白细胞介素-28和白细胞介素-29的研究进展

白细胞介素 2 8(IL 2 8A、IL 2 8B)和白细胞介素 2 9(IL 2 9)是一组由病毒或双链RNA诱导的多种细胞产生的新型白细胞介素 ,它们能结合一种由IL 1 0Rβ和IL 2 8Rα组成的异二聚体型Ⅱ类细胞因子受体 ,通过Jak STAT信号通路而发挥其抗病毒或其他防御功能。作者就IL 2 8与IL 2 9的分子结构、编码蛋白、受体与生物学活性等作一综述。

白细胞介素-29在小儿支气管上皮细胞抗呼吸道合胞病毒感染的机制探讨

目的探讨IL-29在体外培养的小儿支气管上皮细胞中抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的作用及其相关机制。方法建立RSV A2株感染的小儿分化良好的原代支气管上皮细胞(WD-PBEC)模型,经不同质量浓度(0、0.1、1、10、100μg/L)人重组IL-29干预RSV感染的WD-PBEC后,观察人重组IL-29干预对RSV病毒滴度的影响。将WD-PBEC随机分为正常细胞组、IL-29干预组、RSV组、RSV+IL-29组、RSV+Janus激酶(JAK)抑制剂组和RSV+JAK抑制剂+IL-29组。各IL-29干预组均经100μg/L人重组IL-29预处理24h;各RSV感染组在感染RSV A2株前均经100μg/L人重组IL-29预处理24h;各JAK抑制剂组先以JAK抑制剂Ⅰ预处理1h,再经100μg/L人重组IL-29预处理24h。采用实时荧光定量PCR检测细胞中黏病毒抵抗蛋白A(MxA)、2’,5’寡腺苷酸合成酶(2’,5’-OAS)、蛋白激酶R(PKR)和Toll样受体(TLR)3 mRNA的表达,Western印迹法检测TLR3、MxA、2’,5’-OAS、信号转导和转录激活因子(STAT)1、磷酸化STAT(p-STAT)1、STAT2、p-STAT2的蛋白表达。结果使用不同质量浓度人重组IL-29干预RSV感染的WD-PBEC后发现,IL-29延缓了病毒滴度的增高,其作用效果呈浓度依赖性,100μg/L的IL-29作用96h时抗病毒作用最佳。进一步实验结果显示,IL-29干预组的MxA、PKR和2’,5’-OAS mRNA的表达均显著高于正常细胞组(P值均<0.05)。RSV组的MxA、PKR和2’,5’-OAS mRNA的表达均显著低于IL-29干预组(P值均<0.05),2’,5’-OAS mRNA的表达显著高于正常细胞组(P<0.05)。IL-29+RSV组的MxA mRNA的表达显著高于正常细胞组、IL-29干预组和RSV组(P值均<0.05),PKR mRNA的表达显著低于IL-29干预组(P<0.05),2’,5’-OAS mRNA的表达显著高于正常细胞组和RSV组(P值均<0.05)。IL-29干预组的p-STAT2/STAT2和p-STAT1/STAT1均显著高于正常细胞组(P值均<0.05)。RSV组的p-STAT2/STAT2均显著低于正常细胞组和IL-29干预组(P值均<0.05),p-STAT1/STAT1均显著高于正常细胞组和IL-29干预组(P值均<0.05)。IL-29+RSV组的p-STAT2/STAT2显著低于IL-29干预组(P<0.05),显著高于RSV组(P<0.05),而与正常细胞组间的差异无统计学意义(P>0.05);p-STAT1/STAT1显著高于正常细胞组、IL-29干预组和RSV组(P值均<0.05)。RSV+JAK抑制剂组的TLR3mRNA、MxA mRNA和MxA蛋白相对表达量均显著低于RSV组(P值均<0.05)。IL-29+RSV组的TLR3、MxA,以及2’,5’-OAS mRNA和蛋白相对表达量均显著高于RSV组和RSV+JAK抑制剂组(P值均<0.05)。RSV+JAK抑制剂+IL-29组的MxA mRNA和蛋白相对表达量均显著低于RSV组和IL-29+RSV组(P值均<0.05),均显著高于RSV+JAK抑制剂组(P<0.05);2’,5’-OAS mRNA和蛋白相对表达量均显著高于RSV组和RSV+JAK抑制剂组(P值均<0.05),均显著低于IL-29+RSV组(P值均<0.05)。结论 IL-29能以剂量依赖的方式在体外培养的小儿支气管上皮细胞中通过调控TLR3和抗病毒蛋白MxA、2’,5’-OAS表达发挥抗RSV作用,该作用可能部分依赖于JAK/STAT信号通路的激活。

