23-羟基白桦酸通过抑制髓源性抑制细胞对小鼠结肠癌生长的影响

目的探讨23-羟基白桦酸(23-HBA)通过干预髓源性抑制细胞(MDSCs)抑制小鼠结肠癌生长的作用机制。方法体内实验,建立小鼠结肠癌CT-26皮下移植瘤模型,阳性对照组5-FU腹腔注射3 d(2次),实验组23-HBA尾静脉每日注射,连续给药18 d。末次给药后处死小鼠,检测小鼠体质量、移植瘤质量及体积、脏器指数、血常规的变化,流式细胞术检测肿瘤组织MDSCs、CD8^(+)T细胞比例,RT-qPCR法检测肿瘤组织MDSCs细胞免疫抑制功能相关细胞因子精氨酸酶1(Arg1)、一氧化氮合酶(iNOS),以及CD8^(+)T细胞杀伤功能相关细胞因子颗粒酶B(GZMB)、穿孔素1(PRF1)、干扰素-γ(IFN-γ)mRNA的表达。体外实验,CCK8法检测骨髓(BM)细胞、MDSCs细胞存活率,确定23-HBA的安全作用浓度;采用40 ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和40 ng/mL白细胞介素-6(IL-6)诱导BM向MDSCs分化,同时加入不同浓度23-HBA(0、10.5、21、42μmoL/L)干预4 d,流式细胞术检测MDSCs细胞比例变化;BM体外诱导生成MDSCs后,将其分为对照组和23-HBA低、中、高剂量组(10.5、21、42μmoL/L),干预24 h,RT-qPCR法检测MDSCs细胞Arg1、iNOS mRNA表达;Western blot法检测MDSC细胞Arg1、iNOS蛋白表达。结果体内实验显示,与模型组比较,23-HBA干预后,小鼠移植瘤体积及质量均降低(P<0.05,P<0.01);肿瘤组织MDSCs细胞比例降低(P<0.05),CD8^(+)T细胞比例升高(P<0.05,P<0.01),Arg1 mRNA表达降低(P<0.05),GZMB、IFN-γmRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。体外实验显示,23-HBA剂量在10.5、21、42μmoL/L时,对BM、MDSCs细胞存活率没有显著影响(P>0.05);23-HBA高剂量可抑制BM向MDSCs分化(P<0.01);23-HBA呈剂量依赖性减少MDSCs细胞Arg1、iNOS mRNA表达(P<0.05,P<0.01),下调Arg1、iNOS蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论23-HBA可通过干预MDSCs分化下调肿瘤内MDSCs细胞比例,减弱MDSCs细胞的免疫抑制功能,从而恢复CD8^(+)T细胞抗肿瘤活性,发挥抗结肠癌作用。

固定化白桦酸亲和整体柱的制备方法及其应用

探究固定化天然产物白桦酸衍生物制备整体色谱柱的方法及应用。以天然活性小分子白桦酸衍生物3,23-O-二乙酰基-28-白桦酸胺乙基酰胺(EDA-BA)为配体,甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,正丙醇和1,4-丁二醇为生孔剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,通过原位聚合反应一锅法制备而成固定化白桦酸的整体柱poly(GMA-EDA-BA-co-EDMA);通过元素分析、扫描电镜、微径液相等手段对整体柱进行表征。液相色谱的条件下用于蛋白质的分离分析研究,发现除了α-葡萄糖苷酶,其他四种蛋白质和酶(包括胰蛋白酶、牛血清白蛋白、人血清白蛋白以及细胞色素C)在该柱上无特异性吸附,提示了该整体柱具有一定的选择性。研究表明,“一锅法”可应用于固定化天然产物单体化合物分子的整体柱的制备。

白桦酸类化合物的研究进展

白桦酸类化合物是一类可以从多种植物中分离得到的天然产物,包括白桦酸、23-羟基白桦酸、白桦素及其衍生物等,是一类结构及作用机制相对新颖、具有抗HIV-1和抗肿瘤活性的天然化合物。对这类化合物的结构修饰和改造,目前已经获得大量具有良好生物活性的衍生物。现对这方面的研究进展进行综述。

HPLC法测定23-羟基白桦酸注射液中23-羟基白桦酸的含量

目的 建立 2 3-羟基白桦酸注射液中 2 3-羟基白桦酸的 HPL C分析方法。方法 采用 HPL C法。色谱柱 :YWG C1 8(2 5 0 mm× 4 .6 mm,10 μm) ;流动相 :乙腈 -水 -冰醋酸 (6 0 0∶ 4 0 0∶ 1) ;体积流量 :1.0 m L/ min;检测波长 :2 0 5 nm;柱温 :2 5℃ ;检测灵敏度 :0 .0 0 5 AU FS。采用外标法测定 2 3-羟基白桦酸的量。结果 2 3-羟基白桦酸在 10～10 0 μg与峰面积具有良好线性关系 ,平均回收率为 99.5 4 % ,RSD为 1.98% (n=5 )。结论 该方法快速、简便、准确可靠 ,可用于 2 3-羟基白桦酸的定量。

