白细胞介素⁃15预处理调控脓毒症诱导的心肌细胞凋亡及其相关机制研究

目的研究白细胞介素(IL)⁃15对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症心肌细胞凋亡的影响,并探讨其相关的作用机制。方法H9C2细胞分为对照组(常规培养的H9C2细胞)、凋亡组(建立LPS诱导的心肌细胞损伤模型,未进行其他干预)和干预组(采用10 ng/ml重组大鼠IL⁃15干预心肌H9C2细胞损伤模型6 h)。甲基噻唑基四唑(MTT)法和流式细胞仪检测IL⁃15干预对H9C2细胞增殖和凋亡的影响,四甲基罗丹明乙酯(TMRE)染色测定线粒体膜电位。10 mg/kg LPS腹腔注射建立小鼠脓毒症模型,采用腹腔注射含100μg/ml IL⁃15的生理盐水100μl进行干预。通过HE染色评估小鼠心肌病理损伤。ELISA法检测小鼠心肌组织氧化应激指标。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测小鼠心肌组织中血红素氧合酶(HO)⁃1、核转录相关因子2(Nrf2)mRNA和蛋白的表达。结果凋亡组H9C2细胞凋亡率[(47.9±5.1)%]明显高于对照组[(2.1±0.3)%],差异有统计学意义(P<0.05),而干预组H9C2细胞凋亡率[(20.7±2.7)%]则明显低于凋亡组(P<0.05)。LPS诱导可以显著抑制心肌细胞的增殖活性,IL⁃15能够抑制LPS诱导的心肌细胞活力降低(P<0.05)。凋亡组H9C2细胞线粒体膜电位相对值(2.6±4.6)明显低于对照组H9C2细胞线粒体膜电位相对值(7.4±5.2),差异有统计学意义(P<0.05);干预组H9C2细胞线粒体膜电位相对值(4.2±4.9)明显高于凋亡组(P<0.05)。LPS作用后显著增强了H9C2细胞线粒体膜电位的丧失,IL⁃15干预会减少LPS诱导的H9C2细胞线粒体膜电位的丧失。HE染色切片镜下观察显示小鼠脓毒症模型心肌组织出现明显损伤及炎症细胞浸润;IL⁃15干预可改善LPS诱导的小鼠心肌损伤。脓毒症模型小鼠心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T⁃AOC)水平较正常小鼠明显降低,而丙二醛(MDA)水平则明显升高(P<0.05)。IL⁃15干预小鼠心肌组织SOD、T⁃AOC水平均升高,MDA水平均降低(P<0.05)。正常小鼠心肌组织中HO⁃1和Nrf2的mRNA和蛋白表达水平均较低;脓毒症模型小鼠心肌组织中HO⁃1、Nrf2的mRNA和蛋白表达水平较正常小鼠明显升高(P<0.05);IL⁃15干预小鼠心肌组织中HO⁃1、Nrf2的mRNA和蛋白表达水平进一步升高(P<0.05)。结论IL⁃15可减轻脓毒症诱导的心肌细胞凋亡,改善脓毒症小鼠心肌损伤程度。其机制可能与IL⁃15激活HO⁃1/Nrf2信号通路,进而抑制脓毒症心肌组织氧化应激有关。

慢性HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其与白细胞介素15、白细胞介素16的相关性分析

目的分析慢性HBV感染者外周血T淋巴细胞(CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+)及细胞因子白细胞介素(IL)15、IL-16表达水平的变化及临床意义。方法选择2014年7-12月在兰州市第二人民医院治疗的慢性乙型肝炎患者63例(CHB组),慢性HBV携带者112例(ASC组),健康对照者84例(对照组),运用流式细胞术检测3组患者血清中T淋巴细胞亚群水平,酶联免疫法检测IL-15、IL-16表达水平,运用聚合酶链反应检测HBV DNA载量。多组间比较采用方差分析,组内数据的相关分析采用Pearson相关法。结果与健康对照组相比,ASC组和CHB组CD3+、CD4+T淋巴细胞百分数以及CD4+/CD8+T淋巴细胞百分数比值均显著降低,CD8+T淋巴细胞百分数显著升高,差异均有统计学意义(P值均<0.05);ASC组和CHB组IL-15、IL-16表达水平均显著高于健康对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。CHB患者中HBV DNA高载量组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T淋巴细胞百分数比值较HBV DNA低载量组显著降低,CD8+T淋巴细胞百分数显著升高,差异均有统计学意义(P值均<0.05);ASC组HBV DNA高载量者CD4+、CD4+/CD8+T淋巴细胞百分数比值显著低于HBV DNA低载量组,CD8+T淋巴细胞百分数显著高于HBV DNA低载量组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。CHB患者外周血CD4+表达水平与IL-15呈正相关(r=0.516,P<0.05),CD8+表达水平与IL-16呈正相关(r=0.665,P<0.05)。ASC组外周血CD3+表达水平与IL-15呈正相关(r=0.618,P<0.05)。结论 HBV感染者存在T细胞亚群比例异常,IL-15、IL-16可能导致机体存在不同程度细胞免疫功能障碍和细胞免疫调节异常。

