头翁皂苷A对MCF-7细胞的增殖抑制和放射增敏作用。结论:白头翁皂苷A可能通过miR-24-3p/RNF2影响乳腺癌细胞的增殖和放射敏感性。

生物转化法制备白头翁皂苷A3

利用微生物酶法转化白头翁总皂苷,结合硅胶柱层析法和结晶法对酶产物进行分离,制备高活性的稀有白头翁皂苷A3。将1 000g中药白头翁经乙醇浸提3次,再经脱糖、脱色处理后共得总皂苷98.6g,得率为9.86%。采用微生物Absidiasp.P00r发酵产粗酶液,对50g总皂苷进行酶反应,酶解产物经脱糖、脱色处理后,得到含白头翁皂苷A3的粗产物34.2g。通过硅胶柱层析和结晶法对产物进行分离纯化,制备得到白头翁皂苷A3单体1.56g,得率为4.56%,HPLC检测其纯度为95.4%。

白头翁皂苷A3通过抑制巨噬细胞M2型极化增强结肠癌细胞对5-氟尿嘧的化疗敏感性

目的探讨白头翁皂苷A3通过调控巨噬细胞极化对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响及其作用机制。方法利用白细胞介素(IL)-4和IL^(-1)3诱导巨噬细胞M2极化,采用CCK-8法检测白头翁皂苷A3对巨噬细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测白头翁皂苷A3对巨噬细胞极化表型的影响;采用RT-PCR检测白头翁皂苷A3对巨噬细胞CD206,IL^(-1)0,CCL18,CCL22 mRNA表达的影响。收集M2巨噬细胞及白头翁皂苷A3干预M2巨噬细胞后的上清液作为条件培养基(CM)与5-FU共同作用于结肠癌SW480细胞。采用CCK-8法检测CM干预下5-FU对SW480细胞增殖的影响;采用Annexin-FITC/PI双染法及Western印迹法检测CM干预下5-FU对SW480细胞凋亡及凋亡蛋白Bax、活化的胱天蛋白酶3表达的影响。结果白头翁皂苷A3浓度<100 mg·L^(-1)时对巨噬细胞增殖无抑制作用,故选择50,75和100 mg·L^(-1)作为白头翁皂苷A3实验浓度。白头翁皂苷A3呈浓度依赖性降低CD206的阳性细胞表达比例,显著抑制M2巨噬细胞表面抗原CD206和极化因子IL^(-1)0,CCL18,CCL22 mRNA的表达(P<0.01)。白头翁皂苷A3100 mg·L^(-1)能明显提高了5-FU对SW480细胞的抑制率(P<0.05),同时提高了SW480细胞的凋亡率及促凋亡蛋白Bax和活化的胱天蛋白酶3的表达(P<0.05)。结论白头翁皂苷A3通过抑制巨噬细胞M2极化减弱了M2巨噬细胞对SW480细胞促凋亡蛋白Bax和活化的胱天蛋白酶3的抑制作用,从而降低M2巨噬细胞介导的SW480细胞对5-FU的化疗抵抗,提高了5-FU的化疗敏感性。

白头翁皂苷A对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和放疗敏感性的影响及机制

目的 探讨白头翁皂苷A(PSA)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和放疗敏感性的影响及机制。方法 体外培养HepG2细胞,取对数生长期的细胞分别用不同浓度(0、10、15、20 mg/L)PSA进行干预24 h,分别将0、20 mg/L的PSA干预的细胞记为对照组、PSA组。用MTT法检测两组细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,克隆形成实验、单击多靶模型检测肝癌细胞放疗敏感性,qRT-PCR检测细胞内SIRT1 mRNA表达,用Western blotting法检测细胞内SIRT蛋白表达。结果 随PSA浓度的增加,HepG2细胞活力、迁移细胞数目、侵袭细胞数目均逐渐降低(P均<0. 05)。经0、2、4、6、8 Gy X射线照射后,与对照组比较,PSA组细胞存活分数低(P均<0. 05);PSA组放射增敏比为1. 963。与对照组比较,PSA组SIRT1 mRNA、蛋白表达低(P均<0. 05)。结论 PSA可能通过下调SIRT1表达抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,提高其放疗敏感性。

白头翁皂苷D通过调控circ_0001178/miR-885-5p对甲状腺癌细胞的生物学行为的影响

目的探讨白头翁皂苷D对甲状腺癌细胞生物学行为的影响及其对circ_0001178/miR-885-5p分子轴的调控作用。方法不同浓度的白头翁皂苷D处理人甲状腺癌细胞SW579,si-NC、si-circ_0001178、miR-NC、miR-885-5p mimics转染至SW579细胞,pcDNA-circ_0001178、anti-miR-885-5p转染至SW579细胞后加入白头翁皂苷D处理;qRT-PCR检测circ_0001178与miR-885-5p的表达量;MTT、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测circ_0001178与miR-885-5p的靶向关系。结果白头翁皂苷D可降低circ_0001178的表达量、细胞活力及N-cadherin蛋白水平(P<0.05),可抑制克隆形成数、迁移及侵袭,还可促进miR-885-5p表达及E-cadherin的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性;转染si-circ_0001178或转染miR-885-5p mimics可抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;circ_0001178能够靶向调控miR-885-5p;转染pcDNA-circ_0001178或转染anti-miR-885-5p均可逆转白头翁皂苷D对细胞生物学行为的作用。结论白头翁皂苷D可通过调控circ_0001178/miR-885-5p分子轴而抑制甲状腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

日粮中添加白头翁皂苷对育肥猪生长性能、血清生化和免疫指标的影响

文章旨在探究日粮中添加白头翁皂苷对育肥猪生长性能、血清生化和免疫指标的影响。试验将160头健康、生长状况良好三元杂交育肥猪随机分为4组,每组5个重复,每重复8头。试验日粮分别向基础日粮中添加0、10、20和40 mg/kg的白头翁皂苷。试验为期70 d。试验结果表明,与对照组相比,日粮添加20 mg/kg的白头翁皂苷育肥猪终末体重显著提高3.8%(P<0.05),平均日增重显著提高7.6%(P<0.05),料重比显著降低6.7%(P<0.05)。此外,日粮添加白头翁皂苷对育肥猪平均日采食量无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,日粮添加10~40 mg/kg白头翁皂苷可显著提高育肥猪血清总蛋白含量(P<0.05);日粮添加10和20 mg/kg白头翁皂苷可显著提高育肥猪血清白蛋白含量(P<0.05);日粮添加40 mg/kg白头翁皂苷可显著提高育肥猪血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性(P<0.05);此外,日粮添加白头翁皂苷甘油三酯和总胆固醇含量均无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,日粮添加20 mg/kg白头翁皂苷可显著提高育肥猪血清IgA和IgG含量(P<0.05);日粮添加20和40 mg/kg白头翁皂苷可显著提高育肥猪血清IgM和IL-10含量(P<0.05);日粮添加20和40 mg/kg白头翁皂苷可显著降低育肥猪血清TNF-α含量(P<0.05)。总之,日粮添加适量白头翁皂苷可通过增强育肥猪免疫力促进其生长发育,在本试验条件下,日粮白头翁皂苷最适添加量为20 mg/kg。

