弓形虫诱导人白血病细胞K562凋亡的实验观察

目的探讨弓形虫对体外培养的人白血病细胞K562(简称K562细胞)有无抑制作用和诱导细胞凋亡作用。方法取培养至对数生长期的K562细胞(浓度为5×10-4/ml和1×10-6/ml)分别接种于96孔培养板(100μl/孔)及50ml培养瓶(1.5ml/瓶)中,加入不同浓度的弓形虫速殖子(1×104、2×104、4×104、8×104及16×104个/ml),作用48h,用四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测其对K562细胞增殖的抑制作用;荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果上述不同浓度弓形虫速殖子作用48h,对K562细胞增殖的抑制率依次为17%、28%、48%、50%及55%。各实验组吸光度(A490)与对照组比较差异均有统计学意义(t=3.606及5.918,P<0.05;t=9.171、7.841、7.067,P<0.01)。荧光显微镜观察实验组培养的K562细胞,出现细胞核固缩及凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳见DNA梯形条带。流式细胞仪检测到细胞凋亡峰(48h),上述不同浓度弓形虫速殖子诱导K562细胞凋亡数分别占总数的5.53%、7.12%、10.34%、21.14%及29.68%。对照组未出现凋亡小体。结论弓形虫速殖子对体外培养K562细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导K562细胞凋亡。

石蒜碱对人白血病细胞K562凋亡作用的研究

为了研究石蒜碱对人白血病细胞K562的凋亡作用,采用MTT法检测石蒜碱对K562细胞的细胞毒作用,数据表明石蒜碱对K562细胞的IC50为16.000μmol/L.流式细胞仪检测石蒜碱对K562细胞凋亡率的影响,数据表明给药剂量越大,其凋亡率越高,凋亡率与给药剂量呈依赖关系.激光共聚焦扫描显微镜检测石蒜碱对K562细胞膜电位的影响,数据表明随着给药剂量增大,膜电位逐渐降低,且成剂量依赖关系.结果显示石蒜碱能够诱导K562细胞凋亡并使其膜电位降低.

PH Ⅱ-7作用于慢性粒细胞白血病细胞k562的机制研究

目的 PH Ⅱ-7是以靛玉红为模板合成的一种抗肿瘤药物,并有显著逆转耐药作用。实验室前期研究发现在人慢性粒细胞白血病k562细胞中,PH Ⅱ-7可与烯醇化酶ENO1相结合。本研究旨在探究PH Ⅱ-7通过ENO1对k562细胞体外抑癌作用机制。方法构建ENO1表达稳定干扰细胞株k562-shENO1和对照细胞株k562-shCON。通过MTT法检测PH Ⅱ-7对k562-shCON和k562-shENO1细胞株的生长抑制作用;通过细胞计数法检测k562-shCON和k562-shENO1细胞株生长差异;采用流式细胞仪测定细胞凋亡水平。采用逆转录PCR,实时荧光定量PCR和免疫印迹技术检测相关基因表达水平。结果通过real-time-PCR和免疫印迹实验验证k562-shCON和k562-shENO1干扰细胞株成功建立。k562-shENO1和k562-shCON细胞株体外生长无显著差异,PH Ⅱ-7对k562-shENO1和k562-shCON细胞株IC50无显著性差异。PH Ⅱ-7可诱导k562-shENO1和k562-shCON细胞株凋亡,并可激活caspase3、caspase9和PARP等凋亡相关蛋白。与k562-shCON相比较,k562-shENO1细胞对高浓度PH Ⅱ-7诱导凋亡作用更敏感。结论烯醇化酶ENO1与PH Ⅱ-7在人慢性粒白血病k562细胞中作用密切相关,干扰ENO1表达能在一定程度上增强PH Ⅱ-7的抑癌作用。

家蝇胚胎细胞抗菌肽对人髓样白血病细胞K562的杀伤作用

目的探讨家蝇胚胎细胞抗菌肽和高三尖杉酯碱(HHT)对人髓样白血病细胞K562的抑制、杀伤作用。方法采用脂多糖诱导家蝇胚胎细胞,提取抗菌肽。采用磷酸盐缓冲液(PBS)配制80、160、320及640μg/mL4个浓度,阴性对照组仅加入PBS和培养基。采用流式细胞术检测不同浓度抗菌肽对K562细胞周期和细胞凋亡率的影响。用处于对数生长阶段的K562和人脐静脉血管内皮细胞制备成浓度相同的2个药物组(HHT组和抗菌肽组),不加入药物的2种细胞作为正常对照组。采用流式细胞术检测正常对照组及2个药物组对2种细胞的有效杀伤率。结果 4个浓度组抗菌肽均使K562的S期降低,增殖指数降低,并引起G0/G1期升高,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。4个浓度组K562细胞凋亡率与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。HHT组和抗菌肽组对K562的有效杀伤率显著升高,HHT组和抗菌肽组与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HHT组对人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率显著高于正常对照组和抗菌肽组(P<0.05)。结论家蝇胚胎细胞抗菌肽能有效抑制肿瘤细胞的生长,对正常人体细胞无抑制、杀伤作用。

