白花蛇舌草-半枝莲药对乙酸乙酯组分对破骨细胞分化的抑制作用

目的研究白花蛇舌草-半枝莲药对乙酸乙酯组分(YDW11)对破骨细胞分化的抑制作用。方法 UPLC-MS法鉴定YDW11中化学成分后,MTT法分析其对RAW264. 7细胞活力的影响。100 ng/mL核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264. 7细胞7 d以建立破骨细胞模型后,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色考察TRAP阳性多核细胞数,相应试剂盒测定TRAP酶活性。QRT-PCR检测TRAP、树突状细胞-特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)、活化T细胞核因子cl (NFATc1)基因表达,Western blotting检测核因子κB受体活化因子(RANK)、肿瘤坏死因子受体相关因子6 (TRAF6)、NFATc1、组织蛋白酶K蛋白表达,Taqman MicroRNA RT-PCR检测miR-155表达。结果 YDW11中有16种成分,鉴定出对羟基苯乙酮、野黄芩苷、木犀草素、芹菜素。与模型组比较,YDW11组(25、50μg/mL)阳性多核细胞数显著减少(P<0. 01),并对细胞活力无明显影响(P> 0. 05);呈剂量依赖性地显著抑制酶活性,TRAP、DC-STAMP、NFATc1基因表达,RANK、TRAF6、NFATc1、组织蛋白酶K蛋白表达(P <0. 05),并显著提高miR-155表达(P<0. 05)。结论 YDW11可通过上调miR-155表达、下调相关基因和蛋白表达抑制RANKL诱导的破骨细胞分化。

白花蛇舌草-半枝莲药对乙酸乙酯组分对胃癌SGC-7901细胞周期的影响

目的:探讨白花蛇舌草-半枝莲药对乙酸乙酯组分对胃癌SGC-7901细胞周期的影响。方法:将胃癌SGC-7901细胞分为对照组(0 mg·L^(-1))及白花蛇舌草-半枝莲药对乙酸乙酯组分低(10 mg·L^(-1))、中(30 mg·L^(-1))、高(50 mg·L^(-1))剂量组,分别培养12 h、24 h、48 h后采用CCK-8法检测细胞增殖能力;平板细胞克隆形成实验检测SGC-7901细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期变化;Western Blot检测细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及c-Myc蛋白表达水平。结果:与对照组比较,白花蛇舌草-半枝莲药对乙酸乙酯组分各剂量组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),细胞集落形成率显著降低(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著升高(P<0.05),G2/M期细胞比例显著降低(P<0.05),Cyclin D1及c-Myc蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:白花蛇舌草-半枝莲药对乙酸乙酯组分可将细胞阻滞于G0/G1期进而抑制SGC-7901细胞增殖,其作用与下调Cyclin D1、c-Myc蛋白表达水平有关。

基于网络药理学的白花蛇舌草-半枝莲药对治疗胃癌前病变作用机制研究

目的利用网络药理学探析白花蛇舌草-半枝莲治疗胃癌前病变(PLGC)的作用机制。方法通过TCMSP数据库筛选药对主要活性成分和靶点,利用GeneCards数据库获得PLGC相关靶点;通过映射获得药对-疾病共有靶点,利用Cytoscape软件构建"活性成分-共有靶点"网络;通过STRING平台建立共同靶蛋白互作网络(PPI);通过Metascape数据库将共同靶点进行GO功能分析及KEGG通路富集分析;运用Autodock软件将度值较高的活性成分与核心靶点进行分子对接。结果预测得到白花蛇舌草-半枝莲药对治疗PLGC的主要活性成分28个,通过230条信号通路作用于133个共同靶点而发挥治疗作用。分子对接表明主要活性成分可与核心靶点自发结合。结论白花蛇舌草-半枝莲药对中主要活性成分作用于多个PLGC相关靶点,可能通过抑制胃黏膜炎症、抗氧化、调控肿瘤细胞增殖及凋亡、抑制新生血管生成等恢复胃黏膜细胞增殖和凋亡平衡状态,从而治疗PLGC。

