白细胞介素-10基因敲除小鼠血液生理生化指标分析

目的分析白细胞介素-10(IL-10)基因敲除小鼠和野生型小鼠血液生理生化指标差异。方法用摘除眼球法采集IL-10基因敲除小鼠和野生型小鼠血液,用全自动生化分析仪及血细胞分析仪检测常用血液学指标及生化指标。结果与野生型小鼠比较,IL-10基因敲除小鼠血液生理指标中红细胞参数明显降低,血小板参数明显升高(P<0.05),白细胞参数等差异无统计学意义(P>0.05);血清生化指标中Alb、BIL和Fe差异有统计学意义(P<0.05),AST、ALT、BUN、Cr、Glu等指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-10基因缺失可影响小鼠部分的血液、血清生化指标。

白细胞介素10受体A基因突变导致的极早发型炎症性肠病临床特点及基因分析

目的总结白细胞介素10受体A(interleukin 10 receptor A,IL-10RA)基因突变导致的极早发型炎症性肠病(very early onset inflammatory bowel disease,VEO-IBD)患儿临床特点和遗传学特征。方法回顾性分析2007年3月到2019年5月在首都医科大学附属北京儿童医院院消化科住院的慢性腹泻的患儿中,确诊为VEO-IBD的患儿,其中病因为IL-10RA基因突变的患儿15例,对照组为15例非IL-10RA突变所致VEO-IBD患儿,统计分析其临床特点及基因报告。结果IL-10RA基因突变所致的VEO-IBD患儿,克罗恩病(Crohn s disease,CD)11例,溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)4例,临床症状以慢性腹泻(15/15例,100.0%)、便血(15/15例,100.0%)为主,肠外表现依次为口腔黏膜溃疡(6/15例,40.0%)、皮肤红斑(5/15例,33.3%);肛周表现依次为直肠会阴瘘5例(5/15,33.3%),肛瘘4例(4/15,26.7%),肛裂3例(3/15,20.0%),直肠会阴瘘、皮赘并存1例(1/15,6.7%);全身表现为IL-10RA基因突变组营养不良13例(13/15例,86.7%),肛周病变13例(13/15例,86.7%);对照组营养不良6例(6/15例,40.0%),肛周病变5例(5/15例,33.3%),此两项指标与IL-10RA基因突变组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。15例IL-10RA突变患儿中,共检测到9个突变位点,其中c.301c>T(p.R101W)和c.537G>A(p.T179T)为最常见的突变位点。IL-10RA突变导致炎症因子增高,引起肠道炎症反应。凝血酶原时间和部分凝血活酶时间均明显延长。结论IL-10RA基因突变导致的VEO-IBD患儿发病年龄早,除消化道症状外,肠外表现和肛周病变较为常见,结肠镜下病变特点以结肠多发溃疡最常见,其次为炎性息肉。c.301c>T(p.R101W)和c.537G>A(p.T179T)为最常见的基因突变位点。IL-10RA突变导致炎症因子增高,引起肠道炎症反应。

小鼠白细胞介素10重组腺病毒载体构建及对树突状细胞的基因修饰

背景:对于抗原递呈细胞树突状细胞及其分泌的细胞因子白细胞介素10在气道高反应性和炎症中的作用国内外文献报道较少。目的:构建小鼠白细胞介素10腺病毒重组体Ad-mIL-10,获得小鼠白细胞介素10基因修饰的树突状细胞,以期为下一步基因治疗的动物实验打下基础。方法:通过人工合成获得小鼠白细胞介素10基因,根据白细胞介素10基因序列及腺病毒载体的多克隆位点,合成包括酶切位点的基因序列,连接到pMD18-T载体并测序鉴定。用基因工程的方法将小鼠白细胞介素10基因克隆到BD Adeno-XTM腺病毒载体,于人胚肾293细胞中包装、扩增病毒并测定白细胞介素10蛋白表达,转染到体外培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞。结果与结论:成功构建了小鼠Ad-mIL-10重组腺病毒载体并高包装、扩增成功,测定高表达白细胞介素10蛋白,体外成功培养小鼠骨髓来源的小鼠树突状细胞并顺利转染Ad-mIL-10。提示用基因工程方法构建小鼠Ad-mIL-10重组腺病毒载体并转染小鼠骨髓来源的树突状细胞是可行的,可为进行相关基因治疗的可能性提供更充足的理论依据。

