槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖和侵袭及机制研究

探讨槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖和侵袭及机制。方法 根据实验方式进行分组,分为对照组、槐定碱组、氯喹+槐定碱组。对槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖、侵袭能力、迁移能力及活性氧蛋白水平激发情况进行分析,其中细胞增殖的抑制作用利用MTT法检测、侵袭能力利用Transwell小室法检测、细胞的迁移能力利用细胞划痕试验检、活性氧蛋白水平利用Western-blot法检测。结果 与对照组中的超微结构结构相比,U251恶性胶质瘤细胞株在经过槐定碱处理后,其胞质中出现大小不等的自噬体,而这部分自噬体中含有溶酶体、胞质等未消化的细胞器。MTT法检测发现在使用槐定碱试剂进行干预后,槐定碱组中槐定碱对U251恶性胶质瘤细胞生长的半数抑制浓度为(16.45±2.41),高于氯喹+槐定碱组的(2.67±0.56)及对照组的(1.01±0.03);通过Transwell小室检测细胞迁移率发现槐定碱组低于氯喹+槐定碱组及对照组(P<0.05);LC3Ⅱ/Ⅰ、活性氧水平分析中槐定碱组高于氯喹+槐定碱组及对照组(P<0.05);同时Person相关性分析提示活性氧与细胞中呈正相关性(r=0.431,P<0.05)。结论 通过分析发现,槐定碱能够通过调节、诱导自噬来抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖、侵袭、迁移,并涉及细胞中活性氧水平的改变。

曲古菌素A诱导髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的分子途径

目的 研究曲古菌素A(TSA)诱导髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的分子途径。方法 不同浓度 ( 50、1 0 0、2 0 0、30 0、4 0 0nmol/L)的TSA在不同时间范围 ( 1 2、2 4、36、4 8和 6 0h)作用于U937细胞。用流式细胞仪检测细胞的凋亡率和Fas抗原 (CD95)的表达 ,用Westernblot法检测凋亡蛋白caspase 6、caspase 8和caspase 9的蛋白表达。结果 TSA诱导髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡 ,并呈时间、剂量依赖性。在IC5 0 浓度 ( 30 0nmol/L)作用 2 4h凋亡细胞超过 50 % ;1 0 0～ 30 0nmol/LTSA作用 2 4h ,U937细胞Fas抗原表达也明显升高 (P <0. 0 1 )。TSA作用凋亡蛋白caspase 6、caspase 8和caspase 92 4h后 ,蛋白表达明显增高 (P <0 . 0 5)。结论 TSA诱导白血病细胞系U937凋亡涉及死亡受体参与的外源性途径和线粒体参与的内源性途径。

三氧化二砷对人胶质瘤细胞株U251影响的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)抗人胶质瘤细胞株U251的作用及机制.方法采用0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L As2O3诱导人胶质瘤细胞株U251,于培养第1、2、3、4、5、6 d应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪观察人胶质瘤细胞株U251的存活,形态学改变及细胞DNA含量的变化.结果0.5～4μmol/L的As2O3明显抑制U251的增殖.流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,诱导细胞凋亡.结论体外三氧化二砷能抑制人胶质瘤细胞U251增殖,提示有希望用于神经胶质瘤患者的治疗.

三种草胡椒属植物对人白血病U937细胞增殖和凋亡的影响

目的:考察三种草胡椒属植物豆瓣绿、石蝉草和草胡椒的乙醇提取物及其极性萃取部位对人单核细胞白血病细胞(U937)增殖和凋亡的影响。方法:分别用95%乙醇加热回流提取三种植物,回收溶剂后用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物和水层。采用噻唑兰(MTT)法测定三种植物对U937细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33342染色分析U937细胞形态学改变,流式细胞仪结合Annexin V-FITC染色检测细胞凋亡,PI染色检测细胞周期变化。结果:MTT法分析表明豆瓣绿、石蝉草和草胡椒的乙醇提取物及其乙酸乙酯部位均能显著抑制U937细胞增殖,乙酸乙酯部位抑制作用更强,水层在高浓度下有一定的抑制作用。其中以豆瓣绿抑制U937细胞增殖的活性最强。流式细胞仪分析结果表明豆瓣绿醇提物乙酸乙酯部位呈浓度和时间依赖性诱导U937细胞凋亡,荧光染色发现其诱导细胞凋亡的特征明显,通过流式细胞仪检测还表明细胞周期发生阻滞:G2/M期细胞所占比例降低、S期升高、G1期降低。结论:石蝉草、豆瓣绿和草胡椒的乙醇提取物及其乙酸乙酯部位均有抑制U937肿瘤细胞增殖的作用,豆瓣绿的乙醇提取物及其乙酸乙酯部位能诱导U937细胞凋亡和S期周期阻滞。

