2型糖尿病肾病患者血清白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β和超敏C反应蛋白的检测研究

目的研究2型糖尿病肾病患者(DN)血清白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)、白细胞介素-1β(IL-1β)和超敏C反应蛋白(hsCRP)水平,为进一步阐明DN的病理过程提供依据。方法选择87例2型糖尿病(T2DM)患者以及30例健康对照,根据尿白蛋白排泄量将糖尿病患者分为3组:<30mg/d的单纯DM组(33例),30～300mg/d的早期DN组(28例),>300mg/d的临床DN组(26例)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)以及免疫比浊法检测各组血清IL-1Ra、IL-1β和hsCRP水平,并比较各组差异。结果4组之间在平均年龄、性别比例、体重指数(BMI)等方面差异无显著性(P>0.05)。临床DN组患者血清IL-1Ra、IL-1β和hsCRP水平最高,分别为(387.4±55.3)pg/mL、(61.3±12.1)pg/mL和(8.26±1.87)mg/L,显著高于单纯T2DM、早期DN以及健康对照组[单纯DM组:(201.7±67.8)pg/mL、(15.8±6.0)pg/mL和(3.18±1.21)mg/L;早期DN组:(219.3±57.2)pg/mL、(29.1±8.1)pg/mL和(5.71±1.57)mg/L;健康对照组:(167.1±53.4)pg/mL、(12.4±2.6)pg/mL和(1.10±0.19)mg/L,P<0.05～0.001];且早期DN组血清IL-1β和hsCRP水平显著高于单纯T2DM和健康对照组(P<0.01～0.001)。IL-1Ra/IL-1β比值随病情进展而降低。DN组尿蛋白排泄量与血清IL-1Ra、IL-1β和hsCRP水平呈显著正相关(r=0.576、0.453和0.782,P<0.01～0.001),而与IL-1Ra/IL-1β比值呈显著负相关(r=-0.376,P<0.01)。结论2型糖尿病肾病患者血清IL-1Ra、IL-1β和hsCRP水平升高,并与病程相关。

微生物来源白细胞介素-1受体阻断剂2205A的筛选

目的 :对真菌 2 2 0 5的代谢产物进行活性跟踪研究 ,分离出具有拮抗白细胞介素 1受体活性的小分子化合物 2 2 0 5A。方法 :采用大孔吸附、溶媒萃取、硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱方法进行分离和纯化 ,以酶联免疫法进行活性跟踪 ,通过UV ,IR ,FABMS ,NMR和元素分析进行化合物的结构鉴定。结果 :分离得到的化合物 2 2 0 5A的相对分子质量为 2 80 ,根据波谱解析 ,确定其为已知化合物布雷菲德菌素A。结论 :通过白细胞介素 1受体阻断剂筛选模型筛选出活性物质布雷菲德菌素A 。

国产白细胞介素-1受体阻滞剂对胶原性关节炎大鼠淋巴细胞及巨噬细胞功能的影响

目的:观察国产白细胞介素-1受体阻滞剂(IL-1ra)对大鼠胶原性关节炎(CIA)的影响。方法:鸡Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA模型,关节评分法观察关节炎的发生情况;~3H-TdR掺入法检测T细胞、B细胞增殖反应;采用小鼠淋巴细胞增殖法检测IL-1活性;放免法检测大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)培养上清液肿瘤坏死因子(TNF)和前列腺素E_2(PGE_2)的含量。结果:CIA大鼠在致炎后d10,出现关节红肿,刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)诱导的T和B淋巴细胞增殖反应增强;PMφ产生IL-1,TNF-α,PGE_2的水平升高。IL-1ra(7.5,30,120mg·kg^(-1)·d^(-1))和阳性对照组(anakinra 120mg·kg^(-1)·d^(-1))sc,连续7d,均能减轻CIA大鼠关节局部炎症,降低关节评分;IL-1ra(30,120mg·kg^(-1)·d^(-1))能明显降低CIA大鼠过高的T淋巴细胞增殖反应,IL-1ra(7.5,30,120mg·kg^(-1)·d^(-1))能明显降低CIA大鼠B淋巴细胞增殖反应;降低CIA大鼠PMφ产生过高的IL-1,TNF-α及PGE_2水平。结论:IL-1ra对CIA大鼠淋巴细胞和巨噬细胞的增殖反应具有抑制作用。

