热诱导卵白蛋白-白藜芦醇共价复合物的结构、功能及潜在致敏性

目的研究热诱导卵白蛋白(heat stressed ovalbumin,HOVA)-白藜芦醇(resveratrol,RES)共价复合物的结构、功能及潜在致敏性。方法首先将卵白蛋白(ovalbumin,OVA)在323 K条件下加热15 min,然后在碱性条件下与RES反应制备HOVA-RES共价复合物,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳测定HOVA-RES共价复合物的分子量,通过液相色谱-串联质谱法鉴定RES的结合位点,采用内源性荧光光谱、圆二色光谱、紫外吸收光谱解析RES引起的蛋白质构象变化,最后检测HOVA-RES共价复合物的抗氧化性、乳化性、热稳定性及潜在致敏性。结果碱性条件下HOVA与RES可以共价形式交联,结合位点为Lys187和Lys264。低比例RES复合时,HOVA螺旋结构增加,无规则卷曲减少,而高比例RES复合时,蛋白结构逐渐往无序方向发展。RES的共价修饰会影响蛋白质的功能特性,其中1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)ammonium salt,ABTS]阳离子自由基清除率提升了约2倍,乳化活性由45.14 m^(2)/g增加到107.88 m^(2)/g,变性峰值温度上升了9.66℃。此外,随着RES复合比例的增加,HOVA-RES共价复合物的免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)结合能力呈现先下降后上升再下降的趋势,适量RES的共价复合能够显著降低OVA的潜在致敏性。结论HOVA-RES共价复合可以改变OVA的构象,改善其功能特性,并影响其潜在致敏性,这为OVA的开发利用提供了理论依据。

白藜芦醇磷脂复合物固体脂质纳米粒的制备及其体内药动学研究

目的制备白藜芦醇磷脂复合物固体脂质纳米粒,并考察其体内药动学。方法乳化超声-低温固化法制备固体脂质纳米粒,测定其粒径、Zeta电位、包封率、载药量、体外稳定性、体外释药。18只大鼠随机分为3组,分别灌胃给予原料药、磷脂复合物、固体脂质纳米粒0.5%CMC-Na混悬液(20 mg/kg),于0、2、4、8、12、24 h采血,HPLC法测定白藜芦醇血药浓度,计算主要药动学参数。结果固体脂质纳米粒平均粒径为218.6 nm,Zeta电位为-15.6 mV,包封率为84.07%,载药量为2.62%,48 h内累积溶出度为76.18%,白藜芦醇含量在48 h内无明显变化。与原料药、磷脂复合物比较,固体脂质纳米粒t_(max)延长(P<0.01),C_(max)、AUC_(0~)_t、AUC_(0~∞)升高(P<0.01),其相对生物利用度与原料药相比增加至3.00倍。结论固体脂质纳米粒可提高白藜芦醇磷脂复合物体外溶出度和稳定性,促进该成分体内吸收。

白藜芦醇纳米结构脂质载体的制备与体外释放研究

目的 制备白藜芦醇纳米结构脂质载体(Res-NLCs),并对其进行理化性质和体外释放特性的考察。方法 采用乳化蒸发-高压均质法制备Res-NLCs,通过正交试验得出最优处方,并对最优处方制得的Res-NLCs进行理化性质考察;通过HPLC建立白藜芦醇体外释放方法学,采用动态透析法对Res-NLCs的体外释药特性进行考察。结果 Res-NLCs的最优处方为:双硬脂酸甘油酯用量为0.0356 g,大豆磷脂用量为0.3918 g,Tween-80的质量浓度为4.25%,辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯用量为0.0475 g。经透射电镜观察Res-NLCs呈规则圆球状,分散均匀。测得Res-NLCs的平均粒径为(81.87±0.14)nm,多分散系数为(0.099±0.02),Zeta电位为(-8.09±0.75)m V,包封率为(98.43±0.07)%,载药量为(11.04±0.14)%。体外释放结果显示,白藜芦醇溶液在8 h释放97.31%,而Res-NLCs则缓慢持续释放,并在48 h后达到释放平台,累计释放的白藜芦醇为80.69%。结论 通过乳化蒸发-高压均质法制备的Res-NLCs粒径小,分散均匀,具有较高的包封率及载药量,并可显著延长白藜芦醇释放的时间,具有良好的缓释效果。