白桦酸及其衍生物的生物效应和制取方法

白桦酸及其衍生物在抗HIV、抗肿瘤、抗炎等方面表现出多种生物活性以及与以往药物不同的作用机制, 已成为当今一个研究热点。查阅了国、内外近几年来有关白桦酸及其衍生物的近20篇文献,阐述了白桦酸及其衍生物的生物活性、白桦酸的制取及其结构修饰方法,并对其研究前景进行了展望。

23-羟基白桦酸诱导LoVo细胞凋亡与线粒体膜电位的变化

目的探讨23-羟基白桦酸对人结肠癌细胞株LoVo细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测23-羟基白桦酸对LoVo细胞的增殖抑制作用。Hoechst染色、流式细胞仪检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化。结果23-羟基白桦酸能抑制LoVo细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性。Hoechst33258染色显示细胞凋亡特征。23-羟基白桦酸25、50、100及200μmol·L-1作用LoVo细胞48h后,其凋亡率分别为11.32%±0.92%、19.23%±0.78%、24.51%±5.88%及42.22%±2.32%,显示一定的剂量依赖性关系。与空白组相比,23-羟基白桦酸可明显降低LoVo细胞线粒体膜电位(P<0.01)。结论23-羟基白桦酸可抑制LoVo细胞的增殖,其机制与降低线粒体膜电位继而诱导LoVo细胞凋亡有关。

23-羟基白桦酸诱导LoVo细胞凋亡与细胞内活性氧的关系

目的:研究23-羟基白桦酸诱导人结肠癌细胞株LoVo细胞凋亡过程中活性氧(ROS)的变化及其作用机制。方法:光学显微镜法观察23-羟基白桦酸作用LoVo细胞后细胞形态学改变,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内ROS水平。结果:分别以浓度为25、50、100、200μmol/L 23-羟基白桦酸作用LoVo细胞48h后,在光学显微镜下观察到明显的凋亡细胞形态学改变;经流式细胞仪检测,细胞凋亡率分别为(7.17±2.31)%、(15.60±4.02)%、(32.47±5.25)%及(52.71±5.93)%,呈现一定的浓度依赖性关系。23-羟基白桦酸可使LoVo细胞内ROS的水平明显高于空白对照组。细胞内ROS含量(MFI,平均荧光强度)分别为2.83±0.80、5.97±1.72、12.53±2.57及16.73±4.58。其中,浓度为100和200μmol/L 23-羟基白桦酸的作用较明显,与对照组(2.13±0.32)比有显著差异(P<0.05)。结论:23-羟基白桦酸具有明显的诱导LoVo细胞凋亡作用,其作用机制可能与23-羟基白桦酸引起细胞内ROS水平增加有关。

23-羟基白桦酸在Caco-2细胞模型中的吸收特性研究

目的研究23-羟基白桦酸在Caco-2细胞模型中的吸收特性,为设计合理的给药方式提供依据。方法利用MTT实验筛选出23-羟基白桦酸在Caco-2细胞中的安全浓度,然后用Caco-2细胞单层模型研究23-羟基白桦酸的双向转运,采用同位素示踪法检测药物浓度,计算其表观渗透系数,考察时间、药物浓度对23-羟基白桦酸吸收的影响。结果23-羟基白桦酸在Ca- co-2细胞模型中的转运中对应时间点表观渗透系数值(P_(app))A→B约等于(P_(app))B→A,随时间增加P_(app)逐渐下降,而在所测浓度范围内P_(app)值基本保持恒定。结论23-羟基白桦酸在Caco-2细胞模型中的吸收机制主要是被动转运。

23-羟基白桦酸对阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用及抗氧化机制研究

目的:基于细胞水平研究23-羟基白桦酸(23-HBA)对阿霉素(DOX)心肌损伤的保护作用并探讨其抗氧化机制。方法:采用H9c2心肌细胞,考察对照组、DOX组、23-HBA组及23-HBA联合DOX组给药后心肌细胞形态学变化,测定细胞体积及蛋白含量,Real time-PCR测定心钠素(ANP)、脑钠素(BNP)的mRNA水平。考察心肌细胞内Caspase-3活性及Hoechst荧光染色后细胞核形态从而评价细胞凋亡水平。利用DCFH荧光探针测定细胞ROS水平,同时检测细胞内脂质过氧化物(MDA)生成量,评价细胞氧化损伤水平,寻找23-HBA心肌保护的可能机制。结果:5μmol/L DOX诱导心肌细胞肥大,表现为细胞体积增大,蛋白含量增多,并显著上调细胞内ANP与BNP的mRNA水平,提高细胞内Caspase-3活性,导致细胞凋亡。23-HBA与DOX联合用药后,浓度依赖地降低DOX给药后心肌细胞内ROS水平,清除脂质过氧化物MDA,逆转DOX诱导的心肌肥大、心肌损伤标志物上调、心肌细胞凋亡等过程。结论:23-HBA可通过其抗氧化作用降低DOX所致的心肌损伤。

氚标记23-羟基白桦酸的制备及其在动物体内的评价

制备氚标23-羟基白桦酸(3H-23-HBA),并对其在正常鼠及荷瘤鼠的体内分布进行初步探索。23-HBA经23位氧化、硼氚化钠还原后制得3H-23-HBA,考察了标记物的纯度和稳定性,并在ICR小鼠、接种肝癌HepA肿瘤的小鼠体内研究其生物分布特征。结果显示:(1)所得标记物放射化学纯度>95%,放射性比活度为3.33×105Bq/μg(23-HBA);(2)标记化合物的四氢呋喃溶液在–20℃稳定;(3)小鼠尾静脉注射3H-23-HBA(10mg/kg,3.7×105Bq/只)后,在血中清除慢,血浆中原形药约占60%;(4)小鼠尾静脉注射3H-23-HBA(10mg/kg,3.7×105Bq/只)后,在胆、肝、肠浓聚,消除慢;肿瘤鼠肺、胆中摄取高于正常鼠,尤其是胆,至注射后8h仍高达106.89%±47.4%ID/g。实体瘤与对侧肌肉组织的摄取比约为2。3H-23-HBA纯度高,稳定性好,适用于23-HBA药代动力学研究。

白桦酸体外对人肝癌细胞、鼻咽癌细胞增殖及组织血管生成的影响

目的观察白桦酸(BA)对肿瘤细胞增殖及组织血管生成的影响。方法培养人肝癌细胞株Bel-7402、人鼻咽癌细胞株CNE、人血管内皮细胞株HMEC,分别以不同浓度的BA干预,比较Bel-7402细胞和CNE细胞增殖抑制率、凋亡率,并比较HMEC细胞增殖抑制率、迁移能力、血管形成能力。结果 BA可抑制Bel-7402细胞、CNE细胞增殖,促进其凋亡,且呈剂量依赖性(P均<0.05);BA可抑制HMEC细胞增殖,减弱迁移能力及血管形成能力,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。结论 BA可抑制人肝癌细胞、鼻咽癌细胞增殖及肿瘤组织血管生成。

23-羟基白桦酸对血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨23-羟基白桦酸(23-HBA)对血管内皮细胞(ECV-304)形态变化,增殖和迁移的影响。方法:SRB方法测定23-HBA对ECV-304细胞的增殖抑制率,体外琼脂法检测内皮细胞的迁移能力,并用光镜观察内皮细胞形态变化。结果:23-HBA对ECV-304细胞的IC50为39.74μg/ml。当23-HBA浓度提高到20μg/ml以上,ECV-304细胞的凋亡现象非常明显。23-HBA浓度在1μg/ml时即能抑制细胞的迁移。结论:23-HBA对ECV-304增殖和迁移均有显著抑制作用。

白桦酸及其衍生物的研究进展

对白桦酸衍生物的构效关系及其中的YK FH312、RPR10 36 11和IC95 6 4等的作用机制及活性进行述评。天然产物白桦酸是有抗HIV和抗肿瘤活性 ,且具有新型结构和新型作用机制的化合物 ,其天然来源广泛 ,半合成方法成熟 ,是寻找抗HIV和抗肿瘤药物的优秀的先导物。通过对白桦酸的结构修饰 ,大量白桦酸衍生物已被合成。

23-羟基白桦酸的碘标记及其在荷肝癌HepA肿瘤鼠体内的分布

采用双氧水法对23-羟基白桦酸进行131I标记;以硅胶纸为支持介质,V二氯甲烷:V甲醇=9:1为展开剂,测定标记率及标记物放化纯;ICR小鼠和荷肝癌HepA肿瘤鼠尾静脉注射131I-23-羟基白桦酸(0.74MBq/只)后考察标记物的药代动力学性质及荷瘤鼠体内分布。结果显示,131I-23-羟基白桦酸标记率达98%,其放化纯在1、4、8d分别为98.5%、97.3%、95.8%。131I-23-羟基白桦酸在正常小鼠体内血液清除较快,其药代动力学模型符合二室模型。注射后0.5h荷肝癌HepA肿瘤鼠肝摄取最高(9.14%ID·g-1组织),其次为肾、血、脾、肠、肺、肿瘤,脑中分布最少,仅为0.28%ID·g-1组织;肿瘤/肌肉比值>3。表明碘标23-羟基白桦酸标记率高,标记物稳定;碘标记物在荷肝癌HepA肿瘤鼠中的肿瘤靶向摄取提高2倍,可能是一新型增效的核素靶向治疗药物。

中药白头翁中23-羟基白桦酸对照品的制备及鉴定

目的:研究中药白头翁中对照品23-羟基白桦酸的制备方法。方法:以酸水解的方法从白头翁药材中提取总三萜,以硅胶柱层析和重结晶的方法从总三萜中分离、制备对照品,采用波谱方法对其进行结构鉴定。结果:从白头翁总三萜中分离出23-羟基白桦酸对照品。结论:该对照品可作为控制白头翁总三萜制剂质量的指标成分。

RP-HPLC法测定白头翁中23-羟基白桦酸的含量

目的:建立中药白头翁药材中23-羟基白桦酸的 RP-HPLC 含量测定方法。考察了5个地区的商品药材中23-羟基白桦酸的含量。方法:高效液相色谱法,色谱柱为 Agilent Zorbax SB-C_(18)(250 mm×4.60 mm,5μm),流动相:乙腈-0.2%醋酸水溶液(62∶38),流速为0.8 mL·min^(-1),分析时间20 min;检测波长204 nm,进样体积为20μL。结果:23-羟基白桦酸进样量与峰面积呈良好线性关系,线性范围为0.20～4.0μg,r=0.9999(n=5);回收率为97.4%～104.7%(n=9)。结论:本方法首次测定了5个地区白头翁药材中23-羟基白桦酸的含量,该方法快速、简便,重复性好。

23-羟基白桦酸体内抗肿瘤作用实验研究

目的 :研究白头翁皂甙元 ( 2 3 -羟基白桦酸 )对小鼠HepA瘤株的抑制作用。方法 :称取定量的 2 3 -羟基白桦酸 ,用食用植物油配制成所需浓度的溶液。将已接种HepA瘤株的小鼠模型 2 4小时后随机分组 ,各组均连续给药 10天 ,停药后 1天将小鼠脱颈椎处死 ,剥取瘤称重 ,结果 :该甙元有明显抑制HepA实体瘤的作用 ,高、中、低剂量组抑瘤率均在 3 0 %以上 ,说明该单体在抑制肿瘤上有研究前景。结论 ;2 3

液相色谱-质谱联用测定鼠血浆中的23-羟基白桦酸

目的 建立测定小鼠血浆中230羟基白桦酸的液相色谱0质谱联用法（LC-MS）。方法 取血浆，加入内标物枸橼苦素．经二氯甲烷-水（6：1）提取后，40℃水浴中氮气吹干，残渣用甲醇溶解，进行LC-MS测定。色谱柱为Intersil C18（2.1mm×250mm．3．5μm）；体积分数为70％乙腈为流动相（其中三乙胺为体积分数0．05％）；流速0．2mL·min^-1；柱温30℃；电喷雾离子源（ESI），负离子检测（23-HBA，m／z 471；柠檬苦素，m／z 469）。结果 23-羟基白桦酸的线性范围为10～1000μg·L^-1。（r=0．9998），最低定量限为10μg·L^-1，方法平均回收率〉88％，日内、日间精密度（RSD）均小于8％。小鼠血浆样品-20℃放置至少3周内稳定。结论 本方法专属性强，灵敏度高，线性范围宽，操作简便，适用于药动学研究．

23-羟基白桦酸抑制血管内皮细胞增殖和诱导凋亡的实验

目的研究23-羟基白桦酸(23-hydroxy betulinic acid,23-HBA)对人血管内皮细胞(human microcapillary endothelial cells,HMEC)增殖及凋亡的影响。方法采用SRB法测定23-HBA对HMEC增殖的抑制率,并用流式细胞术测定23-HBA对HMEC周期及凋亡的影响。结果23-HBA可明显抑制HMEC的体外增殖,IC50为40.44μg/ml。流式细胞术测定,HMEC出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高,与对照组相比,差别有统计学意义。HMEC的S期细胞含量明显上升,而G2/M期细胞含量下降。结论23-HBA具有明显抑制血管内皮细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用。