白头翁皂苷A对慢传输型便秘大鼠的影响

目的 研究白头翁皂苷A对慢传输型便秘(STC)大鼠的疗效及其作用机制。方法 将SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组和低、中、高剂量实验组,每组10只。除对照组大鼠,其余4组大鼠均灌胃给予复方地芬诺酯构建STC大鼠模型,建模成功后,低、中、高剂量实验组分别灌胃给予100、150、300 mg·kg^(-1)白头翁皂苷A,对照组和模型组均灌胃给予等量的0.9%NaCl,每天1次,并记录给药0、6、10、14 d的大鼠体质量变化,连续给药14 d。记录粪便粒数、湿重、干重、含水量。以苏木精-伊红染色法观察结肠黏膜及肠腺杯状细胞数量变化情况,以蛋白质印迹法检测结肠组织黏蛋白2(MUC2)、酪氨酸激酶受体(c-kit)、干细胞因子(SCF)蛋白水平,以酶联免疫吸附法检测5-羟色胺(5-HT)、血管活性肠肽(VIP)、一氧化氮(NO)水平。结果 对照组、模型组和低、中、高剂量实验组大鼠给药14 d后体质量分别为(234.37±3.29)、(200.62±3.91)、(212.59±2.83)、(223.97±3.27)和(225.91±3.27)g,粪便含水量分别为(32.35±6.64)%、(21.98±7.20)%、(28.90±4.37)%、(29.65±7.29)%和(30.07±6.42)%,杯状细胞数分别为(141.10±10.40)、(51.10±5.30)、(62.10±6.20)、(76.80±6.98)和(126.50±7.30)个,MUC2蛋白相对表达水平分别为0.97±0.09、0.32±0.04、0.45±0.04、0.75±0.05和0.95±0.12,5-HT含量分别为(5.14±0.54)、(3.01±0.17)、(4.13±0.41)、(4.50±0.44)和(5.13±0.50)ng·mL^(-1),c-kit相对蛋白水平分别为0.87±0.08、0.31±0.04、0.49±0.07、0.68±0.06和0.08±0.09,SCF相对蛋白水平分别为1.07±0.11、0.38±0.04、0.55±0.05、0.66±0.08和0.89±0.08。模型组的上述指标与对照组比较,低、中、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 白头翁皂苷A可能通过调控c-kit/SCF通路,调节结肠黏液屏障及肠神经递质水平改善STC大鼠便秘症状。

白头翁皂苷B4对犊牛生长性能、消化代谢和瘤胃发酵的影响

【目的】通过探究白头翁皂苷B4对犊牛生长性能、消化代谢和瘤胃发酵参数的影响。为新型饲料添加剂的开发提供理论基础。【方法】试验选取60头新生荷斯坦公犊牛,随机分为4组(每组15头),分别饲喂0(C组)、15(A1组)、30(A2组)、45(A3组)mg·d^(-1)的白头翁皂苷B4。试验周期为56d。在犊牛14、28、42和56日龄晨饲前称量体重,并在28、42和56日龄晨饲后2 h采集瘤胃液,测定瘤胃发酵参数。分别在42和63日龄进行两期消化代谢试验,测定营养物质表观消化率和能氮代谢指标。【结果】(1)白头翁皂苷B4对哺乳期犊牛体重和干物质采食量无显著影响(P>0.05),但犊牛14—28日龄的平均日增重与白头翁皂苷B4呈显著正相关(P<0.05),饲料转化比与添加量呈显著负相关(P<0.05),其中A3组犊牛的平均日增重显著高于C组(P<0.05),饲料转化比显著低于C组(P<0.05)。(2)A3组犊牛7—56日龄和7—14日龄的粪便评分和腹泻率显著低于C组(P<0.05),A2组犊牛15—28日龄的粪便评分和腹泻率显著低于C组(P<0.05),白头翁皂苷B4的作用效果与添加剂量之间存在显著负相关性(P<0.05);29—42和43—56日龄犊牛的粪便评分和腹泻率在各组之间差异不显著(P>0.05)。(3)断奶前,A3组犊牛干物质采食量显著低于C组(P<0.05),A2组犊牛干物质采食量有低于C组的趋势(0.05≤P<0.10),犊牛的干物质采食量随白头翁皂苷B4添加量的增加显著降低(P<0.05),白头翁皂苷B4对犊牛干物质(DM)、粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)表观消化率的影响差异均不显著(P>0.05);断奶后,A2组犊牛的DM和NDF的表观消化率有高于A1组的趋势(0.05≤P<0.10),ADF表观消化率显著高于A1组(P<0.05);A2组犊牛EE的表观消化率有随白头翁皂苷B4添加量的增加而升高的趋势(0.05≤P<0.10)。(4)断奶前,C组犊牛摄入总能显著高于A3组(P<0.05),同时有高于A2组的趋势(0.05≤P<0.10),A1组犊牛摄入总能也显著高于A3组(P<0.05);断奶后,C组犊牛粪能有高于A2组的趋势(0.05≤P<0.10),A2组总能消化率有高于A1组的趋势(0.05≤P<0.10),总能代谢率显著高于A1组(P<0.05),且有高于C组的趋势(0.05≤P<0.10)。(5)断奶前,各组间粪氮、尿氮、氮消化率和氮沉积率差异不显著(P>0.05),C组摄入总氮显著高于A3组(P<0.05);断奶后,各组之间氮代谢指标差异不显著(P>0.05)。(6)四组犊牛瘤胃发酵参数差异不显著(P>0.05)。【结论】在哺乳期犊牛代乳品中添加白头翁皂苷B4可以显著提高哺乳期犊牛14—28日龄的平均日增重,降低料肉比和腹泻率,提高饲料转化效率,也可以提高断奶后犊牛的干物质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观消化率,促进对总能的消化率和代谢率,同时对犊牛瘤胃发酵指标没有不良影响。综合考虑,推荐添加剂量为45 mg·d^(-1)。

