基于PI3K/Akt/p53信号通路探讨白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物诱导急性髓系白血病细胞凋亡的作用

目的通过评估白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物(EAEHDW)对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/p53信号通路传导调节作用,探讨其抑制急性髓系白血病M2型(AML-M2)细胞株Kasumi-1增殖及诱导凋亡的机制。方法利用乙酸乙酯从白花蛇舌草中萃取制备得到EAEHDW,高效液相色谱串联质谱装置检测样品纯度。设置空白组,将浓度分别为0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.10 mg/mL的EAEHDW加入对数生长期的Kasumi-1细胞株,采用MTT法检测不同浓度EAEHDW作用不同时间后Kasumi-1细胞存活率,采用Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度EAEHDW作用24 h后Kasumi-1细胞凋亡情况,采用Western blot法检测不同浓度EAEHDW(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL)作用24 h后Kasumi-1细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)家族蛋白及PI3K/Akt/p53信号传导通路蛋白表达情况。结果不同浓度的EAEHDW干预后,细胞存活率较空白组明显降低,细胞凋亡率较空白组明显升高,且细胞存活率随着作用时间的延长和药物浓度的增加而下降越明显,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高越明显,差异均有统计学意义(P均<0.05);不同浓度的EAEHDW作用于Kasumi-1细胞后,细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cyto-C)、p53蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、鼠双微染色体2(MDM2)、磷酸化MDM2(p-MDM2)蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论EAEHDW可明显抑制髓系白血病Kasumi-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与影响Caspase家族蛋白表达和抑制PI3K/Akt/p53信号通路导致p53激活有关。

白花蛇舌草通过Nrf2/HO-1通路对肺腺癌增殖、迁移和侵袭的作用机制研究

目的研究白花蛇舌草对肺腺癌A549、H1975细胞株增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制。方法使用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验检测白花蛇舌草干预后对A549、H1975细胞增殖、迁移和侵袭的影响;通过RT-qPCR和Western blot实验检测白花蛇舌草干预后各组细胞Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白的表达。结果白花蛇舌草干预后,与对照组比较,A549、H1975细胞的增殖、迁移及侵袭能力下调(P<0.05);各组细胞Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。结论白花蛇舌草可抑制肺腺癌A549、H1975细胞的增殖、迁移和侵袭,且该作用可能是通过调控Nrf2/HO-1信号通路完成的。

白花蛇舌草多糖对异烟肼致肝损伤的影响及机制

目的探讨白花蛇舌草多糖(HDP)对异烟肼致肝损伤的影响及机制。方法以正常发育的具有肝脏特异性荧光的转基因斑马鱼为对象,分为正常组、模型组(4 mmol/L异烟肼)、HDP低浓度组(4 mmol/L异烟肼+50 mg/mL HDP)和HDP高浓度组(4 mmol/L异烟肼+100 mg/mLHDP),分组处理后观察斑马鱼肝脏荧光面积、荧光强度以及肝组织病理变化。以人肝L02细胞为对象,分为正常组、模型组(4mmol/L异烟肼)、HDP低浓度组(4mmol/L异烟肼+2mg/mLHDP)和HDP高浓度组(4mmol/L异烟肼+4mg/mLHDP),分组处理后检测细胞存活情况,细胞上清液中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平及细胞裂解液中谷胱甘肽(GSH)含量,沉默信息调节因子1(Sirt1)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白的表达水平。结果与模型组比较,HDP低、高浓度组斑马鱼肝脏荧光面积和荧光强度(HDP低浓度组除外)均显著增加(P<0.05或P<0.01),肝损伤坏死特征均有不同程度改善。与模型组比较,HDP低、高浓度组L02细胞存活率,GSH含量(HDP低浓度组除外),Sirt1(HDP低浓度组除外)、Nrf2、NQO1、HO-1(HDP低浓度组除外)蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);ALT、AST(HDP低浓度组除外)水平均显著降低(P<0.05);存活细胞数量均明显增加,损伤或死亡细胞数量均明显减少。结论HDP对异烟肼诱导的肝损伤具有一定的改善作用,其机制可能与激活Sirt1/Nrf2信号通路、改善线粒体功能、提高抗氧化能力相关。