溶菌酶纳米颗粒递送白藜芦醇改善非酒精性脂肪肝

白藜芦醇是一类具有多种生物活性的植物多酚类化合物,通过减少氧化应激和脂质沉积可预防和改善非酒精性脂肪肝(NAFLD)。然而,白藜芦醇难溶于水,口服生物利用率低,降低了其健康功效。本研究采用谷氨酰胺转氨酶交联的溶菌酶纳米颗粒包埋白藜芦醇,其临界胶束质量浓度为1.1μg/mL,粒径为58 nm,白藜芦醇的载药率为21.2%。体外消化模型中载体耐胃酸和蛋白酶水解,经体外肠消化120 min后白藜芦醇释放率为61%。采用SD大鼠模型测定生物利用率,包埋后白藜芦醇的血药浓度峰值(C_(max))提升3.2倍,药时曲线下面积(AUC_(0~48 h))提升3.6倍,绝对生物利用度(Fabs)提高3.8倍。构建NAFLD小鼠模型,灌胃荷载白藜芦醇的溶菌酶纳米颗粒,验证其对NAFLD的干预效果。结果表明,白藜芦醇经纳米载体包埋后NAFLD小鼠的体脂率较游离态的白藜芦醇降低1.1倍,血清中血脂指标、肝脏中甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(NEFA)、肝脏组织氧化应激产物丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)均显著降低,说明经溶菌酶纳米颗粒包埋后的白藜芦醇吸收率更好,对NAFLD小鼠的干预效果更佳。说明谷氨酰胺转氨酶交联之后的溶菌酶纳米载体,在口服递送功能活性物质方面具有极大潜力。

二甲双胍-白藜芦醇复合物油包水型纳米乳在体肠吸收及其药代动力学研究

考察二甲双胍-白藜芦醇复合物油包水型纳米乳(metformin-resveratrol compound water-in-oil nanoemulsion,MRCE)在大鼠体内的在体肠吸收特性和药代动力学行为。通过构建大鼠在体肠单向灌流模型,研究MRCE在不同肠段的吸收情况,大鼠被随机分为两组,二甲双胍和MRCE灌胃给药后,在预设时间点取血,HPLC法测定肠灌流样品和各时间点血样中二甲双胍的含量,绘制血药浓度-时间曲线,DAS 2.1.1软件处理并分析药代动力学数据。MRCE在各肠段的吸收速率常数(K_(a))、有效渗透率(P_(eff))和吸收百分率(PA)均显著高于二甲双胍(P<0.05);MRCE的血药浓度-时间曲线下面积(AUC_(0-72 h))、半衰期(t_(1/2))和平均滞留时间(MRT_(0-72 h))分别为二甲双胍的1.68、11.25和6.97倍(P<0.01)。MRCE的相对生物利用度为167.6%。MRCE的AUC_(0-72 h)的90%可置信区间为156.9%~187.4%,不在生物等效性标准区间内。MRCE肠道吸收情况明显优于游离二甲双胍;结果表明,MRCE提高了二甲双胍的口服生物利用度,且与二甲双胍生物不等效。

