虎杖白藜芦醇的提取及抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的研究

该研究以虎杖白藜芦醇提取率为考察指标,通过单因素试验及正交试验方法确定白藜芦醇的最佳提取工艺,并对其体外抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性进行了考察。试验结果表明,最优提取工艺为:乙醇体积分数为60%,料液比为1∶20,微波提取参数为50℃、700 W、700s。在该提取工艺下,虎杖白藜芦醇提取率为2.14%。体外抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性表明,白藜芦醇对两者都有较好的抑制作用,抑制率分别为69.42%和74.39%。

产β-葡萄糖苷酶细菌的筛选及转化白藜芦醇的研究

白藜芦醇具有抗癌、抗氧化等八大功效,在医药、化妆品等领域应用广泛。为获得分泌β-葡萄糖苷酶的细菌菌株,并实现其对虎杖苷的有效转化。通过栀子苷平板初筛、虎杖苷摇瓶复筛,筛选得到一株能够分泌β-葡萄糖苷酶,转化虎杖苷生成白藜芦醇的菌株,并利用16S r DNA序列对筛选得到的菌株进行鉴定,鉴定为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis),命名为CGMCC13129,该菌株在37℃,接种量为7%,底物虎杖苷浓度为0.1%,p H为7,转化8 h的条件下,对底物虎杖苷的转化率可达90%以上,利用HPLC、HPLC-MS、1H-NMR等手段检测转化产物为白藜芦醇,经甲醇萃取一次,纯度高达99.3%。

白藜芦醇对α-葡萄糖苷酶的抑制动力学及抑制机制

白藜芦醇因具有广泛的生物活性而备受重视,有报道称白藜芦醇有降血糖的功效。α-葡萄糖苷酶抑制剂能够降低血糖含量,有效防治Ⅱ型糖尿病。因此,为了确定白藜芦醇的降血糖机制,研究白藜芦醇与α-葡萄糖苷酶活性的关系,本研究采用分光光度法测定α-葡萄糖苷酶活力,采用双倒数作图法研究白藜芦醇的酶抑制动力学,并采用对接模拟方法对白藜芦醇与α-葡萄糖苷酶的结合模式进行探讨。结果表明:白藜芦醇非竞争性地抑制α-葡萄糖苷酶活性,且有较强的抑制作用,半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为5.047μmol/L,抑制常数为5.743μmol/L,明显强于阳性对照阿卡波糖(IC50=632.6μmol/L);对接模拟结果表明其与α-葡萄糖苷酶有多种可能的结合模式,且都不影响阿卡波糖与α-葡萄糖苷酶的结合。因此,白藜芦醇有被开发为降糖药物的潜力,也可作为膳食补充剂发挥一定的降血糖功效。

白藜芦醇Labrasol/P407混合胶束稳定性及大鼠体内药动学研究

目的:以白藜芦醇为对照,探讨白藜芦醇-Labrasol/P407混合胶束在大鼠体内的药动学。方法:透析法考察混合胶束在人工胃液和人工肠液的稀释稳定性;大鼠灌胃给药后,采用UPLC-Q-Orbitrap HRMS方法测定大鼠血浆中白藜芦醇和白藜芦醇-3-葡萄糖醛酸苷的浓度,采用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果:混合胶束在人工胃液和人工肠液的稀释稳定性良好。与白藜芦醇混悬剂相比,白藜芦醇-Labrasol/P407混合胶束中白藜芦醇在大鼠体内C_(max)(1389.9±373.2 ng/mL)是混悬剂(188.9±58.9 ng/mL)的7.4倍,相对生物利用度是混悬剂的9.6倍;白藜芦醇-3-葡萄糖醛酸苷的达峰浓度(C_(max))分别为(3060.7±787.4)ng/mL和(1298.1±523.2)ng/mL,血药浓度-时间曲线下面积(AUC_(0~24))分别为(14294.9±6085.1)ng·h/mL和(6061.5±874.4)ng·h/mL,分别下降57.59%和57.60%,具有显著性差异(P<0.05)。结论:将白藜芦醇制成混合胶束后可显著提高白藜芦醇的血药浓度和相对生物利用度。