蛋白酶体抑制剂MG132的浓度对人白血病细胞K562凋亡的影响

探讨蛋白酶体抑制剂MG132在诱导人白血病K562细胞凋亡过程中作用。分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132处理人白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用AnnexinⅤ和PI双染的细胞流式法检测K562细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,应用酶标仪法检测K562细胞内Caspase-3活性变化的情况。结果表明,随着MG132浓度的增加,各个指标与对照组比较差异均有显著性(P<0.05):K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当MG132浓度为900 nmol/L时,细胞凋亡率达36.5%;同时,ROS水平和caspase-3活性明显升高。因次,蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制人白血病细胞K562增殖并促进其凋亡。

家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K562抑制作用的研究

目的研究家蝇胚胎细胞MDEC-07114抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K562的抑制作用。方法利用脂多糖诱导家蝇胚胎细胞MDEC-07114,提取抗菌蛋白,配制成40、80、160、320和640μg/ml 5个实验组,同时以人脐静脉血管内皮细胞作为正常对照组。采用MTT法测定不同浓度抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K562和人脐静脉血管内皮细胞的抑制作用,流式细胞术观察5种浓度抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K562细胞周期及凋亡的影响。结果①MTT显示5种浓度抗菌蛋白对K562细胞均有明显的抑制作用,而对人脐静脉血管内皮细胞无抑制作用。②流式细胞术显示对K562细胞S期的影响与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。各浓度组均可引起K562细胞的G0/G1期百分比上升,细胞增殖指数PI降低。与阴性对照组相比,各浓度组引起的K562细胞细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对肿瘤细胞具有明显的抑制作用,而对人体正常细胞无抑制作用。家蝇胚胎细胞抗菌蛋白可阻滞K562细胞周期的正常发育。

不饱和硫醚类化合物对人白血病细胞K562的构效关系

构建了不饱和硫醚类化合物对人白血病细胞K562的增殖抑制构效关系。以不饱和溴代烃和硫化物为原料,经亲核取代反应,用相转移催化剂PEG催化合成了一系列不饱和硫醚类化合物;采用MTT法(96孔板)测定系列目标产物对人白血病细胞K562的增殖抑制活性。测定结果表明:烯丙基三硫醚活性最佳,25μM抑制率达67%。

二甲氧雌二醇对白血病细胞K562增殖、凋亡的作用及其机制

目的:研究二甲氧雌二醇(2-ME)对人白血病细胞K562细胞的增殖、凋亡的作用及其机制。方法:分别以不同浓度的2-ME处理白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用Annexin V和PI双染的流式细胞术检测K562细胞凋亡率,应用凝胶蛋白电泳迁移率分析法EMSA检测K562细胞核内NF-KB蛋白的结合活性变化情况。结果:随着2-ME浓度的升高,各项指标与对照组相比较的差异均有统计学意义(P<0.01);K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当2-ME浓度为8μmol·L^(-1)时,细胞凋亡率达64.3%;同时K562细胞核内NF-kappa B的DNA结合活性明显降低。结论:2-ME可显著抑制人白血病细胞K562增殖并诱导其凋亡;2-ME诱导K562细胞凋亡的机制与NF-kappa B蛋白信号通路有关。

青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562凋亡的实验研究

目的观察青蒿琥酯对人白血病细胞株K562抑制增殖和凋亡作用。方法通过MTT显色法观察不同浓度青蒿琥酯对K562的生长抑制作用,通过AnnexinV/PI双标记法检测青蒿琥酯对K562细胞的凋亡诱导作用。结果青蒿琥酯在1～8μgml浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性;在2～8μgml浓度范围内青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡具有明显的量效关系;4μgml浓度组的青蒿琥酯在0～72h内,诱导K562凋亡具有明显的时效关系。结论青蒿琥酯在体外能抑制K562细胞的增殖,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用。

土贝母苷甲诱导人红白血病细胞K562凋亡

用MTT法检测苷甲对K562细胞生长的抑制作用,分别采用形态学方法(光学显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜)检查在苷甲作用下K562细胞形态的变化以及用流式细胞术观察在苷甲作用下K562细胞凋亡及周期变化的情况.结果显示:苷甲抑制K562细胞的生长,其24、48、72h的IC50值分别为19.7、18.5、15.9μmol/L.苷甲诱导K562细胞出现典型凋亡细胞的形态学特征.20μmol/L苷甲作用K562细胞6 h,流式细胞仪即检出亚倍体峰,G2/M期细胞增多.随着作用时间延长,细胞被阻滞于G2/M期更加明显,细胞的凋亡率也增加.该实验证明:苷甲能抑制K562细胞的生长,把细胞阻滞在G2/M期并诱导细胞发生凋亡.