重组人白细胞介素15工程菌高密度发酵条件探讨

目的研究表达重组人白细胞介素15(rhIL-15)工程菌高密度发酵的条件。方法采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目的蛋白质表达的因素进行优化。结果以甘油为碳源可明显抑制有害物质乙酸的积累,提高工程菌的表达量和收获率。高密度发酵明显提高了目的蛋白质的表达量和工程菌的产量。结论该发酵工艺大大提高了rhIL-15工程菌的产量和表达水平,为rhIL-15的规模化生产打下了基础。

白细胞介素-15在狼疮性肾炎活动病变中的临床意义

目的:检测狼疮肾炎(LN)患者外周血白细胞介素15(IL-15)水平,并进一步分析其与临床有关指标的关系及治疗前后的变化。方法:用酶联免疫吸附法(ELISA)方法检测外周血IL-15水平;采用梯度密度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs);并研究地塞米松对体外培养的活动期LN患者PBMCs分泌IL-15、IgG和dsDNA抗体的影响。结果:(1)LN组患者血清IL-15水平显著高于正常对照组(P<0.01),活动期LN患者血清IL-15水平显著高于缓解期患者(P<0.05)。(2)活动期LN患者血清IL-15水平与SLE活动性指数(SLEDAI)、抗dsDNA抗体、24h尿蛋白排泄量呈正相关关系,与补体C3呈负相关关系,而与血肌酐无相关关系。(3)激素联合环磷酰胺系统治疗活动期LN患者12周,治疗后随病情缓解血清IL-15水平明显下降。(4)体外培养的活动期LN患者PBMCs分泌IL-15、IgG、dsDNA抗体均显著高于正常对照组,而且IL-15分泌与dsDNA抗体和IgG合成呈正相关关系;地塞米松可明显抑制活动期LN患者PBMCs合成IL-15、IgG、dsDNA抗体。结论:LN患者外周血IL-15水平显著增高,IL-15可能参与LN的病理生理过程;血清IL-15水平检测可作为判断LN是否活动的指标之一。

重组人白细胞介素-15包涵体离子交换柱复性与稀释复性的比较

目的比较重组人白细胞介素-15 (rhIL-15 )包涵体蛋白稀释复性法与离子交换柱复性法的效果。方法采用离子交换柱吸附变性包涵体蛋白,用含有复性剂的洗脱液洗脱复性,所得蛋白质比活和稀释复性法所得比活比较。结果两种方法所得目的蛋白质比活相近,但离子交换柱复性法目的蛋白质回收率高,试剂消耗少。结论对于rhIL-15包涵体,离子交换柱复性法用于生产。

鼠白细胞介素15真核表达质粒的构建及活性鉴定

从经PMA刺激的小鼠脾细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术获得鼠白细胞介素15(mIL-15)基因,将其克隆至真核表达质粒VR1012中,转染COS-7细胞,将转染细胞裂解,Westernblot检测.表明获得了mIL-15真核表达载体,其具有完整的带有信号肽的mIL-15序列,重组结果正确,Westernblot检测阳性.并获得有生物活性的mIL-15蛋白.

