44种生物碱类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果:西萝芙木碱、伊波加因、骆驼蓬碱、哈尔明碱、黄连碱、延胡索碱、白屈菜碱、小檗胺、吐根碱、4-甲氧基-1-甲基-2-喹诺酮、贝母碱N-氧化物、去氢贝母碱N-氧化物、倒千里光碱、9-去甲基小檗碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱、金鸡宁、罂粟碱、喜树碱和酒石酸麦角胺对人鼻咽癌细胞株KB细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱、番茄碱苷和喜树碱,其次为黄连碱、白屈菜碱、哈尔明碱、澳洲茄次碱和延胡索碱。西萝芙木碱、白屈菜碱、哈尔明碱、小檗胺、吐根碱、贝母碱N-氧化物、番茄碱苷、罂粟碱、利血胺和喜树碱对人白血病细胞株HL-60细胞的增殖亦有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱,其次为西萝芙木碱、小檗胺、番茄碱苷和喜树碱。结论:上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱的、有抗肿瘤活性中药的有效成分,亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。

40种香豆素类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞生长抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、牛防风素和考迈斯托醇对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有一定程度的抑制作用。结论:马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有抑制作用;伞形花内酯刘寄奴酸酯、牛防风素和考迈斯托醇对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有抑制作用。

ALA-PDT诱导白血病细胞株HL-60凋亡

背景与目的:基于5-氨基乙酰丙酸的光动力疗法(ALA-PDT)利用肿瘤细胞对ALA产生的内源性光敏剂原卟啉IX(PpIX)的优先摄取,使肿瘤细胞在受到一定的光照后被选择性地杀伤。到目前为止,ALA-PDT引起肿瘤细胞破坏的确切机制尚未完全阐明。本研究探讨ALA-PDT对白血病细胞株HL-60的凋亡诱导作用。方法:以白血病细胞株HL-60为实验模型。实验分为4组,对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA+PDT组。用MTT法检测细胞的存活率,瑞氏染色观察细胞形态学改变,用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,并用共聚焦激光显微镜(LSCM)观察凋亡细胞的特征。结果:ALA+PDT组光照后细胞形态学可见凋亡改变;MTT法显示细胞存活率明显下降,24 h为(46±9)%,48 h为(26±8)%,两者比较差异有显著性(P<0.05);流式细胞仪检测显示光照后4、5和24 h细胞凋亡率分别为(26±9)%、(29±11)%和(51±6)%,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);LSCM观察AnnexinV-FITC单阳性及AnnexinV-FITC/PI双阳性细胞均具有典型的凋亡特征,而单纯ALA组、单纯光照组及对照组则无上述改变。结论:ALA-PDT能杀伤白血病细胞株HL-60,主要通过诱导凋亡的方式实现的,并呈一定的时间依赖性。

姜黄素衍生物对人白血病细胞株HL-60增殖的抑制作用及初步机制探讨

目的对姜黄素进行了相应的修饰得到了二十五个姜黄素衍生物,并在细胞水平对这些化合物的体外抗肿瘤活性及其机制进行初步探讨。方法采用MTT法研究姜黄衍生物(6.25μM、12.5μM、25μM和50μM)在体外对HL-60的成活率的影响,并采用吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)荧光双染法染色及流式细胞术对其作用机制进行了初步探讨。结果MTT实验结果表明姜黄素衍生物对人白血病细胞株HL-60的存活率具有一定的影响,其中9#、12#作用最强,且具有时间和剂量依赖性。AO/EB荧光双染法染色及流式细胞术(PI)结果表明姜黄素衍生物9#、12#可以显著的诱导HL-60细胞凋亡,并呈剂量和时间依赖性。结论姜黄素衍生物9#、12#可能通过诱导细胞凋亡抑制细胞生长。

