白花香莲解毒颗粒调控AMPK/mTOR通路抑制肝星状细胞自噬和活化的作用机制研究

目的:探究白花香莲解毒颗粒调控AMPK/mTOR通路抑制肝星状细胞(HSCs)自噬和活化的作用机制。方法:SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、肝纤维化模型组及白花香莲解毒颗粒低(30 g/kg)、中(60 g/kg)、高(120 g/kg)剂量组,每组10只;Westen Blot检测α-SMA蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平;HE染色观察大鼠肝组织病理学变化;Masson染色观察大鼠肝组织胶原纤维;免疫组化观察大鼠肝组织中α-SMA表达。分离培养大鼠原代HSCs,分为对照组、白花香莲解毒颗粒组、白花香莲解毒颗粒+雷帕霉素组、白花香莲解毒颗粒+3-MA组;Westen Blot检测α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达及p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平;MTT检测细胞活力。结果:各剂量白花香莲解毒颗粒可显著降低大鼠肝组织α-SMA蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平(P<0.05),减少受损肝细胞数量、炎细胞浸润及纤维间隔区域面积,减轻胶原纤维增生,降低α-SMA表达。白花香莲解毒颗粒可升高大鼠原代HSCs中p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K水平和细胞活力,降低α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平(P<0.05);雷帕霉素可减弱其作用,而3-MA可增强其作用。结论:白花香莲解毒颗粒可通过活化AMPK/mTOR通路抑制自噬,进而拮抗HSCs活化。

白花香莲解毒颗粒联合经肝动脉化疗栓塞术治疗HBV相关性原发性肝癌的疗效及对免疫功能的影响

目的:研究白花香莲解毒颗粒联合经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗HBV相关性原发性肝癌(PLC)的疗效及对免疫功能的影响。方法:选取2019年4月至2021年4月在广西中医药大学第一附属医院住院治疗的中晚期HBV相关性PLC患者92例,随机分为治疗组(白花香莲解毒颗粒联合TACE治疗)和对照组(单纯TACE治疗)各46例,2周为1个疗程,共观察2个疗程。2个疗程后,依据mRECIST标准进行疗效评价。分别于治疗前、治疗2周后、治疗4周后检测两组患者肝功能指标,包括血清总胆红素(TBil)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及肿瘤标志物AFP;分别于治疗前、治疗4周后检测两组患者CD4^(+)、CD8^(+)水平并计算出CD4^(+)/CD8^(+)比值;检测两组患者骨髓抑制指标,包括白细胞、血红蛋白以及血小板水平;于治疗4周后,观察栓塞后综合征(发热、恶心呕吐、肝区疼痛)发生率;分别于治疗前、治疗后对两组患者进行生命质量评分。结果:治疗组患者客观缓解率明显高于对照组(P<0.05);治疗2周、4周后,治疗组患者TBil、ALT、AST水平以及AFP水平均较对照组明显降低;治疗4周后两组患者CD4^(+)、CD4^(+)/CD8水平均上升,CD8^(+)水平均下降,且治疗组患者CD4^(+)、CD4^(+)/CD8上升水平以及CD8^(+)下降水平均优于对照组;治疗4周后,治疗组患者的WBC、Hb以及PLT数量优于对照组(P<0.05);治疗4周后,治疗组患者发热、恶心呕吐、肝区疼痛不良反应的发生率低于对照组,生命质量各项评分明显优于对照组,上述结果差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:白花香莲解毒颗粒联合TACE治疗HBV相关性PLC,能显著提高患者临床疗效,改善肝功能,提高机体免疫力,减轻TACE术后不良反应,提高患者生活质量。

白花香莲解毒颗粒治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床疗效及对血浆外泌体miR-122表达的影响

