猕猴组织工程骨异体植入后白细胞介素2及其受体的表达

目的 检测猕猴组织工程骨异体植入桥接节段骨缺损后体内白细胞介素 2 (interleukin 2 ,IL - 2 )及白细胞介素 2受体 (interleukin 2 receptor,IL - 2 R)的表达 ,从免疫学方面探讨同种异体细胞作为种子细胞构建组织工程骨的可行性。 方法 用猕猴骨髓基质干细胞 (marrow stromal stem cells,MSCs)体外诱导分化为成骨细胞 ,与人源生物衍生骨材料复合培养 ,构建组织工程骨 ,植入 15只免疫功能健全的异体猕猴体内桥接桡骨节段骨缺损作为实验组 ;用单纯生物衍生骨材料桥接对侧同样大小骨缺损作为对照组 ;分别于术后 1、2、3、6和 12周抽取静脉血 ,并行双侧局部组织取材 ,组织块作低温匀浆 ,用双抗体夹心 IL ISA法检测 IL - 2及 IL - 2 R的表达。 结果 实验组和对照组术后各时间点IL - 2及 IL - 2 R水平无统计学差异 (P>0 .0 5 ) ,IL - 2及 IL - 2 R水平在术后第 2周开始增高 ,第 2～ 6周维持高水平 ,6周后随时间的延长而下降。 结论 猕猴 MSCs和生物衍生骨材料复合构建组织工程骨 ,植入异体猕猴体内引发微弱的免疫反应 ,同种异体 MSCs可选择作为构建骨组织工程的种子细胞。

组织工程皮肤移植过程中白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达

背景:白细胞介素10和肿瘤坏死因子α在异体异种皮肤移植局部免疫与排斥反应中发挥了重要作用。但在组织工程人工皮肤移植过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达情况目前尚不清楚。目的:采用表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤并移植修复兔全层皮肤缺损创面,观察创面修复效果和局部皮肤组织白介素10与肿瘤坏死因子α的表达变化。方法:将体外培养的人表皮干细胞或角质细胞接种到脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤;取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面随机分为4组,表皮干细胞组、角质细胞组用含表皮干细胞或角质细胞的组织工程皮肤移植于皮肤缺损创面;脱细胞真皮组移植单纯脱细胞真皮;对照组创面空置。观察创面修复情况,局部炎症反应,创面愈合时间。各组分别于术后7d在部分创面取材观察组织形态和白细胞介素10与肿瘤坏死因子α表达。结果与结论:含表皮干细胞的人工皮肤移植后创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较角质细胞组明显缩短。白细胞介素10在各组均有表达,其中表皮干细胞组表达最强,角质细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组最弱。肿瘤坏死因子α在各组也均有表达,其中角质细胞组表达最强,表皮干细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组较弱。说明以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用有效促进皮肤缺损创面的修复治疗,创面修复过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子的表达变化可能是其取得较好效果的主要机制之一。

辅酶Q10干预糖尿病牙周炎模型大鼠牙龈组织白细胞介素17,23的表达

背景:辅酶Q10参与呼吸链的电子传递,具有抗氧化、减少细胞凋亡和抗炎的功能,已经在心血管病、糖尿病、肿瘤等方面取得了良好的效果,在糖尿病牙周炎领域的应用可能也具有一定的应用价值。目的:观察伴2型糖尿病牙周炎大鼠牙龈组织白细胞介素17及白细胞介素23表达的变化。方法:将48只Wistar健康雄性大鼠随机分为3组:空白对照组,牙周炎+糖尿病+生理盐水组,牙周炎+糖尿病+辅酶Q10组。空白对照组正常饮食,其他2组采用丝线结扎的方法建立伴牙周炎模型,采用高脂高糖饮食+腹腔注射链脲佐菌素的方法建立2型糖尿病模型。造模成功后辅酶Q10组大鼠连续8周灌胃辅酶Q10,生理盐水组大鼠给同等剂量的生理盐水,分别于给药前,给药第2,4,8周末随机处死4只,采用免疫组织化学法检测牙龈组织中白细胞介素17及白细胞介素23表达水平。结果与结论:第8周末,生理盐水组白细胞介素17、白细胞介素23的阳性表达率显著高于辅酶Q10组(P<0.05)。辅酶Q10可以降低伴2型糖尿病牙周炎大鼠牙龈组织白细胞介素17、白细胞介素23的表达,减轻牙周组织炎症反应。