人重组TFAR19蛋白对白血病细胞株HL-60的促凋亡效应

目的：对一种新发现的凋亡相关基因ＴＦＡＲ１９进行蛋白质水平的促凋亡效应研究，并对其作用机理进行初步的探讨。方法；利用离子交换层析对大肠杆菌表达的人重组ＴＦＡＲ１９蛋白进行纯化，将其加入到培养的白血病细胞株ＨＬ－６０，通过ＤＮＡ片段化、ＰＩ及ＡｎｎｅｋｉｎＶ标记进行流式细胞仪分析，观察ＴＦＡＲ１９蛋白的促凋亡效应。利用ＦＩＴＣ标记ＴＦＡＲ１９蛋白，分析其与细胞的结合及定位。利用Ｃａｓｐａｓｅ－３抑制剂ＤＥＶＤ－ｆｍｋ研究ＴＦＡＲ１９的凋亡信号转导途径。结果：高纯度的重组ＴＦＡＲ１９蛋白剂量依赖性地促进撤除血清的ＨＬ－６０细胞的凋亡，最高可使８２％细胞凋亡，对照为３０％。荧光标记的ＴＦＡＮ１９蛋白能与ＨＬ－６０细胞结合，主要定位于细胞核。ＤＥＶＫ－ｆｍｋ可部分抑制ＴＦＡＲ１９蛋白的促凋亡效应。结论：ＴＦＡＲ１９蛋白能够直接进入ＨＬ－６０细胞，发挥其促进细胞凋亡的效应。这一效应部分地与Ｃａｓｐａｓｅ－３的凋亡执行效应有关。

雄黄纳米微粒对人白血病细胞株HL-60的诱导分化作用

目的：探讨雄黄（As4S4）纳米微粒对于人急性早幼粒白血病细胞HL-60的抑制增殖和诱导分化作用。方法：采用MTT法观察低浓度雄黄对HL-60细胞增殖的影响，Wright-Giemsa染色观察细胞形态，硝基四氮唑蓝（NBT）还原反应和流式细胞术抗原检测等鉴定细胞的分化。结果：细胞经雄黄处理后呈现明显的分化形态。经0．25-1．0μmol·L^-1雄黄作用24h后，NBT阳性率升高。用0．50μmol·L^-1雄黄处理48h，细胞表面分化抗原CD11b表达升高，细胞周期阻滞于G期。结论：低浓度雄黄对HL-60细胞具有诱导分化作用。

三七皂苷R1通过线粒体相关通路促进白血病细胞株HL-60凋亡

目的:观察三七皂苷(notoginsenoside)R1对白血病细胞株HL-60凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法:采用MTT法和流式细胞术(Annexin V-FITC双染法)分别检测三七皂苷R1(10、20、40及80μmol/L)处理HL-60细胞12、24、36及48 h后HL-60细胞的凋亡情况,Western blotting检测HL-60细胞内Bcl-2、Bax及细胞色素C(cytochrome-C,Cyt C)蛋白的表达水平,JC-1染色法观察HL-60线粒体膜电位的变化。结果:MTT和流式细胞术检测显示三七皂苷R1浓度依赖性诱导HL-60细胞的凋亡,且细胞存活率随处理时间的增加而降低;与空白对照组相比,加入三七皂苷R1后细胞中Bcl-2蛋白表达显著减少[(0.45±0.03)vs(1.00±0.00),P<0.05]、Bax蛋白表达显著增加[(1.72±0.08)vs(1.00±0.00),P<0.05];Bcl-2/Bax比值减小[(0.21±0.01)vs(1.00±0.00),P<0.05];线粒体膜电位降低[(0.56±0.09)vs(1.00±0.00),P<0.05];胞质(cyto)中Cyt-C蛋白表达水平显著下降[(0.42±0.03)vs(1.00±0.00),P<0.05]。结论:三七皂苷R1可显著诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制可能是通过线粒体通路促进细胞的凋亡;本实验可为三七皂苷R1用于临床治疗白血病提供实验依据。

