敲除CISH敲入并IL-15显著增强NK细胞抗肿瘤活性的研究

背景白细胞介素(interleukin,IL)-15是调节自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)功能的关键细胞因子,而CISH可负向调控IL-15信号通路,从而影响NK细胞功能。靶向CISH基因和IL-15基因对NK细胞进行基因编辑,可增强NK细胞抗肿瘤活性。目的探讨CISH基因、IL-15基因对NK细胞的细胞毒性的影响。方法采用AsCas12a Ultra基因编辑工具敲除CISH基因,并敲入IL-15基因,对NK细胞进行基因编辑,并通过基因测序检测CISH基因敲除效率,采用ELISA检测IL-15的表达,用LDH检测基因编辑后的NK细胞对H358细胞系的杀伤活性,评估CISH基因敲除、IL-15基因敲入对NK细胞抗肿瘤功能的影响。结果与对照组相比,CISH基因敲除组和CISH基因敲除+IL-15基因敲入组杀伤效率显著增强[E∶T=2∶1组,34.57%±6.32%vs 71.40%±5.81%和69.23%±4.28%,P<0.001]。结论敲除CISH基因可上调IL-15信号通路,增强NK细胞抗肿瘤活性。

血清PTX3、GDF-15、IL-17在川崎病患儿中的表达及与冠脉损伤的关系

目的 探讨血清生长分化因子-15(GDF-15)、正五聚蛋白3(PTX3)、白细胞介素-17(IL-17)在川崎病(KD)患儿中的表达及与冠脉损伤的关系。方法 回顾性分析2020年5月至2023年5月郑州大学附属郑州中心医院收治的114例KD患儿为研究对象,根据冠脉损伤情况分为损伤组(48例)和无损伤组(66例),另选取同时期114例健康体检儿童为对照组;根据冠状动脉内径将冠脉损伤患儿分为轻度扩张(21例)、中度扩张(18例)、冠状动脉瘤(9例)3个亚组。比较3组不同冠状动脉扩张程度患儿入院时血清GDF-15、PTX3、IL-17水平,分析入院时血清GDF-15、PTX3、IL-17水平与冠脉损伤及冠状动脉内径的相关性,偏回归分析KD患儿发生冠脉损伤的危险因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析入院时血清IL-17、PTX3、GDF-15水平联合诊断KD患儿发生冠脉损伤的价值。结果 损伤组入院时血清GDF-15、PTX3、IL-17水平>无损伤组>对照组(P<0.05)。不同冠状动脉扩张程度患儿入院时血清IL-17、PTX3、GDF-15水平比较:冠状动脉瘤>中度扩张>轻度扩张(P<0.05)。相关性分析显示,入院时血清GDF-15、PTX3、IL-17水平与冠脉损伤、冠状动脉内径呈正相关(P<0.05)。logistic回归分析显示,入院时血清IL-17、PTX3、GDF-15水平为KD患儿发生冠脉损伤的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,入院时血清GDF-15、PTX3、IL-17水平联合诊断KD患儿发生冠脉损伤的曲线下面积(AUC)为0.818,最佳诊断敏感度为93.75%,特异度为69.70%,高于各指标单独诊断(P<0.05)。结论 GDF-15、PTX3、IL-17参与KD患儿发生冠脉损伤过程,且在辅助临床早期诊断KD患儿发生冠脉损伤方面具有较高效能。

应用ROC曲线分析外周血可溶性TNF受体、IL-15评估肺结核的预后价值

目的:分析外周血可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)、白细胞介素-15(IL-15)评估肺结核的预后价值。方法:选定枣庄市胸科医院2022年1月至2023年8月就诊的150例肺结核患者,比较预后良好组与不良组的血清sTNFR-55、sTNFR-75、IL-15水平,多因素logistic回归分析肺结核患者预后不良的危险因素,并绘制受试者工作曲线,计算曲线下面积,分析血清sTNFR-55、sTNFR-75、IL-15对肺结核预后不良的预测效能。结果:预后不良组的血清sTNFR-55、sTNFR-75水平均低于预后良好组,血清IL-15水平高于预后良好组(P<0.05)。logistic回归分析,年龄、病变范围、血清sTNFR-55、sTNFR-75、IL-15是肺结核患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清sTNFR-55、sTNFR-75、IL-15联合检测灵敏度均高于单一检测(P<0.05),血清sTNFR-55、sTNFR-75、IL-15联合检测特异度与单一检测比较无差异(P>0.05)。结论:肺结核患者的血清sTNFR-55、sTNFR-75表达量较低,血清IL-15表达量较高,联合检测血清sTNFR-55、sTNFR-75、IL-15,可提高对患者预后的预测效能,具有一定的参考价值。

乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者血清白细胞介素-15、-17检测及意义

由乙型肝炎病毒（HBV）导致的慢加急性肝衰竭（ACLF）是我国传染病死亡的重要原因之一,目前其发生机制尚不明确。有学者提出的“三重打击（免疫损伤、缺血缺氧性损伤及内毒素血症）”学说和“免疫麻痹”学说,对细胞因子在ACLF中所起的作用进行了解释〔1〕。白细胞介素（IL）-15与IL-17在慢性乙型肝炎（CHB）的表达已有学者做了研究,

重组人白细胞介素-15包涵体离子交换柱复性与稀释复性的比较

目的比较重组人白细胞介素-15 (rhIL-15 )包涵体蛋白稀释复性法与离子交换柱复性法的效果。方法采用离子交换柱吸附变性包涵体蛋白,用含有复性剂的洗脱液洗脱复性,所得蛋白质比活和稀释复性法所得比活比较。结果两种方法所得目的蛋白质比活相近,但离子交换柱复性法目的蛋白质回收率高,试剂消耗少。结论对于rhIL-15包涵体,离子交换柱复性法用于生产。

肺炎支原体感染并支气管哮喘发作患儿血清白细胞介素-15的表达

目的研究IL-15在肺炎支原体（MP）感染在支气管哮喘发病中的作用。方法收集2003年6月～2005年4月MP感染并支气管哮喘发作患儿、单纯MP下呼吸道感染患儿、非MP下呼吸道感染患儿和正常对照儿童各30例，采用ELISA方法检测各组患儿外周血IL-15水平。结果外周血IL-15水平在MP感染并支气管哮喘发作组[（2．67±0．93）ng／L]明显高于其他各组，外周血IL-15水平在单纯MP下呼吸道感染组[（2．13±0．64）ng／L]和非MP下呼吸道感染组[（2．10±0．83）ng／L]均显著高于正常对照组[（1．02±0．35）ng／L]，单纯MP下呼吸道感染组外周血IL-15水平与非MP下呼吸道感染组相比有所升高。但无显著性差异（P〉0．05）。结论MP感染后机体外周血IL-15水平升高可能参与支气管哮喘的发病过程。

脐血培养上清中白细胞介素15和干扰素-γ含量检测

目的 研究脐血单个核细胞 (CBMNC)经脂多糖 (LPS)刺激后生成白细胞介素 15 (IL 15 )和干扰素 γ(IFN γ)的能力。方法 采用ELISA法对 14例新生儿CB和 2 0例成人外周血 (APB)MNC经LPS刺激后培养 48h的上清进行测定。结果 CB及APBMNC经LPS刺激后培养 48h的上清中可检测到IL 15和IFN γ ,但CBMNC生成IL 15和IFN γ的能力明显低于APB[IL 15 ( 8.5 5± 0 .60 )ng/Lvs ( 10 .2 4± 1.66)ng/L ,IFN γ( 2 7.96± 5 .88)ng/Lvs ( 60 .5 9± 18.15 )ng/L ,P均 <0 .0 1]。 结论 CBMNC生成IL 15和IFN γ的能力低下 ,在一定程度上揭示了CB的免疫特性 ,同APB相比 。