荣昌猪白细胞介素15成熟肽基因的克隆、表达及其表达产物活性检测

运用RT-PCR技术从由刀豆蛋白(ConA)诱导培养的荣昌猪外周血淋巴细胞(PBMC)扩增出猪白细胞介素15(pIL-15)完整开放阅读框(ORF),共489 bp,编码162 aa。与已公布的2个猪IL-15基因核苷酸同源性均为99.4%。分子进化分析表明其与人及哺乳动物IL-15基因的进化关系较近,而与鸡的IL-15基因进化距离较远。运用PCR技术从含荣昌猪IL-15开放阅读框序列质粒中扩增其成熟蛋白编码基因,共345 bp。将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)后在E.coliBL21中诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白约为34 ku,重组蛋白以包涵体形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的38.7%;Western blot分析表明,在相对分子质量34 ku处有一条特异性带;对诱导重组菌进行转录检测得到约356 bp的特异性片段。MTT法试验证实,表达产物初步纯化、透析复性后,可明显增强淋巴细胞的增殖。荣昌猪IL-15成熟肽成功在体外表达,获得的高效表达的产物具有一定的生物学活性。

肺炎支原体感染并支气管哮喘发作患儿血清白细胞介素-15的表达

目的研究IL-15在肺炎支原体（MP）感染在支气管哮喘发病中的作用。方法收集2003年6月～2005年4月MP感染并支气管哮喘发作患儿、单纯MP下呼吸道感染患儿、非MP下呼吸道感染患儿和正常对照儿童各30例，采用ELISA方法检测各组患儿外周血IL-15水平。结果外周血IL-15水平在MP感染并支气管哮喘发作组[（2．67±0．93）ng／L]明显高于其他各组，外周血IL-15水平在单纯MP下呼吸道感染组[（2．13±0．64）ng／L]和非MP下呼吸道感染组[（2．10±0．83）ng／L]均显著高于正常对照组[（1．02±0．35）ng／L]，单纯MP下呼吸道感染组外周血IL-15水平与非MP下呼吸道感染组相比有所升高。但无显著性差异（P〉0．05）。结论MP感染后机体外周血IL-15水平升高可能参与支气管哮喘的发病过程。

重组人白细胞介素15的纯化及生物活性鉴定

目的 :探讨人白细胞介素 15的纯化工艺和进行活性鉴定。方法 :将rhIL 15工程菌大量扩增后通过包涵体提取、复性、凝胶过滤、阴离子交换层析、高效反相液相色谱等技术进行纯化。结果 :经纯化得到rhIL 15 ,其分子量为 14 4kD ,蛋白纯度为 99%以上 ,比活为 1× 10 7U/mg ,对NK细胞杀伤活性具有明显的促进作用。结论 :通过三步纯化方法可以获得高纯度、高回收率和高生物学活性的rhIL 15 ,且具有明显的促NK细胞杀伤活性。

猪白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

本研究通过RT-PCR方法从用ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪IL-15(pIL-15)编码序列的cD-NA,将其克隆至T载体pMD18-T后,序列测定表明pIL-15基因长度为489 bp,编码162个氨基酸。进一步通过PCR方法获得缺失其N端48 aa的信号肽序列的成熟pIL-15蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-28a的6×His下游,构建重组表达质粒pET-pIL15,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,重组菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到分子量约为15 ku的重组蛋白,其表达量占总菌体蛋白量的17.5%。Western blot试验也证实表达的重组融合蛋白6×His-pIL15能够很好地与抗6×His单抗发生反应。猪IL-15基因的克隆、表达为进一步研究其功能和应用奠定了基础。

脐血培养上清中白细胞介素15和干扰素-γ含量检测

目的 研究脐血单个核细胞 (CBMNC)经脂多糖 (LPS)刺激后生成白细胞介素 15 (IL 15 )和干扰素 γ(IFN γ)的能力。方法 采用ELISA法对 14例新生儿CB和 2 0例成人外周血 (APB)MNC经LPS刺激后培养 48h的上清进行测定。结果 CB及APBMNC经LPS刺激后培养 48h的上清中可检测到IL 15和IFN γ ,但CBMNC生成IL 15和IFN γ的能力明显低于APB[IL 15 ( 8.5 5± 0 .60 )ng/Lvs ( 10 .2 4± 1.66)ng/L ,IFN γ( 2 7.96± 5 .88)ng/Lvs ( 60 .5 9± 18.15 )ng/L ,P均 <0 .0 1]。 结论 CBMNC生成IL 15和IFN γ的能力低下 ,在一定程度上揭示了CB的免疫特性 ,同APB相比 。

白细胞介素-15协同新城疫病毒HN基因抗肿瘤免疫的作用

目的 探讨白细胞介素 15 (IL- 15 )质粒、新城疫病毒 HN基因 (PCD- HN)质粒对肿瘤免疫反应的作用。方法 采用 MTT法和乳酸脱氢酶释放法 ,检测 IL- 15质粒、PCD- HN质粒对小鼠抗肿瘤免疫反应作用中 T淋巴细胞的增殖和 NK细胞的活性。结果 IL- 15质粒、PCD- HN质粒同时免疫小鼠 ,其淋巴细胞增殖指数和 NK细胞活性的百分率明显高于其它各组。结论 IL- 15质粒联合 PCD- HN质粒免疫小鼠 ,对抑制肿瘤生长具有迭加效应。

