白细胞介素12的p35和p40在大肠埃希菌中的克隆表达

目的用基因工程的方法在大肠埃希菌中克隆表达白细胞介素12(IL12)的两个亚单位基因p35和p40。方法从乳腺癌患者全血中分离淋巴细胞,利用RTPCR扩增获得了IL12的2个亚单位基因p35和p40,分别转化到大肠埃希菌中,获得了高效表达。结果薄层扫描分析结果表明,在BL21(DE3)中表达的重组蛋白IL12P35和IL12P40分别占菌体裂解液中蛋白总量的39%和30%。结论该实验结果为IL12在体外的批量生产奠定了基础。

猪白细胞介素12 p35、p40亚基基因的克隆和序列分析

目的:克隆猪白细胞介素(IL)-12p35、p40亚基基因,为制备猪囊尾蚴的复合基因疫苗奠定基础。方法:分别分离成年猪的外周血单个核细胞和脾细胞,培养10h后用IFN-γ(100ng/ml)刺激增殖12h,随后加入细菌脂多糖(1μg/ml)刺激培养3h,分别收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增猪IL-12p35、p40cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,经PCR和双酶切鉴定后进行序列测定。结果:猪IL-12p35、p40cDNAPCR产物电泳结果证明所克隆的基因分别为616bp和1011bp,基因测序结果与GenBank报道的基因序列各有一个碱基差异,但编码氨基酸无差异,证实分别为猪IL-12p35、p40cDNA编码基因。结论:成功克隆了猪IL-12p35、p40cDNA编码基因。

巨细胞病毒肝炎患儿IL-12p40 3′非翻译区基因多态性研究

目的研究巨细胞病毒（CMV）肝炎患儿IL-12p403＇非翻译区rs3212227位点的基因型分布，探讨该位点的单核苷酸多态性与婴儿CMV肝炎发生的关系。方法应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术和基因测序方法测定105例健康儿童及122例CMV肝炎患儿IL-12p403＇非翻译区rs3212227位点基因型，采用双抗体夹心ELISA法、速率法和实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCIR）分别测定CMV肝炎患儿血清IL-12p40水平、ALT活性及尿HCMVDNA载量。结果CNV肝炎组IL-12p40rs3212227位点AA、AC、CC基因型分布频率分别为34．4％、41．8％、23．8％，正常对照组分另q为47．6％、40．0％、12．4％，两组间cc基因型和非cc基因型之间频率分布差异有统计学意义（x2=4．855，P〈0．05，ORcc=2．207，95％cI：1．080～4．510）。CMV肝炎组IL一12p40rs3212227位点等位基因A、c分布频率分别55．3％、44．7％，对照组分别为67．6％、32．4％，两组等位基因频率比较差异有统计学意义（x2=7．168，P〈0．01；ORA=0．593，95％CI：0．404～0．871；ORc：1．686，95％CI：1．149—2．475）。rs3212227位点不同基因型的CMV肝炎患儿之间血清IL-12p40水平、尿HCMVDNA载量（拷贝／毫升，lg）差异均有统计学意义（H=7．385、F=9．325，P均〈0．05），CC基因型患儿血清IL-12p40水平低于AA基因型，尿液HcMVDNA载量高于AA基因型，不剐基因型患儿之间血清ALT活性差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IL—12p403’非翻译区rs3212227位点单核苷酸多态性与婴儿cMV肝炎的发生具有相关性，其中c等位基因可能是其遗传易感基因，携带c等位基因的个体可能更利于cMV病毒的复制。

伴与不伴躯体化症状青少年抑郁障碍病人白细胞介素水平研究

目的:检测青少年抑郁障碍病人血清白细胞介素(IL)水平,并分析其与躯体化症状的相关性。方法:选择2020年12月至2021年12月在合肥市第四人民医院治疗的13~18岁的青少年抑郁障碍病人93例,根据是否伴功能性躯体化症状(functional somatic symptoms,FSS),分为伴FSS组(40例)与不伴FSS组(53例)。同时选取32名正常青少年人群作为对照组。采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、儿童躯体化量表(CSI)对疾病抑郁障碍现状进行评估。采用酶联免疫吸附试验法检测被试儿童血清IL-13及IL-12/23p40因子水平。结果:伴FSS青少年抑郁组IL-13因子水平显著高于不伴FSS组和对照组(P<0.05),不伴FSS组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);伴FSS组IL-12/23p40因子水平显著高于不伴FSS组(P<0.05),两者与对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。IL-13水平与CSI总分及分因子分均呈正相关关系(r=0.360、0.286、0.366、0.310、0.336,P<0.01);IL-12/23p40水平与CSI总分及分因子分均呈正相关关系(r=0.333、0.360、0.275、0.280、0.313,P<0.01)。结论:伴躯体化症状的青少年抑郁病人的血清IL-13水平异常,且与躯体化症状呈正相关。

