基于NF-κB信号通路探讨类风湿性关节炎炎性反应的研究进展

核转录因子κB(NF-κB)信号通路是典型的促炎信号通路,通过在炎性反应中诱导促炎细胞因子表达以发挥促炎作用。过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)是炎性反应的重要调节因子,可通过直接或间接的竞争性抑制作用,抑制NF-κB的信号通路,从而抑制促炎细胞因子产生。类风湿性关节炎(RA)是一种慢性炎症性疾病,炎性反应是其发病的核心环节。该文基于NF-κB信号通路探讨RA炎性反应机制。

不同潮气量机械通气对大鼠肺Toll样受体4及其相关信号链酶表达的影响

目的探讨Toll样受体4(TLR4)及其相关信号链酶在不同潮气量机械通气大鼠肺组织中的表达变化。方法按随机数字表法将40只SD大鼠分为5组,每组8只。A组仅切开气管保留自主呼吸,B1组和B2组以潮气量6 mL/kg分别通气1 h和2 h,C1组和C2组以潮气量30 mL/kg分别通气1 h和2 h。A组在气管切开即刻,其余各组在机械通气结束时处死大鼠。光镜下观察各组大鼠肺组织病理改变,免疫组化法检测肺组织中TLR4、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)及核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达,RT-PCR检测TLR4 mRNA的表达,测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)的活性,计算肺湿干重比值(W/D比值),ELISA法测定支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。结果 A组、B1组、B2组之间肺组织TLR4 mRNA表达,TLR4、TRAF6、IRAK4、NF-κBp65蛋白的表达,W/D比值,MPO活性和TNF-α浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。与相应B1、B2组比较,C1、C2组TLR4 mRNA和TLR4、TRAF6、IRAK4、NF-κBp65蛋白表达明显上调,W/D比值、MPO活性和TNF-α浓度明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。随通气时间延长,C2组各指标较C1组改变更为明显(P<0.05)。结论 TLR4及其相关信号链酶在肺组织中的表达参与了机械通气相关性肺损伤的发生与发展。

宣肺止嗽方对COPD模型大鼠IL-17信号通路的影响

目的:探讨宣肺止嗽配方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠白细胞介素-17(IL-17)信号通路的影响。方法:将60只Wistar大鼠随机分为空白组10只和造模组50只,采用气管滴注脂多糖联合被动烟熏建立COPD模型大鼠。造模成功后采用随机数字表法分为模型组、地塞米松组、宣肺止嗽方高、中、低剂量组(3.6、1.8、0.9 g·kg^(-1)·d^(-1))。空白组和模型组给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)生理盐水灌胃,宣肺止嗽方各干预组灌胃给药,地塞米松组给予2.57×10^(-4)g·kg^(-1)·d^(-1)地塞米松灌胃,持续治疗28 d。肺功能检测仪进行肺功能指标水平测定;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、IL-17、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;免疫组化(IHC)检测肺组织IL-17A、白细胞介素-17受体A(IL-17RA)、核转录因子-κB激活剂1(Act1)、肿瘤坏死因子相关因子6(TRAF6)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及磷酸化阳性表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定肺组织IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6 mRNA的情况。结果:与空白组比较,模型组血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-1β、TNF-α含量明显升高(P<0.05),肺功能流速指标和容量指标明显下降(P<0.05),时间指标和其他指标均明显升高(P<0.05),肺组织IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6mRNA和蛋白水平及下游NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-p38 MAPK阳性表达均明显升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-1β、TNF-α含量均有不同程度的降低(P<0.05),肺功能指标均有不同程度的改善(P<0.05),宣肺止嗽方高、中剂量组IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6 mRNA和蛋白水平及下游NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-p38 MAPK阳性表达明显减弱(P<0.05)。结论:宣肺止嗽方能有效对抗COPD炎症反应,其机制可能与下调IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6蛋白表达,进而抑制下游NF-κB、p38 MAPK信号通路,减少IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、IL-1β的释放,进而减轻气道炎症反应有关。