白细胞介素10基因对非肥胖糖尿病鼠1型糖尿病发病率的影响

目的:探讨白细胞介素10(IL-10)基因治疗对非肥胖糖尿病(nonobesediabetic,NOD)鼠1型糖尿病发病率、胰岛炎的影响。方法:4周龄雌性NOD小鼠尾静脉快速注射IL-10表达质粒,注射Ringes液作为对照组。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中IL-10的表达,10周龄后每周测定血糖,25周龄HE染色观察未发病的NOD鼠胰岛炎程度。结果:处理组IL10的表达持续14d左右,糖尿病发病率为25%,明显低于对照组(71%)(χ2=5.57,P<0.05),且处理组中未发糖尿病的NOD鼠胰岛炎的严重程度亦低于对照组。结论:IL-10基因给药可以降低NOD鼠1型糖尿病发病率及胰岛炎严重程度。

应用AdEasy腺病毒载体系统构建鼠白细胞介素10基因重组腺病毒

目的:AdEasy系统可在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒之间的高效同源重组,经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞获得重组病毒,极大简化了载体的构建过程。实验利用AdEasy腺病毒载体系统构建鼠白细胞介素10基因重组腺病毒。方法:实验于2006-08/2007-05在青岛大学医学院病毒学实验室完成。①实验材料:清洁级SD大鼠5只,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,骨架质粒pAdeasy-1,大肠杆菌BJ5183和DH10B,人胚肾293细胞均由青岛大学医学院微生物教研室罗兵教授惠赠。②实验方法:从脂多糖刺激培养的大鼠脾细胞中提取细胞总RNA,应用反转录多聚酶链反应技术扩增白细胞介素10cDNA,定向亚克隆至pAdtrack-CMV中构建腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-IL-10,酶切线性化后转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy的BJ5183大肠杆菌中,获得重组腺病毒质粒pAd-IL-10,Lipofectamin包装转染293细胞,获得重组腺病毒vAd-IL-10,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。将293细胞接种于96孔板中,每孔1×104个细胞,浓缩后的病毒贮存液按不同比例稀释加至培养板中,测定重组腺病毒滴度。用重组腺病毒vAd-IL-10感染293细胞3d后,以TRIzol一步法提取细胞总RNA,所获RNA加入DNaseⅠ消化处理可能污染的DNA后,PCR产物行琼脂糖电泳检测白细胞介素10 mRNA的表达。结果:①重组腺病毒的包装及滴度测定:经限制性内切酶转染293细胞16h后,荧光显微镜观察到细胞中有GFP荧光,可间接反映目的基因的表达。将病毒上清反复感染293细胞扩增重组腺病毒,通常传至第4～5代于接种病毒后24～48h,几乎可观察到所有细胞出现荧光,此时收获病毒,重组病毒命名为vAd-IL-10。vAd-IL-10滴度为5.5×108pfu/mL,vAd-GFP滴度为9.0×108pfu/mL。②目的基因RT-PCR产物的鉴定:提取重组腺病毒感染293细胞总RNA,RT-PCR扩增后琼脂糖电泳显示特异性580bp预计大小的片段,表明该重组腺病毒可在293细胞中有效转录。结论:利用AdEasy腺病毒载体系统成功构建了携带白细胞介素10基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度的重组腺病毒vAd-IL-10,可在293细胞中有效转录。