白细胞介素17与血管内皮生长因子在鼻息肉组织中的表达及相关性分析

目的通过研究鼻息肉组织中白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平,探讨鼻息肉的发生、发展。方法收集在鼻内镜下慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉手术患者鼻息肉组织30例,慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉手术患者筛窦黏膜组织30例,因鼻中隔偏曲行下鼻甲部分切除术患者下鼻甲黏膜组织10例。采用免疫组织化学SP法检测IL-17、VEGF的表达情况并对两者表达水平相关性进行分析。结果 IL-17、VEGF在鼻息肉组织中的表达明显高于其他两组,两两比较组间差异均具有统计学意义;IL-17与VEGF在鼻息肉组织中的表达呈正相关性。结论 IL-17和VEGF均在鼻息肉组织中的表达增高,对鼻息肉的发生、发展起重要作用;鼻息肉组织中IL-17与VEGF的表达呈正相关,提示两者共同参与鼻息肉的发生与发展。

血清及唾液中干扰素γ和白细胞介素10水平与不同类型的口腔扁平苔藓(英文)

背景:许多细胞因子在唾液和血清中都能检测出,并且在口腔黏膜疾病的诊断,预后的监控和治疗方面更具有临床意义。目的:比较不同类型口腔扁平苔藓患者血清及唾液中的白细胞介素10和干扰素γ的水平,探索唾液作为生物学样本代替血液来研究口腔扁平苔藓中干扰素γ和白细胞介素10的可行性。方法:收集2014年1至7月在佳木斯大学附属口腔医院牙周黏膜病科就诊的口腔扁平苔藓患者45例,根据患者疾病类型分为糜烂型(糜烂组)15例,充血红斑型(充血红斑组)15例,网纹型(网纹组)15例。另取15名就诊于佳木斯大学附属口腔医院体检科身体健康者作为对照组。采用ELISA法分别检测4组对象血清和唾液中干扰素γ和白细胞介素10的表达水平。结果与结论:与正常组相比,口腔扁平苔藓患者血清和唾液中干扰素γ水平较低(P<0.01),且糜烂组、充血红斑组和网纹组患者血清和唾液中干扰素γ水平差异有显著性意义。与正常组相比,糜烂组和充血红斑组患者血清和唾液中白细胞介素10水平较高(P<0.01或P<0.05);与网纹组相比,糜烂组和充血红斑组患者血清和唾液中白细胞介素10水平较高。提示口腔扁平苔藓患者血清和唾液中干扰素γ和白细胞介素10水平高度相关,可以通过检查唾液替代血液来研究口腔扁平苔藓中干扰素γ和白细胞介素10的水平。

秋冬季节对健康大鼠肺组织表面活性蛋白A和白细胞介素6表达的影响

背景:近年来研究证实,季节气候的变化和肺表面活性物质蛋白A及白细胞介素6在肺脏免疫防御功能调节方面均起到很重要的作用,但是季节气候产生影响的机制目前还不清楚。目的:观察秋冬季大鼠肺组织表面活性蛋白A和白细胞介素6的表达,认识季节和气候变化影响大鼠肺脏非特异性免疫的作用机制,为呼吸系统季节性发病的病理生理机制的认识提供实验依据。方法:分别于立秋、秋分、立冬、冬至节气前14d购入雄性SD实验大鼠,并分为相应组别。自由摄取水及正常饲料和室温饲养,接受自然光照。到相应节气,于当日下午6时将动物断头处死,取出全肺组织作表面活性蛋白AmRNA和白细胞介素6mRNA检测。结果与结论:与立秋、秋分、冬至组大鼠相比,立冬大鼠肺组织表面活性蛋白A和白细胞介素6均表达量较低,提示肺部免疫防御功能存在秋季高冬季低的季节节律,而表面活性蛋白A和白细胞介素6正是免疫防疫功能的物质基础。

