2型糖尿病肾病患者血清白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β和超敏C反应蛋白的检测研究

目的研究2型糖尿病肾病患者(DN)血清白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)、白细胞介素-1β(IL-1β)和超敏C反应蛋白(hsCRP)水平,为进一步阐明DN的病理过程提供依据。方法选择87例2型糖尿病(T2DM)患者以及30例健康对照,根据尿白蛋白排泄量将糖尿病患者分为3组:<30mg/d的单纯DM组(33例),30～300mg/d的早期DN组(28例),>300mg/d的临床DN组(26例)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)以及免疫比浊法检测各组血清IL-1Ra、IL-1β和hsCRP水平,并比较各组差异。结果4组之间在平均年龄、性别比例、体重指数(BMI)等方面差异无显著性(P>0.05)。临床DN组患者血清IL-1Ra、IL-1β和hsCRP水平最高,分别为(387.4±55.3)pg/mL、(61.3±12.1)pg/mL和(8.26±1.87)mg/L,显著高于单纯T2DM、早期DN以及健康对照组[单纯DM组:(201.7±67.8)pg/mL、(15.8±6.0)pg/mL和(3.18±1.21)mg/L;早期DN组:(219.3±57.2)pg/mL、(29.1±8.1)pg/mL和(5.71±1.57)mg/L;健康对照组:(167.1±53.4)pg/mL、(12.4±2.6)pg/mL和(1.10±0.19)mg/L,P<0.05～0.001];且早期DN组血清IL-1β和hsCRP水平显著高于单纯T2DM和健康对照组(P<0.01～0.001)。IL-1Ra/IL-1β比值随病情进展而降低。DN组尿蛋白排泄量与血清IL-1Ra、IL-1β和hsCRP水平呈显著正相关(r=0.576、0.453和0.782,P<0.01～0.001),而与IL-1Ra/IL-1β比值呈显著负相关(r=-0.376,P<0.01)。结论2型糖尿病肾病患者血清IL-1Ra、IL-1β和hsCRP水平升高,并与病程相关。

白细胞介素-1受体拮抗蛋白诊断早期急性心肌梗死的临床价值

急性心肌梗死（AMI）的早期诊断对决定溶栓治疗起着十分重要的作用。对临床症状表现不典型、心电图呈非特异性改变的AMI患者,常用的心肌损伤标志物如肌红蛋白（Mb）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTnI）等对AMI早期诊断的灵敏度和特异性均不太理想〔1～3〕。

重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒在软骨细胞的表达

背景:白细胞介素1受体拮抗蛋白能延缓骨性关节炎进程,通过转基因方法可以使白细胞介素1受体拮抗蛋白表达的增加。目的:观察重组人重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒的构建及经脂质体转染软骨细胞的表达情况。方法:双酶切法切取重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白的c-DNA片段,通过T4DNA连接酶连接到pEGFP-C1载体上。体外分离培养兔关节软骨细胞,然后用构建的重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白质粒经脂质体转染软骨细胞,通过荧光显微镜观察转基因的表达和荧光定量PCR检测其表达。结果与结论:获得重组人pEGFP-C1-IL-1Ra真核表达载体质粒,酶切及测序结果证明表达质粒的DNA序列完全正确。荧光显微镜观察有绿色荧光蛋白表达,荧光定量PCR鉴定证实转染的软骨细胞基因得到表达。

白细胞介素-1受体拮抗蛋白在诊断早期急性心肌梗死中的临床价值

目的检测期早期急性心肌梗死(AMI)血清白细胞介素-1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)表达情况,探讨其对于诊断AMI的临床价值。方法 84例AMI患者作为观察组,另外选取85例心绞痛患者作为对照1组,选取82例健康人作为对照2组,应用双抗体夹心酶联免疫法检测各组血清IL-1Ra表达水平,应用统计学软件对检测结果进行分析。结果观察组血清IL-1Ra表达水平显著高于对照1、2组,各组间IL-1Ra表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归模型分析显示临床诊断AMI的IL-1Ra最佳界值是210 pg/ml,以其为检测指标时,敏感性达85.71%,特异性达92.68%。结论 AMI患者早期血清中IL-1Ra表达异常升高,其可作为临床早期诊断AMI的重要标志物之一。

