人类白细胞相关抗原G在移植免疫中的作用及其研究进展

人类白细胞相关抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)是一类非典型的人白细胞抗原I类分子(human lym-phocyte antigen I,HLA-I),最早发现其表达在母胎界面的绒毛膜滋养层层细胞表面,蛋白产物有HLA-G膜结合型和可溶性分子型。国内外多项研究表明HLA-G分子在免疫耐受状态的形成及维持中具有重要作用。现就其基因及蛋白产物表达特点、诱导免疫耐受的机制及临床移植应用研究做简要综述。

人类白细胞相关抗原G与复发性流产患者滋养细胞侵袭功能

复发性流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）是指同一伴侣连续发生3次及3次以上的自然流产[1]。其发生率占妊娠的1%~2%,其中40%~60%经各种临床检查未发现明确病因称不明原因复发性流产。目前的主要治疗方案为免疫治疗,但是仍然有20%~40%失败率。众多的研究证明HLA-G的表达水平与器官移植及妊娠的成功率呈明显正相关。

人类白细胞相关抗原B27在免疫相关性血细胞减少患者诊疗中的意义

为探讨人类白细胞相关抗原B27（HLA-B27）基因与免疫相关性血细胞减少（IRH）和全血细胞减少（IRP）发病的相关性，本研究观察了106例IRH／IRP患者血清中HLA-B27基因表达产物HLA-B27，抗原含量，分析HLA—B27，升高与该类疾病造血细胞损伤的可能关联及其临床意义。

白细胞共同抗原相关磷酸酶受体在大鼠视觉可塑性调控中的作用

目的探讨白细胞共同抗原相关磷酸酶受体(LAR)在大鼠视觉可塑性调控中的作用。方法选取初生Wistar大鼠40只,按照随机数字表法分为5个组,每组8只,分别于出生后1、3、5、7和9周各处死一组幼鼠。另选取32只10周龄健康清洁级成年Wistar大鼠32只,按照随机数字表法分为正常对照组、双眼形觉剥夺(BFD)组、氟西汀组和BFD+氟西汀组,每组8只。正常对照组大鼠不做任何干预,其余各组根据分组分别进行双眼眼睑缝合2周和/或0.2 mg/ml氟西汀无菌水溶液喂养4周。采用免疫荧光法观察各组大鼠视皮层LAR和硫酸软骨素多糖(CSPGs)的表达分布,采用Western blot法检测各组大鼠视皮层LAR表达量。结果大鼠视皮层LAR表达分布于细胞膜、细胞质及轴突,CSPGs表达分布于细胞间质;大鼠视皮层LAR和CSPGs荧光强度随周龄的增大出现增强的趋势。出生后1、3、5、7、9周大鼠视皮层LAR蛋白相对表达量分别为(100.00±3.20)%、(108.37±2.26)%、(113.69±2.33)%、(131.83±3.78)%和(140.11±4.02)%,总体比较差异有统计学意义(F=31.70,P=0.001)。大鼠视皮层LAR蛋白的相对表达量随视觉发育周龄的增大而逐渐增加(标准化β=0.961,P=0.007)。正常对照组成年大鼠视皮层LAR荧光强度最强,氟西汀组、BFD组和BFD+氟西汀组视皮层LAR荧光强度显著下降。正常对照组、氟西汀组、BFD组和BFD+氟西汀组大鼠视皮层LAR蛋白相对表达量分别为(100.00±2.96)%、(81.02±2.77)%、(71.99±3.09)%和(52.90±2.01)%,总体比较差异有统计学意义(F=18.16,P=0.015),其中氟西汀组、BFD组及BFD+氟西汀组LAR蛋白相对表达量均较正常对照组明显下降,差异均有统计学意义(t=31.30、36.10、41.72,均P<0.01)。结论视皮层LAR可能作为CSPGs特异性受体参与视觉可塑性的调控。

子痫前期孕产妇胎盘组织中过氧化氢对人类白细胞相关抗原G表达的影响

为了探讨子痫前期孕产妇胎盘组织中氧化应激产物过氧化氢（H2O2）对胎盘滋养细胞中的人类白细胞相关抗原G（HLA-G）表达的影响，南京医科大学第一附属医院妇产科周雪等选择了2008年10月至2009年10月间在该院住院的产妇40例，其中子痫前期组20例，