大鼠免疫功能恢复与白细胞介素-10基因转染的关系

目的:通过建立实验性自身免疫性甲状腺炎(experimentalautoimmunethyroiditis,EAT)动物模型的基础上,探索通过基因转染方法,以纠正EAT大鼠免疫功能异常状态。方法:选用雌性Wistar大鼠建立EAT动物模型。成模大鼠分为4组:A组5只(PBS+PLL),B组5只(pORF质粒+PLL)、C组10只(pORFmIL10质粒+PLL)及D组5只(pORFmIL10质粒+MEM)。使用放射免疫方法测定TgAb,TmAb滴度。采用Charreive法计算甲状腺内淋巴细胞浸润指数。脾脏淋巴细胞培养,采用犤3H犦-TdR标记方法测定cpm值并计算淋巴细胞增殖指数。结果:C组与A,B,D组比较,第4,6,8周TgAb,TmAb滴度显著降低(P均<0.001,F=42.66,32.65,9.66;F=22.25,81.35,14.84)。C组甲状腺淋巴细胞浸润指数为1.10±0.18,显著低于其他各组(F=4.39,P<0.01)。此外,淋巴细胞增殖试验结果显示,C组PTg刺激的淋巴细胞增殖指数显著低于A,B组(F=2.78,P<0.05)。结论:通过大鼠甲状腺组织内局部注射pORFmIL10质粒使甲状腺滤泡上皮细胞表达白细胞介素10基因,并且能够清除甲状腺内浸润的淋巴细胞,降低自身抗体水平和针对抗原反应的T淋巴细胞增殖反应。多聚赖氨酸可以延长目的基因表达时间,更有效地治疗EAT。

大鼠脊髓损伤后白细胞介素-10、肿瘤坏死因子-α基因表达的变化

目的 探讨大鼠脊髓损伤后白细胞介素 1 0 (IL 1 0 )、肿瘤坏死因子 α(TNF α)mRNA表达的时序变化规律。方法 SD大鼠 4 2只 ,随机分为 7组 ,采用改良Allen’s脊髓损伤打击模型 ,以逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法测定伤段脊髓组织中IL 1 0、TNF αmRNA的表达情况。结果 正常脊髓组织内存在IL 1 0、TNF αmRNA的表达 ;脊髓损伤后IL 1 0mRNA表达逐渐上调 ,伤后 72小时明显上调 ,1 6 8小时达到高峰 ;TNF αmRNA伤后 1小时表达明显上调并达峰值 ,高表达持续至损伤后 2 4小时。结论 脊髓继发性损伤过程中抗炎性细胞因子与前炎性细胞因子共同存在 ;

降钙素基因相关肽体外转染对大鼠移植供肺白细胞介素-10、肿瘤坏死因子-α表达的影响

通过构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的降钙素基因相关肤(CGRP)重组腺病毒载体(Ad5-CGRP-EGFP),研究腺病毒介导CGRP转基因对移植供肺细胞因子白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。1材料与方法：.1材料及试剂河南省实验动物中心提供的20只SPF级健康Wistar大鼠250~300 g。酶联免疫吸附试验(ELISA)

白细胞介素10基因对未发病非肥胖型糖尿病小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响

背景:研究发现肝脏细胞在给予转入胰-十二指肠同源盒1基因后可合成胰岛素,抗CD20单克隆抗体可抑制产胰岛素的肝脏细胞发生自身免疫反应,但机制尚不明确。目的:了解腺病毒介导的小鼠白细胞介素10(Adenovirus vector-mediated murine interleukin,Ad-mI L-10)及抗CD20单克隆抗体联合干预未发病非肥胖糖尿病模型小鼠,对其肝脏细胞以及肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响。方法:3-5周龄雌性未发病非肥胖糖尿病模型小鼠40只,随机分为抗CD20单克隆抗体组、抗CD20单克隆抗体+白细胞介素10组、白细胞介素10组和对照组,分别于第1,8,15,21天尾静脉注射抗CD20单克隆抗体、抗CD20单克隆抗体+Ad-m IL-10、Ad-mI L-10和生理盐水。结果与结论:12周后,与对照组相比,经抗CD20单克隆抗体和/或白细胞介素10治疗的未发病非肥胖糖尿病模型小鼠血糖水平明显降低,而血清和肝脏中胰岛素、白细胞介素10和CD20表达明显增加,同时肝脏中胰-十二指肠同源盒1表达水平增加;且经抗CD20单克隆抗体和白细胞介素10联合对上述指标的影响高于单独应用;但无论是联合干预还是单独干预均对小鼠肝脏炎症病变无明显影响。证实CD20单抗及白细胞介素10基因联合干预为促使非肥胖糖尿病模型小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达机制之一。

