聚乙烯降解菌白浅灰链霉菌LBX-2烷烃羟化酶基因SaalkB的克隆与表达分析

白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus)LBX-2能够高效降解聚乙烯(polyethylene,PE),而烷烃羟化酶alkB基因在聚乙烯降解中可能发挥重要作用.以LBX-2基因组为模板,利用PCR技术扩增SaalkB基因,该基因全长1086 bp,编码361个氨基酸.对该基因编码蛋白进行生物信息学分析,发现AlkB蛋白包含5个跨膜结构域,无信号肽,属于亲水性蛋白,二级结构主要由无规则卷曲和α螺旋组成,与链霉菌Stretomyces sp.XY006的AlkB蛋白的同源性达100%.将克隆得到的SaalkB基因连接到表达载体pDE1上进行原核表达,且重组工程菌株能够降解PE.SDS-PAGE结果显示得到与预期蛋白分子量(40.9 kDa)大小一致的蛋白.利用荧光定量PCR发现,白浅灰链霉菌LBX-2在以PE为唯一碳源的培养基中SaalkB基因的表达量约为在高氏一号培养基中的30倍;蛋白质组学数据分析发现,白浅灰链霉菌LBX-2在以PE为唯一碳源培养48 h和84 h时,AlkB蛋白的表达量比在高氏一号培养基中分别上调了2.35和1.57倍,表明SaalkB基因可能是白浅灰链霉菌LBX-2降解聚乙烯的关键基因.

红树林来源白浅灰链霉菌中生物碱类次级代谢产物研究及核糖体工程优化

综合应用Sephadex LH-20柱层析、反相中压液相柱层析、正相硅胶柱层析等方法对白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus)MGR072的生物碱类次级代谢产物的化学成分进行色谱分离,并运用紫外吸收、核磁及质谱等波谱方法对结构进行解析和鉴定,确定了两个化合物结构,分别为2-喹啉酸酯和4(1H)喹唑酮;基于核糖体工程原理,对该野生型菌株进行抗链霉素和抗利福霉素突变株筛选,得到1765株抗性突变株,其中S1、S2、S3、S4、R1、R2这6株的目标产物产量发生不同程度的变化,突变株R1、S3、S4相应峰的积分面积高达野生型菌株(WT)的15、24和12倍;突变株R2的相应峰几乎中断消失.本研究显示针对红树林微生物中丰富的生物碱类次级代谢产物,可通过定向化学分离和核糖体工程优化,快速锁定其中微量的新颖结构类群并对其产量进行调控,为后续分离新天然产物打下基础.

农抗链霉菌BM10菌株的初步研究

[目的]开发农用抗生素新品种。[方法]对该实验室2005年从海南霸王岭原始森林土壤中分离筛选获得的BM10生防菌株进行分类鉴定,并测定其抑菌活性。[结果]链霉菌BM10菌株的孢子丝形态、生理生化特性和细胞壁化学组分与Streptomyces albogriseus基本一致,但在菌落颜色、产黑色素和棉子糖利用等方面存在不同。BM10菌株与Streptomyces albogriseus的16SrDNA序列同源性为99.67%。[结论]初步判定BM10菌株为白浅灰链霉菌的新菌株。

α-淀粉酶/糖苷酶抑制剂产生菌株PW638的分类地位及其产物的发酵、性质与应用研究(英文)

从土壤中分离得到了一株α-糖苷酶抑制剂产生菌株PW638.通过多相分类学研究将菌株PW638初步确定为白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus).该菌经10 L发酵罐水平发酵,发酵液中可积累一定量的A-糖苷酶抑制剂.它们能够显著地抑制重组人源A-淀粉酶和糖苷酶,并能有效降低小鼠餐后高血糖.因此,对于白浅灰链霉菌PW638的进一步研究有助于新型天然A-糖苷酶抑制剂药物的研发。

一株烟草内生放线菌Y_(12)的鉴定

通过16SrRNA序列比对、培养特征观察及生理生化特性测定,对一株烟草内生放线菌Y12进行了鉴定。结果表明:Y12菌株与白浅灰链霉菌亲缘关系最近,同源性达99%。Y12菌株气生菌丝白色至暗灰色,无可溶性色素,可使明胶液化,牛奶胨化,不产生黑色素和H2S,利用葡萄糖能力最强,利用蔗糖能力最弱。综合鉴定表明Y12菌株为白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus)。