重楼总皂苷对热灭活大肠杆菌诱导大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNFα-及IL-1β的影响

目的:探讨重楼总皂苷对热灭活大肠杆菌诱导大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)分泌TNF-α、IL-1β的影响。方法:分离并纯化大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ),与重楼总皂苷共同孵育,2h后予热灭活大肠杆菌(终浓度3.5×107CFU/ml)诱导PMΦ释放TNF-α、IL-1β,以ELISA酶联免疫吸附测定法检测上清液中TNF-α、IL-1β浓度。结果:重楼总皂苷对热灭活大肠杆菌诱导PMΦ释放TNF-α、IL-1β具有显著的抑制作用(P<0.01)。结论:重楼总皂苷可以抑制腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β的活性。

屎肠球菌活菌和热灭活菌对RAW264.7细胞肿瘤坏死因子-α/白细胞介素-10平衡以及丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

本试验旨在通过体外试验研究益生菌屎肠球菌活菌和热灭活菌免疫调节作用的差异。试验分为2部分:1)研究屎肠球菌的类型、剂量和作用时间对RAW264.7细胞的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/白细胞介素-10(IL-10)平衡的影响。试验共设12个组,每个组6个重复。采用3因素2水平设计试验方案。因素1及水平:屎肠球菌类型,活菌或热灭活菌;因素2及水平:剂量,106或108 CFU/mL;因素3及水平:作用时间,3或6 h。在3和6 h作用时间下分别设置阴性对照(DMEM细胞基础培养液)和阳性对照[脂多糖(LPS),2μg/mL]。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞培养上清中TNF-α和IL-10含量,据此计算TNF-α/IL-10的比值。2)研究屎肠球菌活菌或热灭活菌对由LPS引起RAW264.7细胞的TNF-α/IL-10失衡的调节作用。试验共设8个组,每个组6个重复。对照组用DMEM细胞基础培养液处理细胞3 h,LPS组用LPS(2μg/mL)处理细胞3 h;LB-LPS或HB-LPS组先用屎肠球菌活菌或热灭活菌处理细胞3 h,再用LPS处理3 h;LPS-LB或LPS-HB组先用LPS处理细胞3 h,再用屎肠球菌活菌或热灭活菌处理3 h;LPS+LB或LPS+HB组用屎肠球菌活菌或热灭活菌与LPS同时共处理细胞3 h。采用ELISA法检测各组细胞培养上清中TNF-α和IL-10含量,然后计算TNF-α/IL-10的比值,用Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化p38(p-p38)以及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的蛋白相对表达量。结果表明:1)屎肠球菌类型、剂量、作用时间中的1个或多个因素极显著影响TNF-α或IL-10含量(P<0.01),或者TNF-α/IL-10比值(P<0.01),3个因素的两两或三者之间的交互效应因细胞因子而异。屎肠球菌热灭活菌对TNF-α分泌的诱导作用极显著弱于活菌(P<0.01),对IL-10含量的影响与活菌相似(P>0.05),对TNF-α/IL-10比值的影响小于活菌(P<0.05或P<0.01),且低剂量(106 CFU/mL)热灭活菌在作用时间较短(3 h)时能维持TNF-α/IL-10平衡。2)屎肠球菌活菌和热灭活菌分别通过促进IL-10分泌(P<0.01)和抑制TNF-α释放(P<0.01)来抵抗LPS对TNF-α/IL-10平衡的破坏作用,经热灭活菌预处理的细胞能够保持TNF-α/IL-10平衡不受LPS干扰。此外,屎肠球菌活菌和热灭活菌预处理细胞对LPS活化细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路没有产生显著影响(P>0.05),但热灭活菌预处理细胞极显著促进了LPS活化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路(P<0.01)。综上可知,屎肠球菌的类型和剂量是影响TNF-α/IL-10平衡的主要因素,而且屎肠球菌的类型与剂量、剂量与作用时间之间都有交互效应,低剂量热灭活菌且作用时间短才有利于维持TNF-α/IL-10平衡。活菌与热灭活菌以不同方式减轻LPS引起的TNF-α/IL-10失衡,但它们对MAPK信号通路的确切影响还有待进一步研究确定。