广叶绣球菌多糖-白藜芦醇纳米粒子的制备、表征及其体外抑制α-葡萄糖苷酶活性

本研究采用反溶剂沉淀法制备广叶绣球菌多糖(Sparassis latifolia polysaccharides,SLPs)-白藜芦醇(resveratrol,Res)纳米粒子(SLPs-Res NPs),对其表征后分析其体外抑制α-葡萄糖苷酶活性。试验采用水提醇沉法提取SLPs并经HZ830大孔树脂脱色除杂后,以包封率、载药量为指标优化纳米粒子制备工艺,对其表征后分析其缓释特性及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果表明,当Res与SLPs的质量比为1:32时,SLPs-Res NPs的包封率最高,为(53.73±0.76)%,载药量为(1.68±0.01)%。扫描电镜显示SLPs-Res NPs表面较为粗糙。SLPs-Res NPs平均粒径为(223.51±3.02)nm,PDI值为0.51±0.04,Zeta电位为(–21.6±1.1)mV,紫外/可见及红外光谱显示SLPs与Res发生了相互作用。SLPs-Res NPs的光热稳定性均强于游离白藜芦醇,其在模拟胃液中消化2 h后Res释放率为(9.13±0.54)%,继续在模拟肠液中消化3 h后Res释放率为(31.71±0.05)%,显著低于游离Res(P<0.05)。SLPs-Res NPs对α-葡萄糖苷酶的抑制活性显著高于Res和SLPs(P<0.05)。本研究制备得到SLPs-Res NPs,其具有较好的光热稳定性、缓释特性及抑制α-葡萄糖苷酶作用,可为SLPs和Res的进一步开发利用提供一定的理论依据。

白藜芦醇上调糖尿病大鼠脂肪组织PPAR-γ及GluT-4蛋白表达

目的探讨白藜芦醇改善糖尿病大鼠脂肪组织胰岛素敏感性及降血糖的作用机制。方法雄性W istar大鼠随机分为对照组(NC,n=15)及糖尿病造模组(DM,n=40),DM组成模后随机分为糖尿病模型组(DM-C,n=15)和糖尿病白藜芦醇治疗组(DM-T,n=15)。DM-T组予白藜芦醇5.0 mg/(kg·d)-1灌胃11周。实验末,检测各组大鼠FBG、FIns、TG、TC、胰岛素敏感指数(ISI)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)及葡萄糖转运蛋白4(GluT-4)在脂肪组织的表达水平。结果 17周末,DM-C组较NC组FBG、TG明显升高,ISI明显降低,脂肪组织PPAR-γ及GluT-4蛋白表达明显降低;DM-T组较DM-C组FBG明显降低;ISI明显升高;PPAR-γ和GluT-4蛋白表达明显升高。结论白藜芦醇可上调糖尿病大鼠脂肪组织PPAR-γ及GluT-4蛋白的表达,降血糖并改善胰岛素敏感性。

蛇龙珠和白羽葡萄生长期间白藜芦醇及其相关酶变化趋势研究

以酿酒红葡萄品种蛇龙珠(Vitis viniferaL.cv.Carbernet Gernischet)、酿酒白葡萄品种白羽(V.viniferaL.cv.Rkatsiteli)为材料,研究了果实生长发育过程中白藜芦醇(Res)及其糖苷(PD)含量变化,以及与苯丙氨酸裂解酶(PAL)和β-葡萄糖苷酶(β-Glu)活性间的关系。结果表明,不同品种果实生长发育期间白藜芦醇及其糖苷的变化规律差异较大,蛇龙珠果实内的白藜芦醇及其糖苷含量有积累高峰出现;而白羽果实中白藜芦醇含量很低,其糖苷持续下降。两个品种果实内苯丙氨酸裂解酶活性变化差异较大,与白藜芦醇及其糖苷含量差异一致;而β-葡萄糖苷酶的活性变化规律基本相同。