白藜芦醇-大麦醇溶蛋白复合纳米颗粒的光稳定性、缓释行为及抗氧化能力

采用液-液分散法自组装制备了白藜芦醇-大麦醇溶蛋白复合纳米颗粒,其平均粒径为(135.0±2.5)nm,白藜芦醇包封率为90.4%,负载率为18.8%;扫描电子显微镜表征结果显示纳米颗粒表面光滑,呈较规则的圆球状.考察了复合纳米颗粒载体形式对白藜芦醇光稳定性的影响,结果表明,在紫外光下暴露18 h,与游离白藜芦醇相比,纳米颗粒中的白藜芦醇稳定性提高了26%.通过模拟胃肠道环境考察了复合纳米颗粒的白藜芦醇缓释行为,结果表明,2 h内白藜芦醇在模拟胃液中的释放率为35%,随后释放速率减慢,6 h后的释放率为56%;在模拟肠液中2 h内白藜芦醇的释放率为42%,且在4 h内的释放行为遵循零级释放特征,6 h后的释放率为88%.对游离态白藜芦醇和复合纳米颗粒形式的白藜芦醇抗氧化能力进行了对比研究,1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)实验结果表明,复合纳米颗粒形式的白藜芦醇比游离形式在清除氢过氧自由基方面能力稍强(IC50值分别为0.4182 mmol/L和0.4378 mmol/L);Hep G2细胞抗氧化模型实验进一步证实白藜芦醇在形成复合纳米颗粒后其抗氧化能力略有增强.

白藜芦醇纳米结构脂质载体的药剂学处方设计与优化

目的为制备白藜芦醇纳米结构脂质载体,对其药剂学处方进行设计与优化。方法采用乳化蒸发-低温固化法制备白藜芦醇纳米结构脂质载体混悬液,考察了了载体用量、模型药物用量、固液脂质比以及表面活性剂等药剂学处方条件对白藜芦醇纳米结构脂质载体粒径与包封率的影响。结果确定了白藜芦醇纳米结构脂质载体最佳处方条件:单硬脂酸甘油酯80 mg,油酸20 mg,白藜芦醇10 mg,大豆卵磷脂12.5 mg,在此条件下制备的白藜芦醇纳米结构脂质载体微平均粒径为(104.2±5.1)nm,平均分布为0.184±0.021,包封率为(85.43±0.89)%。结论白藜芦醇纳米结构脂质载体包封率、粒度达到药典关于纳米粒子的质量相关要求。

白藜芦醇纳米结构脂质载体的制备与体外抗肿瘤细胞活性研究

目的制备白藜芦醇纳米结构脂质载体,并评价其体外抗肿瘤细胞活性。方法采用热熔乳化-高压均质法制备白藜芦醇纳米结构脂质载体,并使用Box-Behankn效应面法优化其处方。评价了白藜芦醇纳米结构脂质载体的粒径分布、多聚分散系数(PDI)、Zeta电位和微观形态,考察了白藜芦醇纳米结构脂质载体体外释放行为及对人肺癌Calu-1细胞的增殖抑制效果。结果白藜芦醇纳米结构脂质载体的最佳处方为:鲸蜡醇棕榈酸酯用量为5.14mg·ml^(-1),Miglyol~812用量为3.50mg·ml^(-1),大豆磷脂用量为2.50mg·ml^(-1);制备的纳米结构脂质载体呈淡蓝色透明状液体,粒径大小为(121.4±27.6)nm,PDI为0.168±0.031,Zeta电位为(-9.4±0.4)mV,在透射电镜下可以观察到白藜芦醇纳米结构脂质载体呈球状或类球状分布;纳米结构脂质载体可延缓白藜芦醇的体外释放,对人肺癌Calu-1细胞的增殖抑制作用显著高于白藜芦醇溶液(P<0.05)。结论采用热熔乳化-高压均质法制备的白藜芦醇纳米结构脂质载体对人肺癌Calu-1细胞具有显著的增殖抑制作用,对肺癌治疗具有一定的应用前景。