雌激素缺乏状态下牙周组织中核转录因子κB及白细胞介素17的表达变化

背景:绝经期后骨质疏松症与牙周组织疾病有着十分密切的关系,而其作用机制尚不清楚。目的:通过切除卵巢建立雌激素缺乏状态下骨质疏松小鼠模型,观察在此状态下牙槽骨组织中核转录因子κB以及血清与牙龈组织中白细胞介素17的表达变化。方法:将3月龄雌性C3H小鼠随机分为卵巢切除组及假手术组。术后10周,苏木精-伊红染色观察下颌骨及股骨组织学改变;RT-PCR检测下颌骨中成骨相关因子OCN及Runx2表达变化;免疫组化染色及Western Blot检测下颌骨中核转录因子κB表达;CBA流式液相多重蛋白定量技术检测血清及牙龈组织匀浆中白细胞介素17水平。结果与结论:(1)卵巢切除组小鼠股骨的骨皮质变薄,骨髓腔扩大,骨小梁变细、数目减少、密度降低、结构不完整,骨吸收陷窝样结构增多;(2)卵巢切除组牙槽骨组织中OCN及Runx2相对表达量较假手术组低;(3)卵巢切除组小鼠下颌骨中核转录因子κB活化形式P65蛋白呈阳性表达;(4)卵巢切除组牙槽骨组织中核转录因子κB活化形式P65相对表达量高于假手术组;(5)卵巢切除组小鼠血清中白细胞介素17表达水平高于假手术组,但牙龈组织中白细胞介素17表达水平与假手术组相比无明显变化;(6)实验表明,雌激素缺乏导致的核转录因子κB信号通路激活可能在牙周骨吸收中发挥一定作用;而牙周局部组织内的白细胞介素17可能并非此状态下牙周组织破坏的关键因子。

肾虚及正常大鼠的正畸致牙根吸收易感性比较及组织内白细胞介素17的表达差异

背景:正畸致牙根外吸收的发生机制目前尚不明确,且它有较大的个体差异。肾虚体质已被证明与多种细胞因子介导的骨性疾病有直接联系,白细胞介素17为目前研究出的参与牙根外吸收的重要细胞因子之一。明确肾虚体质是否与牙根吸收相关及白细胞介素17是否参与其中,有助于正畸致牙根吸收的病因学研究。目的:探讨正畸移动大鼠牙过程中肾虚体质及白细胞介素17与牙根吸收的关系。方法:选择36只Wistar大鼠,随机分为2组,每组18只。肾虚组应用大鼠药物诱导法建立肾虚模型,对照组给予生理盐水。肾虚模型建立后,所有大鼠右侧上颌建立正畸加力模型,左侧上颌不加力。正畸加力3,7,14 d时全麻下分批处死大鼠,苏木精-伊红染色、免疫组化检测观察第一磨牙近中根压力侧组织形态及白细胞介素17的表达变化。结果与结论:1组织学结果:肾虚加力组牙根压力侧吸收,牙釉质表面不同程度的破骨细胞吸收陷窝,吸收程度随加力时间延长而加重;对照加力组牙槽骨吸收、牙周膜增宽;肾虚不加力组及对照不加力组未见牙槽骨及牙根吸收;2免疫组化结果:白细胞介素17在肾虚组加力组牙根压力侧表达高于对照加力组,在肾虚不加力组的表达高于对照不加力组;3结果表明,肾虚体质下进行正畸治疗易发生牙根吸收,且肾虚体质较正常体质更易产生白细胞介素17,其造成牙根吸收的机制可能与白细胞介素17相关。

