RNA结合蛋白RBPMS调控急性髓系白血病细胞系THP-1增殖与迁移

目的研究具有多重剪接功能的RNA结合蛋白(RBPMS)对携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系THP-1功能的影响。方法使用GEO数据库分析造血系统中RBPMS的表达情况;通过慢病毒感染THP-1细胞,RT-qPCR和Western blot检测RBPMS过表达效率;通过高通量测序检测RBPMS过表达后对THP-1细胞转录组的影响。分别用CCK-8法和流式细胞仪检测RBPMS过表达对白血病细胞增殖以及迁移能力的影响。结果RBPMS在携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病干细胞中异常低表达。RBPMS过表达后THP-1细胞的增殖和迁移能力显著降低(P<0.0001,P<0.05)。结论RBPMS可以抑制携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系的细胞增殖与迁移。

低浓度丁酸和白细胞介素5诱导人嗜酸性粒细胞白血病细胞系细胞分化的初步研究

目的 探究低浓度丁酸和白细胞介素5(IL-5)诱导人嗜酸性粒细胞白血病细胞系(EoL-1)分化为嗜酸性粒细胞的最优时间。方法 使用50μM丁酸和1 ng/ml IL-5诱导EoL-1细胞分化,分别在第0、3、6、9 d时,通过倒置显微镜观察细胞生长状态,并拍照记录。通过实时定量荧光聚合酶链式反应(Q-PCR)技术检测第0、3、5、6、9 d时,嗜酸性粒细胞相关因子的相对表达情况。HE染色观察细胞核形态变化及胞浆中嗜酸性颗粒蛋白染色情况。结果 低浓度丁酸和IL-5刺激后,光镜下可见随着刺激天数增加,细胞增殖速度降低,成团生长减少,细胞数量降低。Q-PCR结果显示,嗜酸性粒细胞相关因子IL-5、IL-10、IL-13、IL-17A、干扰素γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、趋化因子26(CCL-26)的表达水平在第5天、第6天高于其他天数。HE染色结果显示,刺激6 d时,细胞核由椭圆形变为双叶核,细胞质中嗜酸性颗粒增多,胞浆被染为红色。结论 低浓度丁酸和IL-5诱导EoL-1细胞分化为嗜酸性粒细胞,6 d左右为最优时间。

裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性研究

目的:建立裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系并研究其生物学特性。方法:采用逐步递增长春新碱(VCR)剂量的方法培养高成瘤性人白血病细胞系K56g-n,采用细胞培养技术、透射电镜观察、流式细胞术、RT-PCR、免疫组化、染色体核型分析及体内接种等方法研究其生物学特性。结果:建立1株裸鼠高成瘤性人白血病多药耐药细胞系K562-n／VCR。与K562-n细胞比较,K562-n／VCR细胞对VCR耐药为其297.38倍,对蒽环类、鬼臼类等多种化疗药物具有交叉耐药性,bcr-abl融合基因仍为阳性,裸鼠体内成瘤性不变,但成瘤潜伏期缩短,成瘤体积明显增大。结论:裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系K562-n／VCR具有其独特的生物学特性。

三株人白血病细胞系/SCID小鼠模型的建立及其生长特性

本文报道了3株人白血病细胞系(HL-60,CEM和J6-1/SCID)小鼠模型的建立及其生长特点。发现人粒细胞白血病细胞系(HL-60)和T淋巴细胞系(CEM)给SCID小鼠静脉或腹腔移植后均发生全身性白血病,外周血可见白血病细胞。J6-1细胞(可能来自恶性淋巴瘤)眼眶后静脉移植后具有恶性淋巴瘤生长特点,在局部形成瘤块(与瘤细胞漏出血管有关),并侵及颌下淋巴结,无全身性播散。由此可见,人白血病细胞/SCID小鼠模型更类似于人类白血病,是进行人类白血病研究新的良好的模型。

端粒酶活性与白血病细胞系的分化

为了探讨白血病细胞的分化和端粒酶活性改变的关系。方法：采用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ方法检测白血病细胞株Ｋ－５６２和ＨＬ－６０诱导分化前后的端粒酶活性。结果：未经药物处理的Ｋ－５６２和ＨＬ－６０细胞有高的端粒酶活性；用苦参碱作用Ｋ－５６２细胞和维甲酸处理ＨＬ－６０细胞一定时间后，端粒酶活性被明显抑制：分化诱导剂不能直接抑制端粒酶活性；端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态有关。结论：分化是细胞自身调控的过程，端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态密切相关。

多克隆细胞系的研究价值——J6-1人白血病细胞系30年研究评述

J6-1细胞系是我国建立的第一株人白血病细胞系,是EBV和HHV-6双重感染的多克隆细胞系。J6-1细胞系建系30年来,从J6-1细胞克隆了许多细胞因子、受体及其他基因,提供了许多有关白血病细胞性质和功能的信息,从而衍生出多项研究课题,而所有这些显示出多克隆细胞系特有的研究价值。本文就30年来J6-1人白血病细胞系的研究作一评述,包括J6-1细胞系的异质性和多克隆性,J6-1细胞群体的生存机制和J6-1细胞系的异常细胞间通讯及其意义,以及J6-1细胞系的启示。

抗CD44单克隆抗体A3D8对人白血病细胞系HL-60细胞增殖及分化的影响

目的 探讨抗CD4 4单克隆抗体A3D8对HL 6 0细胞增殖及分化的影响 ,寻找急性髓系白血病(AML)治疗的新靶点。方法 以AML细胞株HL 6 0为模型 ,通过观察细胞生长、形态学、表面分化抗原、细胞周期和细胞因子表达 ,以及应用硝基四氮唑蓝 (NBT)还原实验来研究抗CD4 4单克隆抗体A3D8对细胞增殖及分化的影响。结果 HL 6 0细胞高表达CD4 4 ;A3D8以浓度和时间依赖性方式抑制HL 6 0细胞生长。A3D8使HL 6 0细胞周期阻滞在G0 /G1期 ,CD11b、CD14表面抗原阳性率明显增高 ,细胞体积增大 ,核 /浆比例减小 ,核染色质聚集 ,NBT还原实验阴性 ,细胞表达粒细胞集落刺激因子mRNA ,呈现向单核细胞系方向分化。结论 A3D8可抑制HL 6 0细胞增殖 ,并诱导其向单核系细胞分化 ,CD4 4有可能成为AML治疗的新途径。

4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用

目的研究4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用。方法用流式细胞术(FCM)和RT-PCR法检测4-1BBL分子在U937、SHI-1细胞系的表达;将激发型4-1BBL单抗(1F1)与U937、SHI-1细胞系分别进行培养,细胞计数分析2个细胞系的生长情况;收集U937细胞的培养上清,ELISA法检测细胞因子。结果FCM测得U937和SHI-1细胞有4-1BBL分子表达,RT-PCR法测得4-1BBLmRNA;细胞计数表明,1F1明显促U937、SHI-1细胞系生长(P<0·01);ELISA示1F1与U937细胞共培养48h,其上清液中IL-6含量(55·91±10·23)pg/ml,显著高于IgG1同型对照组的(12·14±3·8)pg/ml(P<0·01)。结论U937和SHI-1细胞系组成性表达4-1BBL分子;1F1与U937、SHI-1细胞的4-1BBL分子交联后,可促进U937、SHI-1细胞系生长,诱导U937细胞分泌细胞因子IL-6。

细胞外调节蛋白激酶与端粒酶对肝癌和白血病细胞系凋亡的调控作用(英文)

为了观察化疗药物三尖杉酯碱(HRT)、长春新碱(VCR)和依托泊苷(VP-16)抑制肝癌细胞系SMMC7721和白血病细胞系K562细胞增殖、促进细胞凋亡过程中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化,应用MTT、流式细胞术、端粒重复序列扩增法(TRAP)、生物发光分析及Western印迹等方法进行了检测和分析。研究结果发现,一定浓度的化疗药物作用24小时后,可以抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡;在同样作用条件下,端粒酶活性和磷酸化ERK1/2的表达也受到一定程度的抑制,其中以HRT的作用最明显。结论:HRT,VCR和VP-16可能是通过抑制Ras/Raf/MEK/ERK1/2信号传导通路、降低ERK活性、减少ERK1/2靶基因的转录活化、间接下调端粒酶活性这一共同的作用机制而发挥作用的;细胞凋亡是端粒持续缺失的的结果。

蛋白酶体抑制剂对白血病细胞系细胞周期的影响

近年来的研究显示蛋白酶体抑制剂可诱导多种人肿瘤细胞系的凋亡 ,机制之一是其对细胞周期的影响。本实验就蛋白酶体抑制剂Z LLL CHO对白血病细胞系M 0 7e、TF 1、HL 60细胞周期的影响进行了初步研究。应用MTT法显示Z LLL CHO对三株白血病细胞系呈不同程度的细胞杀伤效应。流式细胞仪检测显示应用 2 .5 μmol LZ LLL CHO 8h后可使G2 M期细胞比例增加 ,此种效应在S +G2 M期比例最高的HL 60中最为显著。对凋亡峰的考察发现 ,Z LLL CHO作用后可使细胞凋亡峰的比例增加 ,但与其对细胞周期的影响程度无明显相关性。上述结果提示蛋白酶体抑制剂作用后可使白血病细胞系G2 M期细胞比例增加 ,细胞对其诱导凋亡的敏感性与细胞周期受影响的程度无明显相关性 ,提示其他的相关机制参与了蛋白酶体抑制剂诱导白血病细胞凋亡的调控。

人单核细胞白血病细胞系SHI-1的多药耐药和耐药蛋白的表达

目的探讨人单核细胞白血病细胞系SHI-1多药耐药谱及其机制。方法噻唑蓝(MTT)检测SHI-1细胞对柔红霉素、鬼臼乙叉甙、高三尖杉酯碱、紫杉醇和长春新碱的敏感性;流式细胞术(FCM)检测SHI-1细胞中P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)等耐药蛋白的表达。结果MTT药敏实验结果显示SHI-1细胞存在着多药耐药,尤其对VP-16最为明显。FCM检测显示SHI-1细胞中P-gp阳性比例10.78%,相对荧光强度(RFI)为1.02;GST-π阳性率93.52%,RFI6.91;LRP阳性率92.86%,RFI8.00;MRP阳性率4.54%,RFI1.38;BCRP阳性率3.84%,RFI1.06。结论SHI-1细胞存在多药耐药,以对VP-16最为明显,其耐药机制可能与LRP和GST-π的高表达有关。

蛋白酶体抑制剂可增加足叶乙甙对白血病细胞系M-07e和TF-1的凋亡诱导效应

近年来的研究显示泛素 蛋白酶体通路在细胞凋亡调控中发挥了重要的作用。本实验就蛋白酶体抑制剂Z LLL CHO与经典的凋亡诱导剂足叶乙甙 (VP16)对白血病细胞系M 0 7e及TF 1的联合效应进行了初步研究。应用MTT法及台盼蓝拒染法显示Z LLL CHO及VP16联合作用于M 0 7e及TF 1细胞 ,可增强两种药物单独的细胞杀伤效应。流式细胞术检测提示单独应用Z LLL CHO及VP16均可使S +G2 /M期细胞比例增加 ,两者联合应用导致细胞凋亡峰比例的显著增高。通过对M 0 7e细胞裂解物做免疫印迹检测 ,发现在Z LLL CHO及VP16单独作用中均导致Bcl 2蛋白被酶解为 2 2kD的片段 ,而联合作用时Bcl 2的酶解现象具有叠加效应。结论 :Z LLL CHO与VP16联合作用较单独作用有更强的细胞杀伤及诱导细胞凋亡活性 ,细胞周期S +G2 /M期比例的增加及Bcl 2酶解片段的增加是导致蛋白酶体抑制剂Z LLL CHO及VP16对白血病细胞系联合效应的可能机制。

人白血病细胞系P2X_7受体的表达及其介导的细胞内钙浓度变化

采用半定量RT-PCR和流式细胞术,在基因和蛋白水平研究了白血病细胞系U937、HL60和Ramos细胞P2X7受体的表达。荧光染料Fura-2/AM负载后,用荧光分光光度计测定P2X7受体激动剂三磷酸腺苷(adenosine 5'-triphosphate,ATP)和苯甲酰苯甲酸ATP(2',3'-O-(4-benzoyl)benzoyl-ATP,BzATP)刺激前后细胞内钙离子浓度的变化,以确认其功能。结果表明:U937和HL60细胞系表达P2X7受体的mRNA和蛋白,Ramos不表达;在激动剂的刺激下,可引发U937和HL60细胞胞内钙浓度的显著升高,但对Ramos没有作用。当去除胞外钙离子时,ATP和BzATP刺激均不能引起U937和HL60细胞胞内钙离子浓度的升高。提示U937和HL60细胞表达P2X7受体的基因和功能蛋白,Ramos细胞则不表达该受体。

SPGL对白血病细胞系HL-60细胞增殖的影响

采用CFU-GM和白血病CFU-L集落培养、白血病HL-60细胞液体培养的方法,观察了光叶海酮总皂甙(SPGL)对正常人骨髓粒-巨噬系造血祖细胞(CFU-GM)和人急性髓系白血病HL-60细胞增殖的影响。结果表明:5 ×10^(-6)-5×10^(-4)mg/ml浓度SPGL能显著抑制HL-60细胞增殖,且具有明显的量-效关系。而对正常人造血祖细胞无明显的细胞毒作用,提示SPGL有抗白血病作用。此结果为进一步研究SPGL提供了实验依据。

应用人白血病细胞系进行抗癌药物筛选

当今,全世界每年有数万个具有潜在抗癌作用的化学物质需要进行筛选,主要采用可移植性小鼠白血病模型P388等进行检测。但小鼠肿瘤模型筛选体系的缺点逐渐暴露,其结果与人体肿瘤细胞间存在一定的差异。为了筛选和寻找新的对人肿瘤细胞更为有效的抗癌药物。

茯苓素对人白血病细胞系HL-60的诱导分化作用

本文报道了茯苓素对人急性早幼粒白血病细胞系HL-60的诱导分化作用。用12.5-100μg/ml茯苓素处理4天,50—80％以上的HL-60细胞获得还原NBT染料的能力。细胞形态及细胞化学反应发生显著变化。溶酶体酶含量显著增加,并获得吞噬乳胶颗粒的能力,分化为单核巨噬样细胞。茯苓素诱导HL-60细胞分化需持续作用48小时以上,诱导分化作用为不可逆性。

三氧化二砷对慢性粒细胞白血病细胞系的作用(英文)

本研究探讨三氧化二砷 (As2 O3)对两种慢性粒细胞白血病 (CML)细胞系有无作用及作用机制。实验选用了两种不同的CML细胞系KU81 2和MEG 0 1及两种其它白血病细胞系U937和PL2 1 ,加入不同浓度的As2 O3(0 .2 ,2和 1 0 μmol/L) ,在不同时间计数活细胞数 ,观察细胞形态 ,并以TUNEL法和DNA凝胶电泳检测细胞有无凋亡的发生 ;同时检测 0 .2 μmol/LAs2 O3作用时细胞表面CD34 ,CD1 3 ,CD33 ,CD1 9,CD1 1b ,CD1 4和CD7的变化 ,并通过RT PCR检测细胞bcr abl水平及caspase 3的变化。研究结果发现 ,不同浓度的As2 O3对 4种细胞系的作用不同 ,1 0 μmol/L时 4种细胞系均会发生细胞凋亡 ,2 μmol/L时则仅CML细胞系KU81 2和MEG 0 1会产生凋亡 ,0 .2μmol/L时 4种细胞系均不发生凋亡。在培养 2 4小时后 ,4种细胞系表面的CD34 ,CD1 3 ,CD33 ,CD1 9,CD1 1b ,CD1 4和CD7等均无明显改变。RT PCR检测bcr abl的水平发现在 2种CML细胞系中无明显改变 ,其caspase 3的活性较对照细胞均有所增加。结论 :As2 O3在较高浓度下可诱导 4种白血病细胞系产生凋亡 ,在 2 μmol/L仅可诱导CML来源的两种细胞系产生凋亡 ,CML细胞系对As2 O3较其它两种细胞系敏感 ,其作用机制与caspase

原始巨核白血病细胞系(HI-Meg)诱导前后sis和mye癌基因表达的研究

我们对巨核细胞分化与癌基因表达的关系进行了初步研究。HI-Meg为原始巨核白血病细胞系,经维甲酸诱导后,该细胞向成熟巨核细胞方向分化。我们检测了C-myc及C-sis两种癌基因在诱导前后的HI-Meg细胞中mRNA表达的改变。结果表明,在诱导后的巨核细胞中,sis表达下降3.82倍,myc表达下降4.54倍,但这两个癌基因表达仍高于在正常淋巴细胞中的水平。本文讨论了这一结果对研究巨核细胞分化与调控及白血病发生的意义。

小鼠淋巴细胞白血病细胞系的建立及其生物学特性的研究(简报)

本研究建立了一种经PHA-脾条件培养液刺激,在体外液体微培养中形成肿瘤干细胞集落,再接种小鼠体内,发病后取细胞在体外连续培养建成白血病细胞系的新方法。采用此法对4株小鼠可移植性白血病细胞进行建系培养,成功地建成了细胞系(L7811-85,L7212-85,L1210-86和P388-86)已分别传代141～29代。对小鼠S180及肝Ca细胞建系也获得成功,表明此方法对小鼠肿瘤细胞建系也有一定的价值。