目的:观察壮药白花香莲解毒颗粒治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床疗效及对血浆外泌体miR-122表达的影响。方法:将120例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者随机分为两组,对照组60例给予恩替卡韦治疗,观察组60例给予恩替卡韦联合白花香莲解毒颗粒治疗,两组均治疗48周,同时选取健康体检者30例作为健康组。观察治疗前后两组临床疗效、乙肝两对半定量、血浆外泌体miR-122、乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)的水平、肝功能及不良反应事件发生情况。结果:治疗48周,观察组总有效率[90%(54/60)]明显高于对照组[71.67%(43/60)](P<0.05)。治疗12、24、48周时,两组HBeAg滴度、血清丙氨酸氨基转移酶水平逐渐下降,且观察组显著低于对照组(P<0.05);观察组血浆中miR-122相对表达量高于治疗前(P<0.05),对照组血浆中miR-122相对表达量与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗12、24、48周时,两组血清HBV-DNA水平逐渐下降(P<0.05);观察组治疗12、24周时HBV-DNA水平低于对照组(P<0.05),但治疗48周后,两组HBV-DNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:白花香莲解毒颗粒能够抑制HBV-DNA的复制及HBeAg分泌,改善肝功能,其疗效机制可能与调节血浆外泌体miR-122的表达有关。

白花香莲解毒颗粒对HBV全基因组1.3倍体细胞模型病毒复制与表达的影响

目的:观察白花香莲解毒颗粒对HBV全基因组1. 3倍体Hep G2细胞模型(HBV 1. 3P)病毒复制与表达的影响。方法:按照白花香莲解毒颗粒最优提取工艺制备稠膏,并使用无菌纯水配制为0. 1g稠膏/ml母液,滤纸及0. 45μM、0. 22μM孔径PVDF超滤膜依次过滤后,应用MEM完全培养基稀释为8个浓度梯度的细胞干预液。CCK-8法测定细胞干预液对HBV 1. 3P增殖的抑制率; q PCR法检测干预24h、48h后细胞上清液中HBV DNA水平;化学发光法检测细胞上清液中HBs Ag、HBeAg表达量;免疫荧光法测定细胞内HBs Ag表达强度。结果:(1)白花香莲解毒颗粒的去乙酰车叶草酸甲酯含量为1. 23mg/g。(2)CCK-8法的最佳检测时间是加入试剂后2h,适宜细胞数范围是2×103～1. 2×104个。在0. 04～0. 625mg/ml范围内白花香莲解毒颗粒对HBV 1. 3P增殖无明显抑制作用;在1. 25～5mg/ml范围内则会显著抑制HBV 1. 3P增殖。(3)0. 625mg/ml是白花香莲解毒颗粒的最佳药物浓度,其干预48h HBV DNA的抑制率达(41. 86±5. 35)%,并能显著降低细胞上清液及细胞内HBs Ag、HBeAg的表达。结论:白花香莲解毒颗粒体外具能较强地抑制HBV复制及HBs Ag、HBeAg表达的生物活性。

白花香莲解毒颗粒治疗HBeAg阳性慢性HBV免疫耐受期患者的临床研究

目的:评价白花香莲解毒颗粒治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎病毒(HBV)免疫耐受期患者的临床疗效及安全性。方法:采用随机、安慰剂对照的临床研究方法,将160例HBeAg阳性慢性HBV免疫耐受期感染受试者随机分为治疗组(80例),对照组(80例),治疗组患者采用白花香莲解毒颗粒,对照组患者口服安慰剂,疗程为48周。检验及记录两组受试者在0、12、24、48wk时的血清HBV DNA、乙肝两对半定量、肝功能、肝脏硬度值、症状积分及不良事件。结果:治疗组患者血清HBV DNA水平从治疗24wk开始显著降低,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。治疗48wk时治疗组患者HBV DNA阴转率为13.75%,对照组为1.25%,差异具有显著性意义(P<0.05)。治疗组患者HBeAg滴度、症状积分随着治疗时间的延长逐渐下降,显著优于对照组(P<0.05)。治疗48wk时,治疗组患者肝脏硬度值较0wk时显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);较对照组治疗40wk时也下降显著P<0.05。结论:白花香莲解毒颗粒能显著改善慢性HBV感染者免疫耐受期的不适症状,抑制HBV DNA复制及HBeAg分泌,并降低肝纤维化的评分,安全性良好。

白花香莲解毒颗粒成型工艺研究

目的优选出白花香莲解毒颗粒的成型工艺。方法以成型率、溶化性、流动性等多项指标,对辅料种类、用量、工艺等条件进行考察,筛选处方的成型工艺。结果最佳成型工艺为:按稠膏∶糊精=1∶2比例加入糊精,以糊精稠膏混合物0.25%的阿司帕坦和0.25%甜菊素作为矫味剂,再加入45%乙醇作为润湿剂,混匀,过14目筛制粒,80℃鼓风干燥,整粒,即得。结论优选出的成型工艺质量稳定可行,可为白花香莲解毒颗粒的制备与生产提供参考。

白花香莲解毒颗粒治疗乙型肝炎肝硬化代偿期的临床观察

目的:观察白花香莲解毒颗粒联合恩替卡韦分散片治疗乙型肝炎肝硬化代偿期的疗效。方法:选取乙型肝炎肝硬化代偿期患者60例,随机分为治疗组和对照组各30例,对照组给予恩替卡韦分散片治疗;治疗组给予白花香莲解毒颗粒联合恩替卡韦分散片治疗,两组均治疗48周。观察治疗后两组肝功能、HBV-DNA、肝纤四项水平及肝硬度值(LSM)的变化。结果:治疗后,两组血清HA、LN、IV-C、PC-Ⅲ水平与本组治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,治疗组血清HA、LN、IV-C、PC-Ⅲ水平低于同期对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,治疗组在抑制HBV-DNA复制方面显著优于对照组(P<0.05);治疗后,两组的TBIL、AST、ALT水平均低于治疗前,且治疗组均优于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:白花香莲解毒颗粒可以有效改善乙型肝炎肝硬化代偿期患者肝纤维化,抑制病毒复制,改善肝功能指标。

白花香莲解毒颗粒联合恩替卡韦治疗乙型肝炎肝硬化疗效观察

目的观察白花香莲解毒颗粒联合恩替卡韦治疗乙型肝炎肝硬化的临床疗效及安全性。方法将2017年1月—2019年1月在广西中医药大学第一附属医院治疗的134例乙型肝炎肝硬化患者随机分为治疗组与对照组,每组67例。对照组采用恩替卡韦治疗,治疗组在对照组治疗基础上加服白花香莲解毒颗粒。观察比较2组患者治疗24周、48周后血清谷丙转氨酶(ALT)和总胆红素(TBil)复常率、HBV DNA转阴率、肝纤维化指标、肝硬度值、临床治疗总有效率及不良反应发生情况。结果治疗24周后,治疗组ALT、TBil复常率与同期对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),HBV DNA转阴率明显高于同期对照组(P<0.05);治疗48周后,治疗组ALT、TBil复常率及HBV DNA转阴率均明显高于同期对照组(P均<0.05)。治疗24周、48周后,2组透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)水平及肝硬度值均明显低于治疗前(P均<0.05),且治疗48周后明显低于治疗24周后(P均<0.05);治疗组治疗24周、48周后HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C水平及肝硬度值均明显低于同期对照组(P均<0.05)。治疗组治疗24周、48周后总有效率分别为86.57%(58/67)和91.04%(61/67),对照组分别为67.16%(47/67)和73.13%(49/67),治疗组均明显高于同期对照组(P均<0.05)。2组均未见血尿便常规及肾功能异常,且未见明显药物不良反应。结论白花香莲解毒颗粒联合恩替卡韦治疗乙型肝炎肝硬化临床疗效确切,安全性好。

白花香莲解毒颗粒质量标准研究

目的:建立白花香莲解毒颗粒的质量标准。方法:采用薄层色谱法对方中白花蛇舌草和三叶香茶菜进行定性鉴别;根据《中国药典》2015年版的相关方法,检查该颗粒的粒度、水分、溶化性、装量差异和微生物限度;运用高效液相色谱法对白花蛇舌草的特异性成分去乙酰车叶草酸甲酯的含量进行测定,色谱柱为Inertsil ODS-3(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相为水-乙腈(91∶9),检测波长为238 nm,流速为0.85 mL/min,柱温为30℃。结果:薄层色谱斑点显示较清晰,分离效果良好,专属性较强,方法简单。白花香莲解毒颗粒的粒度平均为99.39%,水分平均为0.58%,溶化性为全部溶解、有轻微浑浊、无焦屑,装量差异的结果和微生物限度检查结果均符合规定。去乙酰车叶草酸甲酯在5.07~40.56μg/mL之间线性关系良好,r=0.999 9;平均回收率为98.11%,RSD%=2.95%。结论:该实验方法操作简便,重现性好,结果准确,可以作为白花香莲解毒颗粒的质量控制标准。

白花香莲解毒颗粒促进慢性乙型肝炎HBeAg血清学转换及对血清Furin表达的临床研究

目的:探讨白花香莲解毒颗粒促进慢性乙型肝炎乙肝病毒e抗原(HBeAg)血清学转换及对血清弗林蛋白酶(Furin)表达的影响。方法:收集2018年7月—2019年6月在广西中医药大学第一附属医院就诊的120例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者和20例健康人的临床资料,将120例HBeAg阳性CHB患者随机分为对照组和治疗组,对照组给予恩替卡韦分散片,0.5 mg/次,1次/d,空腹口服,治疗组在对照组的基础上加服白花香莲解毒颗粒,1袋/次,2次/d,冲服。两组的观察时间均为48周,分别记录治疗组和对照组治疗前、后乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)载量、血清中HBeAg和Furin的表达水平及不良反应事件。结果:治疗12、24、48周时,两组患者血清HBV DNA载量均较治疗前显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。其中治疗12、24周,对照组血清中HBV DNA载量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗48周,对照组HBeAg血清学转换和HBeAg转阴率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗24、48周,治疗组血清Furin表达量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:白花香莲解毒颗粒能够有效地抑制HBV DNA复制,促进HBeAg血清学转换,其作用机制可能与下调Furin表达有关。

白花香莲解毒颗粒调控miR-122对HepGA14细胞表达HBV标志物活性的影响

目的 观察白花香莲解毒颗粒调控miR-122对HepGA14细胞表达HBV标志物活性的影响。方法 在HepGA14细胞模型的基础上,采用慢病毒转染技术,过表达、干扰表达该细胞模型内miR-122水平,分为模型组、miR-122过表达组、miR-122干扰表达组,再分别予课题组前期明确的白花香莲解毒颗粒最佳药物浓度(0.625mg/ml)对其进行干预并培养48h后,qPCR检测细胞上清干预前后HBV DNA、miR-122表达情况;ELISA检测细胞上清干预前后HBsAg和HBeAg表达量。结果 (1)与干预前(模型组)比较,白花香莲解毒颗粒干预后(即中药组)miR-122表达量明显上调(P<0.001);(2)干预前,与模型组比较,miR-122过表达组HBV DNA、HBsAg和HBeAg表达均下降(P<0.05),miR-122干扰表达组HBV DNA、HBsAg和HBeAg表达均上升(P<0.05);(3)干预后,与同组干预前比较,模型组、miR-122过表达组以及miR-122干扰表达组中HBV DNA、HBsAg和HBeAg表达量均持续下降(P<0.05),与模型组比较,miR-122过表达组下降较优(P<0.05)。结论 白花香莲解毒颗粒可通过上调miR-122的表达,抑制HBV DNA的复制,减少HBsAg、HBeAg的分泌。

白花香莲解毒颗粒制备工艺研究

目的优选出白花香莲解毒颗粒的最佳制备工艺。方法以方中主药白花蛇舌草的特异性成分去乙酰车叶草酸甲酯及出膏率为考察指标,采用正交试验方法,优选出白花香莲解毒颗粒的最佳提取工艺。以成型率、溶化性、流动性等多项指标,对辅料、用量、工艺等条件进行考察,确定处方的成型工艺。结果白花香莲解毒颗粒的最佳提取工艺为加10倍量水,提取2次,每次1.5 h;成型工艺为按稠膏∶糊精=1∶2比例加入糊精,以糊精稠膏混合物0.25%的阿司帕坦和0.25%甜菊素作为矫味剂,再加入45%乙醇作为润湿剂,混匀,过14目筛制粒,80℃鼓风干燥,整粒,即得。结论优选出的提取工艺和成型工艺稳定可行,可为白花香莲解毒颗粒的制备与生产提供参考。

白花香莲解毒颗粒联合恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的多中心、双盲对照研究

目的观察白花香莲解毒颗粒联合恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床疗效。方法选取2018年1月—2019年1月就诊于广西中医药大学第一附属医院、田东县中医医院、藤县中医医院、那坡县中医医院、南宁市武鸣区中医医院的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者320例,随机分为对照组和治疗组,每组各160例。对照组口服中药安慰剂,2袋/次,2次/d,同时餐前或餐后2 h口服恩替卡韦分散片0.5 mg/次,1次/d。治疗组在对照组服用恩替卡韦分散片基础上口服白花香莲解毒颗粒,2袋/次,2次/d。两组患者均治疗48周。观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者HBV DNA下降值、病毒应答率、HBV DNA转阴率、血清生化应答率、HBeAg转阴率、HBeAg血清转换率和症状积分。结果治疗后,对照组临床有效率为76.88%,显著低于治疗组的88.75%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗24、48周时,治疗组症状积分与同组治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组症状积分与对照组治疗同期比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗12、24、48周时,两组HBV DNA下降值均较同组治疗前升高(P<0.05)。治疗12、24、48周时,治疗组HBV DNA下降值显著高于对照组(P<0.05)。治疗12、24周时,治疗组病毒应答率优于对照组(P<0.05)。治疗12、24、48周时,治疗组HBV DNA转阴率、血清生化应答率均优于对照组(P<0.05)。治疗48周时,治疗组HBeAg转阴率优于对照组(P<0.05)。治疗24、48周时,治疗组HBeAg血清转换率优于对照组(P<0.05)。结论白花香莲解毒颗粒能够显著提高HBV DNA转阴率,增加HBeAg血清学转换率,改善肝功能及临床症状。

白花香莲解毒颗粒抑制HBV的miRNA表达谱筛选

目的筛选出白花香莲解毒颗粒抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的miRNA表达谱,旨在发现及鉴定新的具有抗HBV活性的miRNA。方法采用miRNA芯片和基因芯片技术检测HepG2细胞空白对照组、HBV 1.3P侵染HepG2细胞模型组和白花香莲解毒颗粒干预组的表达谱,通过TargetScan以及miRDB数据库预测miRNA的靶基因,并对靶基因进行GO和KEGG Pathways分析,用qRT-PCR方法对筛选出的miRNA进行验证。结果 miRNA芯片筛选出与白花香莲解毒颗粒抑制HBV相关的20个发生显著变化的miRNA,其中在模型组表达降低,同时在白花香莲解毒颗粒干预组表达升高的有16个;在模型组表达升高,同时在白花香莲解毒颗粒干预组表达降低的有4个;qRT-PCR验证hsa-miR-106a-5p、hsa-miR-181a-3p、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-141-3p以及hsa-miR-372-3p的差异表达,结果与芯片一致。结论白花香莲解毒颗粒对肝细胞内的miRNA表达具有干预作用,能通过调控miRNA发挥抑制HBV的作用。

白花香莲解毒颗粒抑制HBV的mRNA表达谱筛选

目的:筛选白花香莲解毒颗粒抑制乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的mRNA表达谱,旨在发现及鉴定新的具有抗HBV活性的mRNA。方法:采用mRNA芯片及基因芯片检测HepG2细胞空白对照组、HBV1.3D侵染HepG2细胞模型组和白花香莲解毒颗粒干预组的mRNA表达谱,并通过生物信息学进行数据分析,筛选出靶mRNA。采用qRT-PCR方法对筛选出的mRNA进行验证。结果:mRNA芯片共筛选出与白花香莲解毒颗粒抑制HBV相关的183个发生显著变化的mRNA,其中在模型组表达升高,同时在白花香莲解毒颗粒干预组表达降低的有88个,在模型组表达降低,同时在白花香莲解毒颗粒干预组表达升高的有95个。qRT-PCR对IL8、EDN1、ENO2、PPARA以及NFIB共5个目的基因进行验证,结果与芯片一致。结论:白花香莲解毒颗粒对肝细胞内的mRNA表达具有干预作用,能通过调控mRNA发挥抑制HBV的作用。