白细胞介素-10基因转染对大鼠肝细胞表达细胞因子的影响

目的观察转染白细胞介素-10(IL-10)基因后肝细胞表达细胞因子的变化,探讨IL-10基因修饰的大鼠肝细胞抑制肝星状细胞(hepatic stallete cells,HSC)活化的可能机制。方法体外培养大鼠肝细胞系BRL,分3组:对照组(C组)、转染pc DNA3.0空质粒组(P组)、转染pc DNA 3.0-r IL-10重组质粒组(I组)。转染48 h后取培养上清液用抗体芯片筛选各组间细胞因子的差异性表达。用ELISA试剂盒分别检测上清中血管表皮生长因子(VEGF)和转化生长因子-β(TGF-β)的变化。抽提3组BRL细胞的总蛋白,用Western blotting方法检测细胞内VEGF蛋白表达的变化。结果抗体芯片筛选显示,I组较P组IL-10表达上调大于50倍,而VEGF下调大于2倍。进一步检测显示,I组培养上清液中VEGF的表达(136.824±34.150)pg/ml较P组(252.026±33.300)pg/ml显著下降(P<0.05),I组培养上清液中TGF-β的表达(220.296±42.115)pg/ml较P组(363.366±17.434)pg/ml显著下降(P<0.01),I组细胞中VEGF的表达较P组也显著下降(P<0.01)。结论转染IL-10基因的大鼠肝细胞除了通过高分泌IL-10直接抑制HSC的增殖与活化,也可能通过下调VEGF和TGF-β等促肝纤维化细胞因子的表达而间接作用。

大鼠白细胞介素-10基因全长cDNA的克隆和鉴定

背景:肝纤维化病程迁延且药物治疗效果不理想,基因治疗将成为这一领域研究的热点。研究显示白细胞介素(IL)鄄10对肝脏具有保护作用,可阻止肝纤维化的发生、发展。目的:克隆并鉴定Sprague鄄Dawley(SD)大鼠IL鄄10基因的全长cDNA,为进一步构建大鼠IL鄄10腺病毒重组子和肝纤维化基因治疗的研究奠定基础。方法:自行设计IL鄄10上下游引物,以逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)从SD大鼠脾脏单核细胞中扩增编码大鼠成熟IL鄄10肽链的cDNA片断。扩增产物与连接载体pMD鄄18T连接后转化感受态菌DH5α,构建重组载体pMD鄄18T鄄IL鄄10。结果:以SD大鼠脾脏单核细胞总RNA为模板,RT鄄PCR扩增出大小为540bp的大鼠IL鄄10cDNA片断。所构建的重组质粒经HindⅢ+KpnⅠ双酶切显示含有目的基因片段,测序结果证实扩增出的DNA片断与大鼠IL鄄10基因序列相符,表明编码区无基因突变。结论:成功地克隆了大鼠IL鄄10基因的全长cDNA,并构建了重组载体pMD鄄18T鄄IL鄄10。

