抗重组人白细胞介素-12单克隆抗体的制备及初步应用

目的制备抗重组人白细胞介素-12(rhIL-12)单克隆抗体(McAb),并建立检测IL-12的双抗体夹心ELISA方法。方法以纯化的rhIL-12(p70)免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测胃癌患者术前、术后血清IL-12水平的变化。结果筛选出3株稳定分泌抗rhIL-12的单抗杂交瘤细胞株,纯化后单抗纯度达95%以上。免疫球蛋白亚类2株为IgG1,1株为IgG2a,轻链属!型,相对亲和力依次为EM5>EM6>EV9。Western blot及ELISA交叉试验表明,单抗具有良好的特异性。建立的双抗体夹心ELISA方法检测rhIL-12的最低检出限为20pg/ml,线性范围为25～3200pg/ml。应用此法检测胃癌患者术前血清IL-12水平较正常对照组明显降低,术后10d明显升高。术后给予免疫增强型NE组IL-12水平较未给予组明显升高。结论制备的抗rhIL-12单克隆抗体,能够用于IL-12的体内外免疫学检测,为IL-12的研究、检测及临床应用奠定了基础。

抗白细胞介素-12单克隆抗体阻断慢性实验性结肠炎发生

目的 探讨抗白介素 12 (IL 12 )单克隆抗体治疗实验性慢性结肠炎的机制。方法 用严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠 ,植入同基因源性CD4 5RBhighCD+4 T细胞 ,诱导慢性结肠炎 ,并进行抗IL 12单克隆抗体治疗和观察IL 12在慢性结肠炎中的病理生理作用。结果 在T细胞植入 4周后结肠组织内IL 12P4 0 mRNA含量明显升高 ,抗IL 12单克隆抗体有效地阻断了慢性结肠炎的发生 ,降低了结肠粘膜内CD4 +T细胞和巨噬细胞浸润 ,并抑制肠粘膜内固有层CD4 +T细胞分泌IL 2和IFN γ。结论 IL 12参与了慢性实验性结肠炎的病理生理过程 ,阻断IL

抗白细胞介素-5单克隆抗体治疗哮喘效果的Meta分析

目的:系统评价抗白细胞介素-5(IL-5)单克隆抗体治疗哮喘的临床效果。方法:在PubMed、Embase和Cochrane对照试验中央注册中心检索有关抗IL-5单克隆抗体治疗哮喘的随机对照试验文献,检索时间为截至2024年3月,对数据采用CMA 2.0软件进行Meta分析。结果:纳入21篇文献,共8717例患者,试验组4593例,对照组4124例。Meta分析结果显示,在第1秒用力呼气容积(FEV1)、哮喘生活质量问卷评分、不良事件发生情况方面,试验组优于对照组。结论:抗IL-5单克隆抗体治疗哮喘的临床效果较好,可改善患者FEV1、生活质量,且安全性较高。

~188Re-抗CEA单克隆抗体与白细胞介素12基因抗结肠癌协同效应

目的在非免疫缺陷荷结肠癌动物模型上观察^(188)Re-抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体(C50)与白细胞介素12(ILl2)基因抑制肿瘤生长的协同作用。方法建立小鼠荷结肠癌动物模型,随机分组后分别施以化疗(CT)、^(188)Re-C50放射免疫治疗(RIT)、IL12基因治疗(GT)及 RIT 与 IL12GT 联合治疗,治疗后3周比较上述各组及对照组(注射生理盐水)的抑瘤效果,同时采用酶联免疫吸附法检测 GT、RIT 及 GT+RIT 3组血清 IL12水平;并于治疗6 h 时采用流式细胞仪检测3组小鼠肿瘤不同周期细胞比率。结果不同治疗后3周各组肿瘤体积、质量比较示,RIT 组与 RIT+GT 组肿瘤体积和质量均明显低于 CT 组和对照组(P<0.01),RIT、RIT+GT 两组间差异有显著性(P<0.01)。血清 IL12水平以 RIT+GT 组最高,与 GT 和 RIT 两组相比差异有显著性(P<0.01)。RIT、GT 和 RIT+GT 3组肿瘤 S 期细胞分别占10.41%、27.53%和6.25%,G_0～G_1期细胞分别占68.60%、53.54%和72.21%;而对照组分别为33.14%和35.12%。结论 ^(188)Re-C50与 IL12基因联合可有效抑制肿瘤生长,疗效优于单独 CT、RIT 及 IL12 GT;RIT+GT 可明显降低肿瘤 S 期细胞比率,并增加 G_0～G_1期细胞比率;^(188)Re-C50可上调 IL12基因表达。