寻常型天疱疮22例及大疱性类天疱疮13例白细胞介素-29水平检测分析

目的通过检测寻常型天疱疮及大疱性类天疱疮患者血清白细胞介素(IL)-29水平,探讨IL-29在寻常型天疱疮及大疱性类天疱疮发病中的作用。方法收集成都市第二人民医院2017年12月-2018年6月共22例寻常型天疱疮患者、13例大疱性类天疱疮患者及14例健康对照组血清,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者IL-29水平,采用Wilcoxon秩和检验法,比较寻常型天疱疮和大疱性类天疱疮患者及健康对照组血清IL-29水平的差异。结果寻常型天疱疮患者血清IL-29水平为(180.52±159.17)pg/ml,较健康对照组(87.73±64.51)pg/ml显著升高(u=45,P <0.0001),差异有统计学意义;大疱性类天疱疮患者血清IL-29水平为(290.55±231.71)pg/ml,较健康对照组亦显著升高(u=16,P <0.0001),差异有统计学意义;寻常型天疱疮患者血清IL-29水平与大疱性类天疱疮患者水平相比差异无统计学意义(u=93,P> 0.05)。结论 IL-29可能参与了寻常型天疱疮、大疱性类天疱疮的发病过程,在寻常型天疱疮、大疱性类天疱疮中的生物学作用可能表现为抗炎和免疫调节。

白细胞介素-29与银屑病

白细胞介素-29(interleukin-29,IL-29)是一种新发现的白细胞介素,是IL-10细胞因子超家族的一员,通过与其独特的异二聚体受体复合物结合而发挥生物学效应。IL-29利用与Ⅰ型干扰素相似的Janus蛋白酪氨酸激酶(Janus protein tyrosine kinase,JAK)/信号传导子和转录激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)信号途径发挥抗病毒作用,同时IL-29通过诱导产生特定的趋化因子,促进皮肤T淋巴细胞浸润,引起并维持炎症,从而与银屑病的发病关系密切。该文对IL-29与银屑病发病相关研究进展进行综述。

白细胞介素-29与Toll样受体4在过敏性紫癜患儿中的表达及临床意义

目的观察白细胞介素(IL)-29、Toll样受体(TLR)4在过敏性紫癜(HSP)患儿中的表达及临床意义。方法选择48例HSP患儿作为观察组,20例健康儿童作为对照组,实时荧光定量PCR检测对照组和观察组(急性期、恢复期)外周血单个核细胞(PBMC)中IL-29mRNA、TLR4mRNA的表达水平,并检测不同时期血清中IL-29、TLR4、IL-4、免疫球蛋白(Ig)A、IgM、IgG、C3、C4、β2微球蛋白(β2-MG)水平。结果观察组急性期PBMC中IL-29、TLR4mRNA相对表达水平,以及血清中IL-29、TLR4水平明显高于恢复期和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组急性期IgA、C3、IL-4、β2-MG水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清中IL-29与TLR4呈显著正相关(P<0.05);血清中IL-29与IgA、C3、IL-4、β2-MG呈显著正相关(P<0.05);血清中TLR4与IgA、C3、IL-4、β2-MG呈显著正相关(P<0.05)。结论IL-29、TLR4参与了HSP的发生、发展,维持了机体的炎症水平。