白细胞介素-1受体阻滞剂滴眼液耐受性研究

目的:评价白细胞介素-1受体阻滞剂(IL-1Ra)滴眼液在中国健康人的安全性和耐受性。方法:依据其临床前安全资料确定初剂量及最大剂量,评价其安全性。采用单次给药、连续多次给药的方法,观察用药后生命体征、眼局部安全指标和全身安全性指标。结果:IL-IRa的耐受性试验未引起受试者全身、局部症状的异常,未引发不良反应症状。结论:IL-1Ra滴眼液在25～100μg·mL-1范围内,人体耐受性良好。推荐进行Ⅱ期临床试验的用药剂量及疗程为50μg·mL-1滴眼液qid,每次0．05 mL,共用药5 d。

白细胞介素-1受体拮抗蛋白诊断早期急性心肌梗死的临床价值

急性心肌梗死（AMI）的早期诊断对决定溶栓治疗起着十分重要的作用。对临床症状表现不典型、心电图呈非特异性改变的AMI患者,常用的心肌损伤标志物如肌红蛋白（Mb）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTnI）等对AMI早期诊断的灵敏度和特异性均不太理想〔1～3〕。

白细胞介素-1受体拮抗蛋白在诊断早期急性心肌梗死中的临床价值

目的检测期早期急性心肌梗死(AMI)血清白细胞介素-1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)表达情况,探讨其对于诊断AMI的临床价值。方法 84例AMI患者作为观察组,另外选取85例心绞痛患者作为对照1组,选取82例健康人作为对照2组,应用双抗体夹心酶联免疫法检测各组血清IL-1Ra表达水平,应用统计学软件对检测结果进行分析。结果观察组血清IL-1Ra表达水平显著高于对照1、2组,各组间IL-1Ra表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归模型分析显示临床诊断AMI的IL-1Ra最佳界值是210 pg/ml,以其为检测指标时,敏感性达85.71%,特异性达92.68%。结论 AMI患者早期血清中IL-1Ra表达异常升高,其可作为临床早期诊断AMI的重要标志物之一。

白细胞介素-10对急性肺损伤炎症/抗炎介质表达的影响

目的探讨白细胞介素10(IL-10)对急性肺损伤(ALI)大鼠炎症介质/抗炎介质表达的影响。方法向气道内滴注内毒素(LPS,10mg/kg)建立大鼠ALI模型。54只雄性SD大鼠随机分为对照组、LPS损伤组、LPS加IL-10组,每组18只,各组又分为2、6和24h3个亚组,每个亚组各6只。按各时间点观察大鼠动脉血氧分压(PaO2)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及分类计数、肺系数、BALF总蛋白水平及肺病理,同时用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测肺组织中炎症介质/抗炎介质的表达。结果1LPS损伤组大鼠PaO2呈进行性降低;肺系数、BALF总蛋白水平及BALF中细胞总数均明显增加,分类以中性粒细胞为主;肺病理示肺内中性粒细胞大量浸润,伴出血、透明膜形成。LPS加IL-10组的各项指标均较LPS损伤组减轻。2LPS损伤组肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达于2h达高峰,随后迅速下降;白细胞介素1β(IL1β)mRNA表达于2h显著升高,6h达高峰,随后迅速下降;IL-1受体拮抗剂(IL1ra)mRNA表达6h开始升高,且为峰值,24h仍高于对照组。LPS加IL10组肺组织TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达受抑,而IL-1ramRNA表达不受影响。结论1ALI早期TNFαmRNA、IL1βmRNA表达明显增加,而IL-1ramRNA表达滞后,提示在无外来干预情况下,ALI早期存在炎症介质/抗炎介质的失衡。