天花粉蛋白诱导人类白血病细胞株HL-60细胞凋亡的研究

目的 :研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白 (TCS)诱导人类白血病细胞株HL - 6 0细胞发生凋亡的作用及放线菌酮 (CHX)对此作用的影响。方法 :采用流式细胞术分析及荧光显微镜观察研究TCS诱导HL - 6 0细胞发生凋亡的情况。结果 :流式细胞术分析表明TCS能够诱导HL - 6 0细胞发生明显的凋亡现象 ,TCS (2 0mg/L)处理48h细胞凋亡百分率为 48 7%± 2 3% ( x±s) ,明显高于对照组的凋亡率 (6 3%± 1 0 % ) (P <0 0 5 ) ,而CHX (5mg/L)相同条件下诱导的凋亡率为 6 5 3%± 3 9%。TCS诱导的凋亡现象进一步为荧光显微镜的观察及DNA凝胶电泳所证实 ,TCS处理的细胞中有许多细胞呈现典型的凋亡细胞核形态改变 ,如染色体凝缩、核碎裂等 ;DNA凝胶电泳显示TCS处理的细胞呈典型的梯级格局。进一步研究表明预先以低浓度CHX (0 2mg/L)处理可显著加强TCS的作用 ,而在这个浓度下单独CHX并不诱导明显的细胞凋亡。TCS诱导HL - 6 0细胞的凋亡呈时间和剂量依赖关系。结论 :TCS能够诱导HL - 6 0细胞发生明显的凋亡 ,CHX可加强这种作用。

雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60的生长抑制及凋亡诱导作用

目的 :探讨雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL 6 0细胞的增殖及凋亡的影响。方法 :应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法、荧光染色法、流式细胞仪 (FCM )检测、DNA片段化分析等方法研究雷公藤多甙对HL 6 0细胞的影响。结果 :雷公藤多甙能显著抑制白血病细胞的增殖 ,降低肿瘤细胞的存活率 ,其半数细胞抑制剂量 (IC50 )为5 .0 μg/ml,阻滞细胞周期于G2 /M期 (P <0 .0 5 )。雷公藤多甙实验组在形态学上可见明显凋亡细胞 ,且凋亡细胞百分率显著上升 (P <0 .0 5 ) ,凝胶电泳分析有DNA梯状条带出现。结论 :雷公藤多甙能显著抑制人急性髓性白血病细胞株HL 6

四嗪二甲酰胺对白血病细胞株HL-60体外作用的研究

目的：观察四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）体外抑制白血病细胞株HL-60增殖，诱导细胞分化和凋亡作用，并对其作用机制进行初步探讨。方法：将不同浓度的ZGDHu-1与HL-60细胞在体外培养，台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用；用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V／PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。通过NBT试验、细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14、CD64和细胞形态学检测ZGDHu-1对HL-60细胞的分化作用。用Rh123／PI测定线粒体跨膜电位（△ψm），用流式细胞术检测Bcl-2、Box、P53、Fas和线粒体膜蛋白的表达变化。结果：ZGDHu-1呈现作用时间和剂量的量效性抑制HL-60细胞增殖和活力，10ng·ml^-1 ZGDHu-1作用HL-60细胞24～72h后，MTr法检测细胞增殖抑制率分别为（7．3±0．3）％、（15．8±1．0）％和（21．3±1．2）％，均显著高于对照组（P〈0．01）；48h、72h的IC50分别为180、180ng·ml^-1。HL-60细胞经ZGDHu-1作用后，大部分细胞阻滞于G2-M期，G0/1期细胞减少；出现典型的细胞形态改变，DNA片端化，经50～1000ng·ml^-1的ZGDHu-1作用后，SubG1由（3.2±1．6）％上升至（67．7±5.9）％，与对照组（0．7±0.5）％比较，具有显著性差异（P〈0．05），Annexin-V／PI标记升高，TUNEL染色后的凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HL-60细胞凋亡。HL-60细胞经10～100ng·ml^-1 ZGDHu-1作用3d后，细胞发生部分分化，NBT阳性率增加，细胞表面CD11b、CD13、CD14、CD64表达增加。ZGDHu-1诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中，Bcl-2表达无变化，但Box表达显著增加，Bax／Bcl-2的比值升高，Fas表达增强，而P53表达无变化。随ZGDHu-1作用的浓度增加，△ψm下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论：ZGDHu-1能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力，低浓度时诱导HL-60细胞向粒单系分化，高浓度时促进细胞凋亡，其机制可能与Bax表达上调，线粒体膜电位下降等有关。