小鼠白细胞介素12基因的钓取及其在COS-7细胞中的表达

目的 :钓取小鼠白细胞介素 12 (m IL- 12 ) p4 0和 p35c DNA并检测其在哺乳动物细胞 (COS- 7)中的表达。方法 :RT- PCR法从小鼠腹腔巨噬细胞 m RNA中扩增 p4 0和 p35亚基 ;脂质体Lipofect AMINE将质粒 p NG- m IL- 12转染至 COS- 7细胞 ,ELISA法检测不同时间 m IL- 12表达水平。结果 :1RT- PCR法扩增出特异的 p4 0和 p35亚基 ,p35亚基克隆至 p KS载体测序 ;2 EL ISA法检测转染 p NG- m IL- 12的 COS- 7细胞上清有 m IL- 12分泌。结论 :为进一步研究 m IL- 12的免疫调节机制及其抑瘤作用奠定了基础。

转化生长因子-β1和白介素-12p40在过敏性紫癜发病中的作用

目的:探讨转化生长因子(TGF)-β1和白介素12p40亚单位(IL-12p40)在过敏性紫癜(AP)发病中的作用及意义。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测AP患者(急性期49例,恢复期15例)与30名正常人TGF-β1和IL-12p40水平。结果:①急性期AP患者血清TGF-β1显著高于正常人(P<0.05),患者组治疗前高于治疗后(P<0.01),混合型组TGF-β1值显著升高(P<0.05);②复发组IL-12p40显著高于首发组和对照组(P<0.01)。结论:TGF-β1和IL-12p40可能是介导过敏性紫癜血管炎症损伤过程中的重要细胞因子;TGF-β1与AP的病情严重程度和病程有显著相关性,IL-12p40检测对于监测AP复发有一定意义。

人白介素-12(P40)亚基在巴斯德毕赤酵母中的表达

运用PCR技术特异性地扩增了人IL 1 2p4 0亚基cDNA的编码区序列 ,得到 94 0bp的扩增片段 ,将其克隆于毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαC的ClaⅠ ,XbaⅠ位点 ,构建成重组表达质粒pPICZαC p4 0 .经LiCl2 转化 ,Zeocin抗性筛选 ,得到含多拷贝p4 0基因的酵母工程菌PichiapastorisX 3 3 /p4 0 ,在 φ =0 5%甲醇诱导下 ,p4 0基因得到了分泌型表达 ,培养上清的SDS PAGE及Western blot均显示表达产物相对分子质量约 4 40 0 0 ,与预计大小相符 ,薄层凝胶扫描结果表明 ,分泌型表达蛋白占培养上清总蛋白量质量的 4 7% .

湿疹患者血清中IL-10,IL-12p40及IL-18水平检测

目的观察湿疹患者血清IL-10,IL-12p40及IL-18的水平,探讨其在湿疹发病机制中的作用和临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测14例急性期湿疹患者、19例非急性期湿疹患者和15例正常对照者血清中IL-10,IL-12p40及IL-18的水平。结果①血清IL-10水平急性湿疹组低于对照组,非急性湿疹患者组高于对照组(P<0.05)。②血清IL-12p40水平急性湿疹组与非急性湿疹组均高于对照组,且非急性湿疹组高于急性湿疹组(P<0.05)。③血清IL-18水平急性湿疹组与非急性湿疹组均高于对照组(P<0.05),急性湿疹组与非急性湿疹组差异无显著性意义(P>0.05)。结论湿疹患者体内可能存在Th1/Th2型细胞因子分泌紊乱。

白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素12(IL-12)对肺腺癌细胞作用机制的研究

目的:探讨人肺腺癌A549/DDP的多药抗药机理。方法:采用四氮唑盐快速比色法(MTT法)进行体外细胞毒性实验;免疫组化方法检测A549及A549/DDP在细胞因子作用前后突变型P53、bc l-2、MDR1的表达。结果:IL-2与顺铂合用前顺铂对两株细胞的毒性作用无明显变化;IL-12与顺铂合用后顺铂对两株细胞的毒性作用明显增强;IL-2、IL-12与顺铂合用后顺铂对两株细胞的毒性作用进一步增强。免疫组化结果显示:IL-2作用于两株细胞后,突变型P53、bc l-2、MDR1的表达无明显变化;IL-12作用于两株细胞后,bc l-2、突变型P53、MDR1的表达均下调,IL-2能增强上述作用。结论:IL-12与顺铂具有协同抑制肺腺癌A549细胞的作用,IL-12能增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,IL-2能进一步增强上述作用。