白头翁皂苷B4和PD-L1 siRNA共递送cRGD修饰靶向脂质体的制备及体外细胞摄取研究

目的制备白头翁皂苷B4(AB4)和程序性死亡配体1(PD-L1)小干扰RNA(siP)共递送环精氨酰甘氨酸天冬氨酸序列(cRGD)修饰靶向脂质体(AB4/siP-c-L),并考察其体外细胞摄取行为。方法采用乙醇注入法制备cRGD修饰的AB4靶向脂质体(AB4-c-L),将AB4-c-L与20 nmol/L的siP等体积混合,通过静电吸附得到AB4/siP-c-L。分别采用激光散射粒径测定仪、透射电子显微镜、超滤离心法、透析法、琼脂糖凝胶电泳法考察AB4/siP-c-L的粒径、Zeta电位、形态、包封率、药物含量、体外释放行为、血清稳定性。分别采用流式细胞术和共聚焦激光扫描技术评价小鼠Lewis肺癌细胞LLC对AB4/siP-c-L的摄取及其在细胞内的分布情况。结果AB4/siP-c-L的平均粒径为(187.4±3.1)nm,Zeta电位为(33.5±1.4)mV,形态呈类球形,AB4的包封率和含量分别为(95.2±0.4)%、(1.0±0.2)mg/mL;AB4/siP-c-L可较好地包裹siP,并具有较好的血清稳定性、pH敏感性以及缓释特性。LLC细胞对AB4/siP-c-L的摄取率显著高于游离药物,并能实现细胞质内富集。结论AB4/siP-c-L可有效实现AB4与基因药物siP共载,且对LLC细胞具有一定的体外靶向性。