白细胞介素-15协同新城疫病毒HN基因抗肿瘤免疫的作用

目的 探讨白细胞介素 15 (IL- 15 )质粒、新城疫病毒 HN基因 (PCD- HN)质粒对肿瘤免疫反应的作用。方法 采用 MTT法和乳酸脱氢酶释放法 ,检测 IL- 15质粒、PCD- HN质粒对小鼠抗肿瘤免疫反应作用中 T淋巴细胞的增殖和 NK细胞的活性。结果 IL- 15质粒、PCD- HN质粒同时免疫小鼠 ,其淋巴细胞增殖指数和 NK细胞活性的百分率明显高于其它各组。结论 IL- 15质粒联合 PCD- HN质粒免疫小鼠 ,对抑制肿瘤生长具有迭加效应。

乳腺癌根治术患者术后血清抗酒石酸盐酸性磷酸酶5b和糖类抗原15-3及白细胞介素-6水平与骨转移的关系

目的探讨乳腺癌根治术患者术后血清抗酒石酸盐酸性磷酸酶5b(TRACP5b)、糖类抗原15-3(CA15-3)、白细胞介素-6(IL-6)水平与骨转移的关系。方法选择2017年12月至2018年12月新乡市中心医院收治的122例行乳腺癌根治术患者为研究对象,术后1周检测患者血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平;随访1 a,记录患者骨转移发生情况;采用Pearson、Spearman相关性分析方法分析乳腺癌根治术后血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平与骨转移的相关性。结果122例患者中,无骨转移90例,骨转移32例,骨转移发生率为26.23%。骨转移患者术后血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平高于无骨转移患者(P<0.05),多发病灶患者术后血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平高于单发病灶患者(P<0.05)。乳腺癌根治术后患者血清TRACP5b、CA15-3水平与IL-6水平呈显著正相关(r=0.4126、0.4078,P<0.001)。乳腺癌根治术后患者血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平与骨转移程度呈显著正相关(r=0.5437、0.5328、0.3867,P<0.001)。结论乳腺癌患者术后血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平与骨转移的发生密切相关,且术后血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平越高,发生骨转移的程度越重。

白细胞介素1β刺激脑微血管内皮细胞内15-羟基前列腺素脱氢酶的经时变化

目的:探讨白细胞介素1β(IL1β)刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)15羟基前列腺素脱氢酶(15PGDH)活性的经时变化。方法:建立rCMEC培养方法,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞长至融合状态后,以30ng/ml浓度的IL1β分别刺激0.5、1、2、4、8、12、24h,以放射免疫法测定各刺激时间点15PGDH活性。结果:90%以上的培养细胞呈阳性,确定为rCMEC。加入IL1β刺激后2h,细胞内15PGDH活性与未刺激组比较有显著性差异(P<0.05);12h时达到最大值;24h时有所降低,但与未刺激组比较仍具显著性差异(P<0.01)。结论:rCMEC经IL1β刺激后,细胞内15PGDH活性经历一个逐渐升高,到达峰值后缓慢下降的过程,IL1β刺激12h内皮细胞15PGDH活性达峰值。

白细胞介素15和粒-单核集落刺激因子激活的自然杀伤T细胞对神经母细胞瘤细胞的杀伤作用

目的 研究白细胞介素 15 (IL 15 )和粒 单核集落刺激因子 (GM CSF)对健康儿童自然杀伤T细胞(NKT)增殖和对NKT细胞介导的神经母细胞瘤 (NB)细胞的细胞毒作用的影响。方法 采集分离健康儿童外周血T细胞 ,分别加入IL 15 ,GM CSF培养 ,MTT法检测T细胞增殖程度的变化 ,流式细胞仪检测NKT/T比例并分选出NKT细胞 ,MTT法检测NKT细胞对NB细胞毒作用。结果 IL 15刺激组、GM CSF刺激组和IL 15 +GM CSF刺激组T细胞增殖程度分别是对照组的 1.2 5倍、1.2倍和 1.4倍 (均P <0 .0 1) ;NKT/T比例分别是对照组的 2 .5 6倍、3.2 7倍和 4 .39倍 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ;GM CSF组和IL 15 +GM CSF组NKT细胞毒作用高于对照组 (均P <0 .0 1) ,IL 15组NKT细胞毒作用与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。与GM CSF组比较 ,IL 15 +GM CSF组T细胞增殖程度增高但NKT/T比例和NKT细胞毒作用差异无显著性。与IL 15组比较 ,IL 15+GM CSF组NKT/T比例和NKT细胞毒作用增高但T细胞增殖程度差异无显著性。IL 15组与GM CSF组T细胞增殖程度、NKT/T比例和细胞毒作用差异无显著性。结论 NKT细胞对NB具有细胞毒作用 ,IL 15和GM CSF联合应用可以促进健康儿童外周血NKT细胞增殖 ,增强NKT细胞对NB细胞毒作用。