白花蛇舌草-半枝莲药对组分对胃癌SGC-7901细胞增殖、线粒体自噬及凋亡的影响

目的:观察白花蛇舌草-半枝莲药对组分对胃癌SGC-7901细胞增殖、线粒体自噬及凋亡的影响。方法:实验分为对照组(正常培养SGC-7901细胞),白花蛇舌草-半枝莲药对组分低剂量组(SGC-7901细胞+25 mg·L^-1)、中剂量组(SGC-7901细胞+37.5 mg·L^-1)、高剂量组(SGC-7901细胞+50 mg·L^-1)。噻唑蓝比色法检测各组细胞培养72 h后细胞增殖抑制率;透射电镜观察各组细胞超微结构;Lyso-Tracker Red荧光染色观察SGC-7901细胞自噬情况;荧光TUNEL染色观察SGC-7901细胞凋亡情况;JC-1染色检测SGC-7901细胞线粒体膜电位变化;Western blot检测各组细胞BNIP3、Beclin-1、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、Cyt C、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果:与对照组比较,白花蛇舌草-半枝莲药对组分各剂量组均显著抑制胃癌SGC-7901细胞增殖(P<0.01)。与对照组比较,白花蛇舌草-半枝莲药对组分各剂量组细胞均出现细胞线粒体膜电位降低、线粒体自噬及细胞凋亡现象(P<0.01),BNIP3、Beclin-1、Cyt C、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达增加(P<0.01),LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值降低(P<0.01)。结论:白花蛇舌草-半枝莲药对组分对胃癌SGC-7901细胞增殖有显著抑制作用,其机制可能与激活线粒体自噬的同时,激活线粒体凋亡信号通路,诱导肿瘤细胞凋亡有关。

清热解毒药对组分调控巨噬细胞M1/M2表型及其机制研究

考察清热解毒药对白花蛇舌草-半枝莲的组分(YDW11)对巨噬细胞表型M1/M2的调控及其机制。利用脂多糖(lipopolysaceharides,LPS)/干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和白介素4(interleukin 4,IL-4)/白介素13(interleukin 13,IL-13)分别诱导鼠源巨噬细胞RAW264.7为M1和M2表型,MTT法检测YDW11对细胞活力的影响;Griess反应法检测细胞上清液中亚硝酸盐含量的变化;Trans-well小室迁移实验考察M2型巨噬细胞对乳腺癌细胞4T1的体外迁移及YDW11干预的影响;qRT-PCR法检测YDW11对细胞内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、白介素1β(interleukin1β,IL-1β)、精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)、甘露糖受体(mannose receptor,MR)基因表达的影响;Western blot法检测YDW11对i NOS和Arg-1蛋白表达的影响;Taqman microRNA RT-PCR法检测YDW11对miR155表达的影响。质谱(MS)联用超高效液相色谱(UPLC)检测YDW11中的化学成分。结果显示,等比水提取白花蛇舌草-半枝莲药对的乙酸乙酯组分(YDW11)呈剂量依赖性抑制巨噬细胞M1表型中亚硝酸盐含量,同时抑制M2型巨噬细胞引起的乳腺癌细胞4T1体外迁移加剧,且对未刺激的巨噬细胞M0无细胞毒性。YDW11呈剂量依赖性抑制M1表型标记物i NOS和M2表型标记物Arg-1基因及蛋白的表达,抑制M1表型中IL-1β和M2表型中MR的基因表达,调控M1表型上升而M2表型下调的miR155的表达。MS-UPLC联用结果显示,YDW11中含有对羟基苯乙酮、野黄芩苷、木犀草素和芹菜素4种化学成分。结果表明,YDW11部分通过调控miR155的表达,抑制巨噬细胞M1和M2表型标志性产物i NOS和Arg-1的基因和蛋白表达,而调控巨噬细胞M1/M2表型的极化过程。