抗白细胞介素-8单克隆抗体乳膏治疗寻常型银屑病的临床研究

目的:观察新型抗白介素-8单克隆抗体乳膏外用治疗银屑病的疗效和安全性。方法:选取84例寻常型银屑病患者外用抗白介素-8单克隆抗体乳膏治疗8周,观察不良反应及皮损大小、颜色、肥厚、鳞屑等变化,以判断安全性和疗效。结果:治疗8周后,11例基本痊愈,41例显著改善,痊愈率和有效率分别为13.1%和61.9%;其中点滴型的痊愈率和混合状的有效率最高,而进行期的痊愈率和有效率均高于静止期;其中只有1例出现轻度不良反应。结论:抗白介素-8单克隆抗体乳膏治疗寻常型银屑病有较好的临床疗效和安全性。

白细胞介素-10联合抗CD_(40)L单克隆抗体对大鼠小肠移植早期排斥反应的研究

目的探讨重组大鼠白细胞介素-10(rIL-10)联合抗大鼠CD40L单克隆抗体对抑制大鼠小肠移植早期排斥反应的作用,为小肠移植免疫提供实验依据。方法将30只雄性SD大鼠和Wistar大鼠(各15只),建立(SD→Wister)大鼠小肠移植模型,随机分为A、B、C3组各10只。A组为生理盐水对照组;B组应用rIL-10;C组应用rIL-10联合抗CD40L单克隆抗体。3组均于术后第2天开始注射。术后第5、7天从3组随机各取5只,取小肠移植物,行组织病理学检查;采受体大鼠的外周血检测IL-2、干扰素-γ(INF-γ)表达水平。结果组织病理学检查:与A组相比,B、C组早期排斥反应明显延迟,且C组早期排斥反应较B组轻;外周血血清学检测:B、C组受体大鼠血清IL-2、INF-γ较A组明显降低,且C组较B组均有不同程度的下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 rIL-10联合抗大鼠CD40L单克隆抗体能有效抑制大鼠小肠移植的早期排斥反应。

血清白细胞介素-6、白细胞介素-12、白细胞介素-17水平与胃癌化疗患者预后关系研究

目的:分析血清白细胞介素(IL)-6、IL-12、IL-17水平与胃癌化疗患者预后的关系。方法:收集109例接受化疗干预的胃癌患者临床资料,根据患者的预后情况将其分为预后良好组(n=68)与预后不良组(n=41)。记录并统计患者临床资料,经Pearson相关性分析血清IL-6、IL-12、IL-17水平与胃癌患者化疗预后的关系;经Logistic回归分析探讨影响胃癌化疗预后的影响因素;经受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IL-6、IL-12、IL-17水平对胃癌患者化疗预后的预测价值。结果:预后不良组年龄及血清IL-6、IL-17水平均较预后良好组高,而IL-12水平较预后良好组低(均P<0.05);经Pearson相关性分析显示,血清IL-6、IL-17水平均与胃癌化疗患者不良预后呈正相关,血清IL-12水平与胃癌化疗患者不良预后呈负相关(均P<0.05);经Logistic回归分析显示,血清IL-6、IL-17水平异常升高均为影响胃癌化疗预后的独立危险因素,而血清IL-12水平升高为影响胃癌化疗预后的保护因素(均P<0.05);经ROC曲线分析显示,血清IL-6、IL-12、IL-17水平均对胃癌化疗预后具有较好预测价值,其中以血清IL-17的预测价值相对最好(均P<0.05)。结论:胃癌化疗患者血清IL-6、IL-17水平越高,IL-12水平越低,其不良预后发生风险也相对越高,通过监测上述指标水平有利于早期辅助临床预测患者预后情况。

