猕猴体内白蛋白融合干扰素α-2b(HSA-IFNα-2b)的药代动力学研究

目的研究白蛋白融合干扰素α-2b(HSA-IFNα-2b)在猕猴体内的药代动力学。方法按照50μg.kg-1iv、50μg.kg-1sc和300μg.kg-1sc3种剂量组给猕猴注射HSA-IFNα-2b,分别在14个时间点采血,用ELISA方法测定血药浓度,计算药代动力学参数。结果3组受试猕猴均能在336h以前的各时间点测到HSA-IFNα-2b药物。一房室模型(weight=1/C2)分析药物浓度-时间曲线显示:50μg.kg-1iv、50μg.kg-1sc和300μg.kg-1sc3个剂量组的分布容积分别为67、71和63ml.kg-1。HSA-IFNα-2b皮下注射吸收相对缓慢,单剂量50μg.kg-1sc的吸收半衰期约为19h,消除半衰期为53h,清除率为0.92ml.h-1.kg-1,生物利用度达73%。结论HSA-IFNα-2b猕猴体内研究表明其药代动力学优于非融合干扰素,提示使用HSA-IFNα-2b可以减少用药次数,并有可能提高疗效。

白蛋白融合干扰素α-2b在猕猴体内的免疫原性研究

研究白蛋白融合干扰素α-2b(Woferon)对猕猴的免疫源性,从而为药物安全性评价提供数据支持。实验方法为猕猴皮下注射白蛋白融合干扰素α-2b,每周一次,连续5次,在不同时间点采取血样,用ELISA方法检测血样中抗白蛋白融合干扰素α-2b抗体的产生情况。结果(1)在给药剂量50、200和800μg/kg范围内,第15天有83%(15/18)的动物产生了抗Woferon抗体,66%(16/18)的动物产生了抗普通干扰素抗体,27%(5/18)的动物产生了抗人白蛋白抗体;第28天有94%(17/18)的动物产生了抗Woferon抗体和抗普通干扰素抗体,77%(14/18)的动物产生了抗人白蛋白抗体。(2)在试验剂量范围内,产生抗体的效价与给药剂量无显著相关性。(3)当抗体效价在1∶800以上时,产生的抗Woferon抗体可完全中和药物,使其失去抗病毒活性。

白蛋白融合干扰素α-2b猕猴长期毒性试验

用人血清白蛋白(HSA)对干扰素进行修饰,制成的新型白蛋白-干扰素融合蛋白(Albumin-Interferon fusion protein,A-IFN,Woferon),不仅保留了干扰素的生物学功能,而且使用时更加安全。为了确定Woferon的安全性,开展了猕猴皮下给药长期毒性试验,观察动物重复给药后的一般生活状态及心电图、血液学、血液生化和尿液等指标的变化。结果猕猴皮下注射高剂量(800μg/kg)白蛋白融合干扰素α-2b会引起可逆性白细胞(WBC)、血小板(PLT)下降和天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)的升高;猕猴对200μg/kg剂量有较好的耐受性;50μg/kg为无毒性反应剂量。TK研究表明:50μg/kg剂量,Cmax为(434.8±38.0)ng/ml,临床拟用剂量下血浆药物浓度为8ng/ml,安全倍数超过50倍。

重组细胞因子基因衍生蛋白与干扰素α-2b分别联合恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者疗效研究