白头翁皂苷对胃癌细胞HGC-27增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制

目的探讨白头翁皂苷对胃癌细胞HGC-27增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制。方法采用不同浓度白头翁皂苷(12.5、25.0、50.0μmol/L)处理人胃癌细胞HGC-27,分别设为低白头翁皂苷组、中白头翁皂苷组、高白头翁皂苷组,另将正常培养的HGC-27细胞设为对照组。将si-NC、si-circNRIP1、pcDNA、pcDNA-circNRIP1转染至HGC-27细胞,分别设为si-NC组、si-circNRIP1组、pcDNA组、pcDNA-circNRIP1组。向HGC-27细胞中转染pcDNA、pcDNA-circNRIP1,均加入50.0μmol/L白头翁皂苷培养,分别记为白头翁皂苷+pcDNA组、白头翁皂苷+pcDNA-circNRIP1组。通过CCK-8法、平板克隆形成实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成和迁移、侵袭能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测环状RNA核受体相互作用蛋白1(circNRIP1)表达量;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的蛋白表达情况。结果对照组、低白头翁皂苷组、中白头翁皂苷组、高白头翁皂苷组细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白水平依次升高,细胞克隆形成数量、迁移数量、侵袭数量依次减少,N-cadherin蛋白水平、circNRIP1表达量依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05);pcDNA-circNRIP1组circNRIP1表达量高于pcDNA组,si-circNRIP1组circNRIP1表达量低于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05);si-circNRIP1组细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白水平高于si-NC组,N-cadherin蛋白水平低于si-NC组,细胞克隆形成数量、迁移数量和侵袭数量少于si-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);白头翁皂苷+pcDNA-circNRIP1组细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白水平低于白头翁皂苷+pcDNA组,N-cadherin蛋白水平高于白头翁皂苷+pcDNA组,细胞克隆形成数量、迁移数量和侵袭数量多于白头翁皂苷+pcDNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论白头翁皂苷可抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭活性且呈现浓度依赖性,其作用机制或与下调circNRIP1表达有关。

白头翁皂苷B4基于调节巨噬细胞极化对小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的探究白头翁皂苷B4基于调节巨噬细胞极化对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用。方法将40只SPF级雄性C57BL/6小鼠(体重18~20 g)按随机数字表法分为对照组、模型组、B4组和阳性药组,每组10只。模型组、B4组和阳性药组连续给予3%DSS 5 d构建UC模型,造模成功后B4组灌胃白头翁皂苷B4(5 mg/kg,1次/d),阳性药组灌胃美沙拉秦(400 mg/kg,1次/d),对照组和模型组灌胃等量生理盐水,四组均连续干预7 d。观察干预期间小鼠体重的变化。干预结束后对小鼠结肠组织进行苏木精-伊红染色并进一步评估其病理组织学指数,并对四组炎症相关指标进行检测。qRT-PCR检测四组结肠组织中核因子κB(NF-κB)p50、p65及M1型巨噬细胞特异性指标诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、M2型巨噬细胞特异性指标精氨酸-1(Arg1)的mRNA表达水平。对四组结肠组织进行免疫组织化学染色,观察四组结肠组织中巨噬细胞极化的情况。结果模型组干预6、9、12 d的体重均低于对照组,B4组干预12 d的体重高于模型组(P<0.05或P<0.01)。对照组黏膜层肠腺排列整齐,无溃疡性病变;模型组肠黏膜层隐窝及上皮大部分丧失,并伴有大量炎症细胞浸润、炎症侵及黏膜层和黏膜下层;B4组结肠黏膜具有轻微炎症,溃疡和出血症状明显减少,上皮和隐窝较为完整,结肠黏膜损伤也得到显著改善。模型组病理组织学指数、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平及核因子κB(NF-κB)p50、NF-κBp65、iNOS mRNA表达水平高于对照组,IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)水平及Arg1 mRNA表达水平低于对照组(P<0.05)。B4组病理组织学指数、TNF-α、IL-1β、IL-6水平及NF-κBp50、NF-κBp65、iNOS mRNA表达水平低于模型组,IL-10、TGF-β水平及Arg1 mRNA表达水平高于模型组(P<0.05)。模型组M1型巨噬细胞比例高于对照组,M2型巨噬细胞比例低于对照组,B4组M1型巨噬细胞比例低于模型组,M2型巨噬细胞比例高于模型组(P<0.05)。结论白头翁皂苷B4可通过抑制M1型巨噬细胞极化,促进M2型巨噬细胞极化,改善肠道炎症环境,缓解UC。