湿疹皮损处IL-10、IL-12p40及IL-18的表达及临床意义

检测湿疹患者皮损中IL-10、IL-12p40和IL-18的表达情况,并探讨其临床意义,采用SABC免疫组化法检测16例非急性期(包括亚急性和慢性)湿疹患者皮损及10例正常皮肤角质形成细胞中IL-10、IL-12p40和IL-18的表达情况。结果:IL-10、IL-12p40和IL-18定位于角质形成细胞胞浆内,表皮全层均有分布,三种细胞因子在正常皮肤角质形成细胞内呈阴性或弱阳性表达,在湿疹患者皮损组织中表达阳性或强阳性,差异有统计学意义(P<0.05)。湿疹患者皮损处存在Th1/Th2型细胞因子的分泌异常,可能与其发病相关。

阻断白介素12p40功能的新型治疗性单克隆抗体的开发

目的设计并利用抗体工程方法构建并制备全新序列的阻断白介素12(IL-12)p40功能的单克隆抗体MAB1,并对其生物学活性进行鉴定,以制备可应用于治疗多种自身免疫病的IL-12通路的阻断剂。方法根据已有的IL-12 p40蛋白序列,设计、构建并制备了全新的单克隆抗体MAB1,利用间接ELISA测定其与抗原结合的亲和力,并用细胞学方法鉴定它的生物学活性。结果抗体MAB1与p40抗原的结合亲和力为0.0399 nmol/L,并能明显抑制IL-12诱导的人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)水平上调。其抗原结合能力以及抑制IL-12生物学活性能力与美国强生公司抗体药Stelara(ustekinumab)相当或更优。结论全新构建的单克隆抗体MAB1可作为IL-12通路的高亲和力阻断剂,从而成为自身免疫疾病(例如斑块型银屑病)治疗用新药的临床候选药物。

血清白细胞介素-17A、白细胞介素-10及白细胞介素-12p70对肺炎支原体肺炎患儿预后评估价值

目的探讨血清白细胞介素(IL)-17A、IL-10及IL-12p70对肺炎支原体肺炎(MPP)患儿预后的评估价值。方法选取自2021年7月至2023年3月就诊于南通大学第六附属医院的100例MPP患儿设为MPP组;另选取同期30例健康体检患儿作为健康组。比较两组研究对象的血清IL-17A、IL-10及IL-12p70水平。进一步将MPP患儿分为预后良好组和预后不良组,收集并比较两组患儿的一般资料和实验室指标。采用Logistic分析血清IL-17A、IL-10及IL-12p70与MPP预后不良的关系;并进一步绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IL-17A、IL-10及IL-12p70对MPP预后不良的预测价值。结果MPP组治疗前24 h内血清IL-17A、IL-10及IL-12p70水平均高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。经治疗,预后良好组患儿76例,预后不良组患儿24例;两组患儿的年龄、胸腔积液、治疗天数、合并多重感染、抗菌联合用药、白细胞计数、血清IL-17A、IL-10及IL-12p70水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic分析结果显示,年龄、合并多重感染、抗菌联合用药、血清IL-17A、IL-10及IL-12p70均为影响MPP预后不良的危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清IL-17A、IL-10及IL-12p70水平联合诊断MPP患儿预后不良的曲线下面积最大,为0.997,敏感度、特异度分别为0.958、0.974,均优于各指标单独检测的效能。结论MPP患儿血清IL-17A、IL-10、IL-12p70水平明显升高,三者表达水平的变化与预后有关,可能成为MPP患儿预后评估的血清标志物。

体外LPS刺激及CD40的配基化对sCD40基因修饰DCs TLR4-MD2表达及IL-12分泌的影响

目的:研究体外LPS刺激及CD40的配基化对可溶性CD40(sCD40)基因修饰树突状细胞TLR4-MD2表达及IL-12分泌的影响,为有效利用树突状细胞诱导特异性移植免疫耐受提供实验依据。方法:脂质体法将质粒pEGFP-N1/sCD40及空质粒pEGFP-N1转染DC2.4细胞株;应用LPS及抗CD40单抗刺激6h,流式细胞仪检测DC表面TLR4-MD2的表达,RT-PCR法检测DC的TLR4mRNA表达水平,并用ELISA法检测细胞因子IL-12p70的分泌。结果:LPS刺激下调DC表面TLR4-MD2的表达,同时给予CD40配基化可引起TLR4-MD2的表达显著增高;CD40配基化对DCTLR4mRNA水平表达无影响,但可部分地增高LPS引起的TLR4mRNA表达降低;此外,CD40的配基化可显著诱导LPS刺激后IL-12分泌增加。sCD40基因修饰DC可拮抗以上作用。结论:体外LPS及抗CD40单抗刺激下,sCD40基因修饰树突状细胞可显著下调其表面TLR4-MD2的表达,IL-12p70分泌减少,可能与阻断胞浆内的TLR4-MD2的转运过程有关。

