TAT介导的白血病抑制因子受体α亚基胞内区远膜端融合蛋白的制备及其对HL-60细胞生长的抑制作用

目的：克隆表达HIV-1反式激活蛋白TAT与白血病抑制因子（LIF）受体α亚基胞内区C末端序列（LIFRα-CT3）的融合蛋白（TAT-CT3）,并检测其对HL-60细胞增殖的抑制作用.方法：重组构建TAT-CT3和SUMO融合表达质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导SUMO-TAT-CT3融合蛋白表达.表达产物经亲和层析柱纯化、去除SUMO蛋白标签后获得TAT-CT3融合蛋白,免疫印迹鉴定.采用CCK-8法检测HL-60细胞的抑制率.结果：构建了高表达重组子pET28a-SUMO-TAT-CT3,获得了相对分子质量约为26 kD的TAT-CT3融合蛋白.经活性检测,TAT-CT3融合蛋白能有效抑制HL-60细胞的生长.结论：成功地克隆、表达、纯化TAT-CT3融合蛋白,该融合蛋白具有生物活性,可抑制HL-60细胞的增殖.

白血病抑制因子受体在宫颈癌肺转移过程中的作用及其机制

目的探讨白血病抑制因子受体(LIFR)在宫颈癌肺转移中的作用以及Hippo-YAP信号通路在其中的作用。方法 (1)采用实时荧光定量PCR法检测50例宫颈癌肺转移患者原发灶癌组织、癌旁组织及转移灶癌组织LIFR mRNA表达。(2)用包含LIFR的重组慢病毒质粒及其阴性对照空载体质粒vector转染人宫颈癌Si Ha细胞,2.0μg/mL嘌呤霉素筛选,得到稳定过表达LIFR的宫颈癌细胞(观察组)和对照细胞(对照组)。采用Western blotting法检测两组LIFR及Hippo-YAP信号通路相关蛋白YAP、P-YAP、TAZ、p-TAZ。将两组细胞经尾静脉注射到BALB/c裸鼠体内,4周后处死裸鼠,取出肺组织,HE染色,镜下计数肺组织中所有转移灶个数。结果 (1)LIFR mRNA相对表达量:原发灶癌组织高于癌旁组织,转移灶癌组织低于原发灶癌组织和癌旁组织(P均<0.05)。(2)观察组过表达LIFR的Si Ha细胞LIFR、p-YAP、p-TAZ蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.05),YAP、TAZ蛋白表达量与对照组比较P均>0.05。注射过表达LIFR的Si Ha细胞及对照细胞的裸鼠肺转移灶个数分别为(9±2)、(60±5)个,P<0.05。结论过表达LIFR可促进Hippo-YAP信号通路蛋白YAP、TAZ磷酸化,进而抑制宫颈癌肺转移灶的形成。

白血病抑制因子受体细胞内区对HL-60细胞表达CD14和CD15的影响

观察白血病抑制因子 (LIF)受体gp190亚基完整的细胞内区和gp190胞内区C末端片段(190CT)对人白血病系HL 6 0表达CD14、CD15的影响 ,进一步了解LIF引发白血病细胞增殖抑制和分化的关系 .用基因重组技术将LIF另一亚基gp130的细胞内区换成gp190的细胞内区 ,用PCR技术扩增gp190细胞内区C末端的一个多肽的编码序列 ,构成嵌合体受体基因 130 /190及 190CT片段 ,并分别在HL 6 0细胞表达 .用免疫组化和流式细胞术检测分析在LIF的诱导下 ,HL 6 0细胞表达CD14、CD15的水平 .转染pcDNA130 /190的HL 6 0细胞 ,CD15表达量明显增高 ;转染pcDNA190CT的细胞 ,CD15的表达量降低 ;但 2组细胞的CD14表达量均较低且水平接近 .LIF可能诱导HL 6 0细胞向粒细胞而不向单核细胞分化 ,该效应是由gp190亚基细胞内区介导的 ,而gp190C末端片段可干扰LIFα受体介导的信号传导效应 .

白血病抑制因子受体gp190细胞内区与HL-60细胞内Cdc25B激活的关系

目的 :观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基完整的细胞内区和 gp190胞内区 C末端片段在人白血病细胞系HL - 6 0中与细胞周期调控因子 Cdc2 5 B表达和激活的关系 ,进一步了解 L IF引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。 方法 :用基因重组技术将 gp130的细胞内区换成 gp190的细胞内区 ,用 PCR技术扩增合成 gp190细胞内区 C末端的一个多肽 ,构成嵌合体受体基因 130 /190及 190 CT片段 ,并分别在 HL - 6 0细胞表达。用免疫组化和 Western印迹方法 ,分析在 L IF的诱导下 ,细胞生长和形态与 Cdc2 5 B表达的关系。 结果 :转染 pc DNA 3.0 130 /190的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量降低 ,细胞数量减少 ,细胞体积增大 ;转染 pc DNA3.0 190末端的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量增高 ,细胞表现为增殖 ,细胞体积普遍减小。 结论 :Cdc2 5 B表达量降低与 L IF诱导引发的白血病细胞 HL - 6 0增殖抑制有关 ,上述效应是由 gp190亚基细胞内区介导的 ,而gp190 C末端片段可干扰 L

HIV-1反式激活蛋白介导的白血病抑制因子受体α亚基胞内区远膜端融合蛋白在HL-60细胞分化中对microRNA-155的影响

目的：探讨HIV-1反式激活蛋白（TAT）与白血病抑制因子（LIF）受体α亚基胞内区C末端序列（LIFRα-CT3）的融合蛋白（TAT-CT3）,对HL-60细胞分化的影响.方法：将HL-60细胞分为对照组和TAT-CT3组.流式细胞仪对HL-60细胞进行粒细胞表面分化标记物CD14、CD11b的检测;Real-time PCR检测HL-60细胞中BIC、miR-155及其下游靶基因C/EBP β和SOCS-1 mRNA的表达;免疫印迹检测HL-60细胞中C/EBP β、SOCS-1及pSTAT3蛋白的表达.结果：与对照组相比,TAT-CT3组的HL-60细胞,其粒细胞表面分化标记物CD14、CD11b阳性表达率增加;BIC、microRNA-155（miR-155）表达量降低,C/EBP β和SOCS-1 mRNA及蛋白表达量均增加,pSTAT3蛋白表达量降低.结论：TAT-CT3融合蛋白通过抑制miR-155的表达,促进HL-60细胞向成熟粒细胞方向分化.

白血病抑制因子受体过表达对肺癌干细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨白血病抑制因子受体(LIFR)过表达对肺癌干细胞(LCSC)凋亡的影响及其机制。方法从肺癌患者的原发癌灶中分离培养原代肺癌细胞,用流式细胞术筛选出CD133+表型的LCSC。将包含LIFR的重组慢病毒过表达质粒及其阴性对照空载体质粒分别以病毒/细胞数量为18的比例感染LCSC,经2.0μg/m L的嘌呤霉素筛选,成功构建稳定表达LIFR的LCSC细胞株及其对照细胞株,分别作为观察组和对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组LIFR mRNA相对表达量,采用流式细胞术检测培养48 h时两组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测两组细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3相对表达量。结果观察组、对照组LIFR mRNA表达量分别为8.54±1.32、1.03±0.02,细胞凋亡率分别为(35.00±5.29)%、(11.33±1.76)%,两组比较P均<0.05。与对照组比较,观察组Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。结论 LIFR过表达可促进LCSC凋亡;其机制可能与抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax、Caspase-3蛋白表达有关。

白血病抑制因子受体在宫颈癌侵袭转移中的作用及机制研究

探讨白血病抑制因子受体(LIFR)与宫颈癌侵袭转移的关系,进一步分析宫颈癌侵袭转移的机制。方法 纳入2021年1月至2021年12月期间我院收治的45例宫颈癌肺转移的患者作为研究对象,取宫颈癌组织、癌旁组织及肺转移病灶组织作为标本,分别检测三组标本的LIFR mRNA的表达水平。使用慢病毒质粒(包含LIFR),并运用空载体质粒vector转染人宫颈癌SiHa细胞,将得到LIFR过表达的宫颈癌视作研究组,对照细胞则视作对照组。运用蛋白免疫印迹(WB)法,以开展检测,分析Hippo-YAP信号通路相关蛋白的表达情况。再选取40只健康SD裸鼠进行研究,按随机数字表法实施分组,使裸鼠成为两组,每个小组有20只。通过经尾静脉注射法注射细胞,使其分别进入到不同组的裸鼠体内。4周后处死裸鼠,获取肺组织,并实施苏木精-伊红(HE)染色,观察肺组织的情况,调查肺细胞的转移病灶数。结果 LIFR mRNA表达水平对比,肺转移病灶组织<宫颈癌<癌旁组织,P<0.05。研究组LIFR、P-YAP以及P-TAZ蛋白表达水平明显高于对照组,YAP和TAZ表达水平低于对照组,P<0.05。研究组裸鼠肺转移灶平均个数为(9.4±1.2)个,对照组裸鼠肺转移灶平均个数为(23.3±5.4)个。研究组明显少于对照组,P<0.05。结论 LIFR表达水平降低,Hippo-YAP信号通路相关蛋白磷酸化水平降低,可能是促进宫颈癌肺转移的机制。

白血病抑制因子及其受体在早孕蜕膜和绒毛组织中表达的研究

目的 探讨正常早孕蜕膜和绒毛组织白血病抑制因子 (LIF)及其受体 (LIFR)的表达。 方法 采用原位杂交和免疫组织化学染色技术对 18例正常早孕妇女蜕膜和绒毛组织LIF -mRNA、LIF和LIFR蛋白的表达进行研究。 结果 全部早孕蜕膜组织和绒毛滋养细胞中有LIF -mRNA、LIF和LIFR蛋白表达 ,同一组织和细胞LIF和LIFR基因表达强弱基本一致 ,LIFR在绒毛滋养细胞的表达强于蜕膜。 结论 人类蜕膜和绒毛滋养细胞LIF和LIFR基因表达可能与胚泡着床、维持胎盘功能和促进胚胎发育有关。

白血病抑制因子及其受体在月经周期猕猴输卵管内的表达

应用免疫细胞化学方法对白血病抑制因子(LIF)、白血病抑制因子受体(LIFR)和gp130在月经周期猕猴输卵管内的表达进行了研究。结果表明,LIF、LIFR和gp130主要在输卵管上皮细胞内表达,而在固有层、肌层及浆膜内的表达量较少。LIF、LIFR和gp130在猕猴输卵管内的表达量随月经周期的不同而变化,在增殖中期到分泌中期的输卵管内表达量较高,而在增殖早期及分泌晚期输卵管内表达量较低。LIF及其受体在猕猴输卵管内的表达可能由卵巢分泌的类固醇激素所调控,LIF可能在猕猴排卵及早期胚胎发育过程中起重要的调节作用。

血清雌孕激素及输卵管组织白血病抑制因子及其受体表达与输卵管妊娠的关系

目的探讨白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)和血清雌孕激素[雌二醇(E2)、孕酮(P)]与输卵管异位妊娠的关系。方法采用免疫组化技术检测11例非孕组、12例宫内妊娠组和36例输卵管异位妊娠组输卵管组织中LIF和LIFR的表达水平,半定量分析其在各组间的表达差异。电化学发光法检测32例正常宫内孕组、40例异位妊娠组血清E2和P。结果 LIF在非孕组、宫内妊娠组和异位妊娠组间的表达无明显差别;在输卵管腺上皮中,异位妊娠组LIFR的表达高于其他两组(P<0.05),而非孕组和宫内妊娠组上皮间表达无明显差异(P>0.05);但是在间质中,LIFR的表达在输卵管妊娠组明显低于其他两组(P<0.01),而非孕组和宫内妊娠组上皮间其表达无明显差异(P>0.05)。异位妊娠组血清E2、P水平明显均低于正常宫内妊娠组(P<0.05,P<0.01)。相关性分析显示输卵管妊娠时输卵管腺上皮LIFR和患者血清E2正相关,间质LIFR和E2负相关。结论 LIFR的异常表达可能与输卵管异位妊娠的发生密切相关。输卵管异位妊娠组血清E2、P均明显低于正常宫内妊娠组。E2能上调输卵管腺上皮的LIFR表达,下调输卵管间质LIFR的表达。

白血病抑制因子及其受体与妊娠

白血病抑制因子 ( LIF)是一种多生物学活性的细胞因子。近年来的研究表明 ,LIF存在于子宫内膜、妊娠期蜕膜及胎盘上。它通过与其受体 ( LIFR)结合 ,从而调节胚胎的着床及妊娠的维持。LIF不仅与其他细胞因子之间相互调节 ,且它还受到激素内分泌的严格调控。进一步研究还发现 ,原因不明不孕症妇女子宫内膜 LIF的表达较正常妇女减弱甚至缺失 ,这提示 LIF的异常表达可能是原因不明不孕症患者着床失败的原因之一 。

白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。

白血病抑制因子及其受体在早孕蜕膜和绒毛组织中表达的研究

目的：探讨正常早孕蜕膜和绒毛组织白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)的表达。方法：采用原位杂交和免疫组织化学染色技术对18例正常早孕妇女蜕膜和绒毛组织LIF-mRNA、LIF和LIFR蛋白的表达进行研究。结果：全部早孕蜕膜组织和绒毛滋养细胞中有LIF-mRNA、LIF和LIFR蛋白表达，同一组织和细胞LIF和LIFR基因表达强弱基本一致，LIFR在绒毛滋养细胞的表达强于蜕膜。结论：人类蜕膜和绒毛滋养细胞LIF和LIFR基因表达可能与胚泡着床、维持胎盘功能和促进胚胎发育有关。

白血病抑制因子及其受体在原发性不孕症患者子宫内膜中的表达分析

目的探讨白血病抑制因子(leukemiainhibitoryfactor,LIF)及其受体(leukemiainhibitoryfactor receptor,LIFR)在原发性不孕症患者种植窗期子宫内膜中的表达情况,分析其与不明原因不孕症的关系。方法采用前瞻性临床对照研究方法,随机选择本院2015年7月～2017年7月诊治的原发性不孕症患者200例为观察组,按照不同的发病原因等分为4个亚组:A组(输卵管闭塞)、B组(卵巢功能低下)、C组(子宫内膜异位)及D组(不明原因),同时选择同期健康志愿者50例为对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,分别检测各组研究对象LIFm RNA和LIFRm RNA表达水平,比较组间差异。结果对照组LIFmRNA表达水平为(1.12±0.46),A、B、C、D四个亚组则分别为(1.03±0.33)、(0. 90±0. 30)、(0. 99±0. 38)和(0. 50±0. 31)。A、 B、C三组L I Fm R N A表达水平和对照组的差异无统计学意义(P均>0.05),而D组LIFmRNA表达水平明显低于对照组(P <0.01),组间比较D组和A、B、C三组的差异均有统计学意义(P均<0.01)。A、B、C、D四个亚组LIFRmRNA表达水平均较对照组明显下降(P <0.01),而亚组间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论女性不孕群体子宫内膜内LIFR显著受损,推断LIFR可能是调节女性子宫内膜种植窗期受孕的关键因子之一。LIF表达缺失可能与不明原因的不孕症发病有关。

白血病抑制因子在女性输卵管的表达

白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）是60年代末发现的一种多功能的细胞因子，因能抑制小鼠M1型髓样白血病细胞增殖并诱导其向正常Mφ样细胞分化而得名。研究显示，LIF在女性卵巢及卵泡液、子宫内膜及蜕膜、滋养细胞与输卯管等组织细胞均有表达，在排卵、胚泡的形成、早期发育及胚泡着床中起调节作用，人类输卵管妊娠及部分不孕症的发生可能与组织局部LIF的表达异常有关。

白血病抑制因子在胚胎植入过程中的调节作用

白血病抑制因子(LIF)是一种具有多种生物学效应的多功能细胞因子,通过与其受体(LIFR)和gp130结合发挥作用,联合激活下游的信号传导子与转录激活因子3(STAT3),进而启动影响细胞分裂、分化等相关基因的表达。近些年来的研究越来越显示出LIF在胚胎植入过程中有着重要的调节作用,包括在子宫内膜容受态的构建、囊胚生长发育和黏附、滋养外胚层细胞分化及入侵等植入关键环节,尤其LIF已被公认是子宫内膜容受态的标志之一。本文将结合最新研究进展重点综述LIF在胚胎植入各环节中的调节作用。

LIF受体胞内功能域调节白血病细胞增殖分化

目的:探讨白血病抑制因子受体(LIFR)浕亚基胞内游离功能域gp190CT3对启动靶细胞内信号转导通路(JAK/STAT3),使白血病细胞HL-60向粒细胞方向分化的作用。方法:采用免疫细胞化学、RT-PCR以及流式细胞术等技术和方法,观测pcDNA3.0-gp190CT3重组质粒稳定转染CHO细胞中靶基因的表达;以及稳定转染的CHO细胞与HL-60细胞共培养后,HL-60细胞的形态学、STAT3磷酸化水平、细胞表面抗原CD15表达的变化。结果:(1)重组质粒转染的CHO细胞表达目的基因gp190CT3,并获得稳定表达目的基因的细胞株;(2)重组质粒转染的CHO细胞与野生型HL-60细胞共培养可使HL-60细胞体积变大,形态不规则,STAT3磷酸化水平和细胞表面抗原CD15表达升高。结论:LIF受体α亚基胞内游离片段表达的功能蛋白gp190CT3能够启动靶细胞内JAK/STAT3信号转导通路,从而发挥其调节白血病细胞增殖分化的效能。

白血病抑制因子及其受体在早产胎盘组织及蜕膜组织中的表达及临床意义

目的探讨早产胎盘及蜕膜组织中的白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)的表达。方法应用免疫组织化学方法检测白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)在30例早产(实验组)、30例人工流产(对照组)胎盘和蜕膜组织中的表达。用卡方检验(Chi-Square Test)检测LIF、LIFR在早产和人工流产中的表达是否有差异。结果 LIF、LI-FR在早产胎盘组织中阳性率分别为6.7%和10%,在蜕膜组织中阳性表达率分别为10%和13.3%,结论白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)对晚期妊娠的维持有待进一步研究。

白血病抑制因子及其受体在宫外孕胚胎组织中的表达及临床意义

目的探讨宫外孕胚胎组织中的白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)的表达。方法应用免疫组织化学方法检测白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)在30例宫外孕、30例人工流产以及30例足月妊娠胎盘组织中的表达。用卡方检验(Chi-Square Test)检测LIF、LIFR在宫外孕、人工流产及足月妊娠胎盘组织中的表达是否有差异。结果 LIF、LIFR在宫外孕胎盘组织中阳性率分别为93%和90%,在人工流产胎盘组织中阳性率分别为93%和90%,在足月妊娠胎盘组织中无阳性表达。结论白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)在早期妊娠中,对维持胎盘的功能和胚胎的生长发育具有重要意义,对晚期妊娠的临床意义还有待进一步研究。

LIFR、eNOS、sEng在子痫前期发病机制中作用的研究进展

子痫前期(PE)是妊娠期高血压疾病的一种,是导致妊娠期胎儿宫内生长受限、胎儿宫内窘迫和产妇死亡的常见原因。PE是一种多因素、多机制及多通路致病的疾病,至今病因和发病机制尚未完全阐明,近年来一直是国内外学者研究的热点。目前认为PE的发病机制主要与胎盘浅着床、母体全身炎症反应、免疫耐受等有关。国内外学者一直致力于探讨预测PE发生的生物标志物,希望可以找到预测PE发生的特异性生物标志物,从而对PE高危孕妇提前采取干预措施,降低母婴死亡率。该文综述白血病抑制因子受体(LIFR)、内皮性一氧化氮合酶(eNOS)、可溶性内皮素(sEng)在PE发病机制中作用的研究进展,为深入研究LIFR、eNOS、sEng对PE的预诊断价值提供一些理论依据。