白毛藤多糖的分离、纯化和鉴定

目的分离、纯化和鉴定白毛藤S olanum ly ra tum中的多糖的成分。方法经脱脂、沸水抽提、乙醇沉淀、酶-Sevag法脱蛋白得到的粗多糖,再经DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换和Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱色谱分离得到纯化的白毛藤多糖(SLPS),用红外光谱和紫外光谱分析鉴定该多糖,凝胶渗透色谱(GPC)法测定其相对分子质量,运用薄板色谱(TLC)和纸色谱(PC)法初步测其结构组成。结果红外光谱分析具有典型的多糖特征吸收峰,紫外光谱分析未见蛋白质(280 nm)与核酸(260 nm)的特征吸收峰。结论本实验所提取的白毛藤多糖为单一组分的多糖。

白毛藤多糖的分离和生物免疫活性研究

干燥白毛藤全草经粉碎、乙醇脱脂后,残渣用热水提取得到2种多糖SL-1、SL-2,凝胶渗透色谱(GPC)法测定其分子量.生物免疫活性实验证明:白毛藤多糖SL-1、SL-2均在体外具有明显提高正常小鼠胸腺淋巴细胞免疫活性的作用,其中SL-2的作用要强于SL-1.另外,SL-1对正常小鼠胸腺淋巴细胞的作用在40～80μg/mL达到峰值,而SL-2在80～120μg/mL达到峰值,且均与用药时间成正比.

白毛藤多糖诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

白毛藤多糖以不同浓度作用于胰腺癌细胞,采用Hoechst33258染色测定凋亡情况,RT-PCR检测caspase-3蛋白的表达。结果表明,白毛藤多糖的抗肿瘤作用可能与细胞凋亡有关。

白毛藤多糖抑制人卵巢癌细胞增殖作用及其机制研究

目的:探讨白毛藤中多糖成分对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。方法:将不同浓度白毛藤多糖作用SKOV3细胞后,通过MTT法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测bcl-2、caspase-3基因mRNA表达量的变化,荧光显微镜检测细胞凋亡情况。结果:白毛藤多糖明显抑制SKOV3细胞增殖,诱导细胞凋亡,并抑制bcl-2表达,上调caspase-3表达。结论:白毛藤多糖能通过激活caspase-3、抑制bcl-2表达从而抑制SKOV3细胞增殖,促进凋亡达到抗癌的目的。

白毛藤多糖通过调控miR-431表达对结直肠癌SW620细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨白毛藤多糖对结直肠癌SW620细胞增殖、凋亡的影响及其对miR-431的调控作用。方法采用不同浓度(0.4,0.8,1.6 g/L)的白毛藤多糖处理SW620细胞,分别设为白毛藤多糖低剂量组、白毛藤多糖中剂量组、白毛藤多糖高剂量组;为探究miR-431在结直肠癌发生及发展过程中的作用机制,将miR-NC和miR-431 mimics分别转染入SW620细胞,命名为miR-NC组和miR-431组;为探讨miR-431是否可作为白毛藤多糖治疗结直肠癌的潜在靶点,将anti-miR-NC和anti-miR-431分别转染入SW620细胞后加入白毛藤多糖处理细胞,命名为白毛藤多糖+anti-miR-NC组和白毛藤多糖+anti-miR-431组。采用MTT实验检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测miR-431的表达量。结果与对照组比较,白毛藤多糖低剂量组、白毛藤多糖中剂量组、白毛藤多糖高剂量组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白水平升高(P<0.05),miR-431的表达水平和增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白水平降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。与miR-NC组比较,miR-431组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05),Ki-67、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。与白毛藤多糖+anti-miR-NC组比较,白毛藤多糖+anti-miR-431组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平降低(P<0.05),Ki-67、Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05)。结论白毛藤多糖可通过上调miR-431的表达而抑制结直肠癌细胞增殖及促进细胞凋亡。

白毛藤多糖通过抑制JNK信号通路活性促进人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡及机制的初步探讨

目的探索白毛藤多糖对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的影响及其调控机制.方法在体外用不同浓度(0、0.4、0.8、1.6 mg/ml)的白毛藤多糖处理人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,白毛藤多糖对TPC-1细胞增殖活性的影响采用MTT法检测,对TPC-1细胞凋亡的影响采用Hoechest 33258染色法检测,同时通过Western印迹检测白毛藤多糖对TPC-1细胞JNK蛋白表达及JNK磷酸化的影响.结果MTT结果显示,与空白组相比,不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞增殖抑制率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);且白毛藤多糖浓度越高、处理时间越长,对TPC-1细胞增殖活性的抑制作用越明显(P<0.05).Hoechest 33258染色结果显示,与空白组相比,不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞凋亡率显著升高,且呈浓度依赖(P<0.05);同时,Western印迹结果表明,与空白组相比,不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞中Bcl-2/Bax比率凋亡率显著降低,且呈浓度依赖(P<0.05).经不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞中,JNK及p-JNK蛋白表达均显著降低,且随着白毛藤多糖浓度的增加,其对JNK及p-JNK蛋白表达的抑制逐渐增强(P<0.05);此外,白毛藤多糖对p-JNK的抑制更为显著,随着白毛藤多糖浓度的增加,p-JNK/JNK比值逐渐下降(P<0.05).结论白毛藤多糖对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖具有抑制作用,其机制可能与凋亡通路中活化Bax蛋白、抑制Bcl-2蛋白及抑制JNK磷酸化有关.