IL-12p35 siRNA干涉对大鼠髓源性树突状细胞表面分子表达的影响

目的:研究IL-12p35siRNA干涉对大鼠髓源性树突状细胞(DC)免疫功能的影响。方法:通过粒细胞-巨噬细胞型集落刺激因子(GM-CSF)I、L-4和脂多糖(LPS)体外培养体系,从大鼠骨髓中获得DC,化学合成小型干扰RNA(siRNA),体外转染DC。检测IL-12p35转录采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术。DC细胞表面分子CD80、CD40和MHCⅡ表达采用流式细胞仪分析。结果:IL-12p35siRNA转染后的DC表面分子CD80和MHCⅡ表达无明显改变,而CD40表达明显下降。结论:IL-12p35siRNA的转染不能干扰DC的成熟,但可以抑制其免疫应答功能。

白细胞介素-23的研究进展

白细胞介素-23(IL-23)是造血细胞因子家族成员,它是由p19和p40两个亚基组成的活性复合体,IL-23受体由IL-12β1和IL-23R构成,IL-23的信号途径与白细胞介素-12(IL-12)有相同的Jak-Stat信号分子,IL-23的功能与IL-12也存在许多相同之处,但也有其独特的功能。IL-23可作用于活化的T细胞、记忆性T细胞和树突状细胞,产生γ干扰素(IFN-γ)和IL-12等细胞因子,在炎症性疾病、自身免疫性疾病的发病以及抗肿瘤和抗感染等方面发挥重要作用,有望成为新的免疫治疗因子。

CD40L对B淋巴细胞表面分子及分泌IL-12的影响

在体外使用CD40L作用于B淋巴细胞使之活化,通过测定B淋巴细胞表面分子及分泌细胞因子的变化,探讨B淋巴细胞作为抗原递呈细胞在抗肿瘤免疫中的优势,为B淋巴细胞特异性活化细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)进而发挥其肿瘤细胞杀伤效应奠定基础.取7名健康成人外周静脉血,经淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),分为对照组和实验组,实验组培养液中加入加入CD40L和IL-4,共培养21 d.观察B淋巴细胞生长状况,并在第7 d、第14 d和第21 d,用流式细胞仪(FCAS)测定其表面分子CD80、CD86和CD19,在第21 d,使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中的IL-12水平.结果显示,在CD40L的作用下,B淋巴细胞呈克隆样增殖,并高表达表面分子CD80/CD86和CD19,和对照组相比,B淋巴细胞分泌IL-12水平升高(P<0.05).上述实验结果说明通过CD40L的刺激,B淋巴细胞得到了活化,提示通过该途径活化的B淋巴细胞具备了作为抗原递呈细胞而发挥其抗肿瘤免疫治疗的能力.

抗P选择素功能域单抗对人树突状细胞表型及IL-12分泌的影响

观察抗P选择素Lectin EGF功能域单抗 (PsL EGFmAb )对体外培养人树突状细胞 (DC )表型以及促炎细胞因子IL 1 2分泌的影响 ,探讨PsL EGFmAb对DC炎性成熟过程中的调节作用。通过SCF、GM CSF、TGF β1 、Flt 3和TNF α体外培养体系 ,从脐血CD34+ 造血干细胞中诱导扩增获得DC ,并于成熟中用PsL EGFmAb进行干预。采用流式细胞仪分析细胞表型CD1a、CD1 1c、CD83、CD80、CD86和HLA DR ;采用RT PCR检测IL 1 2p35、p4 0mRNA表达 ;以及ELISA法测定IL 1 2p70分泌的含量。结果显示 ,PsL EGFmAb可下调成熟中DC表面CD1 1c、CD83、CD80、CD86和HLA DR的表达 ,同时能抑制DC内IL 1 2p35、p4 0mRNA的转录和IL 1 2p70的分泌。本研究提示 ,PsL EGFmAb对DC黏附共刺激分子表达和促炎细胞因子合成具有抑制作用 。