白细胞介素1β刺激脑微血管内皮细胞内15-羟基前列腺素脱氢酶的经时变化

目的:探讨白细胞介素1β(IL1β)刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)15羟基前列腺素脱氢酶(15PGDH)活性的经时变化。方法:建立rCMEC培养方法,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞长至融合状态后,以30ng/ml浓度的IL1β分别刺激0.5、1、2、4、8、12、24h,以放射免疫法测定各刺激时间点15PGDH活性。结果:90%以上的培养细胞呈阳性,确定为rCMEC。加入IL1β刺激后2h,细胞内15PGDH活性与未刺激组比较有显著性差异(P<0.05);12h时达到最大值;24h时有所降低,但与未刺激组比较仍具显著性差异(P<0.01)。结论:rCMEC经IL1β刺激后,细胞内15PGDH活性经历一个逐渐升高,到达峰值后缓慢下降的过程,IL1β刺激12h内皮细胞15PGDH活性达峰值。

白细胞介素15和粒-单核集落刺激因子激活的自然杀伤T细胞对神经母细胞瘤细胞的杀伤作用

目的 研究白细胞介素 15 (IL 15 )和粒 单核集落刺激因子 (GM CSF)对健康儿童自然杀伤T细胞(NKT)增殖和对NKT细胞介导的神经母细胞瘤 (NB)细胞的细胞毒作用的影响。方法 采集分离健康儿童外周血T细胞 ,分别加入IL 15 ,GM CSF培养 ,MTT法检测T细胞增殖程度的变化 ,流式细胞仪检测NKT/T比例并分选出NKT细胞 ,MTT法检测NKT细胞对NB细胞毒作用。结果 IL 15刺激组、GM CSF刺激组和IL 15 +GM CSF刺激组T细胞增殖程度分别是对照组的 1.2 5倍、1.2倍和 1.4倍 (均P <0 .0 1) ;NKT/T比例分别是对照组的 2 .5 6倍、3.2 7倍和 4 .39倍 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ;GM CSF组和IL 15 +GM CSF组NKT细胞毒作用高于对照组 (均P <0 .0 1) ,IL 15组NKT细胞毒作用与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。与GM CSF组比较 ,IL 15 +GM CSF组T细胞增殖程度增高但NKT/T比例和NKT细胞毒作用差异无显著性。与IL 15组比较 ,IL 15+GM CSF组NKT/T比例和NKT细胞毒作用增高但T细胞增殖程度差异无显著性。IL 15组与GM CSF组T细胞增殖程度、NKT/T比例和细胞毒作用差异无显著性。结论 NKT细胞对NB具有细胞毒作用 ,IL 15和GM CSF联合应用可以促进健康儿童外周血NKT细胞增殖 ,增强NKT细胞对NB细胞毒作用。

乳腺癌根治术患者术后血清抗酒石酸盐酸性磷酸酶5b和糖类抗原15-3及白细胞介素-6水平与骨转移的关系

目的探讨乳腺癌根治术患者术后血清抗酒石酸盐酸性磷酸酶5b(TRACP5b)、糖类抗原15-3(CA15-3)、白细胞介素-6(IL-6)水平与骨转移的关系。方法选择2017年12月至2018年12月新乡市中心医院收治的122例行乳腺癌根治术患者为研究对象,术后1周检测患者血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平;随访1 a,记录患者骨转移发生情况;采用Pearson、Spearman相关性分析方法分析乳腺癌根治术后血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平与骨转移的相关性。结果122例患者中,无骨转移90例,骨转移32例,骨转移发生率为26.23%。骨转移患者术后血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平高于无骨转移患者(P<0.05),多发病灶患者术后血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平高于单发病灶患者(P<0.05)。乳腺癌根治术后患者血清TRACP5b、CA15-3水平与IL-6水平呈显著正相关(r=0.4126、0.4078,P<0.001)。乳腺癌根治术后患者血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平与骨转移程度呈显著正相关(r=0.5437、0.5328、0.3867,P<0.001)。结论乳腺癌患者术后血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平与骨转移的发生密切相关,且术后血清TRACP5b、CA15-3、IL-6水平越高,发生骨转移的程度越重。