抗白细胞介素-1α抑制剂bermekimab治疗化脓性汗腺炎取得突破性成果

XBiotech公司宣布抗白细胞介素(IL)-1α抑制剂bermekimab治疗化脓性汗腺炎Ⅱ期临床试验取得突破性成果,包括不用抗生素且明显减轻疼痛。Ⅱ期临床试验为随机、双盲、安慰剂对照研究,在美国11个皮肤病研究中心进行,入选42名患者每周皮下注射该药400mg,共12周。患者分2组,一组是抗肿瘤坏死因子(TNF)治疗失效患者(n=24);另一组是未用TNF治疗的患者(n=18)。

慢性乙型肝炎核心抗体阳性与阴性患者外周血红细胞膜CR1分子和白细胞介素-2受体及Ig水平观察

目的:观察同为HBsAg阳性、HBeAg阳性和HBVDNA高复制,抗HBc阳性与抗HBc阴性的慢性乙肝患者的免疫指标,并探讨其临床价值。方法:把患者分为抗HBc阳性组和抗HBc阴性组,进行乙型肝炎病毒标志物(HBVM)、ALT、HBVDNA定量、白细胞介素2受体(sIL2R及mIL2R)、红细胞膜补体受体1型分子(CR1)的数量表达、血清IgM和IgG水平测定。结果:两组HBVDNA复制差异无显著性(P>0.05);血清ALT活性抗HBc阳性组显著高于抗HBc阴性组(P<0.01);两组sIL2R水平显著高于对照组(P<0.01),mIL2R的表达显著低于对照组(P<0.01);抗HBc阳性组血清sIL2R水平显著高于抗HBc阴性组(P<0.01),mIL2R的表达显著低于抗HBc阴性组(P<0.01);血清IgM和IgG水平均显著高于对照组(P<0.01),但两组差异无显著性(P>0.05);两组红细胞膜CR1分子表达显著低于对照组(P<0.01),抗HBc阳性组红细胞膜CR1分子表达显著低于抗HBc阴性组(P<0.01)。结论:两组患者细胞免疫和RCIA功能均降低,体液免疫呈“亢进”状态,抗HBc阳性组优为显著。本研究对指导慢性乙型肝炎患者的治疗和预后具有一定的价值。

白细胞介素-1及其阻断剂在青光眼滤过性手术后伤口愈合中的调控作用

青光眼滤过性手术中抗瘢痕药物的应用始终是眼科青光眼领域研究的热点。以丝裂霉素C(MMC)为代表的抗代谢药物的应用显著地提高了青光眼手术的成功率 ,同时 ,也产生了一些新问题 ,如结膜伤口漏、低眼压、低眼压性黄斑病变、眼内炎等 ,对青光眼患者本已损伤的视功能产生了新的威胁。基于此 ,近年来 ,细胞因子的研究逐渐成为该领域的一个新热点。本文就非甾体类抗炎药物白细胞介素

中枢白细胞介素-1受体参与应激镇痛

目的 :观察中枢白细胞介素 1(interleukin 1,IL 1)受体在足击镇痛及条件恐惧应激刺激诱发镇痛中的作用。方法 :本实验用脑室注射 (intracerebroventricularinjection ,icv)生理盐水 (normalsaline ,NS)或白细胞介素 1受体拮抗剂 (interleukin 1receptorantagonist,IL 1ra)并用热辐射甩尾测痛法检查IL 1ra对足击镇痛及条件恐惧应激刺激诱发镇痛效应的影响 ;结果 :(1)icvNS的大鼠 ,足击引起痛阈上升 ;而icvIL 1ra 30min后足击不引起明显的痛阈上升 ,但icvIL 1ra 90min后足击仍出现明显的痛阈上升。(2 )icvNS的大鼠 ,条件恐惧应激刺激也引起明显的痛阈上升 ,且该条件恐惧应激刺激诱发的镇痛效应能被icvIL 1ra明显衰减。 (3)icvIL 1ra本身对基础痛阈无明显影响。结论 :中枢IL 1受体参与足击及条件恐惧应激刺激诱发的镇痛效应。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂卡那霉素抗性菌种的构建、表达、纯化及质量鉴定