人白细胞介素-29的生物信息学分析

目的利用生物信息学技术对人白细胞介素-29(Human nterleukin-29,IL-29)进行分析,为定点突变hIL-29,以提高其生物学活性奠定理论基础。方法利用生物信息学技术分析克隆得到的hIL-29基因,预测hIL-29基因编码蛋白的理化性质、结构、功能及可能影响其生物学活性的关键氨基酸位点;预测其三维结构,并与IFNλ3的晶体结构进行比对;对检索到的9个物种的IL-29基因同源序列进行比对,并构建系统进化树。结果 hIL-29基因编码蛋白含200个氨基酸残基,其N-末端19个氨基酸为信号肽,成熟肽的相对分子质量为20 018,理论等电点为9.08,肽链中含一个由胞内向胞外的跨膜结构域;hIL-29的空间构象由6个α螺旋(A～F)和无规则卷曲组成,螺旋A、B和F可能是hIL-29与特异性受体结合而发挥生物学效应的活性部位,A、F螺旋中有4个氨基酸残基可能是影响其生物学活性的关键氨基酸位点;系统进化分析显示,hIL-29与狗、猫、大熊猫、马、野猪、黑猩猩、长臂猿的IL-29具有较高的同源性,处于同一个大分枝,而人、黑猩猩、长臂猿的IL-29处于同一个小分枝,在系统进化树中的距离最近。结论关键位点氨基酸的差异可能对hIL-29的生物学活性影响较大,可作为对hIL-29进行分子改造的突变位点。本研究为后续进行hIL-29的定向改构及其构效关系等的深入研究奠定了理论基础。

天然N-末端人白细胞介素-29成熟肽在毕赤酵母中表达条件的优化

目的优化天然N-末端人白细胞介素-29(Human interleukin-29,hIL-29)成熟肽在毕赤酵母中的表达条件,高效表达天然N-末端hIL-29成熟肽。方法采用单因素试验和L(934)正交试验,分析摇瓶发酵条件下甲醇添加量、起始pH值、诱导时间及诱导温度对毕赤酵母工程菌GS115/hIL-29发酵液A450值的影响;用5 L发酵罐初步探索工程菌株的高密度发酵策略。结果影响重组毕赤酵母摇瓶发酵液A450值的因素重要性依次为:诱导温度>起始pH值>甲醇添加量>诱导时间,最佳发酵条件为:起始pH值7.5、甲醇添加量1.5%、26℃诱导60 h,在此条件下,发酵液的A450值达1.72;高密度发酵策略为:pH 7.5,甲醇与溶氧反相偶联,26℃诱导12 h,在此条件下,目的蛋白的表达量明显高于摇瓶水平;高密度发酵12、24 h表达的蛋白与羊抗人IL-29多抗的反应强度明显高于摇瓶发酵表达的蛋白。结论优化了工程菌株GS115/hIL-29摇瓶发酵和发酵罐高密度发酵条件,实现了重组天然N-末端hIL-29成熟肽在毕赤酵母GS115中的高效表达,为其进一步的中试放大工艺奠定了基础。

人白细胞介素-29基因的克隆及真核表达

目的克隆人白细胞介素-29(Interleukin-29,IL-29)基因并进行真核表达。方法提取人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,经逆转录合成cDNA,以其为模板,PCR扩增IL-29基因,插入真核表达载体pPIC9K,构建重组真核表达质粒pPIC9K-29,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果扩增的IL-29基因序列与GenBank中登录的序列(NM_172140)相同;重组表达质粒pPIC9K-29经双酶切及测序证实构建正确;表达产物经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量分别约30 000和27 000的特异蛋白条带,经Western blot分析,均可与羊抗人IL-29多抗发生特异性反应。结论已克隆并在毕赤酵母GS115中表达了人IL-29,为进一步研究其生物学活性及其应用奠定了基础。

老年强直性脊柱炎患者血清白细胞介素-28A、-28B、-29的水平及临床意义

目的探讨老年强直性脊柱炎(AS)患者血清白细胞介素(IL)-28A、IL-28B、IL-29的水平及临床意义。方法选择老年AS患者90例作为AS组,同期老年健康体检者90例作为对照组(C组)。收集患者年龄、性别、病程、Bath强直性脊柱炎疾病活动性指数(BASDAI)、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)等临床及检验结果资料。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清IL-28A、IL-28B、IL-29水平。结果AS组血清IL-28A水平显著高于C组(P<0.05),IL-28B水平显著低于C组(P<0.05),两组IL-29水平差异无统计学意义(P>0.05)。AS患者治疗后BASDAI、CRP、ESR、IL-28A水平显著低于治疗前(P<0.05),IL-28B显著高于治疗前(P<0.05),AS患者治疗前后IL-29水平差异无统计学意义(P>0.05)。AS患者治疗前血清IL-28A水平与BASDAI、CRP、ESR呈正相关(P<0.05),IL-28B与BASDAI、CRP、ESR呈负相关(P<0.05),IL-29与BASDAI、CRP、ESR无相关性(P>0.05)。AS患者治疗后血清IL-28A水平与BASDAI、CRP、ESR呈正相关(P<0.05),IL-28B与BASDAI、CRP、ESR呈负相关(P<0.05),IL-29与BASDAI、CRP、ESR无相关性(P>0.05)。结论老年AS患者血清IL-28A水平升高、IL-28B水平降低,IL-28A、IL-28B水平可反映治疗效果,与疾病严重程度关系密切。

rNDVIL-29对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨表达IL-29的重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus IL-29,r NDV IL-29)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和细胞凋亡的影响。方法:实验分为r NDV IL-29组(r NDV IL-29感染A549细胞)、NDV组(NDV感染A549细胞)和对照组(PBS)。用Western blotting、RT-PCR、免疫荧光法检测IL-29蛋白及其mRNA的表达;MTT、克隆形成实验及划痕实验检测r NDV IL-29对A549细胞增殖、迁移能力的影响;流式细胞术及Western blotting检测r NDV IL-29对A549细胞凋亡的影响。结果:与NDV组和对照组相比,r NDV IL-29组细胞:(1)IL-29蛋白及其mRNA表达水平显著升高;(2)细胞增殖抑制率明显升高[(56.48±11.89)%vs(42.18±6.18)%,P<0.05],细胞迁移率明显下降[(5.00±4.00)%vs(32.43±3.71)%、(84.57±3.96)%,均P<0.05];(3)Caspase3表达水平明显上调[(29.67±1.53)%vs(18.33±3.06)%、(7.00±6.08)%,均P<0.05],Bcl-2/bax表达水平明显下调[(12.00±2.65)%vs(42.33±5.86)%、(67.00±6.25)%,均P<0.05],细胞凋亡增多。结论:r NDV IL-29抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移,并且促进其凋亡,提示r NDV IL-29可能成为一种很有潜力的抗癌药物。

蛋白酶激活受体激活对A549细胞IL-28和IL-29 mRNA表达的影响

目的用蛋白酶和蛋白酶激活受体激动肽(PAR-AP)刺激A549细胞后检测细胞中白细胞介素IL-28和IL-29 mRNA表达情况以分析蛋白酶激活受体激活对人肺上皮细胞IL-28和IL-29基因表达的影响。方法用最佳工作浓度的凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶及蛋白酶激活受体-1,2,3,4的激动肽刺激A549细胞后,分别在第2、8、16h收集细胞,用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)方法分析A549细胞内IL-28和IL-29 mRNA表达。结果凝血酶作用A549后,细胞内IL-29 mRNA表达增强,高达对照组9.6倍;而细胞内IL-28 mRNA表达无明显变化。胰蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强,分别为对照组6.1倍和4.4倍。类胰蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强分别高达对照组的3.1倍和2.1倍。弹性蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29 mRNA表达增强高达对照组5.1倍而IL-28 mR-NA无明显变化。PAR-1AP(SFLLR)作用后,A549细胞内IL-29 mRNA表达增强为对照组1.7倍而IL-28 mRNA表达无明显变化。PAR-2AP(SLIGKV及tc-LIGRLO)作用后,A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强分别为对照组4.9倍和2.4倍。PAR-3AP(TFRGAP)作用后,A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达无明显变化。PAR-4AP(GYPGQV)作用后A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强高达对照组4.1倍和5.5倍。结论 A549细胞蛋白酶激活受体的激活可以上调细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达。