黄芩苷对耐阿霉素白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响

本研究探讨中药黄芩苷对耐阿霉素人髓系白血病细胞株HL-60/ADR增殖、凋亡的影响。应用MTT法绘制细胞生长曲线,观察黄芩苷对HL-60/ADR细胞增殖的影响;应用Annexin V FITC/PI双染流式细胞术、DNA片段化、TdT酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;RT-PCR检测黄芩苷作用不同时段后c-myc、bcl-2等凋亡相关基因mRNA的表达水平;Western blot法检测凋亡及信号通路相关蛋白C-MYC、BCL-2、pro-caspase-3、PARP、BAD等的表达变化。结果表明,黄芩苷能明显抑制HL-60/ADR细胞增殖所测得的细胞倍增时间为48小时,半数抑制率为28μmol/L;Annexin V FITC/PI法检测到早期凋亡细胞、DNA片段化,TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈浓度依赖性(20、40、80μmol/L)。黄芩苷作用HL-60/ADR细胞不同时段(12、24、48小时)后c-myc、bcl-2基因mRNA的表达,并随着作用时间的延长而逐渐减弱,C-MYC、BCL-2、procaspase-3、PARP(116kD)蛋白的表达逐渐下降,PARP(85kD)及BAD蛋白表达逐渐增强,呈时间依赖性。结论:黄芩苷能有效抑制HL-60/ADR细胞增殖,诱导其凋亡,上述凋亡相关基因及信号通路相关蛋白可能参与了黄芩苷抑制HL-60/ADR细胞增殖和诱导凋亡的过程。

应用人类全基因组芯片检测多药耐药白血病细胞株HL-60/VCR与敏感细胞株HL-60基因的表达差异

本研究利用基因芯片技术检测白血病多药耐药细胞株HL-60/VCR及其亲本细胞株差异基因表达谱,探讨急性白血病多药耐药机制。本试验提取白血病细胞株HL-60及其多药耐药细胞株HL-60/VCR的mRNA,在反转录及体外转录过程中分别用生物素进行标记,与Affymetrix公司人类全基因组芯片U133A杂交,用Affymetrix专用芯片扫描仪G2500AGeneArrayScanner及MicroarraySuite、MicroDBTMGeneChipLIMS、GeneChipDMT分析软件系统处理杂交信号获取结果。结果表明:白血病细胞株HL-60及其耐药株HL-60/VCR差异显示基因5507条,其中耐药细胞株中上调表达基因3100条,下调表达基因2407条;差异极显著性基因1040条,表达上调435条,下调605条,涉及与细胞生长活动及信号转导相关的基因。结论:多基因参与白血病细胞株的多药耐药机制,基因芯片技术是并行分析多个基因、探讨白血病多药耐药机制的有效方法。

苦参碱诱导白血病细胞株HL-60分化的实验研究

目的 观察苦参碱对HL-60细胞的诱导分化作用。方法 采用体外细胞培养技术,从细胞增殖、形态学变化、NBT还原能力测定、非特异性酯酶染色及细胞表面分化抗原测定等方面观察。结果 苦参碱在12.5μg/ml—50μg/ml浓度范围内能明显抑制HL-60细胞的增殖,细胞向成熟粒系方向分化,NBT还原反应能力增强,α-NAE染色呈阴性,CD_(15)、CD_(11b)阳性率表达上升而CD_(33)阳性率表达降低,CD_(14)阳性率处理前后无变化。结论 苦参碱可能是一种良好的白血病细胞分化诱导剂,具有潜在的抗白血病作用。

低氧对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及HIF-1α表达的影响

探讨模拟低氧环境对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及低氧诱导因子表达的影响。方法 常规方法复苏、传代培养细胞，待细胞进入对数生长期后用于实验。将细胞分为低氧处理组和常氧对照组，常氧对照组采取常规培养，低氧处理组分别用50、200、400、800 μmol/L二氯化钴（CoC1 2 ）处理，并于24、48、72 h收集细胞进行以下指标检测：①倒置相差显微镜观察细胞形态变化；②MTT比色法检测细胞增殖抑制率；③实时荧光定量PCR检测HIF-1α在转录水平的表达。结果 1：低氧模拟环境下，细胞在形态上呈较明显变化，并随CoCl 2 浓度和处理时间的延长变化显著；2：MTT实验结果显示，与常氧对照组比较，CoCl 2 处理组均产生明显抑制作用，抑制率随着药物浓度增加而增大；3：实时荧光定量PCR结果表明，与对照组（24 h）相比，50 μmol/L CoCl 2 和200 μmol/L CoCl 2 低浓度处理组HIF-1α mRNA的表达均有上调，且上调呈剂量和时间依赖关系；结论 1：CoCl 2 模拟低氧后，细胞生长明显受抑；2：低浓度（50~200 μmol/L）CoCl 2 组HIF-1α mRNA表达上调并呈现时间、浓度依赖性；3：本研究涉及的低氧模拟环境对HL-60细胞未引起明显的诱导分化现象。