白藜芦醇纳米混悬剂的制备及体外初步评价

目的制备白藜芦醇(RES)纳米混悬剂,并进行体外评价。方法采用沉淀法制备RES纳米混悬剂。以平均粒径及多分散系数(PDI)为评价指标,正交试验优化制剂工艺。冷冻干燥法制备纳米混悬剂冻干粉末并进行表征。使用透析袋法研究制剂的体外释放情况。建立高糖刺激的ARPE-19细胞损伤模型,CCK-8法评估RES纳米混悬剂对细胞活力的影响。结果RES最优处方工艺为:RES浓度6 mg/mL,两种稳定剂(PVP K17∶HPMC)质量比2∶1,RES与稳定剂质量比1∶2,5%甘露醇做冻干保护剂。RES纳米混悬剂为相对规则的颗粒状,载药量为28.04%,36 h内累计释放量达91.27%。与RES相比,RES纳米混悬剂预处理后ARPE-19细胞活力显著提高(P<0.05)。结论RES纳米混悬剂可提高RES的体外释放率,并且能够减轻高糖对ARPE-19细胞的损伤,提高细胞存活率。

白藜芦醇纳米微粒新型给药系统研究进展

白藜芦醇是一种植物来源的多酚类化合物,具有抗炎、抗肿瘤等多种药理作用,长期以来其水溶解度低、稳定性差的问题限制了其临床开发。纳米给药系统可以提高难溶性药物的生物利用度、稳定性,近年来,研究人员设计了多种类型的纳米给药系统,提高了白藜芦醇的生物利用度。现文章综述近年来白藜芦醇纳米微粒新型给药系统研究进展,旨在为其在临床开发与应用提供新的思路。

白藜芦醇药理作用及新型纳米微粒载药系统研究进展

白藜芦醇是一种在植物中广泛存在的多酚类化合物,药理研究揭示其具备抗肿瘤、抗炎、抗糖尿病、抗骨质疏松、神经保护等药理作用,因此在医药健康领域具有广泛的应用前景。然而,其水溶解度低、稳定性较差以及生物利用度不高的问题,长期以来制约了其临床开发。本文对近年来白藜芦醇的药理作用及新型纳米微粒载药系统研究进行了归纳总结,以期为白藜芦醇临床制剂的开发提供参考。

白藜芦醇和亚麻籽油复配的纳米结构脂质载体的制备和表征

采用热高压均质法制备用于封装、保护并提供白藜芦醇和亚麻籽油的纳米结构脂质载体(RL-NLC),并进行微观形貌、理化稳定性、抗氧化性、体外释放、脂质加速氧化等特性的表征研究。制备的RL-NLC粒径约为105nm,多分散指数(PDI)约为0.216。该球形纳米颗粒在水溶液中分散性良好,25℃避光条件下能储存3个月以上。载体化后的白藜芦醇具有更好的抗氧化活性和缓慢的体外释放速度。在50℃加速储存试验中,固化的脂质核和白藜芦醇的存在共同抑制了亚麻籽油的氧化。本文开发的白藜芦醇和亚麻籽油复配载体,可能在功能食品领域具有良好的应用前景。

基于PEG-PLGA和CMCS载体制备白藜芦醇纳米粒在结肠癌治疗中的应用

目的为了提高白藜芦醇(Resveratrol,RES)的生物利用度,将其制备成纳米粒子,并研究其体外抗结肠癌的作用。方法分别以聚乙丙交酯聚乙二醇共聚物(PEG-PLGA)和羧甲基壳聚糖(Carboxymethyl chitosan,CMCS)作为药物载体,采用纳米沉淀法和乳化交联法分别制备了PEG-PLGA共载白藜芦醇纳米粒(RES-PEG-PLGA NPs)和CMCS共载白藜芦醇纳米粒(RES-CMCS NPs),利用紫外分光光度计、激光粒度分析仪和透射电子显微镜等仪器对纳米粒的理化性质进行表征;采用CCK-8检测法测定纳米粒对人结肠癌细胞(SW480)的抗增殖活性,并通过荧光显微镜考察了纳米粒在SW480细胞中的摄取。结果RES-PEGPLGA NPs粒径为78.67±1.0 nm,包封率为87%;RES-CMCS NPs粒径为231±1.6 nm,包封率为60%。结论两种纳米粒在模拟肿瘤微环境下均能实现白藜芦醇的缓释,都可以有效地被SW480细胞摄取,并且对SW480细胞表现出较高的抑制作用。

白藜芦醇纳米结构脂质载体的制备

制备了白藜芦醇纳米结构脂质载体(Res-NLC),筛选了最佳制备工艺和最优处方。固体脂质、液体脂质和表面活性剂为辅料,采用溶剂蒸发-低温固化法制备纳米结构脂质载体,以粒径、包封率和载药量为指标考察了Res-NLC的制备工艺及制剂处方。结果表明:通过单因素及正交试验结果得出最佳制备工艺和最优处方,在此条件下制备的白藜芦醇纳米结构脂质载体的包封率为84.87%,载药量为8.48%,粒径为252.4nm。提出了白藜芦醇纳米结构脂质载体包封率、粒度达到药典关于纳米粒子的质量相关要求。

维生素C/白藜芦醇纳米复合脂质体制备及其抗氧化性研究

本文以具有亲疏水特点的磷脂分子为基质材料,采用薄膜水化法制备了一种同时包载脂溶性白藜芦醇(Res)和水溶性维生素C(VC)的纳米复合脂质体(Lip@Res/VC),并将其用于细胞抗氧化研究。在Lip@Res/VC的制备过程中,以Res和VC的包封率以及脂质体的粒径、多分散指数和电位为指标,考察了Res和VC的最佳投入量。研究结果表明,分别选择Res为4.0 mg和VC为3.5 mg的投入量,制备的Lip@Res/VC的水合粒径为(92.29±5.41)nm,Res和VC的包封率分别为(85.13±5.37)%和(64.73±5.51)%。体外1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸二胺盐(ABTS)自由基清除试验结果显示,Lip@Res/VC的抗氧化活性较只包载了Res的单一脂质体Lip@Res或只包载了VC的单一脂质体Lip@VC均显著提高。通过选择正常肝细胞(L02细胞)为模式细胞,研究了Lip@Res/VC的细胞内抗氧化效果,结果显示,Lip@Res/VC具有清除细胞内活性氧(ROS)的能力,对过氧化氢诱导的L02细胞氧化损伤具有保护作用。

基于白藜芦醇还原特性的银基纳米载体制备及肿瘤细胞杀伤效应评价

以反式白藜芦醇(resveratrol,RES)为还原剂,硝酸银(AgNO_3)为前驱体,十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)为表面活性剂和相转移催化剂,采用原位液相还原工艺制备了负载RES的银基纳米载体(RES-AgNPs)。当AgNO_3、RES和CTAB摩尔比为1:1:0.5、40℃反应13 h时,制得平均粒径(45.5±2)nm、zeta电位-21 mV的RES-AgNPs。红外光谱和紫外吸收光谱分析结果表明,RES成功负载在纳米银表面,负载量达到0.0883 mg?mg^(-1)。体外释放实验表明,RES-AgNPs具有过氧化氢(H_2O_2)敏感响应的释放特性,当p H=5.4且CH_2O_2=25μmol?L^(-1)时RES释放率为89%。以人乳腺癌细胞MCF-7为肿瘤细胞模型,MTT实验结果显示,当样品剂量均为15μg?mL^(-1)时,与RES、AgNPs和RES+AgNPs联合给药相比,RES-AgNPs对细胞的生长抑制率分别提高了62.6%、68.2%和55.1%,体现了纳米载体中银纳米粒子与负载药物RES对肿瘤细胞的协同杀伤效应。

负载白藜芦醇的大麦醇溶蛋白/海藻酸丙二醇酯复合纳米颗粒的制备及表征

以大麦醇溶蛋白(hordein)、海藻酸丙二醇酯(PGA)为原料,通过溶剂蒸发法制备大麦醇溶蛋白-海藻酸丙二醇酯复合纳米颗粒(Hordein/PGA),并对白藜芦醇进行包封。结果表明,随海藻酸丙二醇酯添加量的增加,Hordein/PGA的粒径由1654.9 nm逐渐下降至475.9 nm。同时Hordein/PGA的电位均为负值,并随海藻酸丙二醇酯添加量的增大由-3.62 mV下降至-8.04 mV。红外光谱结果显示:大麦醇溶蛋白与海藻酸丙二醇酯主要通过氢键、静电吸引及疏水相互作用结合。以Hordein/PGA1∶1对白藜芦醇进行包封,构建三元复合纳米颗粒(Hordein/PGA/Res),白藜芦醇的包封率可达87%。红外光谱和X射线衍射分析表明白藜芦醇与大麦醇溶蛋白、海藻酸丙二醇酯有效结合。Hordein/PGA/Res经85℃处理30 min后白藜芦醇保留率为88%,显著高于游离白藜芦醇保留率(73%);经6 h紫外光辐射处理后白藜芦醇保留率可提高约16%。

不同空化射流条件下大豆蛋白-白藜芦醇互作结合机制与抗氧化活性研究

为探究空化射流预处理对大豆分离蛋白-白藜芦醇(SPI-RES)复合物的影响,对SPI进行空化射流预处理(0、2、4、6、8、10min)后,与RES非共价结合形成复合物。通过荷载量和包埋率研究了SPI对RES的结合情况,采用内源荧光光谱、傅里叶红外光谱及分子对接技术研究了SPI和RES之间的相互作用机制,通过粒径、ζ-电位、表面疏水性、抗氧化活性等考察了复合物的物理化学性质和功能特性。结果表明:经过一定时间的空化射流处理后,SPI对RES包埋率和荷载量显著增加,复合物粒径和ζ-电位分别减小和增大。内源荧光光谱表明RES对SPI的淬灭为静态淬灭,反应是自发进行的。傅里叶红外光谱表明适当的空化射流预处理促进了SPI从有序结构转变为无序结构,从而结合更多的RES。热力学参数和分子对接结果表明疏水相互作用是主要作用力,还涉及氢键。此外,适当的空化射流预处理后,SPI-RES复合物表面疏水性及抗氧化活性均有所增加。本研究为空化射流预处理大豆分离蛋白应用领域的开拓和脂溶性活性物质保健食品的开发提供了前期理论基础。

白藜芦醇纳米乳的制备及其质量评价

制备白藜芦醇纳米乳并进行质量评价。通过伪三元相图法优选处方,以聚氧乙烯氢化蓖麻油为表面活性剂,乙醇为助表面活性剂,肉豆蔻酸异丙酯为油相制备白藜芦醇纳米乳,检测纳米乳的形态及粒度分布,并考察其稳定性,紫外分光光度法测其有效成分含量。结果表明,白藜芦醇纳米乳在电子显微镜下呈圆形,平均粒径为16.5±1.5 nm,分布在10-40 nm。白藜芦醇纳米乳保存3个月仍澄清透明,未见分层或絮凝,其稳定温度范围为-4-60℃。纳米乳中白藜芦醇含量为6.184±0.110 mg/L,回收率为95.8%。白藜芦醇纳米乳外观透明、热力学稳定、药物含量高、回收率高,纳米乳基质能明显防止白藜芦醇氧化。

表面氨基游离的白藜芦醇壳聚糖纳米粒制备方法研究

目的:探索表面氨基游离的白藜芦醇壳聚糖纳米粒制备方法,以便连接配体实现主动靶向。方法:采用氯化钠沉淀法制备表面氨基游离的壳聚糖纳米粒;比较不同固化程度纳米溶液的浊度、体外释放、包封率、载药量和粒径等性质。结果:固化程度不同的纳米溶液经超声或水浴加热处理后,浊度降低值不同;含不同固化剂的纳米溶液均有明显缓释效果,随固化剂加入量增加,释放速度减慢;固化程度对包封率和载药量无明显影响。加固化剂200μL的壳聚糖纳米粒粒径为487 nm,多分散指数为0.144。结论:制备的白藜芦醇壳聚糖纳米粒粒径相对较小,表面氨基游离,可用于主动靶向给药系统的设计。