人白介素-29变异体在毕赤酵母中的表达及抗肿瘤活性

基于生物信息学分析的结果,采用基因突变和大引物PCR技术完成人白细胞介素-29(h IL-29)成熟肽第33位氨基酸的定点突变,成功实现其在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中的异源表达。重组人白细胞介素-29变异体蛋白(rh IL-29mut33)在不同质量浓度时,对肝癌细胞BEL7402、结肠癌细胞HCT8和胃癌细胞SGC7901的增殖均有抑制作用,而且抑制增殖效应强于野生型rh IL-29。与低质量浓度相比,高质量浓度下rh IL-29mut33对肿瘤细胞增殖抑制作用更强,对上述3种肿瘤细胞的增殖抑制率分别达到(31.76±2.87)%、(22.47±0.26)%和(34.41±0.40)%。rh IL-29mut33良好的生物学活性表明该变异体具有较大的应用潜力。

IL-29调节的肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体表达分析

目的:检测白细胞介素(interleukin,IL)-29引起的肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体(protease activated recep-tor,PAR)-1,2,3,4表达。方法:肥大细胞P815培养后以不同浓度的IL-29激发肥大细胞,在不同时间点收集细胞,给予透膜和非透膜处理后用流式细胞术检测肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体的表达。结果:IL-29激发肥大细胞2、6和16 h后肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-1表达与相应对照相比差异有统计学意义,而IL-29调节的膜表面PAR-1表达与胞浆内PAR-1表达相比,差异无统计学意义。IL-29引起的肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-2,3,4表达与相应对照相比,差异无统计学意义;而IL-29激发2 h肥大细胞膜表面PAR-2表达与胞浆内PAR-2表达相比,差异有统计学意义;IL-29激发6 h肥大细胞膜表面PAR-3表达与胞浆内PAR-3表达相比,差异有统计学意义;IL-29激发2、6和16h后肥大细胞膜表面PAR-4表达与胞浆内PAR-4表达相比,差异有统计学意义。结论:IL-29可以下调P815肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-1表达,且IL-29引起的膜表面和胞浆内PAR-1表达无差异;尽管检测到PAR-2,3,4在膜表面和胞浆内的表达情况不同,但IL-29对膜表面和胞浆内PAR-2,3,4表达的调节作用不明显;流式细胞术检测的膜表面和胞浆内PARs表达结果均可反应IL-29调节的P815肥大细胞PARs表达情况。

IL-29促进肥大细胞Th2细胞因子释放的信号转导机制

目的:检测白细胞介素(IL)-29对肥大细胞Th2细胞因子分泌的影响和可能的信号转导通路。方法:肥大细胞P815培养、激发后收集不同时间点的细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中IL-4和IL-13的水平,用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、细胞外信号调节激酶(ERK)、信号转导子和转录激活子(STAT)3和p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路蛋白磷酸化情况。结果:IL-29能够促进肥大细胞P815分泌IL-4和IL-13。AG490和LY294002阻断IL-29引起的肥大细胞IL-4分泌并抑制IL-29引起的STAT3和Akt磷酸化。LY294002阻断IL-29引起的肥大细胞IL-13分泌并抑制IL-29引起的Akt磷酸化。结论:IL-29刺激肥大细胞P815分泌IL-4可能是通过激活Akt和STAT3信号转导通路实现的,而IL-29刺激肥大细胞P815分泌IL-13可能与Akt信号转导通路激活有关。

