白扁豆多糖对正常小鼠体内抗氧化和免疫实验研究

采用正常小鼠进行体内抗氧化和免疫实验,通过测定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力,来评价其抗氧化能力;通过观察正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和小鼠血清溶血素形成的影响,来评价其免疫活性。结果表明,白扁豆多糖可使SOD、GSH-Px活力升高,可显著提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数,促进溶血素形成。

白扁豆多糖的超声波辅助提取及其稳定性研究

采用超声波辅助提取,研究提取温度、时间、料液比及提取次数对白扁豆多糖提取率的影响,并对多糖在不同温度、pH和常见的氧化剂、还原剂、食品添加剂、金属离子等条件下的稳定性进行探讨。实验结果表明,白扁豆多糖的最佳提取条件为:超声提取温度60℃、提取时间30min、料液比1∶30(g∶mL)、提取次数2次。白扁豆糖在低温、还原剂、VC及pH=5 7的溶液中稳定性较好,在氧化剂、苯甲酸钠、柠檬酸和K+、Na+、Ca2+、Al3+等金属离子溶液中的稳定性相对较差。

白扁豆多糖通过HPA轴介导降血糖的作用机制

本文研究了白扁豆多糖(polysaccharide from Dolichos lablab L.,WHBP)对Ⅱ型糖尿病大鼠高血糖和下丘脑-垂体-肾上腺(Hypothalamic-Pituitary-Adrenal,HPA)轴的影响。实验通过高脂高糖饮食结合尾静脉注射STZ(30 mg/kg bw)建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型,分别采用WHBP高(WHBPH组,100 mg/kg bw)、中(WHBPM组,50 mg/kg bw)和低(WHBPL组,25 mg/kg bw)三剂量,灌胃剂量为1.5 mL。4周后,测定体重,空腹血糖(Fasting blood-glucose,FBG)、血清胰岛素(Insulin,INS)、促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素(Adrenocorticotropic hormone,ACTH)和皮质酮(Corticosterone,CORT)含量及SGLT1 mRNA水平。结果显示,WHBP能够显著降低Ⅱ型糖尿病大鼠FBG水平和血清INS含量(P<0.05),抑制Ⅱ型糖尿病大鼠体重下降但无统计学意义(P>0.05);WHBP高剂量组能够显著降低Ⅱ型糖尿病大鼠血清CRH、ACTH和CORT含量(P<0.05),抑制HPA轴亢进。同时,WHBP所有剂量组都能显著抑制小肠组织中的高血糖介导的SGLT1 mRNA高表达水平(P<0.05)。因此,WHBP可通过抑制高血糖介导的HPA轴亢进和小肠组织SGLT1的高表达,减少葡萄糖吸收入血,改善Ⅱ型糖尿病大鼠胰岛素抵抗水平,发挥降血糖作用。

白扁豆多糖对神经细胞缺氧性凋亡的保护机制

目的:模拟体内环境,研究白扁豆多糖(dolichos bean seed polysaccharide,DBSP)对胎鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡的保护机制。方法:原代培养胎鼠大脑皮层神经细胞;建立缺氧/复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)损伤模型;实验分4组:对照组、A/R组、白扁豆多糖预处理组(DBSP+A/R组)、阻断剂组(LY29400^(2+)DBSP+A/R组);用比色法检测细胞活性与乳酸脱氢酶的释放水平;流式细胞仪分析测定Ca^(2+)相对浓度、活性氧、线粒体膜电位和细胞凋亡的变化;Western blot法检测总蛋白激酶B(total protein kinase B,T-Akt)和磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)蛋白表达。结果:从细胞活性来看,A/R组比对照组明显降低(P<0.01),表明A/R对神经细胞产生了损伤。同时,与A/R组相比,DBSP+A/R组细胞活性显著上升、细胞凋亡明显减少(P<0.01),乳酸脱氢酶的释放水平下降,表明DBSP对受A/R损伤的神经细胞产生保护作用,进一步结果显示,与A/R组相比,DBSP+A/R组中Ca^(2+)相对浓度和活性氧生成显著降低、显著增加线粒体膜电位和p-Akt蛋白表达(P<0.01)。而与DBSP+A/R组相比,LY29400^(2+)DBSP+A/R组中p-Akt蛋白表达显著减少(P<0.01),同时细胞活性与线粒体膜电位下降,且LDH的释放水平、Ca^(2+)相对浓度、活性氧、细胞凋亡明显增加(P<0.05),表明DBSP对神经细胞的保护作用受到PI3K-Akt信号通路抑制剂LY294002的抑制作用而被削弱。结论:DBSP可通过PI3K-Akt信号转导通路抑制神经细胞的缺氧性凋亡。

白扁豆多糖对人胃癌细胞凋亡的作用及其机制

目的:探讨白扁豆多糖对人胃癌细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:胃癌细胞HGC-27和SGC-7901经终浓度为16、8、4、2、1和0μg/ml的白扁豆多糖作用24、48和72h,各设3个复孔。MTS法检测其增殖活性;分别取经4、0μg/ml白扁豆多糖作用24h的HGC-27和SGC-7901细胞(各3个复孔),JC-1染色观察线粒体膜电位,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率,QPCR法探讨Bcl-2、caspase-3和Bax基因的mRNA转录水平。结果:白扁豆多糖作用后,HGC-27和SGC-7901细胞线粒体膜电位降低;细胞增殖显著受抑制(P<0.01),且效果与药物作用浓度和时间有关;细胞凋亡率分别为53.15%和38.77%,均较PBS处理组(8.07%和6.03%)明显增加(P<0.01),而细胞周期无显著变化;同时,细胞内Bcl-2基因的转录水平明显受抑制,Bax和caspase-3基因的转录明显上调(P<0.01)。结论:白扁豆多糖可通过调节Bax-Bcl-2-caspase3通路,诱导胃癌细胞HGC-27和SGC-7901凋亡。

白扁豆多糖对神经细胞缺氧性凋亡的保护

目的:探讨白扁豆多糖(WHBP,white hyacinth bean polysaccharide)抗神经细胞缺氧性凋亡的作用机制。方法:实验分正常对照组,凋亡诱导组,WHBP 0.5g/L组、3.5g/L组、8.0g/L组;采用Neurobasal加B27 Supplement体外培养SD胚大鼠大脑皮层神经细胞;应用MTT法、Trypan blue拒染法、DNA琼脂糖电泳法、免疫细胞化学染色等观察细胞活性和凋亡。结果:①MTT测定证明缺氧条件下WHBP 2.5g/L～3.5g/L刺激神经细胞的活性与正常对照组比较无差异(P>0.05),而与凋亡诱导组比较WHBP 0.5g/L～6.0g/L刺激神经细胞的活性均显著增高(P<0.000)。②DNA琼脂糖凝胶电泳发现WHBP 3.5g/L组与正常对照组相似未见有明显凋亡梯状条带。③免疫细胞化学发现缺氧条件下WHBP 3.5g/L刺激神经细胞的Bcl-2表达率(63.01±1.40%)高于凋亡诱导组(37.83±7.41%),且与正常对照组相近(68.07±3.17%);Bax和Caspase-3表达率(62.79±1.30%,45.75±3.44%)显著低于凋亡诱导组(72.09±3.98%,70.01±3.43%)(P<0.05～0.000),且与正常对照组相比情况不一(63.36±2.22%,33.60±4.14%)(P>0.05,P<0.01);但是Bcl-2/Bax比值(1.01±0.02)显著高于凋亡诱导组(0.52±0.08)(P<0.000),而与正常对照组相近(1.07±0.08)(P>0.05)。结论:WHBP通过减少Bax、Caspase-3的表达,相对提高Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax比例阻断缺氧诱导的神经细胞凋亡和保护神经细胞。

白扁豆多糖抗神经细胞缺氧性坏死与凋亡

目的:探讨白扁豆多糖(WHBP,white hyacinth bean polysaccharide)抗胚鼠大脑皮层神经细胞缺氧性坏死及凋亡的作用。方法:实验分正常对照组,凋亡阳性组,白扁豆多糖0.5g/L、3.5g/L、8.0g/L组;采用无血清体外培养SD胚大鼠大脑皮层神经细胞;应用MTT法、Trypan blue拒染法、Annexin V-FITC/PI流式细胞术等方法观察白扁豆多糖的合适使用剂量和缺氧性神经细胞坏死及凋亡保护作用。结果:①常氧条件下白扁豆多糖2.0g/L～6.0g/L促进神经细胞相对增殖率达28.85%～15.38%,与正常对照组比较P<0.01;而缺氧条件下白扁豆多糖2.5g/L～3.5g/L与正常对照组比较P>0.05,但与凋亡阳性组比较白扁豆多糖0.5g/L～6.0g/L相对增殖率均高(P<0.01)。②Annexin V-FITC/PI染色流式细胞测定表明,白扁豆多糖0.5g/L、3.5g/L、8.0g/L组的坏死率分别为9.45±5.28%、8.39±3.44%、9.85±2.90%,与凋亡阳性组(10.01±2.94%)及正常对照组(5.38±1.46%)比较P>0.05;而早期凋亡率分别为19.83±2.50%(P<0.05)、9.34±2.47%(P<0.01)、23.35±5.14%,与凋亡阳性组(28.72±2.74%)比较差异显著,而与正常对照组(4.54±0.34%)比较除3.5g/L组外,其余两组均P<0.01。结论:白扁豆多糖具有促进神经细胞生长,阻断缺氧引起的神经细胞生长抑制,以及显著地抗神经细胞缺氧性凋亡功效。

白扁豆非淀粉多糖对Ⅱ型糖尿病大鼠的降血糖降血脂作用

本研究探讨了白扁豆非淀粉多糖(NS-DLP)对Ⅱ型糖尿病大鼠降血糖降血脂作用。建立Ⅱ型糖尿病模型大鼠,采用NS-DLP灌胃干预。4周后,观察各组大鼠胰腺组织的病理学变化,测定大鼠空腹血糖、血脂、血清胰岛素、胰腺炎症因子和氧化应激指标。结果表明,与模型组相比,NS-DLP高剂量(100 mg/kg bw)组大鼠空腹血糖和血清甘油三酯水平分别显著降低了10.36%和29.93%;病理学观察发现NS-DLP高剂量组大鼠胰岛面积和细胞数量明显增加;且NS-DLP高剂量组大鼠血清胰岛素,胰腺丙二醛、白介素6和肿瘤坏死因子-α水平分别显著降低了26.36%、39.13%、41.18%和47.18%;超氧化物歧化酶和过氧化氢酶水平分别显著提高10.38%和148.03%。因此,NS-DLP可通过改善胰腺组织病变、减少胰岛素抵抗、降低胰腺炎症水平、抑制胰腺氧化应激水平,对Ⅱ型糖尿病大鼠发挥降血糖降血脂作用。