目的观察比较应用重组细胞因子基因衍生蛋白或干扰素α-2b分别联合恩替卡韦治疗血清HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效.方法2019年3月~2021年3月我院诊治的65例血清HBeAg阳性的CHB患者被分成两组,分别给予干扰素α-2b联合恩替卡韦治疗或重组细胞因子基因衍生蛋白联合恩替卡韦治疗48 w.常规检测血清生化学、血清学和病毒学指标.结果在治疗12 w末,恩替卡韦联合重组细胞因子基因衍生蛋白治疗组血清HBeAg转阴率和HBeAg血清转换率分别为34.4%和25.0%,均显著高于恩替卡韦联合干扰素α-2b治疗组的9.1%和6.1%,差异有统计学意义(P<0.05);在治疗48 w末,恩替卡韦联合重组细胞因子基因衍生蛋白治疗组血清ALT复常率、血清HBeAg转阴率和HBeAg血清转换率分别为87.5%、62.5%和40.6%,均显著高于恩替卡韦联合干扰素α-2b治疗组的78.8%、30.3%和18.2%,差异有统计学意义(P<0.05);在治疗期间,联合干扰素治疗组乏力和发热头痛发生率分别为21.2%和84.9%,显著高于联合衍生蛋白治疗组的3.1%和3.1%(P<0.05),而两组中性粒细胞减少、血小板减少、食欲下降和低钙血症等不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论相比于干扰素α-2b联合恩替卡韦,应用重组细胞因子基因衍生蛋白联合恩替卡韦治疗血清HBeAg阳性的CHB患者能够获得更好的血清学转换率和较小的不良反应,值得进一步观察研究.

重组干扰素α-2b治疗小儿呼吸道合胞病毒毛细支气管炎对肺表面活性蛋白D和转化生长因子-β的影响

目的探讨重组干扰素α-2b治疗小儿呼吸道合胞病毒毛细支气管炎对肺表面活性蛋白D(SP-D)、转化生长因子-β(TGF-β)的影响。方法选取2019年3月至2020年10月于本院儿科就诊的174例呼吸道合胞病毒所致的毛细支气管炎患儿作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组与观察组,每组87例。对照组给予布地奈德混悬液联合孟鲁司特钠治疗,观察组在对照组基础上增加重组人干扰素α-2b治疗,比较两组临床疗效、临床症状消失时间及住院时间、实验室指标(SP-D、TGF-β)及不良反应发生率。结果观察组治疗总有效率为96.55%,高于对照组的88.51%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组喘憋消失时间、肺部湿啰音消失时间、咳嗽消失时间及住院时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组SP-D、TGF-β水平比较差异无统计学意义;治疗7 d后,两组SP-D水平低于治疗前,TGF-β水平高于治疗前,且观察组SP-D水平低于对照组,TGF-β水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义。结论重组干扰素α-2b治疗小儿呼吸道合胞病毒致毛细支气管炎疗效显著,有助于加快缓解患儿临床症状,降低SP-D水平,提高TGF-β水平,且安全性较高,值得临床推广应用。

伊马替尼联合重组人干扰素α-2b治疗加速期慢性髓性白血病患者的疗效及对血清MMP-2、SALL4 mRNA和AGP水平的影响

目的探讨伊马替尼联合重组人干扰素α-2b(IFNα-2b)治疗加速期慢性髓性白血病(CML)患者的疗效及对血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、婆罗双树样基因4(SALL4)mRNA和α1-酸性糖蛋白(AGP)水平的影响。方法招募2017年1月至2021年1月陕西省人民医院收治的加速期CML住院患者90例。采用随机数字表法将其分为观察组(采用伊马替尼联合IFNα-2b治疗,45例)和对照组(采用伊马替尼治疗,45例)。比较两组临床疗效和血清MMP-2、SALL4 mRNA和AGP水平以及不良反应发生情况。结果观察组治疗后获完全血液学缓解(CHR)的人数比例较对照组更高,整体疗效更优,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前血清白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E 2(PGE 2)、碱性磷酸酶(ALP)、MMP-2、SALL4 mRNA、AGP水平比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后IL-6、PGE 2、ALP、MMP-2、SALL4 mRNA、AGP水平均较治疗前显著降低(P<0.05),且观察组治疗后水平较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组血液学不良反应发生率高于对照组[22.22%(10/45)vs 6.67%(3/45);χ2=4.406,P=0.039],两组非血液学不良反应发生率比较差异无统计学意义[6.67%(3/45)vs 4.44%(2/45);χ2=0.000,P=1.000],总不良反应发生率比较差异有统计学意义[28.89%(13/45)vs 11.11%(5/45);χ2=4.444,P=0.035]。结论伊马替尼联合IFNα-2b较单用伊马替尼治疗加速期CML疗效更佳,可降低患者血清MMP-2、SALL4 mRNA和AGP水平,但可能会增加患者血液学不良反应的发生风险。

高危型HPV感染患者应用抗HPV生物蛋白敷料与重组人干扰素α-2b凝胶治疗的效果分析

目的:分析抗人类乳头状瘤病毒(HPV)生物蛋白敷料与重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)凝胶在治疗高危型HPV(hr-HPV)感染中的应用效果。方法:选取2020年5月至2021年11月于本院接受治疗的hr-HPV感染患者90例,采用随机数表法分为抗HPV组(45例)和rhIFNα-2b组(45例)。rhIFNα-2b组患者予以rhIFNα-2b凝胶治疗,抗HPV组患者给予抗HPV生物蛋白敷料治疗,两组患者均连续治疗3个疗程。观察两组患者接受治疗后的HPV清除效果,检测抗HPV组和rhIFNα-2b组患者治疗前、治疗3个疗程后体内炎症水平,统计抗HPV组和rhIFNα-2b组患者在用药期间出现瘙痒、灼热等症状的发生情况,并比较用药后3个月、6个月时抗HPV组和rhIFNα-2b组患者的临床疗效。结果:治疗3个疗程后,抗HPV组hr-HPV感染患者HPV清除的总有效率84.44%,高于rhIFNα-2b组的总有效率64.44%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗3个疗程后,抗HPV组hr-HPV感染患者肿瘤坏死因子(TNF-α)、转化生长因子(TGF-β1)、白细胞介素(IL-6)与rhIFNα-2b组相比均有所降低,干扰素(IFN-γ)水平与rhIFNα-2b组相比均有所升高,差异有统计学意义(P<0.05);用药期间,抗HPV组患者瘙痒、灼热等症状的发生率为4.44%,rhIFNα-2b组患者瘙痒、灼热等症状的发生率为6.67%,两组患者瘙痒、灼热等症状的发生率比较,差异无统计学意义(P=0.645);抗HPV组用药后3个月、6个月的总有效率均高于rhIFNα-2b组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抗HPV生物蛋白敷料对于治疗hr-HPV感染比rhIFNα-2b凝胶疗效更好,具有降低患者炎症介质水平的作用,安全性好。

白蛋白融合α-2b干扰素在毕赤酵母中的表达

α2b干扰素的重组表达质粒pPIC9KHSAIFNα2b经限制性内切酶SalI酶切线性化后电转化巴斯德毕赤酵母菌(P.Pastoris)SMD1168,将阳性转化子进行PCR鉴定和Mut表型鉴定并用甲醇诱导表达,WesternBlot结果表明白蛋白融合IFNα蛋白与IFNα抗体具有结合能力,Wish细胞VSV病毒系统鉴定表达蛋白具有抗病毒生物活性。在摇瓶培养条件下,甲醇在0.5%～4.0%的范围,随着浓度的升高蛋白表达量也升高,在其他因素固定时,菌体起始OD值在5～80的范围内,随着OD值的升高表达量反而下降。成功表达出具有高生物学活性的白蛋白融合干扰素蛋白(HSAIFNα2b),为进一步应用打下基础。

重组人血清白蛋白-干扰素α-2b 融合蛋白体外抗乙型肝炎病毒活性评价

目的检测重组人血清白蛋白-干扰素α-2b融合蛋白(HSA-IFNα-2b)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法构建含1.6倍HBV基因组及绿色荧光蛋白的重组腺病毒(AdGFP-HBV),感染人肝细胞系HepG2细胞,构建HBV复制细胞模型;ELISA法检测HBV乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg)表达;MTT法检测HSA-IFNα-2b对HepG2细胞的毒性作用;定量PCR法检测细胞内HBV RNA的相对表达以及细胞上清中HBV DNA绝对表达水平;双报告基因法检测HSA-IFNα-2b对HBV增强子Ⅰ活性的影响。结果 AdGFP-HBV感染HepG2细胞后可以复制表达HBV。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1加入AdGFP-HBV感染的HepG2细胞,使HBsAg表达降低51.32%(P<0.01),HBeAg降低50.26%(P<0.01),而相同浓度的HSA-IFNα-2b并不抑制细胞的增殖。随HSA-IFNα-2b浓度增加,其对HBsAg表达的抑制作用逐渐升高,HSA-IFNα-2b对HBsAg表达的抑制率(Y)与其浓度(X)的回归方程是Y=21.11 lgX+11.91(r2=0.954),IC50为63.76 kU·L-1。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使细胞中HBV RNA下降52.83%(P<0.01),培养上清中HBV DNA降低53.07%(P<0.01)。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使HBV增强子Ⅰ活性下降40.04%(P<0.01)。结论构建了可用于药物评价的HBV复制细胞模型,HSA-IFNα-2b体外具有抗HBV活性。

^125I-白蛋白融合干扰素α2b大鼠体内分布研究

采用氯胺-T法对白蛋白融合干扰素α2b进行125I标记,PD-10柱纯化,三氯醋酸沉淀法测定放化纯;体外以WISH/VSV系统比较白蛋白融合干扰素α2b和125I-白蛋白融合干扰素α2b的抗病毒活性;SD大鼠皮下注射125I-白蛋白融合干扰素α2b,分别于给药后0.5、2、6、24、48、90、180、300h放血处死,取血和相关脏器,称重并测定放射性,计算每克脏器放射性占注入量的百分率(%ID?g-1)。结果显示,氯胺-T法制备的125I-白蛋白融合干扰素α2b标记率为82.72%,放化纯95.53%,放射性比活度为0.26MBq/μg;抗病毒活性比较结果表明标记前后的生物学活性几乎无变化;皮下注射大鼠体内分布研究表明,125I-白蛋白融合干扰素α2b在血中于6h达高峰,消除缓慢,未见特异性组织或器官的浓聚。

不同剂量重组人干扰素α-2b治疗手足口病患儿的效果对比

目的:对比分析不同剂量重组人干扰素α-2b治疗手足口病患儿的效果。方法:选取2020年6月—2022年6月本院收治的138例手足口病患儿为对象,随机分为对照组、低剂量组、高剂量组,每组46例。对照组以利巴韦林为主的抗病毒治疗,低剂量组增加重组人干扰素α-2b注射液10万U/kg雾化吸入治疗,高剂量组增加重组人干扰素α-2b注射液20万U/kg雾化吸入治疗。连续治疗7d后评估患儿的临床疗效、炎症因子、免疫球蛋白水平、脑保护功能指标、治疗安全性等。结果:高剂量组总有效率高于低剂量组及对照组(P<0.05)。治疗后高剂量组炎症因子缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、核转录因子(NF-κB)、趋化因子12(CXCL12)水平均低于低剂量组及对照组(P<0.05)。治疗后高剂量组免疫球蛋白IgA、IgM、IgG水平均高于低剂量组及对照组(P<0.05)。治疗后高剂量组脑保护功能指标胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白2(MAP2)低于低剂量组及对照组(P<0.05)。三组患儿不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重组人干扰素α-2b雾化吸入治疗手足口病患儿的效果显著,且高剂量(20万U/kg)比低剂量(10万U/kg)重组人干扰素α-2b在降低炎症因子水平、提高机体免疫功能和改善患儿脑功能保护方面更具优势,可在临床上推广应用。

^99Tc^m-半乳糖基化人血清白蛋白融合干扰素α2b的制备和生物分布

用氯化亚锡(SnCl2)还原法制备99Tcm-半乳糖基化人血清白蛋白融合干扰素α2b(GHSA-IFNα2b),研究了SnCl2和GHSA-IFNα2b的用量以及溶液pH对99Tcm-GHSA-IFNα2b标记率的影响;ICR小鼠尾静脉注射99Tcm-GHSA-IFNα2b(0.286MBq/只,n=6),于5、10、15、30、60、120min取脏器和血,称重、计数,计算%ID(organ)-1和%ID·g-1;并对99Tcm-GHSA-IFNα2b的SD大鼠显像进行了研究。结果表明,在pH=3.0~4.5、GHSA-IFNα2b的用量≥0.3mg、SnCl2的用量为3~60μg时,37℃反应30min,可得标记率>90%的99Tcm-GHSA-IFNα2b,并在6h内保持基本稳定;肝脏组织中的99Tcm-GHSA-IFNα2b在注射后10min高达52.51%ID(organ)-1,能够被肝脏特异性摄取,主要通过胆道、肠道排泄;大鼠静脉注射15~30min时,即可获得清晰的肝显像。

^(125)I-白蛋白融合干扰素α2b大鼠体内排泄研究

为研究125I-白蛋白融合干扰素α2b大鼠体内排泄行为,利用氯胺-T法制备了125I-白蛋白融合干扰素α2b,其标记率为82.72%,放化纯度为95.53%,放射性比活度为0.26MBq/μg。体外WISH/VSV系统抗病毒活性比较分析表明,白蛋白融合干扰素α2b和125I-白蛋白融合干扰素α2b具有相近的抗病毒活性。SD大鼠皮下注射125I-白蛋白融合干扰素α2b后,0～6、6～12、12～24、24～48、48～96、96～192和192～300h7个不同时段的尿、粪的放射性分析结果表明,125I-白蛋白融合干扰素α2b主要通过肾脏排泄,部分可通过粪便排泄,300h时尿、粪中平均累积排泄率分别为80.10%和16.00%;0～1、1～2、2～4、4～6、6～12、12～24和24～30h7个不同时段的胆汁的放射性分析结果表明,125I-白蛋白融合干扰素α2b也可通过肝脏代谢后经胆汁排泄,但这不是它的主要排泄途径,30h时,胆汁中的平均累积排泄率仅为1.61%。

重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在PichiaPink系统中的表达

目的:比较PichiaPink表达系统和巴斯德毕赤酵母GS115在表达外源蛋白方面的差异,对PichiaPink表达系统的潜在优点进行评价。方法:以重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白(HSA-IFN-α2b)为报告蛋白,构建相关载体,分别转化PichiaPink系统菌株和巴斯德毕赤酵母GS115菌株,诱导HSA-IFN-α2b表达并测定表达水平;通过SDS-PAGE检测HSA-IFN-α2b在PichiaPink系统中的降解程度。结果:PichiaPink系统几乎所有的转化子都可以表达HSA-IFN-α2b,而GS115菌株只有60%的转化子能表达HSA-IFN-α2b;同一种Pink菌株中,整合有高拷贝数表达载体pPink-HC的菌株表达量高于整合有低拷贝数表达载体pPink-LC的菌株;Pink蛋白酶缺陷菌株在复杂培养基(YPD,BMMY)中HSA-IFN-α2b基本没有降解,而在合成培养基(BSM)中降解现象明显。结论:PichiaPink表达系统产生的转化子较GS115菌株产生的转化子易于筛选;PichiaPink系统蛋白酶缺陷菌株可明显减少外源蛋白降解。这些结果为利用PichiaPink表达系统高水平和大规模制备外源蛋白提供了实验依据。

重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白的稳定性研究

研究重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白(rHSA-IFNα-2b)的稳定性。以抗病毒活性和纯度为主要检测指标,考察rHSA-IFNα-2b的热稳定性,酸碱稳定性以及冻融耐受性。rHSA-IFNα-2b在37℃、55℃下放置5h后生物学活性无明显降低,60℃水浴1h即可见活性降低了约40%;pH值(分别为2、3、9)改变时,生物学活性未发生明显变化;rHSA-IFNα-2b反复冻融后聚合体逐渐增加,冻融4次后聚合体含量达到17.91%,但生物学活性无明显降低。重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白对热、酸碱变化稳定,但不宜冻融。

层析法去除重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白的内毒素

用柱层析方法在生产重组人血清白蛋白干扰素a2b融合蛋白过程中去除产品中的内毒素。所用柱层析组合为Blue-sepharose亲和柱层析、SOURCE 15 ISO疏水柱层析、Q Sepharose F.F.离子交换柱层析、Sephadex G25 Coarse凝胶过滤柱。采用鲎试剂法检测柱层析各阶段得到蛋白中的内毒素含量;并用RP-HPLC方法测定柱层析各阶段得到蛋白的纯度与浓度,求出每毫克蛋白的内毒素含量。结果为每步柱层析过程式均有去除内毒素的作用,最终所得蛋白的内毒素含量降为1 EU/mg,去除率达到99.9%。因而生产重组人血清白蛋白干扰素a2b融合蛋白所用分离纯化柱层析技术在纯化蛋白的同时能有效的去除产品中内毒素,所得产品内毒素的含量远低于药典对注射剂的内毒素含量要求。

人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白在毕赤酵母中表达及质量控制

筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白。经摇瓶及5 L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件。经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L。离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过Blue Sepharose 6FF亲和层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析及Q Sepharose 6FF离子柱纯化。纯化产品进行SDS-PAGE纯度检测、SEC-HPLC检测、相对分子质量测定、N端测序、内毒素检测和生物活性检测。筛选获得一株高产菌,优化获得最佳的发酵条件。纯化产品检测(SEC-HPLC)纯度大于95%,相对分子质量为85 821,氨基酸的N端测序为DAHKSEVAHRFKDLG,与预期的相符。内毒素含量小于5EU/mg,符合国家药典的要求。体外生物细胞活性高达1.6×106IU/mg。具有良好的工业应用价值。

人干扰素α2b和IgGFc片段融合蛋白显著延长体内半衰期

重组人干扰素a(rHuIFNa)已被广泛用于临床治疗多种人类病毒性疾病和肿瘤。但IFNa在体内半衰期较短从而导致IFNa在用药后数小时即从血浆中被清除。目前常用化学修饰和构建融合蛋白的方法来延长IFNa的半衰期。在本研究中,构建了IFNa2b与人IgG免疫球蛋白Fc片段的融合基因(IFNa2b-Fcγ)并在毕赤酵母中以二聚体形式分泌表达,并有部分糖基化。不同亚型Fcγ片段的融合蛋白对IFNa2b抗病毒活性均有一定影响。其中IFNa2b-Fcγ2所受影响最小,较单纯的IFNa2b降低了2.3倍,抗病毒活性可达4.29x10^7 IU/mg,大鼠皮下注射后循环血液中半衰期达65 h,血液中存留时间120 h以上,比商品重组干扰素的体内半衰期延长约8倍,血液存留时间延长10倍,显示了其良好的临床应用前景。

天花粉蛋白和重组干扰素α-2b联合应用对消化道癌细胞的协同杀伤作用

天花粉蛋白和重组干扰素α┐２ｂ联合应用对消化道癌细胞的协同杀伤作用胡梅洁张曙章永平乔敏敏付华吴裕火斤关键词天花粉蛋白重组干扰素α┐２ｂ消化道肿瘤协同作用作者单位：上海第二医科大学附属瑞金医院消化科（上海２０００２５）消化道癌症占各类恶性肿瘤发病之前列...

重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性评价方法研究

为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在DF1细胞上抑制水疱性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖活性;采用MTS法分别测定重组融合蛋白促鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾淋巴细胞增殖活性。结果表明,重组融合蛋白可以与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应;重组融合蛋白在DF1细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV活性高于抗IBDV活性,且均明显高于rChIFN-α蛋白对照;不同浓度的重组融合蛋白均具有明显的促鸡PBLC和脾淋巴细胞增殖活性,且其促增殖活性明显高于rChIFN-α蛋白对照。本研究成功建立了重组融合蛋白体外活性检测评价方法,为进一步探究重组融合蛋白在鸡体内协同作用奠定基础。