EB病毒早期基因BHRF1—Bcl-2的病毒性同源基因

BHRF1是近年来得到确认的EBV新的致癌基因,在结构上和功能上与细胞原癌基因Bcl-2相似,属Bcl-2家族成员。由于其抑制细胞凋亡和细胞转化作用而受到广泛关注,本文就BHRF1的作用特点、与bcl-2的关系以及应用前景作一综述。

茶尺蠖核型多角体病毒湖北分离株的分子鉴定

运用PCR技术扩增茶尺蠖核型多角体病毒安徽分离株(EcobNPV-AH)和湖北分离株(EcobNPV-HB)的同源重复序列2(hr2),并对湖北分离株的hr2进行克隆和序列测定.结果表明,茶尺蠖核型多角体病毒安徽分离株hr2扩增产物为2条DNA片段,大小约1300bp和1800bp,湖北分离株的hr2扩增产物为1条DNA片段,大小约1800bp,由基因型组成判断,EcobNPV-HB是新的地区分离株,其hr2全长1761个核苷酸,GC含量21.7%,编码540个氨基酸,具有重复性回文序列,较GenBank中登录的EcobNPV-AH的hr2多362个核苷酸.

甲状腺乳头状癌组织V-raf鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体B1V600E突变与尿碘浓度的关系

目的 探讨甲状腺乳头状癌（PTC）中V-raf鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体B1（BRAF） V600E基因突变和患者的尿碘浓度（UIC）及其与临床病理特征的关系.方法 应用聚合酶链反应（PCR）技术和DNA直接测序法检测110例PTC、47例结节性甲状腺肿、26例甲状腺腺瘤患者标本中BRAF V600E基因突变,同时检测患者的尿碘浓度;分析PTC患者中BRAF V600E基因突变和尿碘浓度与患者性别、年龄、肿瘤数目、腺体外浸润、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征的关系.结果 在183例甲状腺结节组织中,PTC中检测到BRAF V600E突变,突变阳性率为49%（54/110）,而结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤标本未检测到（χ2=50.838,P=0.000）.BRAF V600E突变与PTC的腺体外浸润呈正相关（χ2=6.031,P=0.014）,与性别（P=0.363）、年龄（P=0.360）、肿瘤数目（P=0.593）、肿瘤直径（P=0.497）、淋巴结转移（P=0.554）及pTNM分期（P=0.785）无明显相关.PTC患者碘过量率为79%,高于结节性甲状腺肿的66%和甲状腺腺瘤的58%,差异有统计学意义（χ2=6.288,P=0.043）.PTC患者的尿碘浓度与性别（P=0.187）、年龄（P=0.138）、肿瘤数目（P=0.571）、肿瘤直径（P=0.454）、腺体外浸润（P=0.345）、淋巴结转移（P=0.248）及pTNM分期（P=0.792）无明显相关.PTC中BRAF V600E突变与尿碘浓度无明显相关（χ2=0.019,P=0.891）.结论 BRAF V600E突变与PTC的侵袭性明显相关,PTC患者尿碘浓度的碘过量率高于甲状腺良性结节.

Hp感染胃癌组织ALK BRAF Her-2表达及预测不良预后价值

目的:观察幽门螺杆菌(Hp)感染胃癌组织间变性淋巴瘤激酶(ALK)、鼠类肉瘤滤过性病毒致癌同源体B1(BRAF)、人类表皮生长因子受体2(Her-2)表达,并分析其对Hp感染胃癌预测不良预后的价值。方法:选取2019年10月至2022年11月福建医科大学附属南平市第一医院收治的106例Hp感染胃癌患者,比较Hp感染胃癌组织、癌旁组织ALK、BRAF、Her-2表达阳性率差异,分析胃癌组织ALK、BRAF、Her-2表达与Hp感染胃癌临床特征、病理表现的关系。随访1年,根据患者术后复发或病亡将其分为预后良好组(61例)、预后不良组(45例),比较不同预后Hp感染胃癌组织ALK、BRAF、Her-2表达;分析Hp感染胃癌组织ALK、BRAF、Her-2表达对不良预后的预测效能及预警价值。结果:Hp感染胃癌组织ALK、BRAF、Her-2表达阳性率(17.92%、67.92%、25.47%)高于癌旁组织(2.83%、7.55%、4.72%)(χ^(2)=12.984、82.230、17.814,P<0.05);Hp感染胃癌组织ALK、BRAF、Her-2表达阳性率在组织分化程度、浸润程度、TNM分期、淋巴结转移中比较差异明显(P<0.05);106例Hp感染胃癌患者经随访统计,纳入45例预后不良组(32例复发,13例病亡),61例纳入预后良好组。预后不良组Hp感染胃癌组织ALK、BRAF、Her-2表达阳性率(35.56%、93.33%、46.67%)高于预后良好组(4.92%、49.18%、9.84%)(χ^(2)=16.523、23.172、18.504,P<0.05);Hp感染胃癌组织ALK、BRAF、Her-2表达阳性联合评估不良预后的AUC最大,为0.901(95%CI:0.827~0.950)(P<0.05),敏感度为86.67%,特异度为93.44%,预测效能优于ALK、BRAF、Her-2表达单独检测。ALK、BRAF、Her-2阳性所致Hp感染胃癌不良预后的RR值分别为2.526(1.771~3.604)、6.611(2.205~19.821)、2.560(1.733~3.781)(P<0.05)。结论:Hp感染胃癌组织ALK、BRAF、Her-2表达与组织分化程度、浸润程度、TNM分期、淋巴结转移联系密切,对Hp感染胃癌不良预后有较高预测效能与预警价值。

成熟T／NK细胞淋巴瘤中鼠类肉瘤滤过性病毒致癌同源体B1基因突变和表达的检测及意义

目的研究成熟T／NK细胞淋巴瘤组织以及细胞系中鼠类肉瘤滤过性病毒致癌同源体B1（BRAF）基因突变和表达情况，探讨BRAF基因的表达与成熟T／NK细胞淋巴瘤临床病理特征和临床疗效的关系。方法采用直接测序法检测Jurkat细胞、Hut-78细胞、YTS细胞、正常外周血淋巴细胞、58例不同类型成熟T／NK细胞淋巴瘤组织和29例反应性增生淋巴结组织中BRAF基因第15号外显子的1799位点和第11号外显子的463、465和468位点突变情况。采用实时荧光定量PCR和Westernblot法检测Jurkat细胞、Hut-78细胞、YTS细胞和正常外周血淋巴细胞中BRAFmRNA和蛋白的表达情况。采用免疫组化方法检测成熟T／NK细胞淋巴瘤组织和反应性增生淋巴结组织中BRAF蛋白的表达，分析BRAF基因的表达与非特指型外周T细胞淋巴瘤患者临床病理特征和疗效的关系。结果成熟T／NK细胞淋巴瘤组织和细胞系中BRAF基因均未出现第15号外显子的1799位点和第11号外显子的463、465和468位点突变。正常淋巴细胞、YTs细胞、Hut-78细胞和Jurkat细胞中BRAFmRNA的相对表达量分别为1．000、5．207±0．013、8．412±0．615和36．720±1．797，Jurkat细胞中BRAFmRNA的相对表达量明显高于正常淋巴细胞、Hut-78细胞和YTS细胞（P〈0．01）。正常淋巴细胞、YTS细胞、Hut-78细胞和Jurkat细胞中BRAF蛋白的相对表达量分别为0．051±0．003、0．102±0．013、0．113±0．017和0．304±0．010，Jurkat细胞中BRAF蛋白的相对表达量高于正常淋巴细胞、Hut-78细胞和YTS细胞（P〈0．05）。58例不同亚型成熟T／NK细胞淋巴瘤组织中，仅有6例（10．3％）呈BRAF蛋白阳性表达，且全部为非特指型外周T细胞淋巴瘤。BRAF蛋白表达与非特指型外周T细胞淋巴瘤患者的性别、年龄、B症状、临床分期、血清乳酸脱氢酶水平均无关（均P〉0．05）。BRAF蛋白在治疗有效组中的阳性率（8．3％）明显低于治疗无效组（55．6％，P=0．046）。结论BRAF基因的表达有可能成为外周T细胞淋巴瘤恶性生物学特性的标志物和临床治疗靶点。

ErbB2 RNA干扰联合^(60)Co γ照射对U251细胞增殖及凋亡的影响

构建特异性抑制白血病病毒致癌基因同源体2(ErbB2)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,并检测联合^(60)Coγ照射对U251细胞增殖抑制及促进凋亡作用。设计、合成ErbB2特异性的19bp短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到Psflence2.1-U6-H1载体中,构建ErbB2特异siRNA的表达载体,HindⅢ和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染U251细胞,四甲基偶氮唑盐法(Methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)检测细胞增殖活性,Hoechst 33258染色,Annexin-(?)检测细胞凋亡情况。经双酶切与测序鉴定成功构建ErbB2-siRNA表达载体,转染星型胶质瘤细胞株U251细胞可显著抑制细胞增殖活性(p<0.05),并诱导细胞产生时间依赖性凋亡,24h凋亡细胞百分比增加10.52%,48h凋亡细胞百分比增加50.65%。联合^(60)Coγ照射U251细胞增殖活性较单独转染进一步显著降低(p<0.05)。运用Psilence2.1-U6-H1载体构建的ErbB2-siRNA表达载体可有效抑制U251细胞增殖并促进时间依赖性细胞凋亡;联合^(60)Coγ照射可增加增殖抑制效果。

sARMS-PCR检测非小细胞肺癌肿瘤组织中KRAS、BRAF基因突变研究

目的针对非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织标本鼠类肉瘤病毒癌基因同源基因(KRAS)和鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)驱动基因突变使用特异引物双扩增实时蝎形探针扩增阻滞突变系统(sARMS-PCR)检测的可行性;了解KRAS和BRAF基因突变患者临床病理特征,为NSCLC患者个体化治疗提供理论依据。方法收集89例NSCLC患者肿瘤组织甲醛固定石蜡包埋标本(FFPE),采用FFPE样品DNA分离试剂盒(离心柱型)提取DNA,使用sARMS-PCR同时进行KRAS及BRAF基因突变检测。结果1 KRAS基因突变21例(21/89);其中KRAS基因7种热点突变中,检出6种热点突变,均位于第12、13位密码子,1例同时检出存在G12D及G12V位点突变,1例同时检出存在G12C及G12V位点突变;未发现G12S突变型;2 BRAF基因突变1例(1/89),突变位点为V600E,为女性,黏液腺癌;3未见KRAS和BRAF基因同时突变现象。结论临床使用sARMS-PCR技术检测NSCLC患者KRAS和BRAF基因突变有较强敏感性,且石蜡组织标本取材方便,可以作为两种基因的临床检测方法;KRAS和BRAF基因突变与年龄、吸烟史、病理分型等均无明显相关性,KRAS基因突变与性别相关,男性高于女性;KRAS与BRAF基因是独立存在的。

甲状腺乳头状癌组织中TRAP1表达、BRAF V600E基因突变情况观察及其相关性分析

目的观察甲状腺乳头状癌(PTC)组织中肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)表达、V-raf鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体B1(BRAF)V_(600E)基因突变情况,并分析其相关性。方法 PTC组织100例份(A组)、甲状腺腺瘤组织38例份(B组)、结节性甲状腺肿组织38例份(C组),观察各组TRAP1蛋白表达及BRAFV_(600E)基因突变情况,分析TRAP1表达、BRAFV_(600E)基因突变两者间的相关性及其与PTC临床病理特征的关系。结果A、B、C组TRAP1阳性率分别为71.00%、13.16%、10.53%,BRAFV_(600E)基因突变率分别为52.00%、0、0,A组分别与B、C组比较,P均<0.05。BRAFV_(600E)基因突变与PTC患者年龄及肿瘤直径相关(P均<0.05)。A组中TRAP1表达与BRAFV_(600E)基因突变呈正相关(r=0.445,P<0.05)。结论 PTC组织中TRAP1阳性率及BRAFV_(600E)基因突变率升高,且TRAP1高表达与BRAFV_(600E)基因突变密切相关,两者可能共同参与了PTC的发生发展。

BmNPV-ZJ iap1基因的克隆、序列分析及其对哺乳动物细胞NF-κB的调节作用研究(英文)

利用PCR法克隆得到家蚕核型多角体病毒镇江株 (BmNPV ZJ)的iap 1基因。序列同源分析表明 :BmNPV ZJ的iap 1全长为 85 8bp ,与BmNPV T3株的碱基同源性为 96 % ,与BmNPV T3株相比少了一段编码 7个氨基酸的区域 ,该缺失区域的两侧有着独特的结构 :缺失区的 5′侧为连续编码 7个天冬氨酸的序列 ;缺失区的 3′侧为连续编码3个天冬氨酸的序列。NCBI的DART(DomainArchitectureRetrievalTool)功能域搜索表明 ;BmNPV ZJ的iap1含有 2个杆状病毒BIR功能域 ,但不含RING区域。BmNPV的iap是否具有抗凋亡作用迄今尚未见报道。利用以NF κB为探针的凝胶阻滞分析表明 ,BmNPV ZJ的iap1转染鼠的pc12细胞 ,可逆转肿瘤坏死因子TNFα处理pc12细胞引起的核因子 κB(NF κB)的激活。BmNPV ZJ的iap1对NF κB的作用途径及作用方式 。

ERBB2——心脏再生相关分子

心肌梗死可继发心力衰竭,但由于哺乳动物心肌细胞无法再生,致使心力衰竭成为人类生命的重大威胁。最近,以色列Weizmann科学院学者Gabriele D＇Uva等人发表在《Nature Cell Biology》的研究成果,为心脏再生医学研究提供了新的思路。

miR-26a通过NRAS和E2FE途径增强胃癌细胞对顺铂敏感性的研究

目的探讨mi R-26a通过NRAS和E2FE途径增强胃癌细胞对顺铂的敏感性。方法实时定量PCR检测mi R-26a在顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP和非耐药SGC-7901细胞株中的表达;MTS法分析mi R-26a对顺铂敏感性的影响;膜联蛋白/碘化丙啶(PI)双染色法和流式细胞仪检测调亡。荧光素酶报告性分析和基因检测鉴定mi R-26a靶标;另外,MTS和细胞凋亡分析评估NRAS和E2F2化疗的敏感性。结果与SGC-7901细胞比,mi R-26a在SGC-7901/DDP中的表达降低。运用功能获得和失活实验分析,证实了mi R-26a能增强胃癌细胞对顺铂的敏感性。同时发现NRAS和E2F2的3′-UTR端存在mi R-26a靶位点,且mi R-26a能下调NRAS和E2F2的表达。此外,敲除NRAS或E2F2可增加胃癌细胞对顺铂敏感。结论通过mi R-26a的靶标NRAS和E2F2能增强胃癌细胞对基于顺铂化疗的敏感性;同时,证明了mi R-26a可作为胃癌化疗的潜在增敏剂。

结直肠癌中错配修复蛋白表达缺失的意义及其与大鼠肉瘤病毒癌基因、v-Raf小鼠肉瘤病毒癌基因同源物B基因状态相关性研究

目的分析探讨结直肠癌中4种错配修复(MMR)蛋白的表达及其临床意义,RAS、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)基因状态及其与4种蛋白表达的相关性。方法采用免疫组织化学法检测634例结直肠癌组织中4种MMR蛋白的表达;对存在MMR蛋白表达缺失者进行微卫星不稳定(MSI)检测。对其中236例(含缺失组的53例)进行RAS和BRAF基因检测。计数资料组间比较采用χ^2检验。结果634例中53例(8.4%)发生MMR蛋白表达缺失,Mut L同源基因1(MLH1)、PMS2、人类MutS同源蛋白2(MSH2)和人类MutS同源蛋白6(MSH6)蛋白表达缺失率分别4.4%(28/634)、4.7%(30/634)、3.3%(21/634)、3.6%(23/634)。缺失组的53例进行MSI分子检测,其中49例(92.4%)出现2~5个位点微卫星不稳定,为MSI-H。236例(含缺失组的53例)结直肠癌RAS和BRAF基因检测结果显示,BRAF基因V600E突变11例,均为微卫星稳定(pMMR);v-Ki-ras2大鼠Kirsten肉瘤病毒基因同源基因(KRAS)基因突变109例,其中7例为错配修复基因缺陷(dMMR);NRAS基因2号外显子检测到突变8例,均为pMMR。结论MMR蛋白表达缺失组多发生于右半结肠,组织学分化差且常伴有粘液成分,肿瘤组织间可见显著的淋巴细胞浸润,患病年龄偏低。KRAS基因状态影响MMR蛋白表达。

HCMV感染诱导血管平滑肌细胞同源盒基因表达改变及TLX2基因的克隆与原核表达

目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人血管平滑肌细胞同源盒基因(homeobox gene,HOX)表达的影响,并克隆受HCMV诱导表达的同源框基因,为其功能研究奠定基础。方法以1MOI的HCMV感染人血管平滑肌细胞,分别于感染后24h,48h及72h用基因表达谱芯片检测血管平滑肌细胞基因表达水平的改变,筛选差异表达的同源框基因并进行全长cDNA的克隆和原核表达。结果人血管平滑肌细胞感染HCMV后24、48、72h有9个HOX基因的表达发生变化。其中上调基因3个(HHEX、ZEB2、HOXD8),下调基因6个(EMX2OS、SIX5、PKNOX1、IRX3、MEIS1、ESX1)。在HCMV感染后48、72h,TLX2基因表达上调。成功构建pGEX-4T-1/TLX2重组原核表达质粒,转化BL21后经IPTG诱导表达58×103的重组蛋白,该蛋白能被相应抗体识别。结论 HCMV感染可诱导人血管平滑肌细胞多个HOX基因表达的改变,构建的pGEX-4T-1/TLX2重组质粒获得体外表达,为进一步研究TLX2的功能及HCMV致血管平滑肌增生性疾病的分子机制奠定了基础。