目的构建卡那霉素抗性的重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)菌种,并进行rhIL-1Ra蛋白的表达、纯化及质量鉴定,以降低β-内酰胺抗生素带来的风险。方法分别以氨苄抗性的质粒rhIL-1Ra(A-rhIL-1Ra)、pET-28a为模板,进行PCR扩增,获得线性化载体和卡那霉素基因片段,经同源重组构建卡那霉素抗性的质粒rhIL-1Ra(K-rhIL-1Ra),测序正确后转化E.coli BL21(DE3),构建重组工程菌,经IPTG诱导表达后,进行CM Bestarose Fast Flow、DEAE Bestarose Fast Flow两步柱层析纯化。收集纯化产物,15%SDSPAGE、分子排阻高效液相色谱法(size-exclusion high-performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、反相高效液相色谱法(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测纯度,串联质谱法检测质谱相对分子质量,Western blot法鉴定特异性,报告基因法检测生物学活性,液相色谱-质谱(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)法分析比对产品相关杂质。结果经菌落PCR及测序鉴定证明质粒K-rhIL-1Ra构建正确。表达的K-rhIL-1Ra蛋白相对分子质量约17000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%以上;两步纯化的K-rhIL-1Ra蛋白纯度分别为97%和99%,单体含量分别为99.33%和100%,色谱纯度分别为91.86%和96.96%,质谱相对分子质量与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致,可与小鼠抗人IL-1Ra单抗发生特异性反应;纯化的K-rhIL-1Ra蛋白生物学活性为1.29×10^(5)U/mg,相关蛋白化学修饰类型与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致。结论成功构建了K-rhIL-1Ra菌种,表达并纯化后的蛋白符合rhIL-1Ra的特征和质量标准,为rhIL-1Ra菌种变更及可比性研究奠定了基础。

1-(1,4-苯并二噁烷-2-羰基)-4-取代芳氧烷基哌嗪类α_1受体拮抗剂的合成及其生物活性

目的寻找新的1,4-苯并二烷类α1受体拮抗剂。方法选用1,4-苯并二烷为母核,以儿茶酚和取代苯酚为原料,分别经关环、水解、成酰胺、取代、成盐等反应合成目标化合物,并测定该类化合物α1受体拮抗活性。结果与结论设计合成了13个新化合物,结构经ESI-MS、1H-NMR、IR及HR-MS确证。初步药理活性实验表明,其中8个目标化合物的pA2值大于6.00,具有良好的α1受体拮抗活性,有进一步研究的价值。

IL-lra对IL-1β诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6的拮抗作用

目的 :研究白细胞介素 1受体拮抗剂对IL 1β所介导生物学功能的影响 ,为进一步临床应用提供理论依据。方法 :采用细胞培养技术和ELISA夹心法。结果 :经IL 1β单独作用 ,牙龈成纤维细胞培养上清液中IL 6含量明显增高 ,当一定浓度的IL lra与 1μg/LIL 1β共同作用人牙龈成纤维细胞后 ,培养上清液中IL 6的含量比单独IL 1β作用组低 .结论 :IL lra能够抑制IL l诱导的人牙龈成纤维细胞分泌IL 6。

白细胞介素-1受体相关激酶4小分子抑制剂的研究进展

白细胞介素-1受体相关激酶4 (interleukin-1 receptor associated kinase 4, IRAK-4)作为一种丝氨酸-苏氨酸激酶,是转导IL-1R家族和TLRs信号通路的关键信号节点。研究发现IRAK-4介导的炎症通路可以引起人体的关节、肠道、肝脏和神经系统的炎症反应及其他自身免疫疾病,也是一些癌症细胞的耐药性原因。因此, IRAK-4可以作为炎症疾病和癌症的有效治疗靶点。研发结构新颖的IRAK-4小分子抑制剂,考察其安全性和有效性,丰富对炎症和癌症疾病的临床治疗用药,是该通路药物发展的方向。本文按不同结构分类概述了关于IRAK-4信号通路小分子抑制剂的最新研究进展,旨在为相关药物的研发工作提供参考。