人类白细胞抗原B27和免疫指标在强直性脊柱炎诊断中的应用

目的探讨人类白细胞抗原B27(HLA B27)和免疫指标在强直性脊柱炎患者中检测的临床意义。方法选择98例强直性脊柱炎(AS)患者及30例健康对照者,检测HLA B27、T细胞亚群及免疫球蛋白。结果 98例AS患者中有84例患者HLA B27阳性,阳性率85.71%,与对照组的3.33%比较差异有统计学意义(P<0.01);HLA B27阳性患者与阴性患者比较,免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)以及T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值)水平无明显差异(P>0.05);AS患者IgG、IgA以及CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值较对照组显著升高,CD8+显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HLA B27、T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白均与AS密切相关,提示HLA B27与免疫功能指标对AS具有辅助诊断价值。

外周血白细胞淋巴细胞功能相关抗原-1表达对受者肾移植前后的作用

目的监测肾移植前后外周血白细胞淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的表达水平,了解其变化规律,探讨其在移植排斥反应中的意义。方法应用单克隆抗体-流式细胞术荧光抗体技术监测肾移植受者外周血白细胞淋巴细胞LFA-1表达水平。结果肾移植术后LFA-1表达水平较术前显著降低,并维持在低水平,发生排斥反应时显著升高,排斥时LFA-1表达水平与术后无排斥时及排斥反应控制后LFA-1比较差异有显著性,与术前比较差异无显著性。结论LFA-1在白细胞淋巴细胞上表达与排斥反应密切相关,监测FA-1的表达水平有助于肾移植排斥反应的诊断。

体外受精移植胚胎培养液中可溶性人白细胞抗原-G的研究

目的:检测体外受精移植(IVF-ET)胚胎,培养液中胚胎分泌的可溶性人白细胞抗原-G(sHLA-G)水平,探讨sHLA-G与IVF妊娠率的相关性。方法:收集2008年3-6月,唐都医院妇产科生殖中心进行试管婴儿的患者,体外单个培养胚胎的培养液,通过ELISA法检测培养液中sHLA-G的浓度。结果:在41例患者的84份胚胎培养液中,移植至少一个sHLA-G阳性胚胎的妊娠率69%,明显高于全部移植sHLA-G阴性的妊娠率18%(P<0.05)。结论:检测胚胎sHLA-G的表达水平,可以作为辅助形态学评估选择胚胎移植,预测IVF妊娠率。

胃粘膜Hp感染与淋巴滤泡周围上皮细胞HLA-DR抗原的表达

1 材料和方法1.1 材料活检标本取自260例患者,年龄18岁～74岁,平均40.3岁,男女比例为1.36:1,其中内镜诊断为慢性胃炎194例,胃溃疡14例,十二指肠球部溃疡52例.所有患者均未接受抗 Hp 治疗,胃癌和胃结核未纳入本研究.抗 HLA-DR 单克隆抗体为丹麦 Dako 公司产品,ABC 试剂盒为美国 Vector 公司产品.1.2 方法每例患者均在胃窦采集胃粘膜组织3块,1块用作Hp 培养,1块用作快速尿素酶实验,另1块作病理学检查.快速尿素酶检查或 Hp 培养出现一项阳性即认为有 Hp 感染存在.免疫组化染色采用 ABC 过氧化物酶法.用正常鼠血清代替一抗进行染色,作为阴性对照.用磷酸缓冲液代替一抗进行染色,作为空白对照.胃粘膜组织活检标本经福尔马林固定、脱水后石蜡包埋,4μm厚连续切片,分别作 HE 染色和 ABC 免疫组化染色,应用普通光学显微镜观察,若观察到淋巴细胞聚集和清晰的生发中心即认为有淋巴滤泡的存在,用 x^2检验判定 Hp阳性组与 Hp 阴性组胃粘膜淋巴滤泡发生差异有无显著性.根据淋巴滤泡周围 HLA-DR 抗原阳性上皮细胞表达范围分别判定:无胃粘膜上皮细胞表达 HLA-DR 抗原(-),紧邻淋巴滤泡不超过一个腺体范围的上皮细胞表达 HLA-DR 抗原(+)。

外周血循环肿瘤细胞在晚期肺癌患者的预测及预后价值研究

目的应用免疫磁珠阴性富集技术结合荧光细胞化学染色方法,检测肺癌患者外周静脉血中循环肿瘤细胞(CTC)的敏感性及特异性;分析肺癌患者CTC水平与临床疗效的相关性。方法 2007年7月～2008年4月在北京协和医院呼吸内科肺癌中心诊断的144例肺癌患者作为研究对象,并设健康对照组35例、良性肺疾病组28例。采集上述各组静脉血标本,应用免疫磁珠阴性富集分离及免疫荧光细胞化学染色方法检测静脉血中CK18^+/CD45^-/CTC计数,凡≥1判定为阳性。随访上述52例入院化疗患者治疗后CTC,与其临床疗效、生存进行相关性分析。结果健康和良性肺疾病组CTC检测阳性分别为2例(5.71%)及1例(3.57%),肺癌组未接受抗肿瘤治疗前CTC的阳性率64.5%(93/144)。其中Ⅲ_A、Ⅲ_B及Ⅳ期分别为32.0%、56.8%及78.0%。腺癌、鳞癌、小细胞癌CTC阳性率分别为66.7%、70%及62%。52例肺癌患者进行每周期化疗后CTC检测,疗前CTC阳性率69.2%(36/52),3个周期化疗后下降至6.5%(3/46),显示CTC与疗效相关。结论本检测方法简便,敏感性为93.1%,特异性为72.8%;CTC阳性率与疾病分期、吸烟、疗效及转移相关,CTC水平越高可能提示预后不良。

sHLA-G对复发性流产患者滋养细胞侵袭功能的影响

【目的】探讨外源性可溶性人类白细胞相关抗原G(sHLA-G)对不明原因复发性流产(RSA)患者滋养细胞侵袭功能的影响,为探索RSA的有效治疗措施提供依据.【方法】正常组30例,为正常早孕人流患者,无自然流产史,孕周8-10周;RSA组20例,相应孕周RSA患者,绒毛组织20例。滋养细胞原代培养,分离绒毛外滋养细胞,正常组患者每例滋养细胞接种1瓶、RSA患者每例3瓶备实验用。正常组及RSA对照组、研究1组、研究2组分别以生理盐水、生理盐水、5×10-4/L%终浓度sHLA-G、0.1%终浓度sHLA-G干预培养16 h,取悬浮细胞获得绒毛外滋养层细胞(EVCT)团,加入CD146单克隆抗体,采用流式细胞仪检测各组滋养细胞CD146阳性率。【结果】①正常组EVCT CD146阳性率为(63.29±6.76)%,明显高于RSA对照组(10.61±3.34)%,P<0.01。②研究1组EVCT的CD146的阳性率为(30.61±7.52)%,较RSA对照组显著升高,P<0.01;研究2组EVCT的CD146的阳性率为(64.15±9.54)%,显著高于研究1组及RSA对照组,P均<0.01,与正常组比较差异无统计学意义,P>0.05。【结论】外源性sHLA-G干预可显著提高RSA患者EVCT侵袭功能,可望成为RSA的有效治疗措施之一。

前炎因子、粘附分子与巨细胞动脉炎

巨细胞动脉炎,又称为颞动脉炎,是一种系统性和肉芽肿性动脉炎.它主要侵犯大中动脉,以颅动脉多见,尤其是颞动脉.此病好发于老年人,国外报道95%以上的病人年龄均在50岁以上.头痛,颞动脉异常,视力异常,发烧和体重减轻是最常见的初始症状.该病发病机制不明.据报道,人类白细胞相关抗原(HLA-DR4)与该疾病可能有关[1,2].目前主要认为免疫机制参与了巨细胞动脉炎的发生发展,现综述如下:

人类白细胞抗原G及其异构体mRNA在人类着床前胚胎的表达

目的研究人类白细胞抗原G（human leukocyte antigen，HLA-G）及其异构体mRNA在人类着床前胚胎的表达，探讨HLA-G在人类胚胎早期发育中的作用和意义。方法第四军医大学唐都医院妇产科生殖医学中心2003-01-2005-12期间，以体外受精-胚胎移植技术助孕过程中剩余的患者自愿捐赠的人类早期胚胎作为研究对象，采用巢式RT-PCR检测早期胚胎HLA-G及其异构体mRNA的表达。结果检测20个受精后2—3d的人类卵裂期胚胎，2、4、6、8细胞期胚胎各5个，有7个胚胎表达HLA-G及其部分的异构体mRNA。检测5个受精后4d的人类桑葚胚，全部表达HLA-G及其部分的异构体mRNA。检测25个受精后6d的扩张期囊胚，全部受检囊胚均表达HLA-G mRNA，但异构体表达不同。在受检的25个扩张期囊胚中，20个表达HLA-G1（表达率80．0％），4个表达G2（表达率16．0％），25个表达G3（表达率100％）、24个表达G4（表达率96．0％），5个表达G5（表达率20．0％），8个表达G6（表达率32．0％）。结论着床前的人类胚胎表达HLA-G及其异构体mRNA，其阳性表达胚胎的比例，随着胚胎发育的进程而增加。HLA-G异构体在人类着床前胚胎差异表达。

