对虾白斑病毒VP28基因在聚球藻中的表达与分析

通过PCR从实验室保存的pMD-VP28质粒中扩增得到对虾白斑病毒囊膜蛋白VP28基因,同时在设计的引物起始密码子前添加促进外源基因在蓝藻中表达的SD序列,引物末端添加限制性内切酶位点BamHⅠ和EcoRⅠ,从质粒pRL-439获得强启动子PpsbA,酶切连接构建了pDC-VP28高效表达穿梭载体.利用三亲接合转移成功地将构建的载体pDC-VP28转化聚球藻7002.对转基因聚球藻进行培养,其表达产物通过SDS-PAGE分析,发现表达量达3%左右.

应用 PCR 检测太湖青虾白斑病毒和桃拉病毒

白斑综合征和桃拉综合征是严重危害虾类养殖业的两种传染性疾病，病原的快速检测是控制疾 病暴发，减少病害损失的有效方法之一。青虾是太湖地区的主要养殖虾类，本实验应用白斑病毒和桃拉病毒 复合式试剂盒，对太湖附近的青虾进行检测，结果未发现太湖青虾感染或携带这两种病毒。

虾桃拉病毒、黄头病毒和白斑病毒液相芯片快速检测方法的建立

本研究通过设计、合成并修饰基因特异性引物和寡核苷酸探针并标记生物素,利用该探针与荧光编码微球偶联后与虾黄头病毒(Yellow head virus,YHV)、虾桃拉综合征病毒(Taura syndrome virus,TSV)和白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Luminex200)检测荧光信号,初步建立了虾黄头病毒、桃拉病毒和白斑病毒的快速同步检测方法。结果显示,建立的该方法具有较好的特异性,偶联特异性探针的微球只与相应的病毒基因的PCR产物反应,而不与其他虾病病毒基因反应,YHV、TSV和WSSV检测灵敏度高分别为401.5、251.5和75.2 copies。

对虾白斑病毒1197基因的表达和产物纯化的研究

In previous report we have cloned a putative early and la te transcriptional gene 1197 of prawn baculovirus.In order to detect the biologi cal function of this gene,1197 gene was inserted into expressing vec tor pGEX-3X .The fusion protein expressed with high yield was obtained,but it was found that the fusion protein locates in inclusion bodies of E.coli and it caused trou ble in its purfication.We found that the expressed product with MW.of 66kD could be purified from inclusion bodies by using a serious of treatments of inclusion bodies with urea and guanidine hydrochloride and then by sequential FPLC chroma tography.

对虾白斑病毒PCR反应体系的改进

采用 TN匀浆 ,蛋白酶 K、DS消化、裂解 ,煮沸的方法 ,从感染白斑病毒的养殖对虾中提取 DNA作模板 ,在模板和扩增缓冲液用量恒定下 ,改变 PCR反应体系的 d NTP、引物和 Taq酶用量 ,进行 PCR扩增 ,使用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测。结果表明 ,d NTP用量在 1 2 5～ 1 87μM· L- 1、引物用量在 0 .6 μM·L- 1 、Taq酶用量达到 0 .5 u及以上时 ,扩增条带荧光很强 ,而使用产品提供商建议用量 ,PCR可现特异性扩增 。

南美白对虾桃拉病毒和白斑病毒多重PCR检测体系的建立

养殖对虾可混合感染多种病毒,桃拉病毒(Taura syndrome virus,TSV)和白斑病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是南美白对虾感染的主要病原体,建立TSV和WSSV的多重聚合酶链式反应(PCR)技术可有效防制疫病的爆发。根据GenBank公布的TSV和WSSV全基因组序列,分别设计TSV和WSSV的特异性引物,并在四种不同的PCR系统中扩增筛选,在同一电泳道内得到与预期结果相符的、可明显区分的2条特异条带,PCR扩增产物测序显示分别与TSV和WSSV基因序列吻合,本体系的建立为生产鉴别和诊断混合感染病毒奠定基础。

对虾白斑病毒感染的电子显微镜观察及DNA杂交证据

中国大陆养殖的中国对虾从 1 993年开始至今连年爆发病毒性流行病 ,俗称“白斑病”(WSBV) ,死亡率近 1 0 0 % ,造成巨大经济损失。为进一步明确虾病暴发原因 ,利用电子显微镜技术 ,对 1 993年至 1 998年收集的发病中国对虾组织进行观察 ,发现病原体为直径 ( 1 2 5±7 6)nm、长约 ( 345± 1 6)nm大小的带包膜的非包涵体型杆状病毒。经氯化铯密度梯度超速离心技术获得了纯化的病毒核衣壳 ,大小为 ( 80± 1 3)nm× ( 380± 2 4 )nm。形态学特征与台湾地区发现的白斑杆状病毒 (WSBV)相似。利用地高辛标记的WSBVDNA探针对病虾标本及纯化病毒DNA进行斑点杂交检测 ,均呈阳性反应 ,而与正常对虾组织无杂交反应。从形态学及分子生物学角度证明WSBV感染是造成中国大陆养殖对虾连年暴发流行病的重要原因。

