微小RNA-497通过靶向调控B细胞淋巴瘤／白血病-2基因对胃癌细胞增殖及凋亡的作用及机制

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-497靶向调控B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）基因对胃癌细胞增殖及凋亡的调控作用。方法选取胃癌组织及相应癌旁组织，分别采用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot检测组织中miR-497及bcl-2蛋白表达；选取胃癌细胞株SGC-7901，分别转染miR-497模拟物及对照寡核苷酸，采用RT-PCR检测细胞中miR-497表达，采用Westernblot检测bcl·2蛋白表达，采用噻唑蓝（MTr）法检测细胞增殖，采用流式细胞仪检测细胞凋亡；分别将野生型bcl-2 3’端非编码区域（3’-UTR）质粒（bcl-2-wt）和突变型bcl-2 3’．UTR质粒（bcl-2-Mut）与miR-497模拟物或对照寡核苷酸共转染至胃癌细胞株SGC-7901，采用双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。结果（1）与癌旁组织比较，胃癌组织中miR-497表达明显降低（4．5±1．6比21．5±4．3，P〈0．05），bcl-2蛋白表达明显增高（389．0±61．2比75．5±27．1，P〈0．05）。（2）与转染对照寡核苷酸比较，转染miR-497模拟物可使胃癌细胞SGC．7901中miR497表达增高（15．7-4-2．3比3．84-1_1，P〈0．05），bcl-2蛋白表达降低（58．3±15．2比257．4±41．6，P〈0．05）。（3）与转染对照寡核苷酸比较，转染miR497模拟物可使胃癌细胞SGC-7901增殖活性显著降低（P〈0．05）。（4）与转染对照寡核苷酸比较，转染miR-497模拟物可使胃癌细胞SGC-7901总凋亡比例显著增高（P〈0．05）。（5）与转染对照寡核苷酸比较，共转染miR-497模拟物与bcl-2-wt可使胃癌细胞SGC-7901荧光素酶活性降低（0．39±0．09比0．98±0．11，P〈0．05），而共转染miR-497模拟物与bcl-2-Mut则胃癌细胞SGC-7901荧光素酶活性无显著变化（1．11±0．15比0．97±0．12，P〉0．05）。结论miR-497可通过靶向bcl-2抑制胃癌细胞增殖、同时促进细胞凋亡。

缺氧诱导因子-1α基因沉默逆转卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药性的机制

目的:观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)沉默后人卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3/DDP的HIF-1α、多药耐药基因1(MDR1)和B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)mRNA及蛋白产物的表达,探讨HIF-1α逆转SKOV3/DDP耐药性的机制。方法:体外培养卵巢癌细胞株SKOV3(敏感组)及其顺铂耐药株SKOV3/DDP(耐药组),部分耐药株转染HIF-1α干扰质粒pshRNA-HIF(转染组)及对照质粒pshRNA-Control(对照组)。RT-PCR法检测各组细胞HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量;Western blotting和免疫组织化学法测定HIF-1α、P-gp(MDR1基因编码蛋白)和Bcl-2蛋白的表达量。结果:RT-PCR检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2mRNA表达量明显低于耐药组(P<0.05)。Western blotting检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05);免疫组织化学法,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05);MDR1、Bcl-2mRNA及蛋白在敏感组与转染组的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。HIF-1α表达与MDR1、Bcl-2mRNA表达量均呈正相关关系(r=0.908,P=0;r=0.916,P=0);HIF-1α表达与P-gp、Bcl-2蛋白表达呈正相关关系(r=0.773,P=0.003;r=0.862,P=0)。结论:HIF-1α沉默逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药株SOV3/DDP耐药性可能与MDR1和Bcl-2表达降低有关联。