靶向CD74的嵌合抗原受体T细胞的抗白血病细胞作用研究

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)疗法目前已应用于血液肿瘤的治疗,前期研究发现CD74在白血病患者白血病干细胞中高表达,为了探索其对白血病细胞的杀伤作用,通过CD74 CAR表达载体的构建、慢病毒载体的包装及T细胞的感染,制备CD74 CAR-T细胞。利用体外杀伤实验及细胞因子的释放检测确定CAR-T细胞对CD74^(+)的白血病细胞的特异性杀伤作用。结果显示,CD74 CAR-T分别与CD74^(+)的THP-1及CD74^(-)的K562白血病细胞共培养时,THP-1细胞可被清除,而对CD74^(-)的K562细胞无明显杀伤作用。CD74 CAR-T细胞可被CD74^(+)的THP-1细胞有效激活,通过细胞因子释放途径有效杀伤白血病细胞。研究成功构建了靶向CD74^(+)的白血病细胞的CAR-T细胞,为白血病的免疫治疗提供了新的靶点和免疫治疗策略。

初诊t(8;21)急性髓系白血病中白血病干细胞相关抗原的表达特征及预后意义

目的研究白血病干细胞(LSC)相关抗原CD34、CD38、CD123、CD96和TIM-3在t(8;21)急性髓系白血病(AML)中的表达及预后意义.方法采集2015年10月至2018年4月北京大学人民医院收治的47例初诊t(8;21)AML患者的骨髓标本,采用流式细胞术检测LSC相关膜表面抗原CD34、CD38、CD123、CD96和TIM-3的表达,分析其与复发的关系.结果47例t(8;21)AML患者中,CD34^+CD38^-、CD34^+CD38^-CD123^+、CD34^+CD38^-CD96^+、CD34^+CD38^-TIM-3^+细胞在有核细胞中比例的中位数分别为2.37%、0.24%、0.27%、0.06%;CD34^+CD38^-、CD34^+CD38^-CD123^+、CD34^+CD38^-CD96^+和CD34^+CD38^-TIM-3^+细胞比例与诱导治疗1个疗程缓解率无明显相关性(P值均>0.05);CD34^+CD38^-、CD34^+CD38^-CD123^+和CD34^+CD38^-CD96^+细胞比例高的患者较比例低的患者具有更高的2年累积复发(CIR)率(P值分别为0.049、0.030、0.045),而CD34^+CD38^-TIM-3^+细胞的比例对CIR无明显影响(P>0.05);CD34^+CD38^-细胞比例及微小残留病(MRD)水平是影响患者CIR的独立预后因素(HR=6.9,95%CI 1.3~37.4,P=0.025;HR=11.1,95%CI 1.2~99.2,P=0.031).结论不同的LSC相关抗原在t(8;21)AML中的预后意义不同,初诊骨髓有核细胞中高比例的CD34^+CD38^-以及CD34^+CD38^-CD123^+和CD34^+CD38^-CD96^+细胞可能与t(8;21)AML患者的复发有关.

MMSA-8、MMSA-1在急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中的水平及临床意义

目的:分析多发性骨髓瘤相关抗原(MMSA)-8、MMSA-1在急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中的水平及MMSA-8、MMSA-1在急性髓系白血病中的临床意义。方法:选取2021年1月~2022年12月苏州大学附属第一医院收治的急性髓系白血病30例患者为观察组,再选择同期被诊断为单纯缺铁性贫血的患者25例为对照组,比较两组MMSA-8和MMSA-1 mRNA的水平差异。对观察组患者进行随访1年,分析急性髓系白血病患者1年生存情况,根据随访预后疗效将其分为良好组(n=25)和不良组(n=5)。比较不同预后急性髓系白血病患者MMSA-8和MMSA-1 mRNA的水平差异。运用受试者工作特征(ROC)曲线分析MMSA-8和MMSA-1 mRNA水平预测急性髓系白血病的效能。结果:观察组MMSA-8、MMSA-1 mRNA水平明显高于对照组(P<0.05)。30例急性髓系白血病患者术后均随访1年,预后良好25例,预后不良5例,良好率为83.33%(25/30)。不良组的MMSA-8、MMSA-1 mRNA水平明显高于良好组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,MMSA-8、MMSA-1 mRNA水平与急性髓系白血病患者的曲线下面积为0.880、0.840,95%CI为0.709~0.969、0.661~0.948,预测效能较好。结论:MMSA-8和MMSA-1 mRNA的水平在急性髓系白血病中呈高水平表达,在预测急性髓系白血病的效能较好,临床可借助该两项指标预测急性髓系白血病的病程以及预后。