高效液相色谱法测定红葡萄酒中白藜芦醇的四种异构体

将红葡萄酒用 β 葡萄糖苷酶水解处理 ,使其中的白藜芦醇甙转换成白藜芦醇。采用高效液相色谱法测定水解前后顺、反式白藜芦醇含量的变化 ,从而计算出葡萄酒中白藜芦醇的 4种异构体的含量。色谱柱为SymmetryC18柱 (3 9mmi.d .× 15 0mm) ,流动相为乙醇 0 0 5 %乙酸水溶液 (体积比为 2 3∶77) ,紫外检测波长为 30 6nm。实验结果表明 :白藜芦醇的 4种异构体在其质量浓度为 0 2～ 5 0 .0mg/L时均有良好的线性关系 (r >0 999) ,白藜芦醇及其甙的顺、反异构体的最小检出量分别为 :0 81,1 2 0 ,0 4 0和 0 4 6ng ,白藜芦醇回收率大于 98% ,相对标准偏差 (RSD)为 0 5 %～ 8 5 %。 11种被测干红葡萄酒中白藜芦醇总醇含量为 0 84～ 7 33mg/L,3种被测葡萄汁中白藜芦醇总醇含量为 0 12～ 6 .0 0mg/L。该方法操作简单 ,精密度高 ,重复性好 ,可用于葡萄酒 (汁 )中白藜芦醇及其甙的顺、反异构体的测定。

酶解法制备白藜芦醇的工艺优化

本文对虎杖提取物中白藜芦醇苷酶解制备白藜芦醇的工艺进行研究,以样品中白藜芦醇的含量为指标,对虎杖复合酶、纤维素酶、β-葡萄糖苷酶、虎杖苷专用酶进行了筛选,结果表明,以β-葡萄糖苷酶的转化率最高。采用单因素实验对影响β-葡萄糖苷酶酶解的因素:底物浓度、酶用量、酶解温度、pH和酶解时间进行考察;得出较佳的酶解工艺条件:酶用量3%,pH=5,40℃酶解10h。用该方法制备白藜芦醇的可以得到较高的产率,且苷水解酶可循环使用,重现性较好,适用于工业化大规模生产。

一种酶反应装置的开发及在白藜芦醇酶法制备中的应用

通过对传统圆底烧瓶进行改造,在瓶体设置玻璃插槽,使酶液滴加管插入并能在玻璃插槽中固定不漏出,酶液滴加管的设置便于准确定量,解决酶反应过程中涉及到的温度及反应时间不够精准的问题。利用该酶反应装置进行酶法制备白藜芦醇实验,正交实验优化的酶解最佳工艺条件推测为:乙醇浓度为40%,酶解温度50℃,酶解pH为5.0,酶与虎杖粉的液质比m L/mg为1︰500,白藜芦醇得率达到9.45 ug/g。

白背叶中一个新的异戊烯基二氢黄酮

目的对大戟科植物白背叶Mallotusapelta的叶进行化学成分研究。方法原料的乙醇浸出物,用各种柱色谱进行分离和纯化,所得化合物以理化性质和波谱数据进行鉴定。结果分得5个化合物,分别鉴定为蒲公英赛醇(Ⅰ)、β-谷甾醇(Ⅱ)、5,7-二羟基-6-异戊烯基-4′-甲氧基二氢黄酮(Ⅲ)、洋芹素(Ⅳ)、洋芹素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ)。结论化合物为新化合物,命名为白背叶素(mallotusin),化合物Ⅰ、Ⅲ-Ⅴ为首次从白背叶中分得。关键词:白背叶;蒲公英赛醇;5,7-二羟基-6-异戊烯基-4′-甲氧基二氢黄酮;洋芹素;

新型β-葡萄糖苷酶BglD2异源表达及水解虎杖苷能力

从海洋细菌Bacillus sp.D1中克隆、重组表达β-葡萄糖苷酶BglD2,研究其酶学性质,并对其水解虎杖苷制备白藜芦醇的能力进行分析。BglD2的最适催化温度和pH分别为45℃和6.5,在30℃和pH 6.5条件下的半衰期约为20 h。BglD2能够水解含β(1→3)、β(1→4)、β(1→6)等键型的多种底物。BglD2具有良好的糖促活特性,100 mmol/L葡萄糖和150 mmol/L木糖分别将酶活力提升2.0倍和2.3倍。BglD2具有较好的乙醇促活及耐受特性,30℃时,10%乙醇使酶活力提升1.2倍,25%乙醇存在时其仍保留60%的酶活力。BglD2具有水解虎杖苷制备白藜芦醇的能力,35℃条件下反应2 h水解率为86%。具有乙醇耐受及抗产物抑制等特性的β-葡萄糖苷酶BglD2在酶法水解虎杖苷制备白藜芦醇方面有应用潜力。