人白细胞介素1受体拮抗基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

目的 获得一株重组人白细胞介素 1受体拮抗蛋白的高效表达菌株 ,为研究各种急慢性炎症疾病的发病机制以及拮抗 IL - 1的生物学效应奠定基础 .方法 分离人外周血淋巴细胞 ,提取 m RNA,反转录 PCR获得人白细胞介素 1受体拮抗基因 (h IL - 1ra) ,克隆入大肠杆菌表达载体 ,从而构建高效表达人 IL - 1ra的重组菌株 .结果 成功构建了 IL - 1ra的高效表达菌株 (p L DH- h IL 1ra) ,序列测定与文献报道一致 .12 % SDS- PAGE分析显示此菌株所表达的目的蛋白产物相对分子质量为 2 3ku,与预期结果相符 .光密度扫描重组 h IL-1ra蛋白质占细菌总蛋白的 30 % .结论 在大肠杆菌中成功地表达了 h IL- 1ra基因 .

急性脊髓损伤模型大鼠与白细胞介素1受体拮抗剂的保护作用

背景:白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤后脊髓功能修复具有保护作用,但具体机制不明。目的:观察白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤组织神经丝蛋白质200和胶质纤维酸性蛋白的影响。方法:SD大鼠随机分成假手术组,生理盐水对照组和白细胞介素1受体拮抗剂治疗组。采用改良Allen氏打击法建立急性脊髓损伤大鼠模型。分别在建模后1,48和72h获取损伤段8mm脊髓标本。结果和结论:免疫组织化学染色检测,白细胞介素1受体拮抗剂治疗组神经丝蛋白质200和胶质纤维酸性蛋白的表达较假手术组和生理盐水组高,差异有显著性意义(P<0.05)。提示白细胞介素1受体拮抗剂可使急性脊髓损伤大鼠模型损伤段脊髓神经丝蛋白质200和胶质纤维酸性蛋白表达增加,对急性脊髓损伤发挥保护作用。

白介素-1受体拮抗蛋白的应用对早期创伤性关节炎软骨细胞代谢的影响

目的探讨应用白介素-1受体拮抗蛋白(IL1RA)对早期创伤性关节炎软骨细胞代谢的影响,主要观察应用后相关细胞炎性因子及蛋白酶基因的表达变化。方法 44只健康成年新西兰大白兔,随机分为对照(假手术)组(CON组,n=4)、安慰剂组(PBS组,n=20)、IL1RA治疗组(IL1RA组,n=20)。其中PBS组及IL1RA组均接受关节内重物击打,造成创伤性关节炎模型。造模后1 h,CON组不接受任何治疗,PBS组及IL1RA组实验兔膝关节则分别给予0.5 m L无菌PBS和0.5 m L IL1RA-PBS关节腔注射。术后3 h及8 h采集关节液,检测IL-1β含量。术后8 h处死动物取软骨组织进行软骨细胞培养后,测定细胞活力及凋亡率,RT-PCR检测软骨组织中ADAMTs-4、ADAMTs-5、MMP-3、IL-1β及TNF-α的m RNA表达。结果术后3 h及8 h,PBS组关节液中IL-1β的含量均明显高于CON组(P<0.01)。然而,经IL1RA介入治疗后,IL-1β在术后各测试点的含量均明显低于PBS组(P<0.05)。与CON组相比,术后8h培养的PBS组软骨细胞活力明显降低(P<0.05),而IL1RA组软骨细胞活力与CON组相比无显著性差异,但明显高于PBS组。另一方面,与CON组及IL1RA组相比,PBS组的细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。而IL1RA组与CON组相比,细胞凋亡率无明显差别(P>0.05)。RT-RCR结果显示,与CON组比较,PBS组所有目的基因m RNA的表达均明显增加(P<0.01)。然而,IL1RA组所有目的基因的表达与CON组相比无统计学差异,但明显低于PBS组(P<0.01)。结论实验结果表明创伤后关节炎早期应用IL1RA介入治疗可有效降低关节液细胞炎性因子的浓度,抑制细胞炎性因子对软骨细胞生长增殖的负性影响,降低细胞凋亡,且对于促进软骨细胞基质降解的细胞炎性因子及蛋白酶的表达显著下调,对PTOA病程发展具有抑制作用。