川崎病患儿白细胞介素-15水平变化的临床意义

目的探讨白细胞介素-15(IL-15)在川崎病(KD)发病机制中的作用及其应用价值。方法选择2004年10月～2006年1月本院住院的30例KD患儿作为研究对象,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测KD患儿急性期和恢复期血清IL-15水平,同期检测30例下呼吸道感染发热期和20例正常健康儿童作为对照。结果急性期KD患儿血清IL-15水平明显高于健康对照组,二者比较有显著性差异(q=25.64P<0.01);恢复期KD患儿血清IL-15水平下降,但仍较健康对照组增高,二者比较有显著性差异(q=4.00P<0.01);KD患儿血清IL-15水平急性期与恢复期比较有显著性差异(t=14.87P<0.01)。KD患儿急性期和恢复期血清IL-15水平均明显高于下呼吸道感染患儿急性期和恢复期,有显著性差异(急性期t=6.28P<0.01;恢复期t=4.34P<0.01);急性期随KD患儿IL-15水平升高,ESR也相应升高,二者呈显著正相关(r=0.371P=0.044),但与外周血WBC计数、CRP和血清清蛋白(ALB)变化无明显相关性;与IgG存在正相关性(r=0.372P=0.043)。结论IL-15参与KD的病理生理过程,IL-15可能促使免疫细胞大量激活,进而介导组织免疫病理损伤。IL-15水平变化反映KD的病情状况,可能为早期诊断提供一定线索。

人白细胞介素-15 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

从正常人外周血中分离粘附的单核细胞，加入ＬＰＳ刺激４ｈ后提取细胞ｍＲＮＡ反转录获得ｃＤＮＡ第一链，用两对特异引物进行巢式ＰＣＲ扩增出含ＢａｍＨＩ酶切位点的编码人１Ｌ－１５成熟蛋白的ｃＤＮＡ，其大小约３６０ｂｐ。用ＰＥＧ法回收其片段并将其连接到ｐＢＳＳＫ载体的ＳｍａⅠ位点上进行序列分析，结果表明其序列与文献报道一致。然后再将其片段亚克隆插入到ｐＧＥＸ－２Ｔ的ＢａｍＨＩ位点。筛选插入方向正确的克隆，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，以１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导５ｈ收集菌体直接进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，与阴性对照相比，ＭＷ４４ＫＤ处多出一条带，紫外扫描显示此带占菌体蛋白总量的８．８％。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ证实此带能够特异地与兔抗人ＩＬ－１５的抗体发生反应。证明ＲＴ－ＰＣＲ所得的人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在大肠杆菌中获得了表达，为进一步探讨人ＩＬ－１５的生物学作用打下基础。

白细胞介素-15对嗜中性粒细胞非特异性免疫功能的影响

目的 :探讨白细胞介素 15对嗜中性粒细胞非特异性免疫功能的影响。方法 :以不同浓度IL - 15预处理人外周血嗜中性粒细胞 ,然后检测其各噬能力、杀菌活性的变化 ,同时检测其受LPS刺激的产生活性氧、合成分泌NO及IL - 8的情况。结果 :IL - 15可明显提高PMN的吞噬、杀菌活性 ,并调高PMN受LPS刺激后NO和IL - 8的产量 (P <0 .0 5 ) ;但活性氧的产量无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论 :IL - 15可增强PMN的非特异性免疫功能 ,是一种重要的天然免疫作用分子。