类泛素蛋白FAT10对人肾上皮细胞α-烯醇酶共价修饰的初步研究

目的:构建带Flag标签的α-烯醇酶(ENO1)基因以及带Myc标签的人白细胞抗原F相关转录物10(FAT10)基因的真核表达质粒载体,鉴定ENO1和FAT10在人肾上皮细胞株HEK293中的表达,检测类泛素蛋白FAT10是否共价修饰ENO1。方法:以人宫颈癌细胞系He La的c DNA为模板进行PCR,得到eno1目的片段,与分别经EcoRⅤ和SalⅠ酶切的pFlag-CMV载体连接得到重组质粒pFlag-CMV-eno1并进行鉴定测序;以人脑组织c DNA文库为模板进行PCR,得到fat10目的片段,与分别经Eco RⅠ和XhoⅠ酶切的p CMV-Myc载体连接得到重组质粒p CMV-Myc-fat10并进行鉴定并测序。将重组质粒用脂质体法转染HEK293细胞,用Western印迹检测ENO1和FAT10蛋白的表达。将重组质粒共转染HEK293细胞,用免疫共沉淀检测FAT10对ENO1的修饰情况。结果:重组克隆载体内的eno1和fat10序列与Gen Bank报告的序列完全一致;转染HEK293细胞后,ENO1和FAT10蛋白过表达;FAT10能够共价修饰ENO1。结论:类泛素蛋白FAT10共价修饰ENO1,为肿瘤的发生、发展及迁移的研究提供了新的研究思路。

反复自然流产患者绒毛组织中HLA-G mRNA的异常表达及意义

目的研究人类白细胞相关抗原-G(HLA-G)及其各亚型mRNA在正常妊娠及反复自然流产患者绒毛组织中的表达。探讨人类白细胞相关抗原-G(HLA-G)及其各亚型与反复自然流产的关系。方法取20例反复自然流产(实验组)及10例正常妊娠早孕人工流产绒毛组织(对照组),应用荧光定量RT-PCR比较两组间HLA-G及其各亚型mRNA(HLA-G1、G2、G3、G4、G5、G6)的表达。结果与对照组相比,反复自然流产患者绒毛组织中总HLA-GmRNA显著降低,以HLA-G1、HLA-G3降低为主。结论 HLA-G1与HLA-G3在绒毛组织中的低表达可能与反复自然流产的发病和病理生理过程相关。

HLA-DQA1基因拷贝数变异与乙型肝炎病毒感染后不同转归的易感性

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)DQAl基因拷贝数变异(CNV)与中国汉族人群乙型肝炎病毒(HBV)感染后不同转归和疾病进展的关系。方法采用AccuC opy CNV检测技术检测825例慢性HBV感染患者和287例急性自限性HBV感染者的HLA-DQAl基因CNV,采用χ2检验等分析HLA-DQA1 CNV与HBV感染后慢性化和疾病进展的发病风险。结果在HBV感染后急慢性转归方面,急性自限性HBV感染组HLA-DQA1拷贝数>2的比例显著高于慢性HBV感染组(15.3%vs 6.9%,χ2=25.22,P<0.001)。在慢性HBV感染后疾病进展方面,随疾病进展,HLA-DQAl基因拷贝数<2的比例在慢性乙型肝炎(CHB)组、肝硬化(LC)组和肝癌(HCC)组3组间逐渐增加,分别为10.1%,15.3%和27.9%,差异有统计学意义(χ2=25.66,P<0.001)。根据E抗原分组分析显示,E抗原阳性患者组和E抗原阴性患者组HLA-DQA1 CNV的比例无显著性差异。结论 HLA-DQA1基因CNV是HBV感染慢性化的遗传易感因素,HLA-DQA1基因拷贝数减少可能是HBV感染慢性化和疾病进展的危险因素。

HLA-G蛋白在人类着床前胚胎的表达

目的:探讨HLA-G在人类胚胎早期发育和免疫耐受中的作用和意义。方法:以体外受精-胚胎移植技术助孕过程中剩余的、自愿捐赠的人类早期胚胎作为研究对象,采用免疫荧光染色技术,检测人类着床前胚胎HLA-G蛋白的表达。结果:采用MEM-G/9单抗进行了HLA-G免疫荧光染色,20个2-8-细胞期的人类早期胚胎中15个胚胎HLA-G蛋白检测阳性;3个桑椹胚和5个囊胚均为阳性。结论:着床前人类早期胚胎表达HLA-G蛋白。