人白细胞介素-2单克隆抗体的研究

应用杂交瘤技术获得6株抗人白细胞介素-2单克隆抗体细胞株，并对其特性进行分析，各单抗滴度不一，有的高达10(16)，有的则在1∶10左右，大多数（5种）为IgG型，少数（1种）为IgM型。单克隆抗体与纯化的IL－2有明显的特异性吸附（P＜0．01）。有4种单克隆抗体有相同的吸附位点，另外2种至少有3个吸附位点，位阻表现不一。

抗重组人白细胞介素12单克隆抗体的制备及其生物学特性

目的:以纯化的重组人白细胞介素12(rhIL-12)蛋白为抗原,制备具有生物活性的rhIL-12单克隆抗体(McAb),并对其特性进行研究鉴定,为肿瘤及免疫相关性疾病的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具。方法:以纯化的rhIL-12p70免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术,用间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及多次克隆化,培养制备杂交瘤细胞系,用clutathione sepharose 4B进行纯化。采用间接ELISA及Western blotting等方法对McAb的Ig亚类(型)腹水效价及特异性进行鉴定。结果:建立了3株持续分泌rhIL-12p70McAb的杂交瘤细胞株,3株细胞染色体数目均为100条左右,证实为杂交瘤细胞,所分泌的抗体为2株IgG1亚类及1株IgG2a亚类,轻链属k型,小鼠腹水效价测定分别为1∶5.9×106、1∶2.9×107、1∶3.6×107,亲和力依次为EM5>EM6>EV9。结论:成功地制备了3株能稳定分泌抗rhIL-12p70的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高。

抗白细胞介素-6受体单克隆抗体的制备

用白细胞介素-6（IL－6）依赖性人多发性骨髓瘤细胞株XG-1作为免疫原，我们成功地制备获得一株分泌抗人IL－6受体单克隆抗体的杂交瘤，命名为SI15。夹心ELISA和位点竞争试验表明，SI15和抗人IL－6受体单克隆抗体M19识别IL－6受体上的同一位点，对IL－6受体的生物学活性无影响。

重组牛白细胞介素4的原核表达及其单克隆抗体研制

目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBoIL-4的单克隆抗体(mAb)。方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BoIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定。以纯化的融合蛋白rHis-BoIL-4为免疫原,用纯化的rGST-BoIL-4为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIL-4的mAb。结果:获得表达BoIL-4基因的重组菌BL21(pGEX-6p-1-BoIL-4)和BL21(DE3)(pET-BoIL-4),重组蛋白相对分子质量(Mr)的大小分别为39 000和19 000,且以包涵体的形式存在。获得7株可稳定分泌抗rBoIL-4 mAb的细胞株,命名为2B8、4A10、5D6、5D8、7G10、8B7和10F8,这些mAb腹水的效价依次为5 000、160 000、10 000、640 000、5 000、40 000和40 000,mAb亚类均为IgG1。Dot-ELISA的结果表明,7株mAb只与融合蛋白rHis-BoIL-4和rGST-BoIL-4起反应,而不与其他重组细胞因子和对照细菌起反应,显示出良好的特异性。Western blot试验显示,7株mAb均能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性条带。同时7株mAb均能与BoIL-4的标准品起反应。结论:7株抗rBoIL-4的mAb均具有高度的特异性,为进一步研究其在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础。

抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究

目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。

白细胞介素-12家族在缺血性脑卒中发生发展中的作用机制研究

目前研究表明炎症反应和免疫功能异常对缺血性脑卒中的发生发展起重要作用,发现白细胞介素(IL)-12家族参与多种慢性炎症性疾病,对动脉硬化形成起关键作用,其可增强免疫反应和(或)抑制免疫功能。本文对IL-12家族的细胞因子在缺血性脑卒中中的作用现状进行简述,可能为缺血性脑卒中患者的预后判断和治疗方面提供新的参考。