人重组白细胞介素-1受体拮抗剂高效纯化及不同氧化态转换

为满足科研和治疗的需要,将含有人白细胞介素-1受体拮抗剂(HuIL-1 ra)基因的表达质粒转到大肠杆菌BL21(DE3)内,经IPTG诱导,外源蛋白得到高量表达,并且形成了无活性的包涵体.包涵体在二硫苏糖醇(DTT)和变性剂中溶解,经一步离子交换层析,得到高纯度还原态蛋白.在空气、谷胱甘肽或Cu2+作用下,还原态蛋白会逐渐转向氧化态.氧化态和还原态蛋白在HPLC图谱上得以分离,但非还原性SDS-PAGE分析发现,二者分子量没有差别,表明氧化过程中主要形成分子内二硫键.氧化态人重组白细胞介素-1受体拮抗剂性质稳定,仍然具有较高的生物活性.

白细胞介素1受体拮抗基因多态性与骨质疏松症的相关性

目的了解广东地区汉族人群中白细胞介素-1受体拮抗基因(IL-1ra)基因型的分布,探讨IL-1ra基因多态性与骨质疏松症的关系。方法应用PCR及电泳检测等技术,对广东地区汉族人群中IL-1ra基因型的分布及其与骨质疏松症的易感性进行分析。结果在广东人群中IL-1ra基因多态性与骨质密度紧密相关性,骨质疏松组和健康对照组在IL-1ra等位基因性的分布上有明显差异。结论本研究人群中IL-1ra基因型可能作为预测骨质疏松发生的危险性指标。

白介素-1β及其受体拮抗蛋白在肠缺血-再灌注所致急性肺损伤中的作用研究

目的 :探讨肠缺血再灌注 ( I/R)损伤时肺损伤的机制和白介素 1β及其受体拮抗蛋白 ( IL 1ra)的作用。方法 :用大鼠肠系膜上动脉夹闭造成 I/R损伤模型 ,利用放射免疫分析法测定损伤前后和各处理组血液、肺组织灌洗液中 IL 1β和 IL 1ra水平。同时采用逆转录聚合酶链反应 ( RT PCR)法测定肺组织中 IL 1β和IL 1ra m RNA的表达含量。经光镜和电镜观察肺局部白细胞浸润及组织损伤情况。结果 :I/R损伤后 6小时血液中 IL 1β和 IL 1ra有所增加 ,损伤组 IL 1β比对照组明显增加 ,而 IL 1ra不明显 ;但损伤组和对照组IL 1ra伤后 6小时比伤前自身对照组均明显增加。损伤组肺灌洗液中 IL 1β明显增多 ,而 IL 1ra不明显。肺组织中 IL 1β的 m RNA在损伤后表达明显增加 ,而 IL 1ra表达没有明显变化。经非特异性磷脂酶 A2( PLA2 )阻断剂 (氯喹和三氟拉嗪 )、血小板活化因子受体阻断剂 SR2 7417A、环氧化酶抑制剂消炎痛以及抗氧化剂愈创木酸等处理后 ,血清、肺灌洗液和肺组织中上述指标有不同程度的改变。肺内白细胞的聚集和浸润明显减少。结论 :IL 1β和 IL 1ra可能参与肠 I/R介导的急性肺损伤 ,并且和局部 PLA2

白介素1受体拮抗蛋白间接体内转基因对兔骨性关节炎的抑制作用

目的 探讨IL 1受体拮抗蛋白 (IL 1Ra)间接体内转基因对兔骨性关节炎临床表现及关节软骨破坏的抑制作用。方法 30只新西兰大白兔(8月龄 ,雌性 ,体重 2 5～ 3 0kg)随机分成 3组 ,左膝关节部分滑膜切除 ,分离并培养滑膜成纤维细胞。用携带标记基因或IL 1Ra基因的逆转录病毒分别转染从第 2组或第 3组兔膝关节分离出来的滑膜细胞。采用兔右膝关节前交叉韧带横断术 (ACLT)建立骨关节炎模型。把自体滑膜细胞回输第 1组兔右膝关节腔内 ,把转染标记基因或IL 1Ra基因的自体滑膜细胞回输第 2组或第 3组兔右膝关节腔内。2、4周后 ,用ELISA方法检测右膝关节液中IL 1Ra水平。用膝关节临床评估级别对转IL 1Ra基因组和对照组膝关节局部疼痛刺激反应、步态改变、关节肿胀和活动范围进行评估。根据墨汁软骨表面着色和软骨组织病理改变情况对软骨破坏程度进行分级。结果 转IL 1Ra基因组 (第 3组)兔膝关节液中IL 1Ra水平明显升高 ,在基因转入关节腔后第 2周时为 2 0 6± 1 8ng/ml,第 4周时为 4 82± 0 5 2ng/ml;而 2、4周时 ,对照组(第 1、2组 )关节液中IL 1Ra水平均很低 ;转IL 1Ra基因组膝骨性关节炎的临床表现及膝关节软骨破坏程度 (大体及组织学观察 )均明显轻于对照组。结论 IL