慢病毒导入型人白细胞介素10基因表达质粒的构建及其对CCI大鼠的镇痛作用

目的:构建含人白细胞介素10基因的慢病毒载体LV-hIL-10,观察鞘内注射LV-hIL-10对坐骨神经松结扎模型(chronic constriction injury,CCI)大鼠的镇痛作用。方法:应用PCR从pCYIL-10质粒上扩增hIL-10基因,把hIL-10基因亚克隆至pWPXL质粒上得到重组质粒pWPXL-hIL-10,将pWPXL-hIL-10与psPAX2、pMD2.G共转293T,收集上清浓缩后制备LV-hIL-10。同时将空质粒pWPXL-GFP与psPAX2、pMD2.G共转293T,收集上清浓缩后作实验对照。纯种健康清洁级成年雄性SD大鼠135只,随机分为9组:CCI疼痛模型4组(C0、C1、C2、C3),假手术4组(S0、S1、S2、S3)和正常对照组(N组)。给药组在蛛网膜下腔分别注射LV-hIL-10(C1组、S1组)、LV-GFP(C2组、S2组)、生理盐水(C3组、S3组),对照组C0组、S0组不做鞘内置管,不给药。各组在手术造模成功实施鞘内注射后观察LV-hIL-10组不同时间点痛阈的改变及脊髓、脑皮质、海马中的hIL-10 mRNA和蛋白表达。结果:获得IL-10基因片段,成功重组pWPXL-hIL-10载体,经序列验证无误。质粒共转染293T细胞后,获得了高滴度(2×1010)、高纯度的LV-hIL-10病毒颗粒。CCI大鼠鞘内注射LV-hIL-10后痛觉异常明显缓解,脊髓、脑皮质、海马中的IL-10表达上调,脊髓中IL-10表达上调最显著。结论:鞘内注射慢病毒感染导入型人IL-10表达质粒对CCI大鼠有明显镇痛效应。

白细胞介素-10基因修饰对大鼠肝细胞系BRL生长的影响

目的观察白细胞介素-10(IL-10)基因修饰对大鼠肝细胞增殖、凋亡的影响,并筛选出表达可能受影响的细胞因子。方法体外培养大鼠肝细胞系BRL,分为对照组(C组),转染pcDNA3.0空质粒(P组),转染pcDNA3.0-rIL-10重组质粒(I组)。MTT法检测其增殖,流式细胞法检测其凋亡,抗体芯片法检测其细胞因子的表达。结果转染48h后,P组较C组增殖减少(P=0.000),凋亡增加(P=0.000);I组较P组增殖差别无统计学意义(P=0.279),但凋亡明显减少(P=0.000)。抗体芯片显示I组较P组除IL-10表达增加之外,血管表皮生长因子(VEGF)的表达下调。结论 IL-10基因治疗肝纤维化中,将肝细胞做为IL-10基因的表达细胞具有可行性。IL-10基因修饰后,肝细胞除了高表达IL-10之外,还通过下调VEGF的表达间接作用。

转染病毒白细胞介素10基因对同种异体大鼠皮肤移植术后皮肤CD80和CD86表达率的影响

目的探讨免疫调节因子vIL-10基因对修复同种异体大鼠全层皮肤缺损的免疫耐受作用，以期为解决皮肤移植领域的免疫排斥问题提供理论依据，为解决大面积皮肤缺损病人皮源不足问题奠定必要的基础。办法将转染vIL-10的骨髓基质干细胞经腹腔注射输入实验组大鼠体内，以病毒白细胞介素10表达阳性的大鼠为受体，同种异体大鼠为供体，对照组为注射未转染vIL-10的骨髓基质干细胞的大鼠，空白组为注射同量生理盐水的大鼠，行同种异体全层皮肤移植。取3组1，2，3周的皮肤标本制成石蜡切片，进行免疫组织化学检测并拍照。观察在vIL-10的作用下CD80，CD86的表达率变化。结果CD80，CD86表达率不断升高，但实验组表达率较同期对照组、空白组明显降低（P〈0．05），同期对照组、空白组表达率无明显差异。结论转染病毒白细胞介素10能够降低CD80，CD86的表达水平进而影响T淋巴细胞分型，从而降低机体的免疫排斥反应。