血清金属蛋白酶组织抑制因子、白细胞介素2与白细胞介素10和D-二聚体对下肢静脉曲张的诊断价值

目的探讨血清金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)、D-二聚体(D-dimer)对下肢静脉曲张的诊断价值。方法选取2019年1月至2020年6月无锡市第九人民医院收治的120例下肢静脉曲张患者为下肢静脉曲张组,另选取40例同院进行健康体检者作为对照组,检测两组血清TIMP-1、IL-2、IL-10、D-dimer含量,分析其在下肢静脉曲张诊断中的应用价值。结果下肢静脉曲张组患者血清TIMP-1、D-dimer、IL-2含量高于对照组,IL-10含量低于对照组(P<0.05);血清TIMP-1、IL-2、IL-10、D-dimer联合检测诊断下肢静脉曲张ROC曲线下面积为0.862高于单独检测ROC曲线下面积0.711、0.676、0.736、0.759(P<0.05);120例下肢静脉曲张患者洪堡静脉曲张严重程度评分量表(HVVSS)为(9.25±1.91)分,Pearson相关性分析结果显示患者HVVSS症状评分与血清TIMP-1、D-dimer呈正相关(r=0.358、r=0.321,P值均<0.05),与血清IL-2、IL-10含量无相关性(P>0.05)。结论下肢静脉曲张患者血清TIMP-1、D-dimer、IL-2和IL-10血清指标可作为下肢静脉曲张患者筛查指标,血清TIMP-1、D-dimer可反映患者疾病症状严重程度。

膝骨关节炎患者血清和关节液中基质金属蛋白酶1，3、基质金属蛋白酶抑制剂1及白细胞介素1β含量与补肾通络方的干预

背景:研究表明,软骨破坏是膝骨关节炎的主要病理特征,而关节软骨细胞外基质的均衡是维持关节软骨活性和功能的重要条件。目的:观察补肾通络方干预前后膝骨关节炎患者血清和关节液中基质金属蛋白酶1,3、基质金属蛋白酶抑制剂1及白细胞介素1β的含量变化。设计、时间及地点:分子生物学水平的随机对照观察,于2006-03/06在新疆医科大学附属中医医院完成。对象:收集于新疆医科大学附属中医医院行关节镜诊治的膝骨关节炎患者40例(40膝),按信封随机法分为补肾通络方组和对照组,每组20例。方法:补肾通络方组在关节镜检查清理术后第2日开始服用补肾通络方,每天1剂,早晚分服,15d为1个疗程,连续观察2个疗程。补肾通络方由熟地12g,山萸肉9g,杜仲12g,怀牛膝9g,寄生9g,防风10g,秦艽9g,独活9g,细辛3g,当归12g,地龙6g,甘草6g组成,同时根据患者中医证候类型在本方基础上进行加减。对照组仅行关节镜检查清理术。主要观察指标:分别于治疗前后采用酶联免疫吸附双抗体夹心法测定两组患者血清和关节液中基质金属蛋白酶1,3、基质金属蛋白酶抑制剂1及白细胞介素1β含量。结果:与治疗前相比,2个疗程后补肾通络方组患者的血清及关节液中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1和白细胞介素1β含量均明显下降(P<0.05);对照组仅关节液中白细胞介素1β含量下降(P<0.05)。结论:与单纯关节镜治疗相比,补肾通络方加关节镜治疗对膝骨关节炎患者软骨细胞外基质以及基质金属蛋白酶的调节作用更加广泛;补肾通络方对膝骨关节炎的防治作用可能是通过调控关节软骨细胞外基质的降解完成的。

手十二井穴刺络放血抑郁大鼠血浆白细胞介素1β、白细胞介素6及行为学的指标变化

目的:采用手十二井穴刺络放血方法干预抑郁大鼠,观察大鼠血浆细胞因子的变化以及行为学的特点。方法:实验2005-11/2006-02在大连医科大学实验动物中心及附属第二医院实验中心完成。①实验材料:普通级成年wistar大鼠32只,体质量180～220g,雌雄各半。②实验分组:将大鼠随机分为正常对照组、模型组、百优解组和刺络放血组,每组8只。③实验干预:正常对照组大鼠不予任何刺激和治疗。其他组大鼠孤养并接受21d各种不同刺激后,模型组不予任何治疗,百优解组按2.8mg/kg灌胃,1次/d;刺络放血组选用大鼠双侧前肢趾端的十二井穴刺络放血,隔日1次,共11次,出血量为每穴1滴。④实验评估:对比各组大鼠行为学指标(采用Open-Field法)及血浆中白细胞介素1β、白细胞介素6的差异。结果:32只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠血浆中白细胞介素1β、白细胞介素6水平变化:正常组、百优解组、刺络放血组与模型组大鼠比较,白细胞介素1β、白细胞介素6差异均有显著性(P<0.01);百优解组、刺络放血组与正常组比较,以及刺络放血组与百优解组比较,白细胞介素1β、白细胞介素6差异无显著性(P>0.05)。②各组大鼠Open-Field行为得分:正常组与模型组动物比较,水平得分与垂直得分差异均有显著性(P<0.01);刺络放血组、百优解组与模型组比较,水平得分与垂直得分差异均有显著性(P<0.05～0.01);刺络放血组与百优解组的得分差异无显著性(P>0.05)。结论:手十二井穴刺络放血后,抑郁大鼠模型血浆中的白细胞介素1β、白细胞介素6的含量降低,行为学能力改善,从而产生抗抑郁的作用。

白细胞介素1β对软骨细胞miR-27b和基质金属蛋白酶13蛋白表达的影响

背景:基质金属蛋白酶13对软骨细胞外基质中的Ⅱ型胶原蛋白的降解能力最为活跃,白细胞介素1β被认为是基质金属蛋白酶的诱导剂,参与关节软骨的降解和退变。目的:分析白细胞介素1β对大鼠软骨细胞miR-27b和基质金属蛋白酶13蛋白表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠7只,体外分离培养软骨细胞,并分组为白细胞介素1β刺激组及对照组。对照组不采取任何刺激;白细胞介素1β刺激组采用10μg/L白细胞介素1β的无血清培养基培养大鼠软骨细胞,于第0,24,48小时分别采用倒置显微镜观察细胞生长情况,并收集细胞,提取RNA检测软骨细胞基质金属蛋白酶13表达以及不同的miR NAs的表达变化。结果与结论:(1)白细胞介素1β诱导大鼠软骨细胞0,24,48 h时基质金属蛋白酶13相对表达量逐渐增加(P<0.05);(2)白细胞介素1β诱导大鼠软骨细胞24,48 h时miR-27b、miR-31表达均逐渐下降(P<0.05);mi R-26a、miR-26b、miR-23和miR-204表达均逐渐加强(P<0.05),白细胞介素1β诱导大鼠软骨细胞48 h后,mi R-27b表达的降低最为显著(P<0.05);(3)结果说明白细胞介素1β诱导大鼠软骨细胞,miR-27b表达显著下降,靶定调控基质金属蛋白酶13的能力降低,导致软骨细胞的损伤,加剧了骨性关节炎的发病及进展。

组织工程皮肤分泌细胞因子的初步研究

目的 研究组织工程皮肤培养液中IL 1β、IL 6和IL 8的分泌情况。方法 收集组织工程皮肤制备过程中单层成纤维细胞(fibroblast ,FB)培养液、胶原凝胶真皮替代物(dermalequivalent,DE)、复合壳多糖DE和复合壳多糖皮肤替代物(skinequivalent,SE)培养液标本,ELISA法检测其中IL 1β、IL 6和IL 8分泌量。结果 复合壳多糖真皮基质促进FB、角质形成细胞(keratinocyteKC)分泌IL 6、IL 8。SE分泌的IL 6、IL 8在DE加KC之后和SE形成分层表皮时形成两个高峰。结论 FB、KC在壳多糖组织工程皮肤中混合器官型培养时分泌IL 6和IL 8较明显,这些细胞因子可在创面愈合中发挥重要作用。

基质金属蛋白酶-1及白细胞介素-1αmRNA在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶 (matrixmetalloproteinases ,MMP1)及其组织抑制剂 (tissueinhibitorofmetalloproteinases,TIMP1)和白细胞介素 1αmRNA(interleukin 1 alphamessengerribonucleicacid ,IL 1αmRNA)在中耳继发性胆脂瘤上皮的表达 ,分析其表达在胆脂瘤上皮溶骨性破坏中的作用。方法 分别应用免疫组化SP染色法和原位杂交技术检测MMP1、TIMP1和IL 1α在 32例胆脂瘤和 14例胆脂瘤患者外耳道皮肤中的表达情况。结果 MMP1在 32例胆脂瘤上皮各层细胞均存在较强表达 ,定位在胞膜和胞浆 ,外耳道皮肤表达较弱 ;两种组织MMP1阳性表达的平均 ( x±s,下同 )吸光度 (A值 )分别为 (2 0 18 2 6± 174 89)和 (142 8 35± 12 3 39) ,差异有极显著性 (t=10 6 9,P <0 0 1) ;TIMP1在两者中未见明显表达 ;外耳道皮肤仅基底层细胞可见散在IL 1αmRNA阳性表达细胞 ,平均吸光度 (A值 )为 (5 6 6 2 7± 148 94) ,胆脂瘤上皮除基底层细胞外 ,部分区域基底上层细胞也见阳性表达 ,平均吸光度(A值 )为 938 91± 2 2 3 46 ,差异有极显著性 (t=5 0 3,P <0 0 1)。结论 ①MMP1在胆脂瘤上皮中高表达 ,并提示有MMP1和TIMP1表达失衡 ,与胆脂瘤骨吸收特性有关。②胆脂瘤上皮高表达的IL

体外冲击波治疗兔膝骨关节炎:白细胞介素1β及基质金属蛋白酶13的表达

背景:白细胞介素1β和基质金属蛋白13能促进软骨细胞的分解代谢,抑制软骨细胞的合成修复能力,引起细胞外基质的降解,在骨关节炎的发生中有十分重要的作用。目的:观察体外冲击波对兔膝骨关节炎软骨细胞中白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13表达的影响。方法:将30只新西兰兔随机分为治疗组、模型组、对照组,每组10只。治疗组和模型组均采用改良伸直位固定6周,制备兔膝骨关节炎模型。治疗组造模后给予体外冲击波治疗1次,能流密度0.1 mJ/mm2,冲击次数1 000次。对照组不作任何处理。各组兔于治疗后4周处死,取膝关节液和关节软骨。苏木精-伊红染色和甲苯胺蓝染色法检测各组膝关节病理学形态改变,采用酶联免疫吸附法测定关节液白细胞介素1β水平,免疫组化法检测白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达。结果与结论:治疗组和模型组关节液白细胞介素1β水平较对照组明显增高(P<0.01),治疗结束后治疗组关节液白细胞介素1β水平较模型组下降(P<0.05)。治疗组和模型组软骨组织Mankin评分较对照组明显增高(P<0.01),治疗结束后治疗组软骨组织Mankin评分较模型组下降(P<0.05)。治疗组和模型组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较对照组明显增高(P<0.01),治疗结束后治疗组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较模型组下降(P<0.05)。结果可见体外冲击波能下调膝骨关节炎软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达,促进Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的合成,从而对膝骨关节炎起防治作用。

白细胞介素12基因多态性与广西壮族人群骨关节结核易感性的关系

背景:研究提示白细胞介素12可能在骨关节结核发生中发挥免疫调节作用。目的:分析白细胞介素12A基因rs568408 G/A和白细胞介素12B基因rs3212227 A/C位点单核苷酸多态性与广西壮族人群骨关节结核易感相关性及其与骨关节结核患者血清白细胞介素12水平的关系。方法:采用单碱基延伸的PCR技术和DNA测序方法对150例骨关节结核患者(病例组)及165例健康体检者(对照组)rs568408和rs3212227位点进行多态性检测,分析各基因型以及等位基因的分布频率,各基因型与骨关节结核易感性的关系。结合已检测的血清白细胞介素12水平,分析2位点基因型与骨关节结核患者血清白细胞介素12水平的关系。结果与结论:白细胞介素12A基因rs568408 G/A位点和白细胞介素12B基因rs3212227 A/C位点在对照组与骨关节结核组中的基因型及等位基因频率分布差异无显著性意义(P>0.05)。2个位点的4种单倍型在对照组和骨关节结核组中的分布差异亦无显著性意义(P>0.05)。病例组rs568408位点野生型GG和GA+AA突变型间血清白细胞介素12水平比较差异无显著性意义(P>0.05),rs3212227位点野生型AA和AC+CC突变型间血清白细胞介素12水平比较差异无显著性意义(P>0.05)。说明白细胞介素12A基因rs568408 G/A和白细胞介素12B基因rs3212227 A/C位点多态性可能与广西壮族人群骨关节结核易感性无关。

耐力运动者白细胞介素6基因多态性与血清白细胞介素6水平的关联

背景:人的有氧耐力具有很高的遗传度,随着分子生物技术的发展,通过分子遗传标记的筛选,对基因诊断和预测有氧耐力具有重要的价值。目的:分析耐力运动者白细胞介素6基因单核苷酸多态性位点的分布特征,探讨其是否可以作为分子遗传标记?以及白细胞介素6基因多态性是否与血清白细胞介素6水平存在关联?方法:选取两组研究对象:(1)耐力组:从事耐力性项目(中、长跑,马拉松,竞走等)至少2年,且运动等级至少二级的北方平原汉族运动员,共78人;(2)对照组:北京市城区某中学学生(非肥胖或低体质量,12-15岁),共142人,父母及其本人均为北方平原汉族人。运用PCR-RFLP方法对白细胞介素6基因rs1800796(-572C/G)、rs2066992(1430T/G)、rs13306436(4477G/A)3个单核苷酸多态性位点进行等位基因分型;用ELISA法检测血清白细胞介素6水平。结果与结论:(1)耐力组-572C/G位点基因型分布存在性别差异(P <0.05),但女子耐力组与女子对照组基因型分布相比,P=0.095。其中,女子耐力组CC基因型占61.1%,CG+GG基因型占38.9%;女子对照组CC基因型占43.0%,CG+GG基因型占57.0%;(2)女子耐力组-572C/G位点CC基因型运动员血清白细胞介素6水平低于女子对照组(P <0.05)。另外,耐力组-572C/G位点CC基因型运动员血清白细胞介素6水平有低于对照组的趋势,P=0.070;(3)结果说明,白细胞介素6基因rs1800796多态性位点是女子耐力运动员的分子遗传标记。白细胞介素6基因rs1800796多态性位点CC基因型女子运动员血清白细胞介素6水平低于女子对照组。白细胞介素6基因rs1800796、rs2066992、rs13306436位点不能作为男性运动员的遗传分子标记,可能与样本量不够大有关,尚需进一步的研究。

体外培养人肠上皮细胞株接受脂多糖联合热打击后白细胞介素6、肿瘤坏死因子a的释放

背景:对于肠上皮细胞遭受高热和肠道细菌以及由细菌产生的内毒素等多重打击后经历了怎样的分子生物学变化,一直缺乏切实、可靠实验依据。目的:观察脂多糖联合热打击对人肠上皮细胞损伤及炎症因子白细胞介素6、肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子a释放的影响。方法:体外培养人肠上皮细胞株(SW 480),将3×105细胞种入实验用培养皿。实验分组为:对照组(37℃),热打击组(43℃2 h),脂多糖刺激组(1 mg/L脂多糖6 h),热打击联合脂多糖刺激组(43℃+脂多糖)。采用WST-1法观察细胞毒效应和细胞存活率;同时采用ELISA法观察各组炎症因子白细胞介素6和肿瘤坏死因子a水平。结果与结论:与对照组相比,热打击组具有细胞毒效应,其细胞活率明显下降,细胞炎症因子白细胞介素6和肿瘤坏死因子a水平也有所增高。脂多糖组单独作用也具有细胞毒效应,细胞活力、细胞增殖率也明显下降,同时白细胞介素6和肿瘤坏死因子a水平明显升高。而热打击和脂多糖联合打击后,可观察到两者的协同作用。结果说明,热打击和脂多糖单独作用均可引起细胞损伤,增加炎症因子白细胞介素6和肿瘤坏死因子a表达,并且二者之间存在协同效应。实验结果为理解重症中暑病理过程中,肠道功能障碍、肠道细菌和内毒素移位进而引发多脏器功能衰竭的病理机制提供了客观的实验依据。