金雀异黄素对胶质瘤细胞株U251MG凋亡的影响

目的研究金雀异黄素(Genistein)对人胶质瘤U251MG细胞凋亡的影响及机制。方法碘化丙啶(propidium iodide,PI)和Annexin V-FITC双染色的流式细胞分析方法检测凋亡,并通过流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测Bcl-2、bax蛋白的表达。结果 Genistein在25μg/ml和50μg/ml作用48 h后,早期凋亡率均较对照组明显增加(P<0.01),并呈剂量依赖性。Bcl-2蛋白表达较对照组明显下降(P<0.01),而bax蛋白则较对照组明显增加(P<0.01),呈剂量依赖性。结论 Genistein可诱导胶质瘤U251MG细胞凋亡,其机制可能与其上调bax蛋白以及下调Bcl-2蛋白的表达有关。

人参茎叶总皂甙对人白血病细胞株的诱导分化作用

实验选用人参茎叶总皂甙(GSL)对人单核样白血病细胞株U—937,早幼粒白血病细胞株HL—60进行了诱导分化作用的研究,结果表明:GSL对U—937细胞具有较强的诱导分化作用,形态及功能上均出现向单核细胞成熟分化的特征,并表现出分化后的细胞周期动力学的特征性变化。对HL—60细胞也有一定的诱导分化作用,但分化程度低于U—937细胞。

塞来昔布对胶质瘤U251细胞株生长的影响

目的:探讨COX-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)对胶质瘤的抑制作用及可能的作用机制。方法:采用胶质瘤细胞株U251移植裸鼠后,服用塞来昔布,测量肿瘤重量;流式细胞仪检测药物对肿瘤细胞凋亡的影响;电镜观察药物作用前后肿瘤细胞超微结构的变化;免疫组织化学观察肿瘤微血管密度(MVD)。结果:药物治疗组和对照组肿瘤的重量分别为(51.3±3.85)mg和(125.2±7.34)mg;治疗组细胞凋亡增多;超微结构可见有凋亡特征的细胞。免疫组织化学可见MVD分别为(25.7±3.25)/HP和(76.4±9.41)/HP。结论:塞来昔布能够减少肿瘤血管生成,促进肿瘤细胞凋亡,从而对肿瘤具有抑制作用,对胶质瘤的治疗具有重要意义。

苦参碱提高胶质瘤细胞U251对NK细胞杀伤敏感性的实验研究

目的:观察苦参碱(Matrine)对人胶质瘤细胞U251生长抑制作用及作用前后U251细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化。方法:CCK-8法和台盼蓝染色法检测苦参碱对U251细胞生长抑制作用和细胞存活率;流式细胞仪法检测作用前后U251细胞周期变化及表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3)和HLA-Ⅰ类分子表达;乳酸脱氢酶释放法检测苦参碱作用前后U251细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化。结果:苦参碱能抑制U251细胞生长,随着药物浓度增大和作用时间延长,抑制率逐渐升高、存活率逐渐下降;苦参碱作用后细胞发生G1/S期阻滞;细胞表面NKG2D各配体表达率明显升高,与作用前相比差异有统计学意义(P<0.05),HLA-Ⅰ类分子的表达率无明显变化(P>0.05);效靶比5:1、10:1、20:1时,作用前后U251细胞对NK细胞杀伤敏感性差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱能抑制U251细胞的生长,改变其周期,上调U251细胞表面NKG2D各配体表达率,增强其对NK细胞的杀伤敏感性。

塞来昔布对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡和Survivin表达的影响

背景与目的：选择性COX-2抑制剂塞来昔布是近年来开发的新型非甾体类抗炎药。大量实验证明塞来昔布具有明显的抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用,这在结直肠肿瘤和家族性腺瘤性息肉病中已经得到了证实。本研究观察塞来昔布在体外对人胶质瘤细胞株U251的抑制增殖和诱导凋亡的作用,并探讨该作用与Survivin表达之间的关系。方法：用不同浓度塞来昔布溶液处理对数生长期的U251细胞,在倒置显微镜下动态观察瘤细胞的生长情况。用MTT比色法检测不同时间点各药物浓度组细胞增殖情况。不同浓度塞来昔布处理U251细胞48h后,用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,免疫细胞化学法及Westernblot法检测各组细胞中Survivin蛋白的表达情况,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）半定量法检测各组细胞中survivinmRNA的表达水平。结果：塞来昔布处理后细胞出现明显凋亡样形态学改变。10~100μmol/L塞来昔布对U251细胞增殖均有抑制作用,该作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。塞来昔布处理U251细胞48h后,流式细胞检测结果显示出明显的细胞凋亡,凋亡率随着塞来昔布浓度的增高而升高;免疫细胞化学结果显示,对照组细胞中Survivin蛋白高表达,实验组中随着塞来昔布浓度的增加阳性细胞数目逐渐减少、染色逐渐减淡、蛋白表达的灰度值亦随之上升;Westernblot结果显示随着药物浓度的增高,Survivin蛋白表达量逐渐降低;半定量RT-PCR检测结果显示,塞来昔布作用后U251细胞中survivinmRNA表达明显降低,各实验组与对照组之间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：塞来昔布可明显抑制胶质瘤U251细胞增殖并促使瘤细胞凋亡,这些作用呈时间和剂量依赖性。塞来昔布抗肿瘤的作用机制可能与下调survivin的表达有关。

人类巨细胞病毒感染对U251细胞HOXB1基因表达的影响

目的 :通过研究人神经胶质瘤U2 5 1细胞株的HOX基因表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对U2 5 1细胞HOXB1基因表达的影响 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。方法 :应用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :U2 5 1细胞表达HOXB1基因 ;HCMV感染后 ,U2 5 1细胞HOXB1基因表达明显上调 ;ATRA能显著上调HCMV感染后U2 5 1细胞HOXB1基因的表达。结论 :HCMV感染能诱导U2 5 1细胞HOXB1基因表达上调 ,HCMV有可能通过调控HOXB基因表达异常引起胚胎发育畸形。

预激方案CAG治疗急性髓细胞白血病的疗效及作用机制

目的观察含粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的预激方案在治疗初治急性髓细胞白血病(AML)中的疗效,并进一步研究其作用机制。方法13例初治AML患者予以含G-CSF、低剂量阿糖胞苷(Ara-C)和阿克拉霉素(ACR)的CAG方案。以U937细胞株为体外实验模型,流式细胞仪检测细胞早期凋亡标记Annexin V以及进行细胞周期分析。结果一疗程完全缓解率为46.2%(6/13),部分缓解率为38.5%(5/13),总有效率84.7%(11/13);二疗程完全缓解率为76.9%(10/13)。体外实验中,经CAG处理后,早期凋亡标记Annexin V明显升高(P<0.01)。细胞周期检测显示,CAG处理24 h后,S期细胞比例明显升高(P<0.05)。结论G-CSF可增加化疗药物对AML的疗效,其作用机制主要是通过G-CSF促使G0期白血病细胞进入细胞增殖周期,增加细胞周期特异性化疗药物的细胞毒性,诱导细胞凋亡是主要途径。