兔白细胞介素-10基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

白细胞介素-10(IL-10)是一种多功能的细胞因子,参与免疫调节和抗炎反应。本研究旨在克隆并表达IL-10基因,以制备兔IL-10多克隆抗体。运用RT-PCR技术从新西兰白兔脾脏总RNA中扩增IL-10基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-32a并转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,融合蛋白经纯化后免疫豚鼠制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性。结果表明:克隆得到了兔IL-10基因,大小为537bp,经核苷酸测序与GenBank已登录的基因序列(NM_001082045)相似性为99%;重组载体pET-IL-10构建成功;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶56 000,且具有很高的特异性。成功实现了兔IL-10基因的原核表达,并制备了豚鼠抗兔IL-10多克隆抗体,为深入研究兔IL-10基因的功能奠定了基础。

抗人白细胞介素8单克隆抗体乳膏治疗湿疹的随机双盲对照临床试验

目的：评价抗人白细胞介素8(IL-8)单克隆抗体乳膏治疗湿疹的疗效及安全性。方法：以乳膏基质为对照,对64例湿疹病人进行随机双盲用药,试验组32例,对照组32例,每日早晚各外用1次,连续3 wk,观察其疗效和不良反应。结果：经过3 wk治疗,试验组和对照组痊愈率分别为25%和3%,有效率分别为47%和9%,临床疗效2组差异有显著意义(P＜0.05),试验组优于对照组,2组不良反应发生率相似(P＞0.05)。结论：抗人IL-8单克隆抗体乳膏治疗湿疹安全、有效。

抗白细胞介素6单克隆抗体抑制小鼠心脏移植急性排斥反应及其机制

目的观察抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6monoclonal antibody,anti-IL-6mAb)对同种异体小鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用,并探讨其可能作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移植模型组、移植对照组(注射rat-IgG)和移植治疗组(注射anti-IL-17mAb或anti-IL-6mAb)。观察各组移植心脏存活时间并检测病理组织学改变;Real-time PCR检测各组移植心脏中细胞因子IL-17、干扰素-γ(IFN-γ)及Th17细胞特异性转录因子RORγt mRNA表达水平,流式细胞术检测各组受鼠脾脏CD4+、CD8+T细胞中IL-17、IFN-γ的表达水平。结果①anti-IL-6mAb、anti-IL-17mAb输注均可显著抑制小鼠急性排斥反应的发生,移植心脏存活时间分别延长至(22.0±2.3)d、(13.0±1.8)d,anti-IL-6mAb组抑制排斥反应发生的效果更加显著。组织病理学结果显示anti-IL-6mAb组排斥反应病理分级明显下降(Stanford 2级);②anti-IL-6mAb组移植心脏中IL-17、IFN-γ和RORγt mRNA的转录水平较rat-IgG对照组及移植模型组显著下降,anti-IL-17mAb输注可部分下调IFN-γmRNA的转录水平;③anti-IL-6mAb组受鼠脾脏CD4+及CD8+T细胞中IFN-γ+的比例均有不同程度的下降,且CD4+IFN-γ+T细胞较CD8+IFN-γ+T细胞下降更为明显,同时CD4+IL-17+T(Th17)细胞的比例在anti-IL-6mAb组中亦明显下降。结论 anti-IL-6mAb可有效抑制急性排斥反应小鼠体内Th17和Th1细胞的活化,并延长同种异体心脏移植物的存活时间。

猪白细胞介素-12的分子克隆与序列测定

为研究白细胞介素－１２在机体免疫应答中的作用，从猪外周血提取单个核细胞（ＰＢＭＣｓ），用含ＬＰＳ的培养基培养细胞，从培养２ ｈ和１２ ｈ的活化细胞中分别提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出编码猪ＩＬ－１２两个亚基的基因，其大小分别为７２０ ｂｐ（Ｐ３５）和１ ０４４ ｂｐ（Ｐ４０），将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，回收纯化，用ＳａｃＩ和ＳａｌＩ双酶切后，分别将其连接至ｐＵＣ１８质粒上，进行质粒ＰＣＲ和ＳａｃＩ、ＳａｌＩ双酶切鉴定后筛选阳性克隆，并进行序列测定和分析。序列分析表明Ｐ３５基因开放阅读框含有６６９个核苷酸，序列与人、小鼠和羊同源性分别为７９．２％，３７．６％ ，８６．１％，Ｐ４０基因开放阅读框含有９７５个核苷酸，与人和小鼠、羊基因序列的同源性分别为７９．５％，５３．１％，８４．３％。结果表明克隆到了猪白细胞介素－１２ Ｐ３５和Ｐ４０两个亚基的基因，得到的Ｐ３５基因序列与国外报道完全一致，Ｐ４０基因序列与发表的序列有４个碱基差异，提示Ｐ４０基因可能存在多态性。

白细胞介素-6单克隆抗体的制备、鉴定及其初步应用

目的研制亲和力高、特异性好的IL-6抗体,建立稳定可靠的IL-6测定方法,用于心血管病人的辅助诊断、治疗监测和预后判定.方法用基因重组技术构建IL-6表达载体,经高效表达并纯化得到IL-6蛋白,以其作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体.单克隆抗体经鉴定后,选择针对不同抗原决定簇的单抗配对建立双抗体夹心ELISA方法检测IL-6浓度.另外选择了70例正常人(年龄25～57岁,男55例,女15例)和83例冠心病人(年龄45～68岁,男62例,女21例),检测其血浆中IL-6浓度.结果筛选出4株稳定分泌抗IL-6抗体的杂交瘤细胞株3C12,3D11,4C1,1G6,IgG亚类鉴定3C12,3D11,4C1均为IgG1,1G6株大部分为IgG1,少部分为IgG2b.抗体亲和常数分别为7.9×108,3.8×108,4.8×108,2.3×109,免疫印迹证实单抗特异性识别IL-6细胞裂解产物,相加实验表明4株单抗是针对不同的抗原决定簇,组成配对双抗体夹心ELISA,检测最高灵敏度为10pg/ml,可检测范围为20pg/ml～5ng/ml.70例正常人血浆中IL-6含量207±280pg/ml((-x)±s),83例冠心病病人血浆中IL-6含量711±656pg/ml((-x)±s),p＜0.0001,95%正常值范围0～755pg/ml.以正常人均值加两倍标准差作为标准,正常人高IL-6率4.3%(3/70),冠心病病人高IL-6率31.3%(26/83),p＜0.01.结论4株杂交瘤细胞株特异性好、亲和力高,组成夹心ELISA法可用于定量检测IL-6浓度.冠心病人IL-6明显高于正常人.

双氢青蒿素对脑胶质瘤小鼠血清白细胞介素-10和白细胞介素-12表达的影响

目的:探讨双氢青蒿素是否能调节脑胶质瘤小鼠血清中白细胞介素-10(IL-10)与白细胞介素-12(IL-12)的表达及其作用机制,讨论双氢青蒿素潜在的药物价值。方法:应用C6胶质瘤干细胞立体定向法构建脑胶质瘤小鼠模型,并用双氢青蒿素干预,分为对照组、模型组、双氢青蒿素低剂量组和双氢青蒿素高剂量组,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测各组小鼠血清IL-10和IL-12水平。结果:与正常组相比,模型组的血清中IL-10和IL-12的含量均显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,双氢青蒿素低剂量组血清中IL-10和IL-12的水平均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),双氢青蒿素高剂量组小鼠血清中的IL-10和IL-12的水平也明显下降,且下降程度比双氢青蒿素低剂量组的更为突出。结论:双氢青蒿素能降低由立体定向法建立的脑胶质瘤小鼠血清IL-10、IL-12的表达水平,双氢青蒿素可能通过某些信号通路来调控血清中IL-10、IL-12,进而影响脑胶质瘤的免疫反应或炎性反应情况,使得脑胶质瘤的症状减轻。