白毛藤多糖对宫颈癌细胞系体外增殖的影响及机制研究

探讨白毛藤多糖对宫颈癌细胞系SiHa细胞体外增殖的影响及机制。将不同浓度白毛藤多糖作用SiHa细胞后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,用流式细胞仪分析细胞周期各时相的变化。白毛藤多糖能抑制宫颈癌细胞的体外增殖,其机制可能与细胞周期阻滞有关。

Livin在人喉癌细胞中的表达及白毛藤多糖的干预作用

研究白毛藤多糖对人喉癌细胞生长的抑制作用以及Livin表达的影响。将白毛藤多糖以不同浓度加入到人喉癌细胞,用MTT比色法检测细胞增殖抑制率;荧光定量PCR检测Livin mRNA的表达。结果表明,白毛藤多糖可诱导Livin基因的表达,Livin可能参与白毛藤多糖抑制人喉癌细胞的增殖。

白毛藤多糖联合阿霉素对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨白毛藤多糖(Solamum lyratum Thunb polysaccharide,SLTP)联合阿霉素(Adrismycim,ADM)对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:实验分为空白对照组、ADM组、ADM+低剂量SLTP组,ADM+中剂量SLTP组,ADM+高剂量SLTP组。通过RT-PCR检测各组Bcl-2、Fas基因表达量的变化,同时应用荧光显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡情况。结果:与空白对照组比较,ADM组及ADM+高中低剂量SLTP组细胞凋亡率增加,并且上调Fas和降低Bcl-2表达。结论:阿霉素及阿霉素联合白毛藤多糖促进其MCF-7细胞凋亡,其机制可能与激活Fas、抑制Bcl-2的基因表达有关。

白毛藤多糖抑制人乳腺癌细胞增殖作用的研究

目的:探讨白毛藤多糖对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用。方法:将不同浓度白毛藤多糖作用MCF-7细胞后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜检测细胞凋亡情况,RT-PCR法检测bcl-2、caspase-3基因表达量的变化。结果:不同浓度白毛藤多糖对MCF-7细胞的增殖有明显抑制作用,并可诱导MCF-7细胞凋亡,抑制MCF-7细胞bcl-2表达,上调caspase-3表达。结论:白毛藤多糖抑制MCF-7细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与激活caspase-3、抑制bcl-2表达有关。

从组织学角度研究白毛藤多糖对鸡免疫器官的影响

本试验为了从组织学角度研究白毛藤多糖对鸡免疫器官的影响,在试验过程中取1日龄健康非免疫三黄雏鸡300只随机分为5组,每组60只,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组肌注白毛藤多糖0.25mL/只、0.5mL/只、1mL/只,1d/次,连注7d.以上三组和Ⅳ组在7日龄时分别用鸡新城疫(ND)弱毒苗对鸡进行滴鼻、点眼免疫;Ⅴ组肌注注射生理盐水0.5mL/只,1d/次,连注7d。各组分别在18d、25d、32d、39d、46d时随机取样测定各组鸡免疫器官系数;并在各组随机取10只鸡的免疫器官(脾脏、胸腺、法氏囊)制成组织切片,在显微镜下观察。结果表明,Ⅰ组、Ⅱ组免疫器官系数增殖最为明显,同时其脾脏淋巴细胞数量、胸腺小叶面积、法氏囊皱襞也显著高于其他各组,并以Ⅱ组的差异最显著。从试验结果可知:白毛藤多糖对鸡免疫器官发育有明显的促进作用,但不随注射剂量的增加而增强。

白毛藤多糖抑制人食管癌细胞增殖作用的研究

目的:探讨白毛藤多糖对人食管癌细胞的生长抑制作用。方法:将不同浓度白毛藤多糖作用Ec-9706细胞后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜检测细胞凋亡情况,RT-PCR法检测bcl-2、caspase-3基因表达量的变化。结果:不同浓度白毛藤多糖对Ec-9706细胞的增殖有明显抑制作用,并可诱导Ec-9706细胞凋亡,抑制Ec-9706细胞bcl-2表达,上调caspase-3表达。结论:白毛藤多糖抑制Ec-9706细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与激活caspase-3、抑制bcl-2表达有关。

白毛藤多糖对人卵巢癌A2780/DDP细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨白毛藤多糖(Solamum lyratum Thunb polysaccharide,SLTP)对人卵巢癌A2780/DDP细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究。方法采用MTT法检测白毛藤多糖对各组A2780/DDP细胞生长的影响。同时应用荧光显微镜观察白毛藤多糖对A2780/DDP细胞凋亡的影响。并用RT-PCR法检测PTEN,Survivin基因mRNA的表达。结果与空白对照组比较,顺铂组、顺铂+低剂量SLTP组和顺铂+高剂量SLTP组A2780/DDP细胞凋亡率增加,并且PTEN上调,Survivin表达降低。结论顺铂及顺铂联合白毛藤多糖促进bel7402细胞凋亡,其机制可能与上调PTEN、下调Survivin的基因表达有关。

白毛藤多糖对正常小鼠部分细胞因子mRNA表达的调节

目的:探讨白毛藤多糖对小鼠脾脏细胞因子IL-2、IL-12、TNF-α mRNA表达水平的影响。方法:将BALB/c小鼠随机分成4组:白毛藤多糖高(H组)、中(M组)、低(L组)3个剂量组和生理盐水对照组(C组),连续ip 7 d后,用RT-PCR的方法检测脾脏IL-2、IL-12、TNF-α mRNA表达水平。结果:白毛藤多糖M组、H组可明显促进小鼠脾细胞中细胞因子IL-2、IL-12的mRNA表达,IL-2与C组相比具有显著性差异(P<0.05),且IL-12呈极显著差异(P<0.01)。白毛藤多糖L组、M组2个剂量组能增加TNF-α的mRNA表达,与C组相比差异极显著(P<0.01)。结论:白毛藤多糖能有效提高IL-2、IL-12、TNF-α mRNA三种细胞因子的表达。

白毛藤多糖通过调控miR-1270/CCNG2通路抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡的机制

目的探究白毛藤多糖通过调控miR-1270/细胞周期蛋白(CCN)G2通路对肺癌细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法用不同浓度的白毛藤多糖处理A549细胞48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR和Western印迹检测miR-1270和CCNG2的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western印迹验证miR-1270和CCNG2的靶向关系。分别构建抑制miR-1270表达或过表达CCNG2的A549细胞株,观察A549细胞增殖、凋亡和增殖凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果白毛藤多糖对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,并诱导A549细胞凋亡,抑制A549细胞miR-1270表达,促进CCNG2表达,并呈明显的浓度依赖性。CCNG2是miR-1270的靶基因,miR-1270负性调控CCNG2的表达。抑制miR-1270或过表达CCNG2均可显著抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制CyclinD1和Bcl-2表达,促进p21和Bax表达。过表达miR-1270可逆转白毛藤多糖对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。结论白毛藤多糖通过调控miR-1270/CCNG2通路可抑制肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

白毛藤多糖对骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭的影响

目的探讨白毛藤多糖对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法选取海南省文昌市人民医院骨科2017年1月至2019年1月接收的骨肉瘤患者30例,经病理检测确诊为骨肉瘤,将骨肉瘤细胞分为对照组、白毛藤多糖低、中、高浓度组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-Ebp11组、白毛藤多糖+si-NC组、白毛藤多糖+si-Ebp1组。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖抑制率;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ErbB3结合蛋白1(Ebp1) mRNA表达水平。两组比较行t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果白毛藤多糖低、中、高浓度处理的骨肉瘤细胞中细胞增殖抑制率[(16.39±1.68)%、(37.25±3.44)%、(58.14±5.71)%比(0.00±0.02)%,F=485.673,P<0.05]显著升高,细胞迁移数[(115.69±10.25)、(81.29±8.34)、(62.33±6.24)个比(136.25±11.21)个,F=117.477,P<0.05]、侵袭数[(87.32±8.33)、(69.65±6.58)、(51.26±5.22)个比(113.54±9.87)个,F=106.720,P<0.05]显著降低,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)(0.49±0.05、0.37±0.04、0.24±0.03比0.62±0.06,F=110.791,P<0.05)、基质金属蛋白酶(MMP)-2(0.58±0.05、0.44±0.04、0.32±0.03比0.71±0.07,F=104.091,P<0.05)、MMP-9蛋白相对表达水平显著降低(0.46±0.04、0.34±0.03、0.21±0.02比0.59±0.05,F=176.444,P<0.05),p21蛋白相对表达水平显著升高(0.49±0.04、0.63±0.05、0.76±0.07比0.31±0.03,F=135.364,P<0.05),Ebp1 mRNA(3.71±0.33、3.05±0.31、2.61±0.26比1.01±0.09,F=169.406,P<0.05)和蛋白相对表达水平显著升高(0.52±0.05、0.67±0.06、0.81±0.08比0.39±0.04,F=84.660,P<0.05)。骨肉瘤组织中Ebp1 mRNA(0.42±0.04比1.00±0.09,t=32.255,P<0.05)和蛋白相对表达水平显著降低(0.39±0.04比0.82±0.07,t=29.213,P<0.05)。过表达Ebp1抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭。抑制Ebp1表达逆转了白毛藤多糖对骨肉瘤U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论白毛藤多糖可通过上调Ebp1的表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭。