树突状细胞介导的抗白血病效应的临床研究

肿瘤的免疫治疗作为恶性肿瘤综合治疗的重要组成部分,近年来受到了广泛的关注。树突状细胞(DC)是已知的功能最强的抗原呈递细胞,不仅能够激活自体的抗肿瘤免疫,同样能够提高异体免疫组织的抗肿瘤效应。为了探讨外周血来源的DC体外培养扩增和临床治疗的可行性和安全性,分析DC免疫治疗对于急性非淋巴细胞白血病自体骨髓移植患者长期生存的影响,利用CS3000Plus采集13例急性非淋巴细胞白血病自体骨髓移植后的病人的外周血单个核细胞,经过2周的体外培养后行DC免疫治疗,治疗后长期随访观察其无病生存时间。结果表明,无一例发现有与DC免疫治疗相关的严重不良反应;KaplanMeier生存分析结果为:DC组5年生存率为75.52%,非DC组5年生存率为45.71%,DC组在累计生存率上明显优于非DC组。结论:外周血来源的DC体外培养和临床治疗是安全可行的,急性非淋巴细胞白血病病人在自体骨髓移植术后应用DC免疫治疗延长了其无病生存时间,提高了长期生存率。

黄芩提取化合物单体SBX抗白血病效应及机制研究

本研究探讨黄芩提取化合物单体成分SBX对不同人白血病细胞株的抗白血病效应及其可能的相关机制。体外培养人HL-60、NB4、U937、K562、Jurkat细胞,应用CellTiter-Glo发光法进行细胞活力检测,筛选出敏感细胞株,应用流式细胞术检测SBX对敏感细胞细胞周期的影响,应用蛋白Pathway Array技术检测SBX对敏感细胞蛋白表达的影响。结果显示,SBX(10-200μmol/L,72 h)对各种类型的人白血病细胞均有抑制作用,并呈浓度依赖性(r值分别为0.86,0.88,0.95,0.94,0.96),对HL-60细胞抑制作用最强。流式细胞术显示SBX(50,100μmol/L,48h)对HL-60细胞周期的影响主要是引起G0/G1期阻滞。蛋白Pathway Array技术分析SBX(50μmol/L,48 h)对HL-60蛋白表达的影响显示,p-PKCα/βⅡ、p-p38、Cdc25B、XIAP蛋白表达水平上调,而p-AKT、p-SAPK/JNK、cyclin E、Notch4、Cdk4、Cdc2、Akt、Bcl-2、Bax、cdc42、TNF-α、p27、CaMKKa蛋白表达水平下调。结论:SBX能够抑制各种类型人白血病细胞的增殖,其中敏感细胞株为HL-60。SBX主要影响HL-60的EGFR、Ras/Raf/MAPK和Notch信号传导通路,并通过这些信号传导通路影响细胞周期相关蛋白表达的水平,导致细胞周期G0/G1期阻滞。

金针菇多糖对小鼠抗肿瘤及抗白血病效应的实验研究

目的 研究金针菇多糖 (FVP)对荷瘤小鼠的抑瘤率和对白血病小鼠生存期的影响 ,并探讨其抗肿瘤机理。方法 以小鼠肉瘤 (S180 )、小鼠肝癌 (H2 2 )瘤株及小鼠网状细胞白血病 (L615)瘤株造模 ,设空白对照、正常对照、给药 (高、低剂量 ) 4组 ,分别考察金针菇多糖对各组小鼠抑瘤率和生存期的影响。结果 金针菇多糖对S180 、H2 2 小鼠的抑瘤率分别为 5 0 .6 9%、4 1.4 6 %以上 ;对L615白血病小鼠生命延长率达到 5 3.2 4 %以上。结论 金针菇多糖是抗肿瘤、抗白血病的有效物质 ,可干扰肿瘤细胞的有丝分裂过程和提高机体免疫力。

多药耐药K562/A02和敏感K562细胞来源的树突状细胞介导抗白血病效应对比研究

本研究探讨多药耐药(MDR)白血病K562/A02细胞和敏感K562细胞诱导树突状细胞(DC)分化及介导的抗白血病效应。采用慢性粒细胞白血病(CML)P170糖蛋白(Pgp)高表达的MDRK562/A02细胞、敏感K562细胞在含细胞因子GMCSF(1000U/ml)、IL4(500U/ml)和TNFα(100ng/ml)的RPMI1640完全培养液中诱导分化成DC,以光镜观察细胞形态、流式细胞术检测细胞表型,异基因混合淋巴细胞反应(alloMLR)检测T细胞增殖活性,MTT法测定细胞毒作用。结果表明:培养14天的K562/A02细胞和K562细胞均出现典型的DC形态特征,表达DC的相关分化抗原及共刺激分子CD1a、CD83、HLADR、CD80、CD86。alloMLR检测中,K562/A02DC较K562DC具有更强的刺激异基因T细胞增殖能力(P<0.05)。两种DC激活的CTL分别对K562/A02和K562细胞较HL60细胞具有显著的杀伤活性(P<0.01);更重要的是,K562/A02DC较K562DC激活的CTL对Pgp高表达的MDRK562/A02细胞、HL60/VCR细胞具有更强的细胞毒作用,杀伤活性分别为(40.7±1.3)%、(28.4±0.9)%(P<0.01)和(24.9±1.1)%、(8.2±0.7)%(P<0.01)。结论:Pgp高表达的MDR白血病细胞K562/A02和敏感K562细胞都可在GMCSF、IL4和TNFα作用下诱导分化为成熟DC,均可活化CTL产生特异的抗白血病效应;尤其K562/A02细胞来源的DC可介导针对Pgp高表达的多药耐药白血病的特异细胞毒作用。

硒酸酯多糖和亚硒酸钠抗白血病效应的实验研究

应用ＭＴＴ比色分析法和细胞克隆形成法比较研究了有机硒化物－硒酸酯多糖和无机硒物－亚硒酸钠对白血病Ｋ５６２细胞的作用。结果表明：ＫＳＣ和Ｎａ２ＳｅＯ３体外在实验浓度范围内均对Ｋ５６２细胞的增殖具有显著的抑制作用，并有剂量反应；Ｋ５６２细胞具有我更新能力的细胞群体对硒的抑制作用更敏感；ＫＳＣ的抗白血病效应明显高于含同样硒量的Ｎａ２ＳｅＯ３，ＫＳＣ的作用约为Ｎａ２ＳｅＯ３的５倍。

次要组织相容性抗原诱导移植物抗白血病效应的研究进展

次要组织相容性抗原(mHags)在移植物抗宿主病(GVHD)和移植物抗白血病(GVL)效应中起重要作用。造血细胞起源细胞局限性mHags只在白血病细胞及造血细胞表面表达,可诱导特异性T细胞产生,杀伤白血病细胞,对非造血细胞无细胞毒作用,成为诱导GVL效应、实现GVHD和GVL分离的理想靶抗原。本文对近年来以mHags为靶抗原诱导GVL效应治疗恶性血液病的研究进展作一综述,并探讨其用于临床造血细胞移植后白血病复发过继性免疫治疗的可能性。

移植物抗白血病效应及其诱导机制的研究进展

异基因造血干细胞移植(allo-SCT)是治愈恶性血液病的最有效方法。其预处理的目的是尽可能杀灭宿主体内恶性细胞株以最大限度地减轻肿瘤负荷,但不能达到制止复发以求根治的目的。近期研究表明,allo-SCT中植入供者的T淋巴细胞发挥的移植物抗白血病效应(GVL)可以有效地预防和治疗原发肿瘤复发,可能为根治白血病的重要机制。本文就近年该方面的研究进展进行综述。

紫杉醇对小鼠抗肿瘤及抗白血病效应的实验研究

目的：研究紫杉醇对荷瘤小鼠的抑瘤率和对白血病小鼠生存期的影响，并探讨其抗肿瘤机理。方法：以小鼠肉瘤(S180)、小鼠肝癌(H22)瘤株及小鼠网状细胞白血病(L615)瘤株造模，设空白对照、正常对照、(高、低剂量)给药四组，分别考察紫杉醇对各组小鼠抑瘤率和生存期的影响。结果：紫杉醇对S180、H22小鼠的抑瘤率分别为50．69％、41．46％以上，对L615白血病小鼠生命延长率达到53．24％以上。结论：紫杉醇是抗肿瘤、抗白血病的有效成分，可干扰肿瘤细胞的有丝分裂过程和提高机体免疫力。

移植物抗宿主病和移植物抗白血病效应的发生机制及分离策略的研究进展

异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）为恶性疾病提供了一种全新的治疗策略并广泛应用于恶性疾病的治疗。通过移植治疗,其移植物抗白血病（graft-versus-leukemia,GVL）效应对恶性疾病的治疗及防止移植后疾病复发发挥着关键作用,

移植物抗宿主病与移植物抗白血病效应研究新进展

异基因骨髓移植是治疗多种血液系统恶性肿瘤的有效方法,治疗效果主要归功于移植物抗白血病效应(graft-versus-leukemia,GVL),它可以清除残存肿瘤细胞,提高生存率。然而,GVL与骨髓移植的一大并发症——移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)紧密相连。现代科学研究揭示了急性GVHD的病理过程,在此过程中有一些机制发挥着抗肿瘤作用。曾经的观念认为,GVHD和GVL是相互关联、密不可分的,但最近的研究显示,虽然尚不能采取某种方式将这两者截然分开,但合理利用一些免疫细胞、细胞因子、信号通路、组织抗原,可以达到既降低GVHD又保留GVL的目的。

异基因造血干细胞移植后移植物抗白血病效应与移植物抗宿主病分离方法的研究现状

背景:异基因造血干细胞移植的本质是免疫细胞的移植,其治疗作用主要依靠移植物抗白血病效应,但其伴随的移植物抗宿主病增加了患者的死亡率,影响疗效。目前研究者提出了多种减轻移植物抗宿主病同时增强移植物抗白血病效应的方法,但各有优缺点及争议点,故对两者之间的关系及分离方法尚需进一步深入的研究。目的:综述异基因造血干细胞移植后减轻移植物抗宿主病而加强或不降低移植物抗白血病效应的研究现状。方法:由第一作者检索万方、CNKI、Pub Med数据库,检索时间为2000至2016年,英文检索词为"hematopoietic stem cell transplantation,graft versus leukemia,graft-versus-host disease,donor lymphocyte infusion,regulatory T cell,natural killer cell,mesenchymal stem cell",查阅近年增强移植物抗白血病效应及减低移植物抗宿主病的相关文献。结果与结论:最终纳入42篇文献。目前有关移植物抗白血病效应和移植物抗宿主病的关系及各自的发生机制仍不十分明确,有关两者分离方法虽多,但各有优缺点及争议点,尚未有统一的最优方案,需要进一步研究。

高三尖杉酯碱抗急性粒细胞白血病效应及其机制研究进展

高三尖杉酯碱(HHT)是具有抗肿瘤活性的生物碱,对急性粒细胞白血病(AML)有较好的疗效,且其不良反应较其他抗恶性肿瘤药物低。信号转导途径的异常激活是肿瘤发生、发展的重要步骤。体外细胞实验显示HHT可通过抑制JAK/STAT、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、WNT等信号途径诱导白血病细胞凋亡、抑制白血病细胞生长。该文就HHT临床联合用药、抗白血病效应及其与信号途径之间的关系予以简单综述。

同基因骨髓混合H-2半相合异基因骨髓移植的抗白血病效应实验研究

为了诱发自体骨髓移植(ABMT)后的移植物抗白血病(GVL)效应,提高患者的长期无病存活,研究了同基因混合H-2半相合异基因骨髓移植(MBMT)后的GVL效应以及移植物抗宿主病(GVHD)的耐受情况。通过混合脾细胞移植对新生小鼠GVHD的作用和MBMT对成年小鼠GVHD的活体观察,证实受体小鼠接受亚致死剂量放射后行同基因骨髓移植时,能够耐受1/6有核细胞量的H-2半同基因骨髓而不发生或发生轻度GVHD。比较观察混合1/6有核细胞H-2半同基因的同基因BMT的抗白血病效应。结果显示,单用同基因BMT者移植后2周皆死亡,混合组5周后仅2只死亡,预计生存率为66％,存活小鼠未观察到明显的GVHD,单纯照射组及L615白血病细胞接种组者1周内全死亡,照射后未接种白血病细胞而行同基因BMT者5周仅1只死亡,提示接受1/6量H-2半同基因骨髓细胞的同基因骨髓移植有显著的抗白血病效应(P<0.01),而不发生GVHD。这一研究为临床ABMT后诱导GVL效应,提供了一个新的途径。

移植物抗白血病效应的几个影响因素

移植物抗白血病效应(GVL)是异基因造血干细胞移植治疗白血病、控制残留病变的主要机制,蕴涵复杂的免疫学机制。由于供者免疫细胞回输受体后处于其复杂的免疫环境中,其诱发的GVL效应必然受到多种供受者因素影响,因此有必要对这些影响因素加以认识,以利于在今后的临床实践中有效地利用GVL效应、控制残留白血病微小残留病变(MRD)、降低移植后复发率,以提高移植疗效。为此,本文就影响GVL的几个因素诸如嵌合状态、自身细胞毒T细胞及免疫细胞的体内动力学及细胞因子等作一综述。

非血缘脐血移植治疗恶性血液病发生移植物抗宿主病与移植物抗白血病效应分离的机制

背景:国内外多项临床研究均表明非血缘脐血移植相对于外周血干细胞或骨髓移植,不仅具有较低的移植物抗宿主病发生率,并且疾病复发率也明显降低,具有较强的移植物抗白血病效应,是临床上分离移植物抗宿主病和移植物抗白血病效应的模型之一。非血缘脐血移植后免疫细胞如何分化,为何具有较强的移植物抗白血病效应,目前机制尚不清楚。目的:回顾性分析非血缘脐血移植患者长期临床随访资料,并探讨非血缘脐血移植后优势细胞亚群及分化、相关活化与抑制分子的表达情况,进一步探讨非血缘脐血移植后移植物抗宿主病与移植物抗白血病效应分离的机制。方法:2012-07-01/2017-06-31在中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)接受造血干细胞移植治疗的成人恶性血液病患者154例,其中非血缘脐血移植93例,同胞外周血干细胞移植61例。通过收取非血缘脐血移植和外周血干细胞移植患者的骨髓标本,重点对非血缘脐血移植患者T细胞相关免疫特征进行研究,探讨非血缘脐血移植临床移植物抗宿主病与移植物抗白血病效应的分离现象。结果与结论:①经过中位61个月(42-99个月)的长期随访,非血缘脐血移植组5年慢性移植物抗宿主病发生率、5年移植后疾病复发率明显低于同胞外周血干细胞移植组(P=0.003);整合Ⅲ-Ⅳ度移植物抗宿主病、广泛性慢性移植物抗宿主病以及疾病复发、5年无移植物抗宿主病及无疾病复发生存,非血缘脐血移植组明显高于外周血干细胞移植组(P=0.038)。②非血缘脐血移植组CD3^(+)T细胞明显高于外周血干细胞移植组(P=0.04)。非血缘脐血移植组CD3^(+)CD4^(+)T细胞亚群比例低于外周血干细胞移植组;非血缘脐血移植组CD3^(+)CD8^(+)细胞亚群比例高于外周血干细胞移植组;非血缘脐血移植组CD4^(+)CD80^(+)T细胞低于外周血干细胞移植组(P=0.089),且非血缘脐血移植组CD4^(+)PD-1^(+)T细胞高于外周血干细胞移植组。非血缘脐血移植组CD8^(+)CD80^(+)T细胞高于外周血干细胞移植组。③结果表明,非血缘脐血移植患者具有较低的慢性移植物抗宿主病发生率和疾病复发率,呈现移植物抗宿主病与移植物抗白血病效应分离现象。免疫功能检测表明非血缘脐血移植组T细胞比例相对较高并且以CD8^(+)T细胞为主,可能是非血缘脐血移植产生较强移植物抗白血病效应的机制之一。

白细胞介素2增强混合骨髓移植后移植物抗白血病效应的实验研究

我们以前的实验与临床研究证实,混合一定比例的HLA(H-2)半相合骨髓细胞的混合骨髓移植(MBMT),可避免或减轻GVHD的发生并显示出移植物抗白血病(GVL)效应。本研究探讨在MBMT后短期应用白细胞介素2(IL-2)以增强GVL的效应,旨在进一步提高临床MBMT的疗效。

冬凌草甲素抗T细胞急性淋巴细胞白血病效应的实验研究

目的探讨冬凌草甲素对T细胞急性淋巴细胞白血病的抗白血病效应及其机制。方法以T细胞急性淋巴细胞白血病细胞株CEM为研究对象,应用改良MTT法测定不同浓度及不同时间冬凌草甲素对CEM细胞增殖和生存率的影响,计算72h的半数抑制浓度(IC50);显微镜下观察5、7.5、10μmol/L冬凌草甲素处理24h后CEM细胞的形态学变化;流式细胞术检测0.5、7.5、10μmol/L冬凌草甲素作用24h后CEM细胞的凋亡百分率;应用Western blot法检测7.5μmol/L冬凌草甲素作用后细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白水平,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果 1冬凌草甲素呈浓度及时间依赖性抑制CEM细胞增殖,作用72h的IC50值为(7.37±1.99)μmol/L;2 5、7.5、10μmol/L冬凌草甲素作用24h后CEM细胞边界不清晰,部分细胞崩解,且浓度越高,细胞形态改变越明显;3 0、5、7.5、10μmol/L冬凌草甲素作用24h后,细胞凋亡百分率分别为(4.8±2.11)%、(19.03±2.54)%、(40.27±3.31)%;(57.23±6.69)%;4冬凌草甲素明显抑制CEM细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白的活化;下调CEM细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax的表达。结论冬凌草甲素可能通过抑制mTOR/P70(4EBP1)、RAF/ERK、STAT5信号蛋白的活化,以及上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2而发挥抗白血病作用。

淋巴细胞缺乏状态对白血病特异性细胞毒性T淋巴细胞体内抗白血病效应的影响

目的探讨淋巴细胞缺乏状态对白血病特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体内增殖和抗白血病作用的影响。方法采用6 Gy照射C57BL/6小鼠诱导淋巴细胞缺乏状态,分别经尾静脉注射EGFP+C57BL/6小鼠脾T淋巴细胞和白血病特异性CTL,随后皮下接种1×106FBL3白血病细胞。用流式细胞仪分析小鼠外周血EGFP+细胞及T淋巴细胞亚群比例,同时观察脾T淋巴细胞和白血病特异性CTL对随后接种的FBL3白血病细胞的杀伤作用。结果在淋巴细胞缺乏状态下输入的脾T淋巴细胞和白血病特异性CTL均可得到有效扩增(第18天输注脾T淋巴细胞组和输注CTL组外周血中EGFP+细胞比例分别为28.81%和42.24%),但脾T淋巴细胞对随后接种的白血病细胞生长无抑制作用,而白血病特异性CTL在淋巴细胞缺乏受体小鼠体内扩增速度更快,扩增的倍数更高,并具有显著增强的抗白血病作用。结论诱导受体淋巴细胞缺乏可显著增强外源性CTL输注的疗效。