白花蛇舌草三大类成分的分离纯化及抗肿瘤活性测定

目的从白花蛇舌草中分离纯化总三萜、总多糖、总黄酮,并检测其抗肿瘤活性。方法将白花蛇舌草置于乙醇溶液中冷浸,对其中的三萜类、多糖和黄酮类化合物进行粗提;再通过大孔吸附树脂对粗提物进行处理,获得纯化后的总三萜、总多糖、总黄酮。通过CCK-8法检测白花蛇舌草总三萜、总多糖、总黄酮对A549细胞增殖的影响。结果三萜类化合物浸膏得率为20.60%,精制后总三萜纯度为82.73%;粗多糖得率为41.17%,精制后总多糖纯度为71.11%;黄酮类化合物浸膏得率为0.49%,精制后总黄酮纯度为38.14%。纯化后的白花蛇舌草总三萜、总黄酮和总多糖对A549细胞增殖均有抑制作用,白花蛇舌草总三萜和总黄酮对肺癌细胞A549的抑制作用明显。结论白花蛇舌草总三萜、总黄酮、总多糖均抑制肺癌A549细胞的增殖,为白花蛇舌草总黄酮、总多糖、总三萜的抗肿瘤作用研究提供了一定的参考。

白花蛇舌草提取物通过AMPK/ATG5信号通路对急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用机制研究

目的:通过5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/自噬相关蛋白5(ATG5)信号通路,探讨白花蛇舌草提取物减轻急性胰腺炎(AP)大鼠肺损伤的机制。方法:建立AP肺损伤大鼠模型,随机分为模型组、提取物(白花蛇舌草提取物)组、3-MA(自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤)组、AICAR(AMPK激活剂)组、提取物+AICAR组,每组15只,另取15只大鼠作为假手术组;ELISA检测血清淀粉酶(AMY)、IL-1β、IL-6、IL-18水平;检测大鼠腹水量及肺湿/干重比(W/D);HE观察胰腺及肺组织病理损伤;Western blot检测溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、自噬底物p62、IL-1β前体蛋白(pro-IL-1β)、胰蛋白酶原活化肽(TAP)、AMPK、p-AMPK、ATG5、自噬标志物LC3-Ⅱ/Ⅰ、泛素特异性蛋白酶10(UPS10)表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠腹水量、肺W/D、胰腺和肺组织病理损伤评分、血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平、胰腺组织p62、TAP、pro-IL-1β表达、肺组织pAMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β表达均升高(P<0.05),胰腺和肺组织LAMP2蛋白表达降低(P<0.05);模型大鼠经白花蛇舌草提取物或自噬抑制剂3-MA干预后,上述指标均得到显著改善(P<0.05),且白花蛇舌草提取物的改善效果优于3-MA(P<0.05);而AMPK激活剂AICAR可削弱白花蛇舌草提取物对AP大鼠肺损伤的改善作用(P<0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可通过抑制AMPK/ATG5信号通路减轻炎症反应、降低自噬水平改善AP大鼠肺损伤。

白花蛇舌草及其有效成分治疗脑胶质瘤作用机制研究进展

白花蛇舌草及其提取物在体内外实验中均体现出显著的抗脑胶质瘤作用,其有效成分主要为萜类、黄酮类、蒽醌类。白花蛇舌草及其有效成分抗脑胶质瘤的潜在机制主要包括抑制细胞增殖并诱导其凋亡、抑制血管生成、阻断信号传导通路、增加化疗药物敏感性、调控炎症及肿瘤微环境、调节人体免疫功能等。虽然对于白花蛇舌草治疗脑胶质瘤的药理作用及机制研究已取得一定成果,但其药效物质基础、相关靶点通路尚不明确,还需进一步验证。通过系统梳理白花蛇舌草及其有效成分抗脑胶质瘤的药理作用机制,以期为抗脑胶质瘤新药研发提供参考。

基于网络药理学探讨半枝莲-白花蛇舌草治疗银屑病的作用机制

目的:通过网络药理学探究半枝莲-白花蛇舌草对银屑病产生治疗作用的活性成分、作用靶点、相关通路等作用机制。方法:在中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)对半枝莲-白花蛇舌草进行检索,得到活性化合物及对应靶点,通过UniProt转换为对应基因名,通过GeneCards和TTD这两个数据库整合去重得到最终的银屑病疾病靶点。用Cytoscape 3.9.1构建“半枝莲-白花蛇舌草-活性成分-作用靶点”网络图,通过Venny 2.1.0得到半枝莲-白花蛇舌草与银屑病的交集靶点。通过STRING构建蛋白质-蛋白质相互作用网络图,从DAVID数据库中得到基因本体论(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析结果。利用AutoDock 1.5.6软件进行分子对接分析。结果:本研究得到半枝莲-白花蛇舌草主要通过槲皮素、木犀草素等重要活性成分作用于苏氨酸/丝氨酸蛋白激酶1(Akt Serine/Threonine Kinase 1,AKT1)、肿瘤蛋白p53(Tumor Protein p53,TP53)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor A,VEGFA)等关键靶点发挥治疗银屑病的作用。参与银屑病治疗的通路主要包括癌症通路、脂质和动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体信号通路等156条KEGG通路。分子对接结果表明主要活性成分与核心靶点蛋白有良好的结合活性。结论:半枝莲-白花蛇舌草可通过多个成分、靶点及通路达到治疗银屑病的目的,其作用机制与抑制炎症反应等方面有关。

白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液的抗炎作用研究

目的:比较白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液体内外抗炎作用的差异,为进一步的临床研究提供理论依据。方法:用水或75%乙醇对白花蛇舌草鲜品进行回流提取,并对提取液进行浓缩和冷冻干燥,得到提取物粉末;将提取物粉末配置相应的生药溶液,观察其对炎症模型的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)和小鼠的抗炎作用,并比较水提液和醇提液在其中的作用差异。结果:白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液均可抑制脂多糖致炎的RAW264.7的活力,并且总体上水提液对致炎的RAW264.7中白介素-6、白介素-1β、肿瘤坏死因子-α等炎症因子的抑制率优于醇提液;此外,白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液均能减轻炎症模型小鼠耳肿胀和减少扭体次数,且水提液的整体效果优于醇提液。结论:白花蛇舌草水提液和醇提液的抗炎作用有差异,水提液综合抗炎效果优于醇提液,这可能与其成分差异有关。

QAMS多组分定量联合PCA、OPLS-DA及GRA分析法评价白花蛇舌草的质量

目的:采用高效液相-一测多评(HPLC-QAMS)法联合化学计量学及灰色关联度分析法评价白花蛇舌草质量。方法:采用Alltima C_(18)色谱柱(5.0μm,250.0 mm×4.6 mm),0.2%磷酸-乙腈为流动相梯度洗脱;以芦丁为参照物,建立其与京尼平苷酸、京尼平苷、车叶草苷酸、车叶草苷、2-羟基-3-甲基蒽醌、1,2-二羟基-3-甲基蒽醌、槲皮素、山柰酚、齐墩果酸、熊果酸、豆甾醇和β-谷甾醇的相对校正因子并进行校正因子耐用性考察。同时采用ESM和QAMS法测定收集到的16批白花蛇舌草中该13种成分的含量,再运用统计软件进行化学计量学及灰色关联度分析。结果:13种成分方法学验证均符合2020年版《中华人民共和国药典》要求。京尼平苷酸、京尼平苷、车叶草苷酸、车叶草苷、2-羟基-3-甲基蒽醌、1,2-二羟基-3-甲基蒽醌、槲皮素、山柰酚、齐墩果酸、熊果酸、豆甾醇、β-谷甾醇与芦丁的平均相对校正因子分别为0.9489、0.7033、0.7824、1.1359、0.5845、0.8005、0.8933、1.0683、0.7406、0.8640、0.6745、0.5424。两种方法测定结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。化学计量学方法显示16批白花蛇舌草聚为3类,呈现一定的产区差异。芦丁、车叶草苷酸、京尼平苷和齐墩果酸是影响白花蛇舌草产品质量的主要潜在标志物。GRA法分析结果显示7个省中浙江和江西地区所得白花蛇舌草质量最优。结论:本试验所建立的方法操作便捷、结果准确,结合化学计量学及GRA方法可用于白花蛇舌草质量的综合评价。

白花蛇舌草-半枝莲药对治疗胃癌的物质基础和作用机制研究进展

胃癌是消化系统的常见恶性肿瘤之一,好发于中老年人群。中医认为胃癌是由津亏热结、癌毒胶结于胃腹而形成的一种瘤瘕,在临床中常用清热解毒类药物进行治疗。白花蛇舌草-半枝莲药对具有清热解毒、活血化瘀、消痈散结、抗炎止痛的作用,可治疗胃癌。现代药理学研究证实,白花蛇舌草-半枝莲药对可通过诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖、抑制血管生成、改善免疫微环境、下调端粒酶活性等途径起到抗胃癌的作用。本文对白花蛇舌草-半枝莲药对配伍后活性成分抗胃癌的机制进行综述,为白花蛇舌草-半枝莲药对的临床用药和抗胃癌新药研发提供理论依据和参考。

白花蛇舌草提取物通过抑制有氧糖酵解和促进氧化磷酸化抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨白花蛇舌草提取物(HDE)对肝癌细胞增殖的影响及其与有氧糖酵解和氧化磷酸化的关系,并分析其可能机制。方法 采用CCK-8实验和细胞增殖实验(5-ethynyl-2-deoxyuridine, EDU)检测不同质量浓度(20、40、80 mg/mL)HDE对肝癌细胞SNU-368增殖的影响;采用酶标仪检测乳酸脱氢酶活性、葡萄糖摄取、乳酸生成、线粒体呼吸链复合体活性,采用pH计检测细胞外液pH值,采用细胞氧耗仪检测细胞氧耗,分析HDE对SNU-368细胞有氧糖酵解和氧化磷酸化的影响;采用qRT-PCR实验检测各组SNU-368细胞中GLUT1、GLUT4、HK2、GPI、PFKL、ALDOA和HIF-1α的mRNA表达,采用Western blotting检测HIF-1α的蛋白表达。用过表达HIF-1α的慢病毒转染肝癌细胞SNU-368构建过表达HIF-1α稳转细胞株,并进行HDE相应干预后,采用qRT-PCR和Western blotting检测HIF-1α的mRNA及蛋白表达。结果 CCK-8实验显示,HDE呈一定的浓度依赖效应抑制肝癌细胞增殖(均P<0.05);糖代谢相关检测结果显示,HDE可以抑制葡萄糖摄取和乳酸生成,降低乳酸脱氢酶活性,升高细胞外培养液pH值,增加细胞氧耗和线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性(均P<0.05);qRT-PCR结果显示,HDE抑制了GLUT1、HK2、GPI、ALDOA mRNA的表达(均P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting实验显示,与对照组相比,HDE组HIF-1α mRNA及蛋白的表达明显减少;而与HDE组相比,HDE干预过表达HIF-1α的HIF-1α-LV组中,HIF-1α mRNA及蛋白表达再次增加(P<0.05)。结论 HDE通过抑制肝癌细胞有氧糖酵解、促进氧化磷酸化而抑制肝癌细胞增殖,作用机制可能与抑制HIF-1α的表达有关。

壮药白花蛇舌草水提物对MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制及免疫调节作用研究

目的观察白花蛇舌草水提物对MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制及免疫调节作用,并探讨其作用机制。方法取6只正常BALB/c-nu雌性裸鼠作为正常组;取30只BALB/c-nu雌性裸鼠复制MDA-MB-231乳腺癌移植瘤模型,将造模成功裸鼠随机分为模型组、环磷酰胺组及白花蛇舌草水提物低、高剂量组,每组6只。环磷酰胺组给予环磷酰胺25 mg/kg腹腔注射,每7 d注射1次;白花蛇舌草水提物低、高剂量组分别按照1500 mg/(kg·d)、6000 mg/(kg·d)灌胃白花蛇舌草水提物溶液,正常组和模型组灌胃等体积灭菌注射用水,均1次/d。各组均连续干预21 d,监测裸鼠活动状况,每间隔2 d测量1次肿瘤大小。干预结束后,测量体重、瘤重与脾重,计算脾脏指数、抑瘤率;HE染色观察移植瘤的病理学形态;脾淋巴细胞增殖试验评价脾脏中T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖能力;血液分析仪测定外周血中白细胞数目和淋巴细胞占比;ELISA法检测血清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot法测定模型组和白花蛇舌草水提物低、高剂量组裸鼠肿瘤组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路蛋白及凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶-7(Caspase-7)、半胱天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)]表达情况。结果与正常组比较,模型组裸鼠脾脏指数、外周血中白细胞数量均明显升高(P均<0.05),脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力指数、外周血淋巴细胞占比及血清中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平均明显降低(P均<0.05);肿瘤组织中肿瘤细胞密集丰富排列无序,肿瘤细胞异型性明显。与模型组比较,白花蛇舌草水提物高、低剂量组裸鼠脾脏指数、脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力指数、外周血淋巴细胞占比及血清中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平均明显升高(P均<0.05),瘤重、外周血中白细胞数量均明显降低(P均<0.05);肿瘤组织中肿瘤细胞数目大量减少,细胞凋亡,组织结构破损;肿瘤组织中p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、mTOR、Bcl-2蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),Bax、Caspase-7、Caspase-9蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。环磷酰胺组裸鼠脾脏指数、瘤重、脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力指数、外周血白细胞数量和淋巴细胞占比均明显低于模型组(P均<0.05);肿瘤组织中肿瘤细胞数量明显减少。结论白花蛇舌草水提物可显著抑制MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤生长,诱导乳腺癌细胞发生凋亡,增强移植瘤裸鼠免疫功能,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR通路激活,下调凋亡相关蛋白表达、上调促凋亡蛋白表达相关。

白花蛇舌草多糖调节CXCL12/CXCR4轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨白花蛇舌草多糖(Hedyotis diffusa Willd.Polysaccharide,HDP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及对CXCL12/CXCR4轴的调控机制。方法将乳腺癌细胞分为对照组,CXCL12/CXCR4抑制剂组(AMD 3100组),HDP低、中、高剂量组(HDP-L组、HDP-M组、HDP-H组),HDP高剂量+CXCL12组(HDP-H+CXCL12组);通过CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验、Transwell实验分别测定细胞的迁移和侵袭能力;Western blot分析细胞中上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CXCL12、CXCR4蛋白的表达;建立BALB/c-nu雌性裸鼠MDA-MB-231异种移植瘤模型并观察各组肿瘤生长情况,采用HE染色观察裸鼠移植瘤细胞的形态学特征。结果与对照组相比,AMD 3100组和HDP各剂量组细胞增殖活性、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达显著抑制(P<0.05,P<0.01),而E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与HDP-H组相比,HDP-H+CXCL12组细胞的增殖活力、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达水平明显升高(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平被显著抑制(P<0.01)。此外,动物实验表明,与模型组相比,AMD 3100组和HDP各剂量组的肿瘤重量明显降低(P<0.05,P<0.01);与HDP-H组相比,HDP-H+CXCL12组裸鼠肿瘤重量明显增加(P<0.01);HE染色显示,AMD 3100组和HDP各干预组肿瘤组织坏死与凋亡细胞增多。结论HDP可以通过抑制CXCL12/CXCR4轴进而抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭。

甬派名中医陈宁刚运用白花蛇舌草汤治疗痤疮方证玄机参悟

[目的]介绍甬派名中医陈宁刚运用白花蛇舌草汤治疗痤疮的辨证处方经验。[方法]以古代相关经典论述为基础,对比分析历代医家对于此病病机认识的异同,并结合陈师经验,博古通今,探讨现代患者临床致病因素及发病特征,从而深入剖析陈师运用白花蛇舌草汤的处方结构与方药化裁之内涵,并附验案一则予以佐证。[结果]历代医家针对痤疮发病机制持有不同观念,相关方论不胜枚举。陈师认为甬城位于江南多潮湿,加之现代人不良生活习惯及情志等影响,患者多以肺胃湿热为主要病机,治宜清热利湿、宣疮透表,并依据多年临证经验,自拟白花蛇舌草汤,方中以白花蛇舌草为君清利湿热、散结消疮,臣以茯苓助君通利水湿,佐以白芥子化痰散结,皂角刺破疮透脓,干姜温脾护胃,使以麻黄引诸药透表、消散阴结;以甘草守中调和。文中所附医案,再现了陈师谨守方证病机,解决患者疾病过程中湿、热、痰、瘀等内在矛盾的思辨过程,收效显著。[结论]陈师以肺胃湿热为病机核心,自拟痤疮治疗组方一则,方中既可见清热逐湿之峻猛,又可见温脾护本之巧思,正所谓药简而力专,并根据临证所遇各类变化灵活化裁,疗效显著,其方证辨析思维过程值得进一步探索及研究,以供临床借鉴。

白花蛇舌草诱导活性氧类物质抑制慢性髓系白血病K562细胞增殖

目的探讨白花蛇舌草(HDW)诱导活性氧类物质对慢性髓系白血病(CML)K562细胞增殖的影响。方法流式细胞法检测HDW作用下K562细胞内活性氧(ROS)水平。将K562细胞分为对照组、HDW组、N-乙酰-L-半胱氨酸组(NAC组)和HDW+NAC组,观察各组细胞ROS、活力、形态、增殖和细胞周期分布情况,Western blotting法检测细胞周期相关蛋白和磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-Akt)蛋白表达情况。结果HDW能提高K562细胞内ROS水平(P<0.05)。对照组、NAC组细胞含大量拒染细胞且形态无明显变化,HDW组、HDW+NAC组拒染细胞减少,着色细胞增多,有染色质聚集和细胞核膜崩解现象。与对照组相比,HDW组细胞内ROS、G1期占比、p21和p53蛋白表达升高,S期占比和细胞周期素D1、细胞周期素依赖蛋白激酶4、p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0.05);NAC干预能部分逆转HDW作用效果(P<0.05)。结论HDW能诱导活性氧类物质升高来降低K562细胞增殖能力,与细胞周期阻滞、调节PI3K/Akt通路活性有关。

白花蛇舌草乙醇提取液在化妆品中的应用

通过醇提法对白花蛇舌草进行提取,研究其提取物对酪氨酸酶的影响、抗氧化能力、抗菌作用和保湿性能,评价其在化妆品中的应用。结果表明,白花蛇舌草提取物对酪氨酸酶有抑制作用,当浓度为250μg/mL时抑制率可达71.69%。白花蛇舌草提取液对DPPH自由基有很强的清除作用,半数清除质量浓度为17.62μg/mL。白花蛇舌草提取液对于大肠杆菌、铜绿假单细胞菌和金黄色葡萄球菌均有良好的抑制作用。与甘油相比,白花蛇舌草具有一定的保湿作用,作用来源于对外界水分的吸收。白花蛇舌草拥有良好美白、抗氧化、抗菌及保湿效果,可应用于相应功效化妆品研发中。

基于网络药理学探讨白花蛇舌草-半枝莲防治肺结节作用机制

目的:应用网络药理学和分子对接技术,探讨白花蛇舌草-半枝莲药对防治肺结节的作用机制。方法:通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库筛选药对活性成分和靶点;利用GeneCards获取肺结节相关靶点;使用Cytoscape构建“活性成分-交集靶点”网络,获取STRING数据库信息并构建蛋白相互作用(PPI)网络;运用Metascape数据库对核心靶点进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;利用AutoDock Vina对核心靶点和关键成分进行分子对接验证。结果:筛选得到槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇等33个药对主要活性成分,通过与癌症、糖尿病、动脉粥样硬化、炎症等密切相关的176条信号通路,作用于AKT1、TNF、TP53等182个共同靶点,从而发挥防治作用。结论:白花蛇舌草-半枝莲药对中主要活性成分作用于多个肺结节相关靶点,可能通过调节AGE-RAGE通路、TNF信号通路、IL-17信号通路等,抑制炎症、调节免疫、抑制肿瘤形成,从而防治肺结节。

白花蛇舌草总黄酮对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究白花蛇舌草总黄酮对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养HCT116细胞,用不同浓度白花蛇舌草总黄酮进行处理,分组:0μg/mL组、1μg/mL组、3μg/mL组、6μg/mL组、12μg/mL组。采用细胞计数试剂盒法检测24 h和48 h各组HCT116细胞的增殖能力,并计算抑制率。用苏木精-伊红染色观察细胞形态,用流式细胞术检测HCT116细胞凋亡情况,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-Time Fluorescence PCR,qRT-PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell Lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl2关联X蛋白(Bcl2 Associated X,Bax)和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)表达水平,用蛋白质印迹(Western blot)法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和裂解的Caspase-3的蛋白表达水平。结果:不同浓度的白花蛇舌草总黄酮能明显抑制癌细胞增殖,其浓度越高,抑制率越高(均P <0.05),且处理组48 h抑制率均高于24 h(均P <0.05)。随着浓度的增加,细胞核逐渐收缩,核碎片增加,同时凋亡小体产生。与对照组相比,白花蛇舌草总黄酮也显著促进HCT116细胞的凋亡率(P <0.05)。此外,与对照组相比,白花蛇舌草总黄酮显著下调了Bcl-2和Caspase-3的表达,同时上调Bax和裂解的Caspase-3的表达,并且Bcl-2/Bax值显著降低,而裂解的Caspase-3/Caspase-3值显著升高。结论:白花蛇舌草总黄酮可抑制结直肠癌细胞的体外增殖,并通过影响Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达诱导细胞凋亡。

白花蛇舌草总黄酮对肝细胞癌干细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨白花蛇舌草总黄酮(FOD)对Huh7来源的肝细胞癌干细胞增殖及凋亡的影响。方法培养Huh7细胞系,通过流式分选技术筛选出Huh7细胞系中CD133阳性的干细胞(CD133^(+)-Huh7);流式分析术检测分选后CD133阳性细胞比例;Western blotting实验检测分选纯化前后细胞干性指标Nanog、Oct4、Sox2的表达。分别用0、50、100、400μg/mL FOD分别作用CD133^(+)-Huh7肝细胞癌干细胞24、48、72、96 h,应用CCK8(Cell Counting Kit-8)法检测其对细胞增殖的影响;平板克隆实验检测各组细胞增殖能力变化;Annexin V-PE/7-AAD法检测各组细胞凋亡比例,并用Western blotting法检测p53、FAS-FADD、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax及凋亡指标Cleaved-Caspae3等凋亡通路蛋白的表达。结果纯化后的Huh7细胞的干性标志物Nanog、Oct4、Sox2表达更高。100μg/mL FOD刺激CD133^(+)-Huh7干细胞72 h,CCK8实验结果显示其细胞增殖较阴性对照组(0μg/mL处理组)降低(P<0.05),平板克隆实验亦显示其细胞增殖变弱;细胞凋亡比例较阴性对照组显著升高(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低而促凋亡蛋白Bax以及凋亡指标Cleaved-Caspae3的蛋白表达升高,p53、FAS、FADD通路显著上调。结论FOD可显著抑制CD133^(+)-Huh7肝细胞癌干细胞增殖,并显著促进细胞凋亡。

白花蛇舌草对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡、活性氧水平的影响研究

目的探讨白花蛇舌草注射液(HDI)对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)增殖、凋亡、氧化应激的影响及机制。方法2019年10月至2020年6月,体外培养HRCECs。将HRCECs分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高渗对照组(19.5 mmol/L甘露醇及5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高糖对照组(25 mmol/L葡萄糖处理细胞)、白花蛇舌草组(HDI组)(6.25 mL/L、12.5 mL/L、25 mL/L、50 mL/L HDI和25 mmol/L的葡萄糖处理细胞)。处理细胞48 h,通过CCK8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;激光扫描共聚焦显微镜检测活性氧水平。蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白A1(CyclinA1)和活化胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组细胞活性明显升高[(1.116±0.105)比(0.684±0.072)](P<0.05)。与高糖组比较,12.5 mL/L、25 mL/L和50 mL/L的白花蛇舌草组细胞活性明显降低[(0.847±0.076)、(0.639±0.058)、(0.421±0.042)比(1.116±0.105)](P<0.05)。选择50 mL/L的白花蛇舌草作为研究对象。与对照组比较,高糖组G_(0)/G期细胞百分比[(60.02±5.01)%比(54.72±4.31)%]、细胞凋亡率[(17.11±1.01)%比(3.32±0.47)%]、活性氧水平[(96.18±5.22)比(42.14±3.56)]及PCNA、CyclinA1和cleaved caspase-3表达均明显升高,G_(2)/M期和S期细胞百分比明显降低(P<0.05)。与高糖组比较,HDI组G_(0)/G期细胞百分比[(32.31±3.42)%比(60.02±5.01)%]、细胞凋亡率[(9.72±0.73)%比(17.11±1.01)%]、活性氧水平[(67.75±4.83)比(96.18±5.22)]及PCNA、CyclinA1和cleaved caspase-3表达均明显降低,G_(2)/M期和S期细胞百分比明显升高(P<0.05)。结论白花蛇舌草可降低高糖诱导的HRCECs增殖、凋亡及活性氧水平,阻滞细胞周期,机制可能与调节PCNA、CyclinA1和cleaved caspase-3表达有关。