白细胞介素2基因敲除诱发小鼠炎症性肠病的特点及其机制初步分析

近年来,利用免疫分子基因敲除动物模型、从免疫学机制分析入手对炎症性肠病(或称炎性肠疾病,inflammatory bowel disease,IBD)的探讨,极大地推动了对于IBD病因和发病机制的认识。特别是通过敲除白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)及其受体的基因而诱发小鼠IBD的实验研究,揭示了IBD可能与自身免疫性疾病有关,进一步认识了调控IL-2基因转录的蛋白激酶C-theta(protein kinase c-theta,PKC-θ)的作用和潜在应用价值。本文主要阐述IL-2基因敲除小鼠发生IBD的特点、以及T淋巴细胞的PKC-θ信号通路在此过程中的作用。

白细胞介素6基因敲除对阿尔茨海默病5×FAD模型小鼠β淀粉样蛋白沉积和认知的影响

目的探讨白细胞介素6(IL-6)基因敲除对阿尔茨海默病5×FAD转基因小鼠认知及脑组织病理变化的影响。方法IL-6+/-小鼠与5×FAD小鼠杂交,构建5×FAD;IL-6^(-/-)小鼠模型,并选用3、10月龄子代小鼠进行实验。采用行为学实验对小鼠的认知记忆功能进行分析;采用HE染色和β淀粉样蛋白(Aβ)免疫组织化学染色检测小鼠脑组织病理变化。结果得到5×FAD;IL-6^(-/-)模型小鼠(3月龄n=20,10月龄n=5)及5×FAD同窝对照小鼠(3月龄n=26,10月龄n=24),子代小鼠数量符合孟德尔定律。新物体识别实验结果显示,与同月龄5×FAD小鼠相比,3月龄5×FAD;IL-6^(-/-)小鼠的探索指数显著升高,差异有统计学意义(q=3.890,P=0.002)。Morris水迷宫空间探索结果显示,与同月龄5×FAD小鼠相比,3月龄5×FAD;IL-6^(-/-)小鼠目标象限停留时间及穿台次数增加,差异有统计学意义(q=3.797,P=0.012;q=2.505,P=0.017)。免疫组织化学染色结果显示,IL-6基因敲除显著减少3、10月龄5×FAD小鼠海马(q=13.490,P=0.002;q=45.680,P<0.001)及皮层(q=16.830,P=0.001;q=14.180,P=0.001)的Aβ沉积,差异有统计学意义。结论IL-6基因敲除可明显改善阿尔茨海默病5×FAD模型小鼠的空间记忆能力,减少小鼠大脑Aβ沉积。

香砂六君子汤对脾胃虚弱型萎缩性胃炎大鼠胃窦黏膜组织白细胞介素-6、10及热休克蛋白70表达的影响

目的观察香砂六君子汤对脾胃虚弱型慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃窦黏膜组织白细胞介素(IL)-6、IL-10及热休克蛋白70(HSP70)基因及蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法受试大鼠按随机数字表法分为空白组和造模组,采用综合法复制脾胃虚弱型CAG动物模型,将成模大鼠随机分为模型组、阳性对照组和香砂六君子汤高、中、低剂量组。空白组和模型组大鼠予10 m L/(kg·d)蒸馏水灌胃,香砂六君子汤高、中、低剂量组分别予24、12、6 g/(kg·d)香砂六君子汤药剂灌胃,阳性对照组予0.30 g/(kg·d)维霉素药剂灌胃,连续120 d。检测各组大鼠胃窦黏膜组织IL-6、IL-10含量,实时荧光定量PCR检测胃窦黏膜组织IL-6、IL-10和HSP70 m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测HSP70蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠一般生存状况较差,大鼠胃窦黏膜组织IL-6 m RNA表达、IL-6含量显著升高(P<0.05,P<0.01),IL-10 m RNA表达、IL-10含量显著降低(P<0.05,P<0.01),HSP70基因和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,香砂六君子汤高剂量组大鼠一般生存状况明显改善,大鼠胃窦黏膜组织IL-6 m RNA表达、IL-6含量显著降低(P<0.05,P<0.01),IL-10 m RNA表达、IL-10含量显著升高(P<0.05),香砂六君子汤高、中剂量组HSP70基因和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论香砂六君子汤对脾胃虚弱型CAG大鼠胃窦黏模具有保护作用。

乙型肝炎病毒C基因启动子变异与白细胞介素10与12、肿瘤坏死因子α、γ-干扰素及病毒含量的关系

目的探讨慢性肝病患者乙型肝炎病毒C基因启动子变异(HBV BCP)与血清白细胞介素10(IL-10)、12(IL-12)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)及病毒含量(HBV DNA)的关系。方法采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对176例HBV慢性感染者(慢性乙型病毒性肝炎轻、中、重度,肝炎肝硬化,慢性重型肝炎和原发性肝癌)血清进行检测HBV BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764碱基G→A联合突变;采用双抗体夹心ELISA检测技术,检测患者血清细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)水平。结果HBVBCP变异阳性组、阴性组间对细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)及HBV DNA复制水平的影响差异有统计学意义(P<0.05),BCP变异阳性组的血清IL-10(80.96±30.86vs72.11±24.19 mg/L)I、L-12(41.33±15.10vs35.98±14.47 mg/L)、TNF-α(56.04±27.05vs38.01±10.49 mg/L)、IFN-γ(19.81±12.29vs16.55±8.99mg/L)和HBV DNA(108.2478±0.9826vs105.8876±1.4822拷贝/ml)的水平明显高于BCP变异阴性组。结论HBV BCP变异可导致血清IL-10I、L-12、TNF-α、IFN-γ和病毒复制水平增高。

局灶性脑缺血大鼠白细胞介素10的变化

探讨脑缺血后不同时间血清和局部脑缺血组织白细胞介素10的变化。采用改良zea Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,在缺血不同时间,应用双抗体夹心间接酶联免疫吸附法检测缺血组和假手术对照组大鼠受损脑组织及血清中白细胞介素10的浓度。结果发现,缺血组脑组织白细胞介素10含量在大脑中动脉闭塞3h处于较低水平,与假手术对照组比较无明显变化(P>0.05);6 h达最低,与假手术对照组比较变化显著(P<0.01),随后逐渐升高(P<0.05);血清中白细胞介素10含量在3 h最低,与假手术对照组比较变化显著(P<0.05),随后逐渐升高(P<0.05)。结果提示,白细胞介素10对脑缺血损伤可能有保护作用。

白细胞介素-10对大鼠脑缺血的保护作用

目的 探讨白细胞介素(IL)-10对大鼠脑缺血保护作用的机制。 方法 采用改良Zea Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO)。将健康成年大鼠随机分组原则分成以下4组:IL-10干预组、等渗盐水对照组、单纯缺血组和假手术组,每组8只。干预组在缺血3 h经侧脑室注射1μg人工重组IL-10,对照组注射5μl等渗盐水。单纯缺血组和假手术组不作干预治疗。24 h后观察血清和脑组织中一氧化氮、丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)的变化。 结果 应用IL-10组大鼠脑组织中一氧化氮、丙二醛、SOD、内皮型NOS(eNOS)、诱导型NOS(iNOS)和神经元型NOS(nNos)分别为(2.12±0.35)μmol／g、(2.95±0.99)μmol／g、(248±21)×103IU／g、(0.81±0.21)×103IU／g、(0.52±0.20)×103IU／g和(1.5±0.4)×103IU／g,与等渗盐水组大鼠比较iNOS、丙二醛和一氧化氮明显降低,SOD明显升高(P<0.05),而eNOS和nNOS变化不明显(P>0.05)。应用IL-10大鼠组血清中一氧化氮、丙二醛、SOD、eNOS、iNOS和nNOS分别为(35±15)μmol／g、(12.9±1.5)μmol／g、(316±33)×103IU／g、(1.1±0.3)×103IU／g、(0.8±0.4)×103IU／g及(2.1±0.7)×103IU／g,与等渗盐水组大鼠比较差异无显著意义(P>0.05)。无论大鼠脑组织还是血清中一氧化氮、