rL-IL29对肺腺癌A549细胞生物学特性的影响及相关机制

目的:探讨表达IL-29的重组新城疫病毒LoSota株(recombinant Newcastle disease virus LoSota line expressing IL-29,rL-IL29)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法:体外培养肺腺癌A549细胞,以rL-IL29感染的A549细胞为rL-IL29组,LoSota株新城疫病毒(NDVL)感染的A549细胞为NDVL组及PBS处理的A549细胞为对照组。蛋白质印迹法检测各组A549细胞中NDV HN、IL-29蛋白的表达;CCK8法、划痕试验及Transwell侵袭实验检测rL-IL29对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;蛋白质印迹法检测细胞E-钙黏蛋白、MMP2、波形蛋白及AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。结果:A549细胞感染rL-IL29后,NDV HN及IL-29蛋白均稳定表达,且明显高于NDVL组及对照组;rL-IL29及NDVL感染A549细胞后能够抑制细胞的增殖、迁移及侵袭,且rL-IL29作用更强;与对照组及NDVL组比较,rL-IL29感染后A549细胞中E-钙黏蛋白表达量明显增加,波形蛋白、MMP2(66 kDa/72 kDa)、p-AKT及P65蛋白表达明显减弱(均P<0.05)。结论:rL-IL29可能通过阻碍AKT/NF-κB信号通路上调E-钙黏蛋白表达和下调波形蛋白、MMP2蛋白表达,从而抑制肺腺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移。

人IL-29定点突变体抗肿瘤细胞增殖活性分析

为分析人白细胞介素-29(h IL-29)变异体抗肿瘤细胞增殖活性,采用大引物PCR方法对人h IL-29基因第104位碱基进行点突变,使h IL-29肽链第35位Arg定点改造为Lys。得到的h IL-29变异体基因经重组后转化毕赤酵母GS115和诱导表达,经纯化获得重组蛋白rh IL-29mut35。SDS-PAGE分析显示rh IL-29mut35的相对分子质量约23×103,Western Blotting鉴定显示其与羊抗人IL-29多克隆抗体发生特异性结合反应。用CCK-8试剂检测rh IL-29mut35对肿瘤细胞增殖的影响,rh IL-29mut35在不同质量浓度时对胃癌细胞SGC7901、肝癌细胞BEL7402、肺腺癌细胞A549和结肠癌细胞HCT8的增殖均有抑制作用,高剂量组(1 000 ng/m L)rh IL-29mut35对胃癌细胞SGC7901、肝癌细胞BEL7402、肺腺癌细胞A549和结肠癌细胞HCT8增值的抑制率分别为(34.20±1.50)%、(27.30±0.31)%、(30.20±0.68)%、(29.13±1.40)%,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。而且高剂量组的抗增殖效应高于野生型rh IL-29的(P<0.01),这为进一步研制开发IL-29的抗肿瘤药物奠定基础。

重组人IL-29的原核表达、纯化及活性分析

目的:在大肠杆菌中表达具有活性的重组人白细胞介素-29(IL-29).方法:用PCR技术扩增人IL-29成熟蛋白的编码序列,克隆入原核表达载体pET-44Ek/LIC中,构建融合表达载体pET-44Ek/LIC-IL-29,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达IL-29融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,然后用肠激酶消化除去N端融合标签得到完全天然状态的重组人IL-29,经N-端氨基酸测序鉴定纯化的IL-29,用细胞病变抑制法测定其活性.结果:成功构建了表达载体pET-44Ek/LIC-IL-29,DNA序列测定结果与预期结果一致.在30℃培养条件下,IPTG诱导表达的IL-29融合蛋白占菌体蛋白总量43%左右,并且大部分以可溶形式存在.纯化后的融合蛋白经肠激酶切割和回收后,所得目的蛋白(IL-29)纯度大于96%,该蛋白N-端序列与理论值一致,其抗病毒活性与IFN-α2b相当.结论:获得了具有生物学活性的重组人IL-29.