IL-1ra基因修饰角膜内皮细胞及其表达

目的构建真核细胞内表达的重组质粒PEGFPhIL1ra,对角膜内皮细胞进行基因修饰,为构建白细胞介素1受体拮抗剂(interleukin1receptorantagonist,IL1ra)基因化角膜内皮细胞移植膜奠定基础。方法以人cDNA文库为模板进行PCR扩增,获得人IL1racDNA片断,插入PEGFPC2载体,构建真核表达质粒PEGFPhIL1ra。以阳离子聚合物为介导,对饲细胞培养下的角膜内皮细胞(cornealendothelialcells,CECs)进行体外转染。通过绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)示踪检测转染效率,蛋白免疫印迹检测外源性IL1ra基因在角膜内皮细胞内表达强度。结果以cDNA文库为模板扩增出hIL1racDNA,通过酶切、DNA测序证实PEGFPhIL1ra构建正确。20%～25%的转染角膜内皮细胞中有绿色荧光。Westernblotting检测可见转染角膜内皮细胞内有相对分子量为44000的hIL1raGFP融合蛋白表达,3d时蛋白表达水平达到峰值,并且持续至5d,7d时表达水平开始回落,9d时表达处于较低水平,对照组在观察期内均未见蛋白表达。结论阳离子聚合物介导下重组质粒PEGFPhIL1ra可对角膜内皮细胞实现有效转染并且持续表达IL1ra蛋白。

白细胞介素-1受体拮抗剂基因多态性与缺血性卒中的关系

目的探讨在中国人群中,白细胞介素-1受体拮抗剂基因内含子2的变数串联重复(VNTR)多态性与缺血性卒中的关系。方法共收集了112例缺血性卒中患者(36例短暂性脑缺血发作,76例脑梗死)和105例年龄与性别相匹配的正常人或其他住院病人作为对照,通过聚合酶链反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳来确定其基因型。结果缺血性卒中患者A2等位基因频率要低于对照组(分别为0.049和0.105,χ2=4.78,P=0.029),A1/A2+A2/A2基因型的频率也比对照组低(分别为0.098和0.200,χ2=4.47,P=0.035)。缺血性卒中亚组间的分析发现,短暂性脑缺血发作组与对照组的基因型及等位基因频率没有差别,而脑梗死组与对照组则有显著差别。脑梗死组A2等位基因频率明显低于对照组(分别为0.026和0.105,P=0.004,OR=0.23,95%CI为0.08￣0.69)。结论白细胞介素-1受体拮抗剂内含子2基因VNTR多态性与缺血性卒中有关,其A2等位基因对缺血性卒中特别是脑梗死可能有保护作用。

白细胞介素-1受体拮抗蛋白间接体内转基因对骨关节炎软骨细胞凋亡的抑制作用

目的通过白细胞介素-1受体拮抗蛋白(IL-IRa)间接体内转基因治疗试验性兔骨关节炎,探讨IL-IRa对兔膝关节软骨细胞凋亡的抑制作用.方法①30只新西兰大白兔随机分成3组,左膝关节部分滑膜切除,分离并培养滑膜成纤维细胞.②用携带标记基因或IL-IRa基因的逆转录病毒分别转染从第2组或第3组兔膝关节分离出来的滑膜细胞.③兔右膝关节前交叉韧带横断术(ACLT)建立骨关节炎模型.④把自体滑膜细胞回输第1组兔右膝关节腔内,再把转染标记基因或IL-IRa基因的自体滑膜细胞回输第2组或第3组兔右膝关节腔内.⑤2、4周后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测关节液中IL-IRa水平.⑥TUNEL末端荧光标记法测关节软骨细胞凋亡发生率.结果第3组兔膝关节液中IL-IRa水平,在基因转入关节腔后第2周时为(20.6±1.8)ng/ml,第4周时为(4.82±0.52)ng/ml;而2、4周时,第1、2组中IL-IRa水平均极低.第3组软骨细胞凋亡被抑制,仅有18%发生细胞凋亡,而在第2组关节软骨细胞近40%发生细胞凋亡,正常对照组中只有2%～5%的软骨细胞发生凋亡.结论本试验证明关节腔内注入体外转染IL-1Ra基因的自体滑膜细胞,即IL-1Ra间接体内转基因治疗,能使关节腔局部IL-1Ra水平明显升高,使关节软骨细胞凋亡受到抑制.