塞来昔布对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

本研究旨在探讨塞来昔布(celecoxib)对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24 h后,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞技术分析细胞凋亡及细胞周期分布的变化,定量RT-PCR的方法检测细胞周期蛋白D1、E1及COX-2 mRNA的表达。结果表明,不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24 h后,细胞增殖明显受抑,且呈一定的浓度依赖性(r=0.955),24 h的IC50值为63.037μmol/L。塞来昔布可诱导HL-60细胞的凋亡,也呈剂量依赖性(r=0.988)。塞来昔布可使HL-60细胞明显阻滞于G0/G1期,可下调cyclin D1、cyclin E1 mRNA的表达。塞来昔布可使细胞COX-2 mRNA表达水平降低。结论:塞来昔布呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖,并可能通过下调cyclinD1、cyclin E1的表达引起细胞G0/G1期阻滞,下调COX-2的表达诱导细胞凋亡。

阿糖胞苷体外对人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡的相关性研究

目的 研究阿糖胞苷 (Ara -C)在体外对人白血病细胞株HL - 6 0增殖抑制和诱导凋亡的剂量 -时间 -效应关系。通过对Ara -C在不同剂量和疗程时抗白血病的机理研究 ,验证大剂量阿糖胞苷 (HD -AraC)治疗血液肿瘤的优越性。方法 在体外设定的浓度梯度和作用时间下应用Ara -C处理人白血病HL - 6 0细胞 ,采用四氮唑盐还原法 (MTT法 )检测Ara -C对HL - 6 0细胞增殖抑制的剂量 -时间 -效应关系 ,荧光染色观察凋亡细胞形态学改变 ,琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯带 (DNA ,Lad der) ,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化。结果 荧光染色观察到特异性的凋亡小体形成 ,DNA琼脂糖凝胶电泳显示出典型的电泳条带变化 ,流式细胞仪检查见明显的凋亡峰形成 ,细胞周期主要阻滞在sub -G1期。MTT法显示阿糖胞苷作用于HL - 6 0细胞的半数抑制浓度 (IC50 )分别是 2 .4 1 μM和 1 1 .81 μM。统计分析表明 :随着药物浓度的增加和作用时间的延长 ,Ara -C对细胞的增殖抑制和诱发凋亡作用逐渐增强 (P <0 .0 5)。结论 诱导白血病细胞凋亡可能是Ara -C抗白血病的机理之一 ,通过诱导HL - 6 0细胞凋亡从而对其产生明显的增殖抑制作用 ,且与剂量、时间相关。提示应用HD -AraC治疗白血病 ,可以明显提高疗效。

TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响

目的:探讨KCa3.1通道抑制剂TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响。方法:取对数生长期HL-60细胞,给予实验组分别加入终浓度25、50、75、100 nmol/L TRAM-34的培养液,给予对照组加入含10%胎牛血清RPM11640培养液,同步培养24、48和72 h后加入MTT溶液以检测TRAM-34对HL-60细胞的增殖抑制率;在TRAM-34处理后的每个浓度收集细胞1×10~6个,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin VFITC)/碘化丙啶(PI)双染或PI单染流式细胞术分别检测TRAM-34处理后的细胞凋亡率和细胞周期时相分布情况,采用Transwell检测TRAM-34各浓度24、48 h处理后的穿膜细胞数,采用实时定量PCR检测TRAM-34对CDK6、P53及MMP-2 mRNA水平的影响。结果:与对照组相比(0 nmol/L),除低浓度(25 nmol/L)TRAM-34处理24 h对HL-60细胞增殖无影响外,其余浓度和作用时间的增殖抑制率、凋亡率、G_0/G_1期细胞比例及p53 mRNA水平均升高,S期细胞比例、穿膜细胞数及CDK6、MMP-2 mRNA水平均降低,而且以上差异均有统计学意义(P<0.05)。TRAM-34对HL-60以上指标的作用效果随浓度的升高和作用时间的延长而增强,各浓度间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:TRAM-34可抑制HL-60细胞的增殖及侵袭能力,同时可诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,且TRAM-34作用的时间和浓度均对HL-60细胞恶性行为有影响。