益气清热活血方不同制剂对创伤性肌肉损伤兔肌肉组织中水通道蛋白-1及血清白细胞介素-8表达水平的影响

目的探讨益气清热活血方的浸渍剂与巴布膏剂对创伤性肌肉损伤兔肌肉组织中水通道蛋白-1(AQP-1)及血清中白细胞介素-8(IL-8)表达水平的影响。方法将40只新西兰雄兔在适宜环境下饲养1周后随机分为空白组、模型组、浸渍组和巴布膏组,每组10只。空白组兔不给予任何干预措施;模型组、浸渍组和巴布膏组兔制备创伤性肌肉损伤模型。造模前对各组兔进行脱毛,造模成功后40 min,模型组兔用不含药物的巴布膏贴剂贴于患处10 h,每日1次;浸渍组兔用棉签蘸取适量清热益气活血浸渍液涂擦于患处,每日3次;巴布膏组兔用清热益气活血巴布膏贴剂贴于患处10 h,每日1次。分别于脱毛后、造模后及治疗24、72 h时对各组兔进行损伤症状评分。治疗24、72 h时,采用酶联免疫吸附试验法检测各组兔血清中IL-8水平,采用荧光定量聚合酶链式反应法检测各组兔肌肉组织中AQP-1 mRNA的相对表达量。结果脱毛后4组兔损伤症状评分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。造模后和治疗24、72 h时,模型组、浸渍组和巴布膏组兔损伤症状评分显著高于空白组(P<0.05);造模后、治疗24 h时,模型组、浸渍组和巴布膏组兔损伤症状评分比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗72 h时,浸渍组和巴布膏组兔损伤症状评分显著低于模型组(P<0.05),浸渍组与巴布膏组兔损伤症状评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白组兔不同时间点损伤症状评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、浸渍组、巴布膏组兔造模后及治疗24、72 h时的损伤症状评分均显著高于脱毛后(P<0.05)。模型组兔治疗24、72 h时的损伤症状评分与造模后比较差异无统计学意义(P>0.05);模型组兔治疗72 h时的损伤症状评分显著低于治疗24 h时(P<0.05)。浸渍组兔治疗24 h时的损伤症状评分与造模后比较差异无统计学意义(P>0.05);浸渍组兔治疗72 h时的损伤症状评分显著低于造模后(P<0.05);浸渍组兔治疗72 h时的损伤症状评分显著低于治疗24 h时(P<0.05)。巴布膏组兔治疗24、72 h时的损伤症状评分显著低于造模后(P<0.05);巴布膏组兔治疗72 h时的损伤症状评分显著低于治疗24 h时(P<0.05)。治疗24、72 h时,模型组、浸渍组、巴布膏组兔血清中IL-8水平均显著高于空白组(P<0.05)。治疗24 h时,浸渍组与模型组兔血清中IL-8水平比较差异无统计学意义(P>0.05),巴布膏组兔血清中IL-8水平显著低于模型组(P<0.05),巴布膏组与浸渍组兔血清中IL-8水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗72 h时,浸渍组、巴布膏组兔血清中IL-8水平显著低于模型组(P<0.05),巴布膏组与浸渍组兔血清中IL-8水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗24、72 h时,模型组、浸渍组、巴布膏组兔肌肉组织中AQP-1 mRNA相对表达量显著高于空白组(P<0.05)。治疗24 h时,模型组、浸渍组、巴布膏组兔肌肉组织中AQP-1 mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗72 h时,浸渍组和巴布膏组兔肌肉组织中AQP-1 mRNA相对表达量显著低于模型组(P<0.05),巴布膏组与浸渍组兔肌肉组织中AQP-1 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白组、模型组兔治疗24 h时与治疗72 h时血清中IL-8水平和肌肉组织中AQP-1 mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。浸渍组、巴布膏组兔治疗72 h时血清中IL-8水平和肌肉组织中AQP-1 mRNA相对表达量显著低于治疗24 h时(P<0.05)。结论创伤性肌肉损伤兔在自然条件下72 h后可缓慢修复,清热益气活血方的浸渍剂与巴布膏剂均可有效加快其修复,该作用可能与抑制AQP-1及IL-8的表达有关。

青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用

目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,AS)对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响。方法:采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠,于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察给药后7d内小鼠的死亡率;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,培养体系中预先加入不同浓度AS2h后,观察AS对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6情况。结果:AS可明显推迟热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡时间,并降低小鼠死亡率,死亡率由100%降低至50%(P<0.05)。预先加入的AS能明显抑制热灭活大肠杆菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,并呈明显量效关系。MTT实验结果显示24h内AS对细胞活力无影响。结论:AS对热灭活大肠杆菌攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制促炎细胞因子释放有关。

活血通络汤加减联合中药热奄包治疗血瘀型慢性非特异性腰痛的临床研究

目的 观察活血通络汤加减联合中药热奄包治疗血瘀型慢性非特异性腰痛(CNSLBP)的临床疗效及对患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、5-羟色胺(5-HT)水平的影响。方法 根据随机数字表法将2021年1月至2022年6月安徽中医药大学第一附属医院收治的80例血瘀型CNSLBP患者分为对照组和观察组,每组40例。对照组患者仅采用口服塞来昔布胶囊治疗,观察组患者采用活血通络汤联合中药热奄包治疗,两组患者均连续治疗2周。比较两组患者治疗后的临床疗效,治疗前后视觉模拟疼痛量表(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI),血清TNF-α、IL-1β、5-HT水平,以及简明健康状况量表(SF-36)评分。结果 观察组患者临床总有效率为92.50%(37/40),高于对照组的72.50%(29/40);较治疗前,治疗后两组患者VAS、ODI评分及血清IL-1β、TNF-α、5-HT水平均降低,观察组均低于对照组;两组患者SF-36评分均升高,观察组高于对照组(均P<0.05)。结论 活血通络汤加减联合中药热奄包治疗血瘀型CNSLBP患者的疗效显著,可通过明显减轻患者疼痛,恢复腰部功能,并抑制炎症反应,提高患者生活质量。

滋肾清热活血方治疗大鼠系膜增生性肾炎的实验研究

观察滋肾清热活血方对系膜增生性肾炎 (Ms PGN)的疗效 ,并探讨其机制。采用 SD大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型 ,分正常对照组、模型对照组 ,治疗组对比研究。观察肾小球系膜区情况及各组大鼠肾小球培养上清中白细胞介素 - 1(IL- 1)的活性等。结果 :治疗组与模型对照组比较 ,肾小球系膜细胞 (MC)的增生和系膜基质的积聚明显受到抑制 ,系膜区致密电子物沉积显著减轻 ;肾小球培养上清中 IL- 1活性显著降低。提示 :滋肾清热活血方能抑制 Ms PGN系膜区 MC的增殖及基质的积聚 ,其作用可能与抑制肾小球分泌的 IL-