系统性红斑狼疮患者血清白细胞介素-15的检测及其临床意义

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清白细胞介素(IL)-15水平,并进一步分析其临床意义。方法IL-15检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。结果①SLE组患者血清IL-15水平显著高于正常对照组(P<0.05),活动期SLE患者血清IL-15水平显著高于缓解期患者(P<0.05)。②发生临床肾损害者IL-15水平明显高于无肾损害者(P<0.05)。③出现抗dsDNA抗体阳性、低补体C3血症、高IgG血症者血清IL-15水平均分别显著高于无上述表现者。④活动期SLE患者血清IL-15水平与抗dsDNA抗体呈正相关关系,但与系统性红斑狼疮活动性指标(SLEDAI)无相关关系。结论SLE患者血清IL-15水平显著增高,IL-15可能参与SLE的病理生理过程;IL-15可能与SLE的肾损害有关。

石家庄地区肥胖人群KCTD15基因多态性与白细胞介素-35的关系

目的了解石家庄地区肥胖人群含钾通道四聚化结构域15(KCTD15)基因rs11084753位点多态性情况,探讨其与白细胞介素-35(IL-35)的相关性和意义。方法选取石家庄地区肥胖人群3 518例(肥胖组),同时选取正常人群3 500例为对照组,直接测序法检测KCTD15基因多态性。同时检测血清中IL-35及血脂。结果肥胖组中TC、TG明显高于对照组,而HDL-C、IL-35则明显低于对照组(P<0.05)。肥胖组饮酒及阳性家族史的比例均高于对照组(P<0.05)。肥胖组和对照组按AA、AG、GG不同基因型,TC、TG水平依次升高,而HDL-C、IL-35水平依次降低(P<0.05)。肥胖组KCTD15基因rs11084753位点GG及AG基因型比例明显高于对照组(P<0.05);多元logistic回归分析显示,KCTD15基因rs11084753位点基因型和IL-35水平是肥胖的独立影响因素(P<0.05)。结论 KCTD15基因rs11084753位点突变及血清IL-35水平可能与肥胖有关。

白细胞介素-15在脓毒症免疫细胞应答中的作用

脓毒症是指机体对感染产生的全身性炎症反应与广泛组织损伤的综合征,最近发现脓毒症早期爆发系统性炎症应答,晚期则发生＂免疫麻痹＂。在免疫麻痹阶段,天然和适应性免疫系统因细胞凋亡增加而产生缺陷,患者难以清除入侵病原体,易发生危及生命的院内获得性感染。越来越多证据表明,抑制脓毒症免疫和非免疫细胞凋亡,能显著提高脓毒症动物存活率,抑制细胞凋亡有待成为临床治疗脓毒症新策略。

白细胞介素-15对骨髓增生异常综合征骨髓造血干/祖细胞增殖的影响

目的 :观察白细胞介素 (IL 15 )对体外培养的骨髓增生异常综合征 (MDS)患者CD34+ 细胞增殖作用。方法 :应用单克隆抗体免疫磁珠分离系统提取MDS患者CD34+ 细胞 ,以加IL 15组为实验组 ,不加IL 15组为对照组 ,进行液体和甲基纤维素半固体集落培养 ,计算培养后细胞数和CFU E、BFU E、CFU GM、CFU GEMM等集落数 ,并用MTT比色法检测IL 15对MDS患者CD34+ 细胞增殖的抑制作用 ,流式细胞术检测上述培养细胞周期的变异情况。结果 :11例MDS对象平均CD34+ 细胞比例、回收率、纯度和富集倍数均达要求 ,MTT比色法检测IL 15对CD34+ 细胞的增殖作用呈最佳浓度效应 ,最佳浓度为 2 0 μg/L ,细胞增殖抑制最低峰值时间为 8d。用 0 μg/LIL 15 (对照组 )和 2 0 μg/LIL 15 (实验组 )作用MDSCD34+ 细胞 ,计数显示培养细胞最大增殖倍数和集落形成比率实验组均较对照组明显增加 ,IL 15作用后各细胞周期G1、S、G2 期比例有明显改变 ,与对照组比较 ,差异有统计学意义。结论 :IL 15对MDSCD34+ 细胞有促增殖效应 ,与其它造血生长因子具有协同作用 ,对MDS治疗可能有一定的应用前景。