NME3蛋白在急性髓系白血病细胞株HL-60和患者骨髓表达趋势研究

为了验证HL-60细胞向粒、单两系分化前后非转移细胞蛋白3(NME3)的表达差异,并探讨该蛋白对急性髓系白血病的诊断价值,采用全反式维甲酸(ATRA)和甾体类新药NSC67657分别诱导急性髓系白血病HL-60细胞向粒系和单核系分化,通过细胞化学染色判断细胞分化方向,通过细胞表面分化抗原(CD11b/CD14)检测判断细胞分化程度,通过磷脂酰丝氨酸外翻排除细胞凋亡,建立细胞分化模型,应用RT-PCR和Western blot方法验证NME3基因和蛋白在细胞分化前后的差异表达情况。收集26例临床确诊的各种类型髓系白血病患者及5例正常人骨髓样本,比较分析NME3蛋白在不同样本组中的表达趋势。结果表明:ATRA(2μmol/L,5 d)和NSC67657(10μmol/L,5 d)可分别诱导HL-60细胞向粒系和单核系分化,其分化程度达到90%以上且不伴随凋亡发生,NME3基因与蛋白表达在细胞两系分化后明显下降。对患者骨髓有核细胞分析发现,NME3蛋白在急性髓系白血病患者骨髓样本中表达较慢性髓系白血病患者组及正常对照组明显升高。结论:NME3蛋白在HL-60细胞分化后表达下调,与其在患者样本中的表达趋势相符,提示该蛋白可能作为急性髓系白血病潜在的分子标志物。

柔红霉素对人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞及干扰素调节因子1、8、9表达的影响

目的研究柔红霉素(Daunorubicin,DNR)对人急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60细胞中干扰素调节因子1(IRF1)-mRNA、干扰素调节因子8(IRF8)-mRNA、干扰素调节因子9(IRF9)-mRNA表达的影响。方法将HL-60细胞株设为HL-60组、HL-60+DNR组,同时取3例正常人外周血白细胞为NC组。HL-60组为未加药处理组,HL-60+DNR组为小剂量DNR持续作用HL-60细胞10 d。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IRF1-mRNA、IRF8-mRNA、IRF9-mRNA转录水平,每组实验重复3次。结果与NC组相比,IRF1-mRNA、IRF8-mRNA转录水平在HL-60组显著下调(P<0.05),而HL-60+DNR组显著上调(P<0.05);与NC组相比,IRF9-mRNA转录水平在HL-60+DNR显著上调(P<0.05),在HL-60组则表现为下调,但无统计学差异(P>0.05)。结论 DNR可上调HL-60细胞中的IRF1、IRF8、IRF9表达水平。APL经DNR治疗后,可能通过上调IRF1、IRF8、IRF9的表达诱导白血病细胞的凋亡,促进其成熟,促进病情的缓解。

短发夹状RNA介导的RNAi对白血病细胞株HL-60的抑制作用

目的为探讨RNA干扰对HL-60细胞的抑制作用,构建survivin的短发夹状RNA真核表达载体并将其导入白血病细胞株HL-60细胞。方法设计、合成两对针对survivin的短发夹状RNA序列,连接到带有人U6启动子的载体质粒pSINsi-hU6中,将构建重组质粒命名为pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2。pSIN/shRNA1转染HL-60细胞,应用四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果酶切分析和测序证实pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2构建成功。MTT测定显示转染重组质粒pSIN/shRNA1进入HL-60细胞48、72、96 h后细胞增殖明显受到抑制,分别与阴性对照组、空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪分析pSIN/shRNA1细胞凋亡率达(20.21±0.75)%,明显高于阴性对照组的(2.58±0.48)%和空白对照组的(1.26±0.30)%(P<0.05)。结论构建survivin基因RNAi真核表达载体成功;pSIN/shRNA1序列可特异性地抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡。