白细胞介素-12 通过抑制STAT3 途径调控非小细胞肺癌细胞生物学行为及免疫逃逸因子分泌的研究

目的探索白细胞介素-12(IL-12)对非小细胞肺癌细胞生物学行为及免疫逃逸因子分泌的影响。方法收集126例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁正常组织,通过实时定量PCR检测IL-12、STAT3 mRNA的表达水平。构建人肺腺癌A549细胞模型,分为空白对照组、腺病毒对照组、IL-12腺病毒组、质粒对照组、STAT3质粒组、IL-12与STAT3共转染组。比较各组细胞增殖及凋亡情况,采用ELISA法检测细胞培养液中IL-2、INF-γ、TNF-α的分泌量,采用Western blot法检测IL-12、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平。结果肺癌组织较癌旁组织IL-12 mRNA表达量降低、STAT3 mRNA表达量增高。IL-12腺病毒组较各对照组细胞增殖及活力降低、凋亡增加。STAT3质粒组细胞增殖及凋亡结果则与之相反。IL-12、STAT3共转染组细胞增殖、活力以及凋亡情况介于IL-12腺病毒组与STAT3质粒组之间。此外,IL-12腺病毒组细胞培养液中IL-12、TNF-α、IFN-γ含量明显高于STAT3质粒组,而STAT3质粒组STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著高于在IL-12腺病毒组。结论IL-12对非小细胞肺癌细胞具有抑制增殖、降低活力及诱导凋亡的能力,其作用机制可能通过抑制STAT3途径以及免疫逃逸而实现。

创伤修复中白细胞介素12的生物学特性及其作用

研究证实,白细胞介素12(IL-12)在创伤修复与创伤免疫领域中应用比较广泛,对烧伤、放射损伤、复合伤、多发伤等不同类型的创伤均有作用,但不同创伤条件下,IL-12水平的变化以及IL-12基因表达的作用是不相同的。IL-12具有的强大免疫调节功能与造血调控的多功能作用,主要由黏附细胞(单核/巨噬细胞)和B淋巴细胞产生,具有独特的分子结构和生物学意义。IL-12对自然杀伤细胞和T细胞有明显的增殖作用,对多种细胞因子有诱导作用,对Th1细胞有调节作用,可调节淋巴样细胞表面的一些分子基因表达。

人单链白细胞介素12的原核表达和生物学活性鉴定

目的构建含人单链白细胞介素12(hscIL-12)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达具有活性的hscIL-12。方法 PCR法从质粒pCA13-hscIL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a(+)-hscIL-12,转入到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌液进行蛋白质印迹分析,经镍柱亲和层析(Ni2+-NTA)纯化,体外增殖实验检测其生物学活性。结果 PCR扩增、双酶切及DNA序列测定证实pET28a(+)载体上成功插入了hscIL-12基因片段。表达产物经SDS-PAGE电泳分析,证明其相对分子质量为70×103;蛋白质印记表明重组蛋白具有hscIL-12抗原活性;表达产物纯化、复性后进行体外生物学活性实验表明,该重组蛋白能刺激外周血单核细胞(PBMC)产生IFN-γ。结论 pET28a(+)-hscIL-12原核表达载体的构建和重组hscIL-12蛋白的制备为进一步研究hscIL-12生物学功能和临床应用奠定了基础。

白细胞介素12在肝癌中的差异表达及生物信息学分析

目的:通过生物信息学方法分析白细胞介素12(Interleukin-12,IL-12)在肝细胞肝癌组织中的表达及其意义。方法:从肿瘤基因组图谱计划(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中获取肝癌样本与对照样本的数据,通过Ualcan在线工具分析IL12A和IL12B基因的表达数据、甲基化情况,筛选共表达基因,并通过GO(Gene Ontology)富集分析、KEGG通路分析确定共表达基因的生物学过程及其相关功能;使用Kaplan-Meier生存分析法分析患者的生存时间及生存率,并绘制表达水平与预后生存曲线。结果:本研究表明与正常的肝脏组织相比较,IL12A在肝癌组织中的表达量显著升高,但IL12B在二者之间没有显著的差异表达。IL12A在肝癌组织中的甲基化程度要明显低于正常组织。同时IL12A在不同肝癌分期中也存在差异表达。与IL12A共表达的基因主要参与了细胞增殖、代谢过程、免疫反应、应激反应等生物学过程,并参与了DNA复制、RNA转运、细胞周期调节、蛋白水解、错配修复等生物学通路。同时IL12A基因表达量高的肝癌患者的生存率明显低于其表达量低的患者。结论:IL12A基因在肝细胞肝癌组织中高表达,并且同肝癌的发生、发展密切相关,其表达量与预后生存率也有相关性;因此,IL12A可以作为肝癌诊断筛选、预后效果预测的标志物之一。

从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析

[目的]研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。

从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析

目的研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。方法ELISA法测定纯化的hIL-12诱使外周血单个核细胞产生IFN-γ的量。结果纯化的hIL-12在体外能刺激PBMC产生IFN-γ,而野生对照组无作用。结论本实验室从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。

鼠白细胞介素-12双亚基共表达质粒的构建及在体内外的表达

目的 :构建双亚基共表达鼠白细胞介素 - 12 (m IL- 12 )真核表达质粒 ,并观察其在体内外的表达。方法 :将m IL - 12 p35和 p4 0全长编码 c DNA构建在 pc DN A 3.1载体上 ,然后把 p35表达单元 (CMV- p35 - BGH PA)插入pc DNA 3.1/ p4 0载体 ,使两个目的基因均受各自的启动子 CMV控制 ,构建成 m IL - 12双亚基共表达质粒 p Cm IL -12 ,并进行体内外表达。结果 :p Cm IL - 12在体外转染 COS- 7细胞后 ,经 EL ISA证实有 m IL- 12表达 ,其表达上清能在体外明显增强小鼠 NK细胞活性。小鼠皮内注射 p Cm IL - 12亦能增强小鼠 NK细胞活性。结论 :所构建的质粒在体内外均能表达有生物学活性的 m IL-

马铃薯块茎特异性启动子驱动的人白细胞介素-12的遗传转化研究

为获得高效表达人白细胞介素-12(h IL-12)蛋白的转基因马铃薯植株,利用根瘤农杆菌侵染法将前期构建的马铃薯块茎特异性启动子Ppatatin驱动的h IL-12植物表达载体导入马铃薯,通过共培养、筛选、分化等过程获得转基因植株,并结合PCR、RT-PCR、GUS染色及ELISA分析对转基因植株进行鉴定。结果显示,获得12个马铃薯转基因株系,PCR检测表明其中的10个株系目的基因已导入马铃薯基因组,转基因阳性率为83%;RT-PCR分析表明其中的7个株系外源基因在转录水平成功获得表达,ELISA分析表明其中的5个株系有明显的蛋白水平表达。对这7个株系后代的检测表明外源基因成功表达且具有良好的遗传稳定性。

白细胞介素12:重要的免疫调节因子

IL－12是由巨噬细胞和B细胞产生的一种异二聚体细胞团子，具有多种生物学活性的免疫效应细胞生长刺激因子。能显著增强NK／LAK细胞的杀伤活性，促进特异性CTL细胞的应答能力，诱导γ干扰素，它不仅对细胞免疫具有增强调节作用，且可与其它细胞因子协同作用，有可能成为重要的免疫治疗细胞因子。

白细胞介素12基因的体外抗结肠癌效应

目的 构建共表达P35、P4 0二个亚基的逆转录病毒载体 (Rv mIL12 )、建立PA317 mIL12包装细胞系并评估其IL12的生物学活性及经PA317 mIL12作用后淋巴细胞对结肠癌细胞 (C2 6 )的体外杀伤作用。方法 将经PCR扩增mIL12 p35、p4 0获取的 p35和 p4 0双亚基cDNA片段与经NotI及SalI酶切的逆转录病毒载体 (PL P35 P P4 0 SN)DNA在T4噬菌体DNA连接酶作用下进行粘端连接反应。然后将构建的 pGCXEXPN mIL12经电穿孔法转录单嗜性逆转录病毒包装细胞系 (PE5 0 1) ,再以其病毒上清加Polybrene感染PA317,筛选出病毒滴度最高的携有mIL12逆转录病毒载体的包装细胞系 :PA317 mIL12。采用脾淋巴细胞增殖法检测PA317 mIL12的生物学活性。另外 ,将PA317 mIL12、淋巴细胞以及人结肠癌细胞 (LOVO)按不同浓度比体外共同培养 ,采用MTT法检测经PA317 mIL12作用后的淋巴细胞对LOVO的杀伤率。结果 经筛选的携有mIL12逆转录病毒载体包装细胞系PA317 mIL12的上清mIL12浓度达 2 7ng/ ( 10 6cells·4 8h) ,其促脾淋巴细胞增殖的生物学活性也与mIL12标准品活性相近 ,经PA317 mIL12作用后的淋巴细胞体外杀伤试验结果则显示 :随着PA317 mIL12浓度的增高 ,其淋巴细胞对结肠癌细胞杀伤作用也逐渐增强 ,与对照组相比统计学有显著性差异

白细胞介素12和13的研究进展

白细胞介素１２和１３的研究进展王鲁男（锦州医学院）近一年来，随着分子克隆技术的不断进展，一个又一个白细胞介素的ｃＤＮＡ被克隆成功，形成白细胞介素的研究高潮。到１９９３年，包括白细胞介素１～１３，已被发现和克隆化，极大地促进了白细胞介素的结构和功能的研...

白细胞介素12与免疫性肾疾病

IL 12是一种具有多种免疫调节功能的异源二聚体细胞因子 ,主要由抗原提呈细胞产生 ,具有多种生理及病理功能。IL 12是诱导组织特异性自身免疫的关键因子。IL 12在自身免疫性疾病 ,尤其是在免疫性肾损伤的发病机制中起重要作用。本文概述了IL 12的生物学活性和功能、与自身免疫性疾病的关系及其在免疫性肾疾病发病机理的作用。

白细胞介素-12的研究概况

白细胞介素-12(IL-12)是新近发现的一种细胞因子,具有多种生物学功能。它能够诱导NK细胞、LAK细胞、CTL细胞的增殖。在天然免疫中IL-12通过NK细胞发挥作用,刺激NK细胞的活化,增殖和产生IFN-γ。在获得性免疫中,通过调节T细胞发挥作用,促进幼稚Th细胞分化为Th1细胞,从而加强细胞免疫,是联系天然免疫和获得性免疫发生的枢纽。具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用。在动物传染病的预防和治疗中具有广阔的应用前景。

小鼠白细胞介素12研究新进展

小鼠白细胞介素１２研究新进展刘锰综述郑珊珊审阅（中国医学科学院基础医学研究所免疫学研究室，北京）白细胞介素１２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１２，ＩＬ－１２），又称天然杀伤细胞刺激因子（ＮａｔｕｒａｌＫｉ－ｌｌｅｒＣｅｌｌＳｔｉｍｕｌａｔｏｒｙＦａｃｔｏｒ...

白细胞介素12与感染性疾病

白细胞介素12（IL－12）是异二聚体细胞因子（CK），主要由抗原递呈细胞（APCs）产生，在介导对原虫、胞内菌、真菌、病毒等病原的细胞免疫中起主要作用，其作用包括：诱导静止及活化的天然杀伤细胞（NK）及T细胞产生γ干扰素（γ－IFN）；促进NK及T细胞的增殖；增强NK的细胞毒作用；促使细胞毒T淋巴细胞（CTL）的成熟。IL－12是感。染性疾病的早期先天免疫及后期特异免疫的桥梁，它的产生在CK网络中受到正负反馈机制的调节。宿主防御各种感染的过程中，IL－12起保护作用的同时于某些疾病状态下也有不利作用。因此，IL－12很有希望应用于适当条件下各种人类感染性疾病的防治。

人IL-12在昆虫细胞中的表达及其体外生物活性的检测

目的：建立表达具有生物活性的人 Ｉ Ｌ１２ 的杆状病毒／昆虫细胞表达系统。方法：将ｐ４０ 和ｐ３５ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 一起构建入杆状病毒转移载体ｐ Ａｃ Ｕ Ｗ４２，然后与杆状病毒 Ａｃ Ｕ Ｗ １．ｌａｃ Ｚ Ｄ Ｎ Ａ 共同转染昆虫细胞 Ｓｆ９，使两者产生同源重组；随后利用病毒空斑实验筛选重组的杆状病毒，再由 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 筛选及鉴定表达 Ｉ Ｌ１２ 的重组病毒，并进行 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ 和体外生物活性的检测。结果：经病毒空斑试验、 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ 逐步阳性选择的 Ｉ Ｌ１２ 重组杆状病毒，其感染 Ｓｆ９ 细胞的上清与 Ｉ Ｌ１２标准品一样具备刺激正常人外周血 Ｔ 淋巴细胞增生的生物活性。结论：本研究建立了能表达具有体外生物活性的人重组 Ｉ Ｌ１２ 的杆状病毒／昆虫表达系统。

从白介素-12看肿瘤生物治疗

白介素－１２是一个免疫反应早期的调控因子，能激发机体强有力的抗肿瘤和抗感染免疫，但它的作用机制十分复杂，不同条件下的作用很不相同，甚至相反，还可能有严重的副作用。通过对其近１０年研究历程的回顾，有助于更加准确地看待当今的肿瘤生物治疗。