肿瘤坏死因子α和白细胞介素2在大鼠皮肤移植中的作用

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF_α)和白细胞介素 2 (IL_2 )在同种异体大鼠皮肤移植后免疫排斥反应中的作用 ,研究组织工程皮肤的组织相容性。方法 取SD大鼠皮肤和实验室培养的组织工程SD大鼠皮肤移植于成年Wistar大鼠 ,移植成功后取不同时间点标本用免疫组织化学方法和Westernblot方法检测TNF_α和IL_2在组织中的表达。结果 同种异体皮肤移植组 ,TNF_α和IL_2有显著表达 ;组织工程皮肤移植后 ,局部组织中TNF_α和IL_2水平显著低于同种异体皮肤移植组。结论 TNF_α和IL_2水平的改变与同种异体皮肤移植后免疫排斥反应的发生密切相关 ,组织工程皮肤只具有很弱的免疫原性 ,不引起显著的排斥反应。

应用AdEasy腺病毒载体系统构建鼠白细胞介素10基因重组腺病毒

目的:AdEasy系统可在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒之间的高效同源重组,经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞获得重组病毒,极大简化了载体的构建过程。实验利用AdEasy腺病毒载体系统构建鼠白细胞介素10基因重组腺病毒。方法:实验于2006-08/2007-05在青岛大学医学院病毒学实验室完成。①实验材料:清洁级SD大鼠5只,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,骨架质粒pAdeasy-1,大肠杆菌BJ5183和DH10B,人胚肾293细胞均由青岛大学医学院微生物教研室罗兵教授惠赠。②实验方法:从脂多糖刺激培养的大鼠脾细胞中提取细胞总RNA,应用反转录多聚酶链反应技术扩增白细胞介素10cDNA,定向亚克隆至pAdtrack-CMV中构建腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-IL-10,酶切线性化后转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy的BJ5183大肠杆菌中,获得重组腺病毒质粒pAd-IL-10,Lipofectamin包装转染293细胞,获得重组腺病毒vAd-IL-10,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。将293细胞接种于96孔板中,每孔1×104个细胞,浓缩后的病毒贮存液按不同比例稀释加至培养板中,测定重组腺病毒滴度。用重组腺病毒vAd-IL-10感染293细胞3d后,以TRIzol一步法提取细胞总RNA,所获RNA加入DNaseⅠ消化处理可能污染的DNA后,PCR产物行琼脂糖电泳检测白细胞介素10 mRNA的表达。结果:①重组腺病毒的包装及滴度测定:经限制性内切酶转染293细胞16h后,荧光显微镜观察到细胞中有GFP荧光,可间接反映目的基因的表达。将病毒上清反复感染293细胞扩增重组腺病毒,通常传至第4～5代于接种病毒后24～48h,几乎可观察到所有细胞出现荧光,此时收获病毒,重组病毒命名为vAd-IL-10。vAd-IL-10滴度为5.5×108pfu/mL,vAd-GFP滴度为9.0×108pfu/mL。②目的基因RT-PCR产物的鉴定:提取重组腺病毒感染293细胞总RNA,RT-PCR扩增后琼脂糖电泳显示特异性580bp预计大小的片段,表明该重组腺病毒可在293细胞中有效转录。结论:利用AdEasy腺病毒载体系统成功构建了携带白细胞介素10基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度的重组腺病毒vAd-IL-10,可在293细胞中有效转录。