TGF-β诱导肺脏癌相关成纤维细胞高表达IL-17D并促进MDSC募集

目的:探讨TGF-β诱导肺脏癌相关成纤维细胞(CAF)表达IL-17D,并促进骨髓来源的抑制性细胞(MDSC)募集的关键机制。方法:采用C57BL/6小鼠建立B16黑色素瘤细胞肺癌转移模型(肿瘤模型组),另设对照组,每组6只。应用流式细胞术(FACS)检测肿瘤小鼠肺脏CAF及其分泌IL-17D能力和MDSC比例的变化;采用ELISA和RT-qPCR检测肺肿瘤TGF-β水平的改变;FACS分选肺脏成纤维细胞,采用RT-PCR技术检测TGF-β对成纤维细胞分泌IL-17D、CCL2和CCL7的影响;Transwell检测TGF-β处理的肺脏成纤维细胞对MDSC的趋化作用。结果:肿瘤模型组肺脏CAF(CD45^(-)CD326^(-)CD31^(-))比例显著高于对照组[(28.02±2.23)%vs.(7.35±2.14)%,t=9.956,P<0.001]。肿瘤模型组中CAF分泌IL-17D的能力较对照组显著升高[(38.27±2.93)%vs.(19.04±3.16)%,t=5.995,P=0.001];肿瘤模型组肺脏MDSC比例明显高于对照组[(12.93±1.27)%vs.(8.21±1.40)%,t=4.804,P=0.009]。与对照组相比,肿瘤模型组肺脏TGF-β蛋白水平和转录水平均明显升高[(1685.07±135.61)ng/L vs.(1047.98±68.50)ng/L,t=5.051,P=0.002;2.17±0.03 vs.1.00±0.05,t=51.237,P<0.001]。肺脏成纤维细胞经不同浓度TGF-β(0、5、10μg/L)分别处理24 h后,其IL-17D mRNA相对表达量分别为0.42±0.01、0.67±0.01、0.84±0.04,CCL2 mRNA相对表达量分别为0.89±0.08、1.08±0.04、1.19±0.01,CCL7 mRNA相对表达量分别为0.53±0.05、0.65±0.04、0.74±0.03,随着TGF-β浓度升高,成纤维细胞IL-17D、CCL2、CCL7表达水平明显升高(F=57.384,P<0.001;F=15.802,P=0.004;F=14.544,P=0.005)。另外,与对照组相比(TGF-β为0μg/L),肺脏成纤维细胞经10μg/L TGF-β处理24 h后,可促进肿瘤小鼠脾脏MDSC的迁移[(9.59±0.21)%vs.(2.14±0.24)%,t=6.585,P<0.001]。结论:肿瘤微环境中TGF-β诱导肺脏CAF高表达IL-17D,是促进CCL2、CCL7表达和MDSC迁移的重要因素。