特异性白介素1受体拮抗蛋白放射免疫分析的建立及初步应用

用人工重组的白介素 1受体拮抗蛋白 (I 1ra)免疫新西兰兔 ,获取高效价特异的IL 1ra抗体。用氯氨T氧化法制备12 5I标记IL 1ra ,经SephadexG 2 5纯化 ,竞争性抗原抗体反应采用非平衡法 ,标准品和待测样品同抗体反应 37℃ 6小时后加入12 5I 标记抗原继续反应 4℃ 2 4小时。经PR试剂分离结合和分离的标记抗原。该法标准曲线范围 3～ 96ng ml,最低检出量为 ( 9 0± 1 4ng ml,n =89) ,类风湿因子阳性的病人血清含量为 ( 39 0 6± 15 2 3ng ml,n =14)。肠缺血再灌损伤后 6小时大鼠血清中IL 1ra较伤前自身对照明显增加 (P <0 0 0 1,n =82 )。肺灌洗液中损伤前后没有明显差异。该法特异、灵敏、简便 ,可用于人血清和大鼠血清及肺灌注液中IL

白介素1β及其受体拮抗蛋白在肠缺血/再灌注诱导肺损伤中的作用和机理

目的:探讨肠缺血-再灌注(I/R)损伤时肺损伤的机理及白介素1β(IL-β)及其受体拮抗蛋白的作用。方法:采用大鼠肠系膜上动脉夹闭造成I/R损伤模型。利用放射免疫分析测定损伤前后和各处理组血液、肺组织灌注液中IL-1β和IL-1ra水平。同时采用RT-PCR法测定肺组织中IL-1β和IL-1ra的mRNA的表达含量。经光镜和电镜观察肺局部白细胞浸润及组织损伤情况。结果:I/R损伤后6小时血液中IL-1β和IL-1ra有所增加,即表现为损伤组IL-1β比对照组明显增加,而IL-1ra不明显;但IL-1ra的损伤组和对照组二者均在损伤后6小时比伤前自身对照组明显增加。肺组织灌洗液中损伤组IL-1β明显增多,而IL-1ra不明显。肺组织中IL-1β的mRNA在损伤后表达明显增加,而IL-1ra表达没有明显变化。经非特异性磷脂酶A_2(PLA_2)阻断剂(氯喹和三氟拉嗪),血小板活化因子受体阻断剂SR27417A,环氧化酶抑制剂消炎痛以及抗氧化剂愈创木酸等处理后,血清、肺灌注液和肺组织中上述指标有不同程度的改变。肺内白细胞的聚集和浸润明显减少。结论:IL-1β和IL-1ra可能参与肠I/R介导急性肺损伤,并且同局部PLA_2活化有一定关系。