ErbB2 RNA干扰联合^(60)Co γ照射对U251细胞增殖及凋亡的影响

构建特异性抑制白血病病毒致癌基因同源体2(ErbB2)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,并检测联合^(60)Coγ照射对U251细胞增殖抑制及促进凋亡作用。设计、合成ErbB2特异性的19bp短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到Psflence2.1-U6-H1载体中,构建ErbB2特异siRNA的表达载体,HindⅢ和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染U251细胞,四甲基偶氮唑盐法(Methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)检测细胞增殖活性,Hoechst 33258染色,Annexin-(?)检测细胞凋亡情况。经双酶切与测序鉴定成功构建ErbB2-siRNA表达载体,转染星型胶质瘤细胞株U251细胞可显著抑制细胞增殖活性(p<0.05),并诱导细胞产生时间依赖性凋亡,24h凋亡细胞百分比增加10.52%,48h凋亡细胞百分比增加50.65%。联合^(60)Coγ照射U251细胞增殖活性较单独转染进一步显著降低(p<0.05)。运用Psilence2.1-U6-H1载体构建的ErbB2-siRNA表达载体可有效抑制U251细胞增殖并促进时间依赖性细胞凋亡;联合^(60)Coγ照射可增加增殖抑制效果。

胶质瘤细胞中上皮剪接调控蛋白1(ESRP1)对人髓细胞白血病基因(MCL1)剪接的调控

目的研究胶质瘤细胞系U251中上皮剪接调控蛋白1(ESRP1)对人髓细胞白血病基因1(MCL1)转录本剪接的调控作用。方法对胶质瘤患者数据库中MCL1的测序结果进行数据挖掘,寻找关键位点。构建pc DNA-ESRP1外源表达载体并在U251细胞中进行过表达,通过反转录PCR和Western blot法检测MCL1不同异构体的表达情况。结果 ESRP1在U251细胞中的蛋白表达水平较正常胶质细胞低,MCL1异构体1在U251细胞中的表达高于正常胶质细胞,而异构体2和异构体3的表达则低于正常胶质细胞;在U251细胞中过表达ESRP1以后,发现异构体1表达较未转染组下降,而异构体3表达则显著升高,异构体2表达无明显变化。此外,第801G、802A缺失的MCL1无法被ESRP1正确剪切,异构体1和异构体3的表达与ESRP1转染前后无显著差异。结论抑制ESRP1表达或RNA识别位点突变可以引起肿瘤中癌基因转录本剪接异常。

Stra 6基因的克隆及其在U251细胞中的表达定位

目的:从人胎盘cDNA文库中获得Stra6基因的全长阅读框架,通过融合GFP蛋白的表达观察其在人脑胶质母细胞瘤细胞株U251中的表达定位及形态学影响。方法:应用高保真PCR技术从人胎盘cDNA文库中扩增出特异片段,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-Stra6,转染U251细胞,荧光倒置显微镜观察蛋白表达定位及对形态学影响。结果:获得含人Stra6基因全长阅读框架的重组质粒pEGFP-Stra6,融合GFP的Stra6蛋白大多表达于细胞质和细胞膜。可观察到转染后的细胞呈现分化状态。结论:Stra6基因过表达使U251细胞形态改变,可能在细胞分化中起作用。

白藜芦醇联合硫化氢体外诱导U251脑胶质瘤细胞凋亡作用研究

目的探讨白藜芦醇联合体外诱导U251脑胶质瘤细胞凋亡作用。方法采用四甲基偶氮唑兰（MTT）还原检测法检测白藜芦醇联合硫化氢对u251脑胶质瘤细胞生长。结果用白藜芦醇联合处理细胞24小时后，诱导了细胞凋亡和调节细胞周期，凋亡率与对照组比较明显升高（P〈O．05）。结论白藜芦醇联合硫化氢能抑U251脑胶质瘤细胞生长，其机制可能是通过诱导凋亡来发挥作用的。

金花茶花、种子和叶提取物对U937和HCT116细胞增殖抑制的实验观察

目的比较金花茶花、种子和叶提取物对人白血病细胞(U937)和结肠癌细胞(HCT116)增殖抑制的作用。方法常规传代培养2种肿瘤细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞活性。结果金花茶花和种子的95%乙醇提取物对U937和HCT116细胞增殖均有抑制作用,且细胞存活率随样品质量浓度的加大而降低。金花茶叶乙醇提取物和水提取都显示了较强的抑制U937细胞增殖的作用,呈现出剂量效应关系。而金花茶叶子的不同提取物对HCT116细胞增殖没有作用。结论金花茶花、种子和叶子均有抗肿瘤的作用。

PTEN基因重组腺病毒载体对脑胶质瘤U251生长和凋亡的影响

目的探讨PTEN基因对人脑胶质瘤细胞株U251生长及凋亡的影响。方法携带PTEN基因的重组腺病毒载体转染U251细胞株,采用RT-PCR技术和Western blot方法检测Ad-PTEN-GFP组及Ad-GFP及Control组中PTEN mRNA及蛋白水平表达,用MTT及流式细胞仪检测各组细胞生长、周期及凋亡率等变化,Western blot检测细胞蛋白水平表达的变化。结果 Ad-PTEN-GFP转染U251细胞后,经荧光显微镜、PCR和Western blot证实转染成功。Ad-PTEN-GFP转染U251细胞后,细胞生长明显受抑制(P<0.05)。Ad-PTEN-GFP转染组中p-Akt及P65蛋白水平下降,与Control组相比差异有统计学意义。结论 PTEN基因转染后能抑制人脑胶质瘤U251的生长,调控细胞周期,可能通过PTEN-Akt-NF-кB促进细胞凋亡。

FL转基因细胞的构建及膜型FL对U937细胞的体外促增殖效应

目的构建稳定表达人膜型FL分子的转基因细胞株,观察膜型FL和可溶性FL对单核细胞性(M5型)白血病细胞株的体外促增殖效应。方法利用PCR方法克隆人FL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term,转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。采用RT-PCR和流式细胞仪表型分析等方法进行鉴定。MTT法分析了L929/FL细胞和可溶性FL体外刺激U937细胞的增殖效应。结果成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞L929/FL,膜型FL在体外能够有效促进U937细胞增殖,而可溶性FL并不能有效促进U937细胞的体外增殖。结论成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞,并且提示膜型FL在白血病发病机理中可能具有重要作用。

六亚甲基二乙酰胺对急性白血病细胞株HL-60和U937分化、凋亡的影响及其机制

目的 研究六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)体外诱导HL 6 0和U937细胞分化、凋亡的作用及其机制。方法 流式细胞仪检测细胞分化抗原CD1 1b、CD1 4,细胞凋亡标记Annexin Ⅴ以及进行细胞周期分布和细胞内cyclinD、cyclinE、p2 7抗原的分析 ,RT PCR检测c myc、Rb、Bcl 2基因mRNA的表达。结果 HL 6 0、U937细胞经HMBA处理 72h后CD1 1b表达显著增高 ,高剂量HMBA促使Annexin Ⅴ表达增加。HMBA阻滞HL 6 0、U937细胞于G0 G1 期 ,并使该两种细胞内cyclinE表达显著下降 ,cyclinD、p2 7表达显著增高 ,呈剂量依赖关系 ;HMBA可使HL 6 0、U937细胞c myc、Bcl 2mRNA表达下调 ,而RbmRNA在HL 6 0细胞表达上调 ,在U937细胞则无显著改变。结论 HMBA能诱导HL 6 0、U937细胞出现明显的分化 ,高剂量的HMBA有促使HL 6 0、U937细胞凋亡的倾向 ,其机制可能是通过影响细胞周期调控分子以及有关的增殖分化相关基因的表达 ,从而抑制细胞增殖 ,促进细胞分化。

鱼藤素对U937细胞细胞周期及核孔蛋白Nup98和Nup88的调控作用

为探讨鱼藤素对人类白血病细胞株U937细胞体外抗癌作用的分子机制，采用MTT法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞周期分布，激光共聚焦显微镜检测Nup98和Nup88蛋白表达变化，免疫电镜和流式细胞术观测鱼藤素对Nup98和Nup88的调控，Western blot检测鱼藤素对U937细胞Nup98和Nup88蛋白表达的影响。