急性白血病分型与红细胞ABO血型抗原强度相关性分析

急性白血病红细胞ABO血型抗原减弱国内外已陆续有个案报道,但急性白血病分型与红细胞ABO血型抗原减弱之间的相关性研究,至今国内未见有报道。本文报道2例,并复习国内近18年文献报道42例,现分析如下。1 临床资料1.1 本文病例1,患者女,46岁,全身皮肤散在出血点5月,低热1月于1997年12月4日入院。体检:贫血貌,全身皮肤散在出血点,全身浅表淋巴结及肝脾肋下未触及。外周血:Hb90g/L,RBC 3.0×10^(12)/L,WBC 60.4×10~9/L,幼稚细胞0.8,PLT10×10~9/L,骨髓涂片示增生极度活跃,原始细胞(Ⅰ+Ⅱ)65.5％,早幼粒细胞3％,确诊为急性非淋巴细胞白血病(ANLL)M2a型。

难治复发急性白血病患者造血干细胞移植后感染相关死亡的分析

目的探讨难治复发急性白血病患者接受异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后感染相关死亡（IRM）的特点。方法回顾分析127例接受allo—HSCT的难治复发急性白血病患者的临床资料，统计感染相关死亡情况并分析危险因素。结果观察期内67例死亡。5年总生存率为（35．2±5．3）％，无病生存率为（30．8±5．6）％。28．3％（36／127）患者发生感染相关死亡。Ⅱ～Ⅳ。aGVHD（P=0．049，OR=3．017）和移植后IFI（P=0．032，OR=3．223）是IRM的独立危险因素。结论感染作为移植相关死亡的主要原因，相对于标危患者，在难治复发患者中占更高的比例。更多的关注严重GVHD后感染的预防和治疗力度是目前减少IRM的主要措施。

白血病干细胞表面分子标志物及分化抗原高表达与难治性急性白血病

白血病是一类起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病,越来越多的研究证明,白血病干细胞(LSC)是白血病复发的根源,其具有与正常造血干细胞类似的无限增殖和自我更新能力,且LSC处于静止期,能逃逸化学药物的治疗作用,从而导致白血病复发和难治。其中,白血病复发及其难治与LSC表面分子标志物及分化抗原表达密切相关。因此,以LSC特异性表面抗原或分子标志物为靶点,寻找和发现治疗白血病的生物靶向药物已成为可能治愈白血病研究的重点。

Survivin、细胞周期素依赖激酶4、细胞增殖相关抗原在急性白血病患儿中表达的意义

目的探讨Survivin、细胞周期素依赖激酶4(Cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、细胞增殖相关抗原(Ki-67)在儿童急性白血病(AL)中的表达及其相关性,同时观察其与AL临床分型和预后的关系。方法应用免疫组织化学链霉素亲和素-生物素-过氧化酶复合物(SABC)方法检测37例AL患儿骨髓细胞Survivin、CDK4、Ki-67表达,对照组10例为非恶性血液病且骨髓正常的儿童。结果37例AL患儿中,Survivin表达阳性率为45.9%,CDK4表达阳性率为56.8%,Ki-67表达阳性率为40.5%,均显著高于正常骨髓组织(P均<0.05);Survivin与CDK4表达呈强相关(P=0.007),Survivin与Ki-67表达呈强相关(P=0.008)。结论Survivin、CDK4、Ki-67在AL患儿中均过度表达,共同参与AL患儿白血病细胞凋亡和增殖的调控过程。联合检测Survivin、CDK4、Ki-67有助于AL的诊断、预后及疗效判断。

淋巴细胞功能相关抗原-3(CD58)在儿童期急性B淋巴细胞白血病近期疗效判断中的应用

本研究评估CD58在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)近期疗效判断中的价值。应用四色流式细胞分析技术观察135例儿童期B-ALL患者CD58分子的表达特点;建立用CD58/CD10/CD34/CD19抗体组合检测B-ALLMRD的方案;结合CD58的表达情况和MRD监测结果分析CD58在B-ALL中的预后价值。结果表明135例B-ALL的平均CD58MFI为113.08±63.33,15例正常骨髓的CD19+CD10+细胞的平均CD58MFI为14.68±5.26,两者差异显著(P<0.01);51.9%(70/135)B-ALL患者的CD58分子强表达,可以用CD58为指标进行MRD检测;CD58/CD10/CD34/CD19抗体组合的有效频率仅次于TdT/CD10/CD34/CD19,为51.9%;CD58高表达组的MRD阳性率显著低于CD58低表达组(P<0.05)。结论CD58可以作为B-ALLMRD检测的指标,此结果丰富了MRD检测的组合;CD58的高表达可以作为B-ALL预后较好的指标。

髓系抗原表达对急性淋巴细胞白血病患者异基因造血干细胞移植后造血重建及疾病预后的影响

本研究旨在观察髓系抗原表达对急性淋巴细胞白血病异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后造血重建及疾病预后的影响。回顾性分析西安交通大学医学院第一附属医院血液科2008年1月至2014年4月期间20例行allo-HSCT的急性淋巴细胞白血病患者的临床资料,其中5例伴有髓系抗原表达(My+ALL),15例不伴髓系抗原表达(My-ALL)。观察My+ALL与My-ALL患者allo-HSCT后造血重建及疾病预后的差异。结果表明,My+ALL患者allo-HSCT后血小板植入不良较My-ALL患者多见。My+ALL患者中3例出现皮肤慢性移植物抗宿主病(cGVHD)(其中2例局限型,1例皮肤广泛型);My-ALL患者中3例出现急性移植物抗宿主病(aGVHD),其中2例为Ⅰ度,1例为Ⅱ度;5例出现cGVHD,其中3例局限型,2例广泛型。两组患者1年及2年总生存率分别为80%和85.7%,53%和69.8%,1年及2年疾病无进展生存率分别为53.3%和54.7%,26%和27.4%,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论髓系抗原表达可能对ALL患者异基因造血干细胞移植后血小板植入有不良影响。My+ALL与My-ALL患者移植后1年及2年总生存率及无病生存率间差异无统计学意义。

诱导特异性细胞毒T淋巴细胞的白血病相关抗原研究进展

利用白血病细胞相关抗原可诱导抗白血病细胞特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),主要是白血病细胞超表达抗原、融合蛋白、次要组织相容性抗原、突变基因产物、分化抗原和独特型抗原等6类抗原具有该作用。

凋亡相关抗原7A_6在急性粒细胞白血病中表达的意义

为了研究凋亡相关抗原７Ａ６在急性粒细胞白血病化疗前和化疗过程中的表达，探讨其表达率与疗效的关系，应用流式细胞仪和单克隆抗体２．７Ａ６Ａ３，测定２８例病人化疗前及化疗中７２ｈ后抗原７Ａ６的表达率，比较表达率与疗效的关系。同时以１０例正常人作为对照。结果显示病人化疗前抗原７Ａ６表达率与对照组无差别，化疗７２ｈ后抗原７Ａ６表达明显增高，表达率与疗效成正相关。结果表明：测定凋亡相关抗原７Ａ６表达率可预测急性粒细胞白血病疗效。

伴髓系相关抗原表达的急性淋巴细胞性白血病的研究

目的:探讨伴髓系抗原表达的急性淋巴细胞白血病(My+-ALL)的免疫学特点及临床特征。方法:采用间接免疫荧光法检测81例急性淋巴细胞白血病(ALL)的免疫表型。结果:81例ALL中有11例除表达淋系抗原外尚表达有髓系抗原(13．6％),其中CD 33阳性最常见(阳性率8．6％)。T-ALL和B-ALL髓系抗原表达差异无显著性,ALL各亚型间其阳性率无统计学意义(P>0．05)。CD 34抗原表达阳性率为45．5％(5／11例),均为B- ALL,在T-ALL未见1例。My+-ALL与My--ALL组在性别、年龄、外周血白细胞计数、肝睥淋巴结肿大等相比无统计学意义(P>0．05)。结论:免疫表型分析对急淋白血病伴有髓系表达的诊断不可缺少;CD 34表达与ALL亚型有关。

1例急性髓系细胞白血病患儿在嵌合抗原受体T细胞治疗后出现皮肤软组织损伤合并感染的护理

报告1例复发急性髓系细胞白血病患儿在嵌合抗原受体T细胞治疗后出现皮肤软组织损伤合并感染的多学科联合的护理管理方案,包括脓肿切开、高负压引流瓶负压引流、造口康复、营养、疼痛及心理管理等。经治疗后,患儿的临床症状得到改善,伤口愈合好,未出现引流管周围皮肤刺激性皮炎、造口瘘、肉芽肿形成及全身中毒等并发症。

个体化护理理念对白血病患者抗原处理相关转运因子的影响分析

目的:探究个体化护理理念对白血病患者抗原处理相关转运因子(TAP)的影响。方法:回顾性分析2021年1月—2022年3月南阳医学高等专科学校第一附属医院血液科收治的128例白血病患者的临床资料,采用随机数表法将患者分为对照组和观察组,每组各64例。对照组给予常规护理,观察组给予个体化护理理念干预。对比分析两组患者的护理效果。结果:干预后,观察组患者各项负面情绪评分显著低于对照组,差异有统计学意义(t=26.062、12.466、29.538,P<0.05);各项血清免疫球蛋白水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(t=32.161、5.380、6.642,P<0.05);各项TAP水平显著高于对照组,差异有统计学意义(t=6.798、10.356,P<0.05);各项炎症水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(t=29.482、14.492、19.558,P<0.05)。观察组患者并发症发生率(3.13%)显著低于对照组(17.19%),差异有统计学意义(χ^(2)=6.935,P<0.05)。结论:白血病患者采用个体化护理理念干预,可有效改善负面情绪,增强免疫功能,提高抗原处理相关TAP水平,减轻炎症反应,减少并发症发生率,改善预后结局。

免疫斑点法检测脑脊液中白血病细胞相关脱落抗原CD_9方法建立及应用

在双夹心ＣＥＬＩＳＡ检测脑脊液白血病细胞相关脱落抗原ＣＤ９基础上，建立了更为简便快速的免疫斑点法（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。检测１６例初诊ＣＤ９阳性白血病患儿脑脊液，５例阳性，并且随着鞘注化疗，ＣＤ９滴度逐渐下降。初步研究结束表明：脑脊液ＣＤ９含量检测有助于鞘注化疗疗效监测。

负载MAGE-A3抗原的树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞共培养对子宫内膜癌肿瘤干细胞及恶性进展的影响

目的:探究负载黑色素瘤相关抗原基因A3(MAGE-A3)的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)对子宫内膜癌肿瘤干细胞及恶性进展的影响。方法:采集人外周血分离单个核细胞,利用细胞因子分别诱导生成DC和CIK;MAGE-A3孵育DC后与CIK共培养,流式细胞仪检测DC-CIK、MAGE-A3-DC-CIK的表型;流式细胞仪分选子宫内膜癌细胞系Ishikawa的CD133^(+)干细胞,以子宫内膜癌干细胞作为靶细胞,分别以CIK、DC-CIK及MAGE-A3-DC-CIK作为效应细胞,MTT法检测效靶比为10∶1、20∶1、40∶1的细胞杀伤活性,ELISA法检测联合培养细胞上清液中IFN-γ、IL-2、IL-12、IL-17水平,Annexin V-FITC/PI双染法检测子宫内膜癌干细胞凋亡;建立子宫内膜癌干细胞移植瘤裸鼠模型,尾静脉注射DC-CIK或MAGE-A3-DC-CIK,观察裸鼠肿瘤生长情况,每隔2 d测量瘤体大小,21 d后取肿瘤组织,电子天平称重,HE染色观察肿瘤组织病理形态学变化,免疫组织化学染色检测肿瘤组织内Ki-67表达。结果:分离获得细胞表面CD80、CD86、HLA-DR表达分别达到88%、86%和90%的DC;MAGE-A3-DC-CIK组细胞表面CD8^(+)CD3^(+)、CD56^(+)CD3^(+)比例均高于DC-CIK组(P<0.01);经磁珠分选后获得CD133^(+)细胞比例高达90.23%的子宫内膜癌干细胞;与CIK组和DC-CIK组比较,MAGE-A3-DC-CIK组在不同效靶比下对子宫内膜癌干细胞的杀伤能力升高,细胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-12及IL-17的分泌水平升高,培养液上清处理的子宫内膜癌干细胞凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01);同时,与对照组和DC-CIK组比较,MAGE-A3-DC-CIK组移植瘤裸鼠的肿瘤体积小,肿瘤重量轻,肿瘤组织内细胞稀疏,Ki-67阳性细胞率减小,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:负载MAGE-A3的DC与CIK联合培养能促进CIK成熟,提高对子宫内膜癌干细胞的杀伤性,并抑制移植瘤裸鼠的恶性进展。

急性粒细胞性白血病相关抗原的研究

提要 我们应用梯度离心、低渗氯化钠,超高速离心和超声波粉碎等处理提取了12份经临床及骨髓涂片确诊为急性粒细胞性白血病病人的白血病相关抗原。经紫外分光光度计扫描检查,9份均在257—252nm间出现最高吸收峰。同时用正常人白细胞按同法制备白细胞抗原。

白血病肿瘤相关抗原特异性细胞毒T细胞的体外扩增及杀伤功能的实验研究

目的:探索体外扩增白血病肿瘤相关抗原特异性细胞毒T细胞(tumor-associated antigen-specific cytotoxic T lymphocytes,TAA-CTL)的可行性,并验证其特异性杀伤作用。方法:采用密度梯度离心法分离出健康志愿者外周血单个核细胞,诱导培养树突状细胞(dendritic cells,DC)并负载白血病相关抗原WT1、PRAME、NY-ESO-1混合多肽,然后与自体T淋巴细胞共培育,扩增出TAA-CTL。用流式细胞术检测TAA-CTL表型及多种细胞因子的分泌率,细胞毒实验检测TAA-CTL对负载肿瘤相关抗原的自体靶细胞的杀伤力。结果:1体外诱导培养的TAACTL扩增倍数为3.81±1.61;流式细胞术检测其中CD3+细胞平均为(97.22±0.71)%,CD3+CD4+占(41.47±27.08)%,CD3+CD8+占(56.40±11.15)%,CD3-CD56+占(0.50±0.31)%,CD19+仅占(0.14±0.20)%,与对照组细胞表型分析比较差异无统计学意义(P>0.05)。2流式细胞术检测经抗原刺激后TAA-CTL分泌的胞内细胞因子,CD8+TAA-CTL分泌的IFN-γ和TNF-α水平分别为(27.67±2.21)%和(34.2±0.71)%,CD4+TAA-CTL分泌的IFN-γ和TNF-α分别为(21.6±2.55)%和(9.97±3.44)%;对照组CD8+CTL分泌的IFN-γ和TNF-α水平分别为(1.36±0.04)%和(5.58±0.03)%,CD4+CTL分泌的IFN-γ和TNF-α分别为(0.91±0.06)%和(1.60±0.07)%,均明显低于TAA-CTL组,其差异有统计学意义(P<0.01)。TAA-CTL在效靶比为5∶1、10∶1、20∶1和40∶1时对负载TAA的自体靶细胞的杀伤率分别为(26.85±5.25)%、(60.55±2.45)%、(67.4±3.60)%和(77.00±1.00)%,对未负载TAA的自体靶细胞未见明显杀伤作用(P<0.05)。结论:来源于健康志愿者的外周血单个核细胞体外可以成功诱导扩增出TAA-CTL并具有特异性杀伤功能。

急性淋巴细胞白血病与人类白细胞抗原相关性研究进展

急性淋巴细胞白血病(ALL)是一种常见的血液疾病,成人ALL的预后较差。ALL的发病机制尚不完全清楚,分析是由遗传、物理、化学和生物等多因素共同作用的结果,其中人类白细胞抗原(HLA)是其重要的遗传因素。国内外研究发现许多HLA基因是ALL的易感基因或保护基因,且一些HLA分子与ALL的诊断、治疗及预后关系密切。本文主要对近5年的HLA与ALL的相关性研究进行综述,为ALL的临床治疗等研究提供重要参考依据。

急性白血病细胞CD34的表达与系列相关性抗原表达关系的初步分析

目的探讨CD34在急性白血病细胞的表达,比较CD34与其他系列相关性抗原的关系。方法采用三色流式细胞术对41例急性髓性白血病(acutemyeloidleukemia,AML)和15例急性前体B细胞性淋巴细胞白血病(precursorb-acutelymphoblasticleukemia,PreB-ALL)患者进行表面抗原分析,确定各抗原的表达情况,比较CD34阳性与CD34阴性时,CD34与CD13,MPO,CD10和HLA-DR的共同表达情况。结果CD34在AML和ALL中的抗原表达阳性率分别为70.7%和53.3%。在AML中,51.5%的患者表现为CD34/CD13阳性,61.5%的患者表现为CD34/MPO阳性,50.3%的患者表现为CD34/HLA-DR阳性。仅有10.7%的AML患者表现为CD34/CD10阳性。结论与PreB-ALL相比,CD34在AML中表达阳性率更高,CD34结合CD13,MPO或者HLA-DR可以显示大多数AML细胞特征。对于急性髓性白血病,以CD34设门来选择AML细胞群,有助于诊断预后的评估以及AML微小残留病的检测。