白细胞介素-10对急性肺损伤炎症/抗炎介质表达的影响

目的探讨白细胞介素10(IL-10)对急性肺损伤(ALI)大鼠炎症介质/抗炎介质表达的影响。方法向气道内滴注内毒素(LPS,10mg/kg)建立大鼠ALI模型。54只雄性SD大鼠随机分为对照组、LPS损伤组、LPS加IL-10组,每组18只,各组又分为2、6和24h3个亚组,每个亚组各6只。按各时间点观察大鼠动脉血氧分压(PaO2)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及分类计数、肺系数、BALF总蛋白水平及肺病理,同时用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测肺组织中炎症介质/抗炎介质的表达。结果1LPS损伤组大鼠PaO2呈进行性降低;肺系数、BALF总蛋白水平及BALF中细胞总数均明显增加,分类以中性粒细胞为主;肺病理示肺内中性粒细胞大量浸润,伴出血、透明膜形成。LPS加IL-10组的各项指标均较LPS损伤组减轻。2LPS损伤组肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达于2h达高峰,随后迅速下降;白细胞介素1β(IL1β)mRNA表达于2h显著升高,6h达高峰,随后迅速下降;IL-1受体拮抗剂(IL1ra)mRNA表达6h开始升高,且为峰值,24h仍高于对照组。LPS加IL10组肺组织TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达受抑,而IL-1ramRNA表达不受影响。结论1ALI早期TNFαmRNA、IL1βmRNA表达明显增加,而IL-1ramRNA表达滞后,提示在无外来干预情况下,ALI早期存在炎症介质/抗炎介质的失衡。

慢性乙型肝炎核心抗体阳性与阴性患者外周血红细胞膜CR1分子和白细胞介素-2受体及Ig水平观察

目的:观察同为HBsAg阳性、HBeAg阳性和HBVDNA高复制,抗HBc阳性与抗HBc阴性的慢性乙肝患者的免疫指标,并探讨其临床价值。方法:把患者分为抗HBc阳性组和抗HBc阴性组,进行乙型肝炎病毒标志物(HBVM)、ALT、HBVDNA定量、白细胞介素2受体(sIL2R及mIL2R)、红细胞膜补体受体1型分子(CR1)的数量表达、血清IgM和IgG水平测定。结果:两组HBVDNA复制差异无显著性(P>0.05);血清ALT活性抗HBc阳性组显著高于抗HBc阴性组(P<0.01);两组sIL2R水平显著高于对照组(P<0.01),mIL2R的表达显著低于对照组(P<0.01);抗HBc阳性组血清sIL2R水平显著高于抗HBc阴性组(P<0.01),mIL2R的表达显著低于抗HBc阴性组(P<0.01);血清IgM和IgG水平均显著高于对照组(P<0.01),但两组差异无显著性(P>0.05);两组红细胞膜CR1分子表达显著低于对照组(P<0.01),抗HBc阳性组红细胞膜CR1分子表达显著低于抗HBc阴性组(P<0.01)。结论:两组患者细胞免疫和RCIA功能均降低,体液免疫呈“亢进”状态,抗HBc阳性组优为显著。本研究对指导慢性乙型肝炎患者的治疗和预后具有一定的价值。

中药抗炎1号注射液对急性湿疹患者自然杀伤细胞、白介素2和可溶性白介素2受体的影响

目的观察中药抗炎1号注射液治疗急性湿疹的临床疗效并探讨对患者自然杀伤细胞(NK)、白介素2(IL-2)和可溶性白介素2受体(sIL-2R)的影响,为临床应用提供依据。方法应用抗炎1号注射液静脉滴注治疗30例急性湿疹,在观察疗效同时对治疗前后患者外周血中NK细胞及IL-2、sIL-2R水平进行检测。结果治疗30例患者中,痊愈6例,显效16例,有效6例,无效2例,总有效率达73.33%。同时比较患者治疗前后血清中NK细胞,有显著性差异(P<0.05),治疗后血清中NK细胞有所提高;而治疗后IL-2水平较治疗前升高,sLI-2R水平较治疗前降低,统计学检验有差异(P<0.05)。结论中药抗炎1号注射液治疗急性湿疹有显著疗效。急性湿疹患者存在细胞免疫功能的紊乱。中药抗炎1号注射液有改善急性湿疹患者细胞免疫功能的作用。

IL-lra对IL-1β诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6的拮抗作用

目的 :研究白细胞介素 1受体拮抗剂对IL 1β所介导生物学功能的影响 ,为进一步临床应用提供理论依据。方法 :采用细胞培养技术和ELISA夹心法。结果 :经IL 1β单独作用 ,牙龈成纤维细胞培养上清液中IL 6含量明显增高 ,当一定浓度的IL lra与 1μg/LIL 1β共同作用人牙龈成纤维细胞后 ,培养上清液中IL 6的含量比单独IL 1β作用组低 .结论 :IL lra能够抑制IL l诱导的人牙龈成纤维细胞分泌IL 6。