微生物转化虎杖苷生成白藜芦醇的研究

从虎杖苷粗提物中分离得到一株产β-葡萄糖苷酶活力较高的曲霉,通过优化培养基成分,提高其产酶能力.培养基的最佳组合为蔗糖30g/L,NH4Cl6g/L,K2HPO40.4g/L.在培养48h后过滤的酶液中,添加虎杖粉末进行转化2d,经过HPLC测定白藜芦醇的含量,其提高幅度为34.16%.

白藜芦醇对大鼠非酒精性脂肪肝的作用及机制研究

目的观察白藜芦醇对高脂膳食诱导的大鼠非酒精性脂肪肝的作用并探讨相关的分子机制。方法 63只6周龄雄性SD大鼠随机分为高脂组和普通饲料组,8周后通过体重和肝脏病理切片建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型。再将NAFLD组大鼠随机分为模型组和白藜芦醇干预组(250 mg/kg·bw)。干预结束后,称取大鼠体重、体脂和肝脏重量,分离血清测定相关指标,病理切片观察肝脏的脂肪蓄积,实时定量PCR检测肝脏腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/沉默静息因子(Sirt1)通路基因的表达。结果白藜芦醇干预结束后,干预组大鼠的体重、体脂比、肝重、肝脏系数和肝脏脂肪蓄积量与模型组相比显著降低(P<0.05);天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)与模型组相比也显著降低,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量显著增加(P<0.05);与模型组相比,干预组AMPKα1、AMPKα2、Sirt1和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的mRNA表达显著增加,固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)mRNA表达显著降低。结论白藜芦醇可能通过促进AMPKα、Sirt1和GLUT4的表达改善胰岛素敏感性,抑制SREBP-1c的表达降低脂质沉积改善高脂膳食诱导的非酒精性脂肪肝。

酶解法制备白藜芦醇的工艺优化

本文对虎杖提取物中白藜芦醇苷酶解制备白藜芦醇的工艺进行研究,以样品中白藜芦醇的含量为指标,对虎杖复合酶、纤维素酶、β-葡萄糖苷酶和虎杖苷专用酶进行了筛选。结果表明:以β-葡萄糖苷酶的转化率最高。采用单因素试验对影响β-葡萄糖苷酶酶解的因素底物浓度、酶用量、酶解温度、pH值和酶解时间进行考察;得出较佳的酶解工艺条件:酶用量3%、pH值5和40℃酶解10h。用该方法制备白藜芦醇的可以得到较高的产率,且苷水解酶可循环使用,重现性较好,适用于工业化大规模生产。

高效液相色谱法同时测定朱砂七中5种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定朱砂七中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素和大黄素甲醚的含量。方法采用Agilent 5 TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为290 nm。结果虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素和大黄素甲醚分别在0.0185~0.7402、0.0023~0.0900、0.0368~1.4720、0.0290~1.1600、0.0158~0.6322μg与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.9991)。5种成分的平均加样回收率均在97.7%~103.0%,RSD均在1.5%~2.9%。结论该方法简便、准确,分离效果好,重复性好,可用于朱砂七的质量评价。

川射干黄酮胶囊中非黄酮部分化学成分的研究

目的：研究川射干黄酮胶囊中非黄酮部分的化学成分。方法：利用各种色谱方法进行化学成分分离,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果：从川射干黄酮胶囊中分离、鉴定了6个非黄酮化合物,分别为软脂酸（1）、十四酸（2）、4-羟基~3-甲氧基苯乙酮（3）、胡萝卜苷（4）、B-谷甾醇（5）、白藜芦醇（6）。结论：分离出的非黄酮成分为其药理作用阐明了物质基础。

HPLC法同时测定大黄药材中8个非蒽醌类成分的含量

目的:建立同时测定大黄药材中8个非蒽醌类成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Symmetry C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0mL/min,柱温为30℃,检测波长为280nm,进样量为30μL。结果:没食子酸、儿茶素、表儿茶素、白藜芦醇4′-O-葡萄糖苷、表儿茶素没食子酸酯、白藜芦醇4′-O-β-D(- 6″-O-没食子酰)-葡萄糖苷、番泻苷A、4′-羟基苯基-2-丁酮-4′-O-β-D(- 2″-O-没食子酰-6″-O-对羟基桂皮酰)-葡萄糖苷检测进样量的线性范围分别为6.16~2 464 ng(r=0.999 9)、37.4~14 960 ng(r=0.999 9)、7.635~3 054 ng(r=0.999 7)、7.63~3 052 ng(r=0.999 9)、8.32~3 328 ng(r=0.999 9)、11.5~4 600 ng(r=0.999 9)、16.08~6 432 ng(r=0.999 9)、29.3~11 720 ng(r=0.999 9);定量限分别为3.48、4.30、6.40、4.40、3.39、2.87、8.40、4.95ng,检测限分别为2.32、2.58、2.40、2.64、2.26、1.23、4.20、2.97ng;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于5%;加样回收率分别为94.32%~100.54%(RSD=2.78%,n=6)、91.15%~99.36%(RSD=3.72%,n=6)、92.16%~98.04%(RSD=2.39%,n=6)、93.41%~100.73%(RSD=3.17%,n=6)、93.89%~98.40%(RSD=1.99%,n=6)、92.61%~101.74%(RSD=3.71%,n=6)、92.66%~103.40%(RSD=3.76%,n=6)、95.45%~102.70%(RSD=3.06%,n=6)。结论:所建方法简便、准确、专属性强,可用于同时测定大黄药材中8个非蒽醌类成分的含量。

HPLC同时测定虎杖根不同部位中的5种活性成分

目的:测定虎杖不同根部位(根木质部、根茎木质部、根表皮、根茎表皮、根、根茎)中的5种活性成分含量,为虎杖的综合利用和质量控制提供科学依据。方法:色谱柱为Agilent Extend C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈和水,柱温为40℃,检测波长为290 nm,流速为1.0 mL·min^-1。结果:5种成分线性良好(r>0.999),平均加样回收率为98.4%~98.8%。虎杖苷在根茎表皮中含量最高,为72.48 mg·g^-1;白藜芦醇和大黄素在根表皮中含量最高,分别为8.83 mg·g^-1和23.96 mg·g^-1;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷在根茎木质部中含量最高,为40.57 mg·g^-1;大黄素甲醚在根茎木质部中含量最高,为17.24 mg·g^-1。结论:该方法快速、准确,操作简单,专属性强,可为虎杖的质量评价提供参考依据。

肾康注射液中化学成分的UPLC-Q-TOF-MS分析

目的建立肾康注射液中的化学成分的超高效液相色谱仪联用四级杆串联飞行时间质谱仪(UPLC-Q-TOF-MS)分析方法。方法采用Waters Acquity HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液–乙腈,梯度洗脱;体积流量为0.4 m L/min;柱温为40.0℃;进样量为2.00μL。质谱检测采用正、负离子模式,电压分别为3.0、2.9k V;离子源温度120℃;脱溶剂气体温度450℃;脱溶剂气体体积流量900 L/h。结果鉴定出了肾康注射液中10个化合物,分别为没食子酸、芦荟大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、丹参素、原儿茶醛、苯乙醛、芦荟大黄素、毛蕊异黄酮、云杉鞣酚-3'-O-葡萄糖苷、白藜芦醇-4'-O-葡萄糖苷、大黄素,并结合文献报道对其药材来源进行了归属。结论建立了一种简单、快速、高效的UPLC/Q-TOF-MS方法对肾康注射液中化学成分进行了鉴定,为阐明肾康注射液的物质基础提供了参考。