白细胞介素15及其受体在儿童急性白血病中的表达和作用探讨

目的探讨IL-15水平及其受体在儿童急性白血病中的表达及作用。方法取确诊未治的儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)、儿童急性非淋巴细胞白血病(ANLL)和非白血病组儿童各20例,20例正常儿童的血清,测定不同组别对象血清IL-15的水平和不同组别对象的骨髓单个核细胞IL-15受体三个亚基α、β、γ的表达并进行半定量分析。结果急性白血病患儿血清IL-15水平较正常和对照组均出现明显下降;IL-15受体α、β、γ亚基的表达水平也均较正常组和对照组明显下降,但ALL与ANLL组之间和非白血病组与对照组之间差异无统计学意义。结论急性白血病患儿无论血清IL-15水平及其骨髓单个核细胞IL-15受体α、β、γ均出现下降。

川崎病患儿白细胞介素-15水平变化的临床意义

目的探讨白细胞介素-15(IL-15)在川崎病(KD)发病机制中的作用及其应用价值。方法选择2004年10月～2006年1月本院住院的30例KD患儿作为研究对象,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测KD患儿急性期和恢复期血清IL-15水平,同期检测30例下呼吸道感染发热期和20例正常健康儿童作为对照。结果急性期KD患儿血清IL-15水平明显高于健康对照组,二者比较有显著性差异(q=25.64P<0.01);恢复期KD患儿血清IL-15水平下降,但仍较健康对照组增高,二者比较有显著性差异(q=4.00P<0.01);KD患儿血清IL-15水平急性期与恢复期比较有显著性差异(t=14.87P<0.01)。KD患儿急性期和恢复期血清IL-15水平均明显高于下呼吸道感染患儿急性期和恢复期,有显著性差异(急性期t=6.28P<0.01;恢复期t=4.34P<0.01);急性期随KD患儿IL-15水平升高,ESR也相应升高,二者呈显著正相关(r=0.371P=0.044),但与外周血WBC计数、CRP和血清清蛋白(ALB)变化无明显相关性;与IgG存在正相关性(r=0.372P=0.043)。结论IL-15参与KD的病理生理过程,IL-15可能促使免疫细胞大量激活,进而介导组织免疫病理损伤。IL-15水平变化反映KD的病情状况,可能为早期诊断提供一定线索。

系统性红斑狼疮患者外周血白细胞介素15的研究

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清白细胞介素15(IL-15)水平及外周血单个核细胞(PBMC)IL-15mRNA表达,并进一步分析其临床意义。方法IL-15检测采用ELISA方法;PBMCIL-15mRNA表达采用原位杂交法检测。结果①SLE组患者血清IL-15水平显著高于正常对照组(P<0.01),活动期SLE患者血清IL-15水平显著高于缓解期患者(P<0.05)。②发生临床肾损害者IL-15水平明显高于无肾损害者(P<0.05),出现血清抗dsDNA抗体阳性、低补体C3血症、高IgG血症者血清IL-15水平均分别显著高于无上述表现者。③SLE患者PBMCIL-15mRNA表达量明显高于正常对照组(P<0.05),活动期SLE显著高于缓解期(P<0.05)。④SLE患者PBMC培养上清IgG、IgM和抗dsDNA抗体浓度均显著高于正常对照组;SLE患者PBMCIL-15mRNA表达量与细胞培养上清的IgG及抗dsDNA抗体滴度均呈正相关关系(分别为r=0.645和r=0.715,P<0.05),而与IgM无相关关系(r=0.451,P>0.05)。⑤SLE患者PBMCIL-15mRNA表达量与血清IL-15水平呈正相关关系(r=0.726,P<0.05)。结论SLE患者存在外周血IL-15蛋白和基因表达异常,且与其分泌免疫球蛋白和自身抗体有关,提示IL-15可能参与SLE的病理生理过程。

乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者血清白细胞介素-15、-17检测及意义

由乙型肝炎病毒（HBV）导致的慢加急性肝衰竭（ACLF）是我国传染病死亡的重要原因之一,目前其发生机制尚不明确。有学者提出的“三重打击（免疫损伤、缺血缺氧性损伤及内毒素血症）”学说和“免疫麻痹”学说,对细胞因子在ACLF中所起的作用进行了解释〔1〕。白细胞介素（IL）-15与IL-17在慢性乙型肝炎（CHB）的表达已有学者做了研究,