以WWSV ORF234片段诊断罗氏沼虾白斑病毒病及片段分析

根据GenBank中登录的对虾白斑综合症病毒(WSSV)全基因组序列中和ORF234相应的序列来设计1对引物,从疑似病例的罗氏沼虾中提取总DNA,并以此为模板,经PCR扩增出约885bp的特异性片段,克隆进质粒载体pET-28a(+),进行序列测定和分析。结果显示:扩增序列共编码294个氨基酸,预测的相对分子质量为34kDa,与GenBank中登录序列的对应区域同源性达99%,由此确认该罗氏沼虾患有白斑综合病毒病。该序列所编码的蛋白在22～96氨基酸位置有一段球状结构,在142～272氨基酸位置有一个与DUF1335蛋白同源的将近130个氨基酸残基的保守区,其功能未知。同时还对克隆出的片段进行序列分析和蛋白预测,以进一步深入开展蛋白的功能及对该病毒病的防治的研究。

南美白对虾白斑病毒病的成因与防治

简要总结南美白对虾白斑病毒病的症状;对该病的成因进行分析,主要在于三个方面:一是虾体自身携带病毒、二是水环境污染、三是长期水质不化验;并提出具体的防治方法。

南美白对虾白斑病毒病救治实例

我地区南美白对虾白斑病毒病发病时间多在8月初,恰是高温阴雨季节;发病的虾多是放养早、规格大（8厘米）的虾,而放养晚、规格小（6厘米）的虾同时期发病较少。现就在2014年对淡水养殖南美白对虾白斑病毒病的救治实例介绍如下。

对虾白斑病毒核糖核苷酸还原酶基因原核表达载体的构建及蛋白表达、纯化

采用PCR方法扩增对虾白斑病毒核糖核苷酸还原酶基因,插入到pGEX-4T-2表达载体上构建出带有目的基因的重组质粒pGEX-4T-2RR,然后将重组质粒转化大肠杆菌.转化菌经IPTG诱导后大量表达重组蛋白,通过降低诱导温度获得可溶性表达的重组蛋白,采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析对重组蛋白进行纯化,获得了高纯度的目的蛋白.

墨西哥：对虾因白斑病毒减产50％

墨西哥水产养殖行业要求索诺拉州的农业部门公布2011年该地区对虾养殖的受灾情况。2011年，索诺拉州等地区的对虾养殖受白斑病毒的影响损失惨重。墨西哥的水产养殖行业试图借此获得政府对对虾类养殖业的优惠政策，

鲤鱼生长激素和对虾白斑病毒囊膜蛋白VP28的融合表达及功能研究

鲤鱼生长激素GH是鲤鱼生长腺体分泌并促进鲤鱼生长的一种分泌蛋白。对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28蛋白为囊膜蛋白,是病毒感染宿主的必需因子。根据gh和vp28的上下游序列,分别设计合成两对引物,PCR扩增gh和vp28基因,将基因gh和vp28按先后次序融合后插入穿梭质粒pPIC6αC多克隆位点,构建成重组分泌表达穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28),用Bstx1单酶切穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28)线形化,转化毕赤酵母X-33。重组菌株30℃甲醇诱导,实现在酵母中的融合分泌表达,获得融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE检测和Western Blot印迹鉴定,显示与预期大小66kD相吻合的融合蛋白带。用Ni2+-柱纯化后的基因工程蛋白注射鳌虾进行蛋白生物功能测试,结果表明该蛋白获得了促鳌虾生长和抗WSSV感染的双重功效。

澳大利亚养殖对虾发现白斑病毒

据FiS2016年12月5日报道：在经过检测确认后，确定位于布里斯班南部的对虾养殖场内发现白斑综合征（WSD）。农业部部长BillByrne要求昆士兰生物部门对对虾养殖场进行检测，并将标本送至吉朗的澳大利亚动物健康实验室分析，结果表明并证实该养殖场因缺乏有效管理，致使对虾感染白斑病毒。

印度一大学研制出新型检测虾白斑病毒装置

近日，印度渔业大学养殖系在Shankar博士带队下研制出一种能简单快捷地检测出虾白斑病毒的装置。这种新型产品能在10分钟内帮助虾农检测出虾田里是否有虾白斑病毒，比以往同类产品大大节省时间和成本。这一产品的研制成功使印度虾农不必再花费400卢比购买进口的同类产品，而只须支付50—60卢比就能在10分钟内检测出虾田里的虾白斑病毒。

乳糖诱导对虾白斑病毒囊膜蛋白VP28基因在重组大肠杆菌中的表达

以含对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)囊膜蛋白VP28编码基因质粒的重组大肠杆菌Escherichia coliBL21作为研究对象,研究了乳糖或乳清粉代替IPTG作为诱导剂诱导重组囊膜蛋白VP28的表达。结果表明,乳糖不仅能够作为诱导剂诱导重组大肠杆菌进行外源蛋白的表达,而且能作为碳源促进菌体的生长。通过对诱导条件的优化,乳糖在发酵培养基的添加量为8g.L-1,发酵时间为12h时可以获得最高的目的蛋白表达量,为97.36mg.L-1。试验亦使用乳清粉作为发酵培养基的碳源和诱导工程菌表达的诱导剂。结果表明,在发酵培养基中添加乳清粉作为碳源和诱导剂,使其乳糖终浓度为10g.L-1,发酵时间为13h时可以获得最高的目的蛋白表达量,为86.24mg.L-1。