白细胞介素1α诱导破骨细胞活化和骨流失

背景:白细胞介素1是一种重要的促炎细胞因子,已被证实在调节骨炎症和骨重建中发挥重要作用。有研究表明,白细胞介素1α可诱导MC3T3-E1细胞凋亡,同时抑制成骨细胞分化。目的:探讨白细胞介素1α在小鼠破骨细胞活化和骨流失中的作用及机制。方法:①细胞实验:分别以白细胞介素1α单独或与核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)联合作用于RAW264.7细胞1 d和4 d。CCK8检测细胞活力,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测多核破骨细胞,实时荧光定量PCR、免疫荧光染色及Western blot检测破骨形成相关的特异基因及核转录因子κB和Wnt/β-catenin信号通路相关基因的mRNA和蛋白表达情况;分别以白细胞介素1α单独或与RANKL和巨噬细胞集落刺激因子联合作用于骨髓源性巨噬细胞7 d,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测多核破骨细胞,Western blot检测破骨形成相关的特异基因的蛋白水平的表达情况。②动物实验:将小鼠随机分为2组:对照组腹腔注射PBS,实验组腹腔注射白细胞介素1α溶液,每周2次,5周后取材,采用μCT、苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色和免疫荧光分析小鼠股骨骨组织变化及相关基因的表达情况。结果与结论:①细胞实验结果显示,白细胞介素1α单独干预可显著促进RAW264.7细胞增殖,而白细胞介素1α与RANKL联合作用可刺激RAW264.7细胞向破骨细胞分化(P<0.05);在RANKL或RANKL+巨噬细胞集落刺激因子存在的情况下,白细胞介素1α明显上调RAW264.7细胞和骨髓源性巨噬细胞中破骨细胞相关标志物的表达(P<0.05),并增加抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞的数量(P<0.05);白细胞介素1α显著激活RAW264.7细胞的核转录因子κB和Wnt/β-catenin信号通路(P<0.05);阻断核转录因子κB或Wnt3信号通路不仅逆转了白细胞介素1α引起的RAW264.7细胞的核转录因子κB和Wnt3信号通路的激活,而且减弱了白细胞介素1α诱导的破骨细胞特异性基因的上调(P<0.05)。②动物实验结果显示,与体外细胞实验结果一致,白细胞介素1α可诱导C57BL/6J小鼠骨流失并上调破骨特异基因TRAF6,RANK,p65和Wnt3的表达(P<0.05)。③上述数据证实,白细胞介素1α通过激活核转录因子κB和Wnt信号通路诱导破骨细胞活化和骨丢失。

白细胞介素-1受体拮抗蛋白间接体内转基因对骨关节炎软骨细胞凋亡的抑制作用

目的通过白细胞介素-1受体拮抗蛋白(IL-IRa)间接体内转基因治疗试验性兔骨关节炎,探讨IL-IRa对兔膝关节软骨细胞凋亡的抑制作用.方法①30只新西兰大白兔随机分成3组,左膝关节部分滑膜切除,分离并培养滑膜成纤维细胞.②用携带标记基因或IL-IRa基因的逆转录病毒分别转染从第2组或第3组兔膝关节分离出来的滑膜细胞.③兔右膝关节前交叉韧带横断术(ACLT)建立骨关节炎模型.④把自体滑膜细胞回输第1组兔右膝关节腔内,再把转染标记基因或IL-IRa基因的自体滑膜细胞回输第2组或第3组兔右膝关节腔内.⑤2、4周后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测关节液中IL-IRa水平.⑥TUNEL末端荧光标记法测关节软骨细胞凋亡发生率.结果第3组兔膝关节液中IL-IRa水平,在基因转入关节腔后第2周时为(20.6±1.8)ng/ml,第4周时为(4.82±0.52)ng/ml;而2、4周时,第1、2组中IL-IRa水平均极低.第3组软骨细胞凋亡被抑制,仅有18%发生细胞凋亡,而在第2组关节软骨细胞近40%发生细胞凋亡,正常对照组中只有2%～5%的软骨细胞发生凋亡.结论本试验证明关节腔内注入体外转染IL-1Ra基因的自体滑膜细胞,即IL-1Ra间接体内转基因治疗,能使关节腔局部IL-1Ra水平明显升高,使关节软骨细胞凋亡受到抑制.