大黄灵仙方调控TAK1与TRAF6相互作用及共定位对胆管细胞炎症反应的影响

目的:观察大黄灵仙方(DHLX)对大鼠胆管上皮细胞的修复作用,探讨其作用机制是否通过调节转化生长因子-β(TGF-β)激活激酶1(TAK1)与肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的相互结合,调控核转录因子-κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化而发挥作用。方法:将20只SD大鼠随机分为正常组和DHLX组,分别予生理盐水及DHLX(320 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃8 d,制备正常血清及含DHLX血清;从正常SD大鼠中提取胆管上皮细胞,取胆管上皮细胞分为9组:正常组、模型组(20 mg·L^(-1))、脂多糖(LPS)+DHLX组(20 mg·L^(-1)+10%含药血清)、LPS+PDTC组(20 mg·L^(-1)+200μmol·L^(-1))、LPS+SB203580组(20 mg·L^(-1)+0.5μmol·L^(-1))、LPS+PDTC+SB203580组(20 mg·L^(-1)+200μmol·L^(-1)+0.5μmol·L^(-1))、LPS+PDTC+DHLX组(20 mg·L^(-1)+200μmol·L^(-1)+10%含药血清)、LPS+SB203580+DHLX组(20 mg·L^(-1)+0.5μmol·L^(-1)+10%含药血清)、LPS+PDTC+SB203580+DHLX组(20 mg·L^(-1)+200μmol·L^(-1)+0.5μmol·L^(-1)+10%含药血清);显微镜下观察药物干预后各组细胞的形态学变化,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白细胞介素(IL)-1β与IL-6的表达量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中TAK1与TRAF6蛋白表达水平,免疫共沉淀技术检测TAK1与TRAF6的相互作用,激光共聚焦显微镜观察TAK1与TRAF6在细胞中的分布及共定位情况。结果:LPS作用后,细胞突触减少,胞体变圆变小,用药后各组细胞形态趋向正常;与正常组比较,模型组IL-1β和IL-6表达量明显上升(P<0.05),TAK1表达量降低而TRAF6的表达量升高(P<0.05),TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量呈降低趋势;与模型组比较,LPS+DHLX组IL-1β和IL-6表达量明显降低(P<0.05),TAK1表达量升高而TRAF6表达量降低(P<0.05),TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量显著增加(P<0.01),两蛋白共定位于细胞质中;与LPS+DHLX组比较,其余各组IL-1β和IL-6表达量均明显降低(P<0.05,P<0.01),通路阻滞剂干预后各组TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量明显降低(P<0.05),通路阻滞剂联合DHLX干预后各组TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量明显增加(P<0.05),两蛋白在细胞质中存在共定位但不明显。结论:在LPS诱导的胆管细胞炎症反应中,TAK1与TRAF6相互结合呈减弱趋势,大黄灵仙方可逆转此现象,其作用机制可能与促进TAK1与TARF6的相互结合从而抑制NF-κB/MAPK信号通路活化有关。

伸筋草总生物碱改善大鼠类风湿性关节炎的机制研究

目的通过白细胞介素-1受体相关激酶(IRAK1)/肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF6)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨伸筋草总生物碱治疗类风湿性关节炎(RA)的机制。方法注射弗氏佐剂建立RA模型。将实验大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组和伸筋草高、低剂量组,每组10只。给药21 d后,采用容积排水法测定各组大鼠右踝关节肿胀程度;Western Blot法测定大鼠踝关节滑膜组织IRAK1、TRAF6、NF-κB p65蛋白表达;Elisa法测定血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果与模型组比较,伸筋草高、低剂量组大鼠踝关节肿胀程度明显降低(P<0.05),滑膜组织IRAK1、TRAF6和NF-κB p65蛋白表达显著下调(P<0.05);伸筋草高剂量组大鼠血清中IL-1β和IFN-γ水平显著下降(P<0.05),伸筋草低剂量组IL-1β水平明显降低(P<0.05),IFN-γ水平可见下降趋势。结论伸筋草总生物碱可降低RA大鼠踝关节的肿胀,其作用机制与抑制IRAK1/TRAF6/NF-κB信号通路及其下游炎性因子的分泌密切相关。