白头翁皂苷在癌症中的临床药理研究进展

白头翁皂苷是从白头翁根茎中分离出的一种皂苷,其主要活性物质是单体白头翁皂苷B4,含量丰富,价格低廉,在临床上广泛应用,具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、肾损伤保护、镇痛、免疫调节等药理作用。在各种癌症类型中均具有抗癌活性。可以通过调节癌症相关的代谢信号通路来抑制癌症的发展。本文对白头翁皂苷B4临床药理作用的研究进展作一综述,以期为其开发利用提供参考。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨白头翁皂苷A对人伯基特淋巴瘤(BL)细胞Raji细胞增殖、凋亡及相关通路蛋白表达的影响。方法:以人BL细胞Raji细胞为研究对象,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞增殖情况,并计算出24、48、72 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为19.77、18.31、16.70μmol·L^(-1)。后续相关实验根据白头翁皂苷A作用Raji细胞72 h IC_(50),选用白头翁皂苷A 8、16、32μmol·L^(-1)开展实验。用0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A作用于Raji细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞生长曲线吸光度A。检测经0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A处理Raji细胞24 h后Raji细胞中胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活性。流式细胞仪检测不同浓度白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h,Raji细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的Caspase-3(cleaved Caspase-3)凋亡蛋白表达情况,检测非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况。结果:与空白组比较,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组细胞增殖受到抑制,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化(P<0.01),细胞凋亡明显增加(P<0.05,P<0.01),细胞于有丝分裂准备期(G2)期阻滞明显增加(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组Raji细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:白头翁皂苷A可以抑制人BL细胞Raji细胞的增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与白头翁皂苷A调控JAK2/STAT3信号通路有关。

白头翁皂苷A3通过M2型巨噬细胞提高人结肠癌SW480细胞对5-FU的化疗敏感性

目的:观察白头翁皂苷A3(A3)通过干预巨噬细胞极化增强人结肠癌SW480细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗的敏感性,并探讨其作用机制。方法:采用CCK8法检测A3对人单核THP-1细胞存活率的影响,确定A3的安全作用浓度;采用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为M0型巨噬细胞,将M0型巨噬细胞分为M0对照组,M2模型组,A3低、中、高剂量干预组。其中M2模型组给予20μg·L^(-1)IL-4与20μg·L^(-1)IL-13进行造模,A3干预组在造模的同时给予低、中、高剂量(50,75,100 mg·L^(-1))A3进行干预。采用流式细胞术检测M2型巨噬细胞表面抗原CD206的表达;采用RT-PCR法检测M2型巨噬细胞极化因子CD206、IL-10、CCL22、CCL18 mRNA的表达;采用Western blot法检测细胞内p-STAT6、CD206、IL-10、CCL22蛋白的表达。A3干预巨噬细胞M2型极化后的细胞上清液作为条件培养基用于考察SW480细胞对5-FU的化疗敏感性,采用CCK8法检测SW480细胞的存活率;采用Annexin-FITC/PI双染法及Western blot法检测SW480细胞凋亡水平,以及Bax、Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果:A3在50,75,100 mg·L^(-1)浓度时对THP-1细胞存活率没有显著影响。A3呈剂量依赖性减少CD206阳性细胞表达比例,下调p-STAT6、CD206、IL-10、CCL22、CCL18基因与蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。A3干预巨噬细胞M2型极化后的条件培养基显著提高了SW480细胞对5-FU的敏感性,表现为SW480细胞的存活率下降、凋亡率升高,以及促凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:A3能够减弱M2型巨噬细胞对SW480细胞凋亡的抑制作用从而提高SW480细胞对5-FU的化疗敏感性,作用机制可能与A3调控STAT6信号通路抑制巨噬细胞M2型极化有关。

白头翁皂苷B4对临床型奶牛乳房炎疗效和血清炎性因子、免疫因子的影响

为观察不同剂量白头翁皂苷B4对临床型奶牛乳房炎的疗效,及对血清炎性因子和免疫因子的影响,将36头患临床型乳房炎的奶牛随机分为低、中、高剂量3个试验组,同时选择12头健康奶牛作为对照组。试验组每日分别于颈部肌肉注射白头翁皂苷B40.025、0.05、0.1 mL·kg^(-1),连续注射6 d,对照组不注射任何药物。试验期间,观察试验组各奶牛的有效率和治愈率,同时采集对照组任意一天,及试验组1、3、5、7 d静脉血进行炎性因子和免疫因子检测,分别采集试验组1、7、12 d患病乳区奶样进行乳汁体细胞数(SCC)计数和病原微生物检测,整个试验观察至12 d,统计临床疗效。临床疗效试验结果表明,白头翁皂苷B4低、中、高3个剂量组的临床治愈率和总有效率分别为75.00%、75.00%、91.67%和100%、100%、100%,平均治愈时间分别为6.33、6.11、6.91 d。白头翁皂苷B4可显著(P<0.05)降低临床型奶牛乳房炎SCC。治疗前,36份奶样有34份检测出病原微生物,检出率为94.44%,主要为支原体、球菌和大肠埃希菌等;治疗12 d后,病原微生物总转阴率为52.94%,其中,杆菌、产色葡萄球菌、溶血葡萄球菌和大肠埃希菌的转阴率均达100%,支原体、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和球菌的转阴率分别为69.23%、60.00%、50.00%和33.33%。白头翁皂苷B4可显著(P<0.05)促使临床型奶牛乳房炎血清炎性因子CRP、SAA、HP、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α和免疫因子IgA、IgD、IgE、IgG、IgM恢复到健康水平。

白头翁皂苷D抗肝癌作用的药效学研究

目的研究白头翁皂苷D(毛茛科植物白头翁Pulsatilla chinensis(Bge.)Regel的干燥根)体内抗小鼠H22肝癌细和体外的抗人肝癌SMMC-7721作用。方法在体外实验中,采用MTT法考察白头翁皂苷D对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;在体内实验中,采用小鼠H22实体瘤进行体内抑瘤实验,测定肿瘤生长抑制率,利用光镜(HE染色)、电镜等方法进行形态学观察。结果白头翁皂苷D处理人肝癌SMMC-7721细胞24、48、72h后,给药组均出现了不同程度的细胞增殖抑制。白头翁皂苷D(4.5、6.0 mg/kg)对小鼠H22肝癌细胞实体瘤的生长有明显的抑制作用,抑瘤率分别为38.67%和41.59%(P<0.01,与模型组比较)。组织学观察显示,肿瘤细胞大量变性坏死,电镜下可见凋亡细胞和凋亡小体。结论白头翁皂苷D具有一定的体内、外抗肿瘤作用。

白头翁皂苷D对乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用研究

目的探讨白头翁皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用及其机制。方法采用MTT法和吉姆萨染色,考察白头翁皂苷D对人MCF-7细胞体外增殖抑制的影响;建立MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,考察白头翁皂苷D体内抗肿瘤作用;HE染色和透射电镜实验考察肿瘤组织形态学和超微结构的变化;采用Western Blot法检测MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3及PI3K/AKT/mTOR途径相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K的表达。结果白头翁皂苷D可抑制MCF-7细胞的增殖,且呈剂量依赖关系;裸鼠体内实验结果显示白头翁皂苷D可抑制肿瘤的生长,30.0 mg·kg^(-1)剂量组瘤体质量明显降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01);形态学观察结果也显示白头翁皂苷D对MCF-7细胞具有凋亡作用,且随着给药剂量的增加变化越明显;白头翁皂苷D(15.0,20.0,25.0μmol·L^(-1))不同剂量组均可抑制MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);白头翁皂苷D还可下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达,20.0,25.0μmol·L^(-1)剂量组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论白头翁皂苷D对MCF-7细胞有显著的体内外抗肿瘤作用,其机制可能是通过下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路诱导细胞凋亡。

产地加工对白头翁皂苷B_4含量的影响

目的:考察白头翁药材最佳产地加工方法。方法:2006年8月10日于凤阳县雷达山采集白头翁后,选用晒干、烘干(50℃)、105℃杀青后烘干、沸水杀青后烘干、放置2 d后烘干等5种干燥处理方法。采用高效液相色谱法测定不同加工方法的白头翁中皂苷的含量。结果:105℃杀青后50℃干燥的药材白头翁皂苷含量最高。结论:该研究对白头翁药材产地加工方法的选用提供了科学依据。