IL-29表达与食管癌临床病理的相关性

目的探讨食管癌组织中新型干扰素lamda(interferon-λ,IFN-λ)家族成员之一白细胞介素-29(interleukin-29,IL-29)的表达与食管癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化染色方法对79例食管癌根治术手术标本中IL-29进行检测,并探讨IL-29表达与食管癌的组织学分级、浸润深度及淋巴结转移之间的关系。结果食管癌组织内的IL-29阳性细胞主要分布于癌旁交界区。食管癌中IL-29阳性表达与癌组织浸润深度呈负相关性(P<0.05),而与组织学分级及淋巴结转移差异无显著性(P>0.05)。结论癌间质内IL-29表达与食管癌浸润深度有关。IL-29可能具有抑制食管癌生长的作用。IL-29的表达与食管癌的生物学行为有相关性,对食管癌患者预后评估有一定的参考价值。

重组新城疫病毒IL29抑制人胃癌细胞系BGC的增殖与迁移

目的探讨表达IL-29的重组新城疫病毒Lo Sota株(rL-IL29)对人胃癌BGC细胞增殖及迁移的影响及其机制。方法将体外培养的人胃癌BGC细胞分为对照组、rL-IL29组和Lo Sota株新城疫病毒(NDV)组,分别经PBS、rL-IL29及NDV感染处理后进行下一步实验。蛋白质印迹检测BGC细胞中IL-29、NDV、P-ERK、MMP2、p-AKT蛋白的表达;CCK8法、划痕试验及Transwell小室法侵袭实验检测胃癌BGC细胞的增殖、迁移能力。结果IL-29蛋白仅在rL-IL29组表达,NDV蛋白在IL-29组及NDV组均稳定表达,且明显高于PBS组(P<0.05);rL-IL29感染BGC细胞后BGC细胞的增殖及迁移能力明显减弱,且rL-IL29的抑制较NDV组作用更强;BGC细胞经rL-IL29感染后P-ERK、MMP2(66 ku/72 ku)、p-AKT蛋白表达较对照组及NDV组明显减弱(P<0.05)。结论rL-IL29抑制胃癌BGC细胞的增殖、侵袭及迁移可能与ERK,AKT等信号通路相关。

屋尘螨诱导人支气管上皮细胞表达炎症介质的机制

目的通过测定NF-κB/p65siRNA对屋尘螨刺激的人支气管上皮细胞NF-κB及IL-6、IL-29表达水平的影响,探讨屋尘螨诱导人支气管上皮细胞表达炎症介质的机制。方法将人支气管上皮细胞分为A组(空白对照组)、B组(300ng/mL屋尘螨)、C组(300ng/mL屋尘螨+NF-κB-siRNA)、D组(300ng/mL屋尘螨+siRNA阴性对照)、E组(NF-κB-siRNA)。检测各组细胞NF-κB/p65核蛋白、IL-6、IL-29、NF-κB/p65mRNA的相对表达量及细胞上清液中IL-29及IL-6的蛋白含量。结果 C组经NF-κB/p65siRNA转染后,NF-κB/p65核蛋白、NF-κB/p65mRNA、IL-6mRNA、IL-29mRNA及细胞上清液中IL-6及IL-29的蛋白含量仍然高于A组,但低于B组及D组,组间差异有统计学意义(F值分别为169.564、204.442、144.995、54.499、147.983、116.825,均P<0.01)。结论 NF-κB/p65siRNA有效地抑制人支气管上皮细胞NF-κB/p65的表达后,炎症因子IL-6、IL-29表达亦减少。屋尘螨可能通过激活NF-κB信号通路,引起炎症因子IL-29、IL-6的表达增加,参与屋尘螨引起的气道炎症的发生发展过程。