NKG2D配体介导耐药白血病细胞K562／AO2免疫逃逸的机制研究

白血病细胞对化疗药物耐药是白血病细胞残留的可能机制之一，这些耐药的白血病细胞在病程中获得特殊的免疫表型，从而逃避免疫细胞的识别和杀伤。研究表明免疫细胞可以通过NKG2D受体和配体的相互作用介导对肿瘤细胞的识别和杀伤，降低肿瘤细胞表面NKG2D配体的表达可以逃避免疫细胞的免疫监督。

胡椒碱诱导人红白血病细胞株K562的分化

背景与目的:白血病是一种血液系统的恶性肿瘤,诱导分化是治疗白血病非常有效的方法之一。胡椒碱(piperine)是一种从胡椒属植物中提取的生物碱,具有镇静、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性。本研究旨在探讨胡椒碱对K562细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法:采用台盼蓝染色计数法绘制生长曲线和流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,观察胡椒碱对K562细胞增殖的影响;通过观察细胞形态学变化、检测硝基蓝四氮唑(nitroblue tetrazolium,NBT)还原能力、流式细胞术检测细胞表面标志CD33和CD14的变化,探讨胡椒碱对K562细胞的诱导分化作用。结果:20μmol/L和40μmol/L胡椒碱可诱导K562细胞向巨噬细胞和单核系细胞分化。40μmol/L胡椒碱作用3d,K562细胞的NBT还原阳性率由(8.5±1.9)%上升到(76.7±5.3)%;20μmol/L胡椒碱作用3d,流式细胞术结果显示细胞表面分化抗原CD33的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)下降42.05%(P<0.01),而CD14的MFI则升高了1倍(P<0.01);20μmol/L以上浓度的胡椒碱对K562细胞的增殖具有抑制作用,其抑制作用随时间的延长或剂量的增加有增强的趋势。结论:胡椒碱可诱导K562细胞向巨噬和单核系细胞分化。

γ射线对白血病细胞株K562中MMP-2表达的影响及牛磺酸的防护作用

目的 探讨γ射线对白血病细胞中MMP - 2表达的影响 ,以及从细胞水平初步探讨牛磺酸对肿瘤细胞受辐照后MMP - 2表达的抑制作用。方法 6 0 Coγ射线 1 5Gy照射白血病细胞K562作为阳性对照组 ,不照射的作为阴性对照组 (1 -不加药 ,2 -加药 2 0 0mg/L) ,另设三组实验组 (照射 ,加药量分别为 50mg/L、1 0 0mg/L、2 0 0mg/L) ,照后 1 2h收集 ,细胞经处理后采用Western blotting技术分析各组细胞MMP - 2的表达水平。结果 1 5Gy照射剂量阳性对照组细胞MMP - 2表达量明显增加 ,阴性对照组 1中MMP - 2表达量较少 ,实验组细胞MMP - 2表达量随剂量增加而依次减少 ,其中 2 0 0mg/L组与阴性对照组 1细胞MMP - 2表达量基本一致。结论 1 5Gy6 0 Coγ射线照射促进白血病细胞K562中MMP - 2表达 ,电离辐射可引起肿瘤细胞的进一步侵袭和转移 ;加不同剂量牛磺酸后对MMP - 2表达有抑制作用 ,且与剂量呈相关性 。

伊马替尼与（-）棉酚联合应用增强人慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡作用

目的：慢性粒细胞白血病慢性粒细胞白血病细胞中Bcr—Abl酪氨酸激酶可导致Bcl—xL的表达增高，将Bcr—Abl酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼与Bcl—xL抑制剂（-）棉酚联合应用，观察对Bcr—Abl阳性的白血病细胞K562的影响。方法1．MTT法检测白血病细胞的生长抑制。2．荧光显微镜观察凋亡细胞。3．DNA断裂片段形成检测细胞凋亡：4．流式细胞仪技术检测凋亡比率。结果：（-）棉酚单用在20μmol／L可导致K562细胞凋亡；0．5μmol／L伊马替尼与5μmol／L（-）棉酚合用导致细胞凋亡。结论伊马替尼与（-）棉酚合用导致K562细胞凋亡的作用增强，为进一步的机理探讨和将来临床上联合应用伊马替尼与（-）棉酚治疗慢性粒细胞白血病提供实验依据。

超声体外诱导白血病细胞K562凋亡的研究

目的研究超声对诱导白血病细胞K562凋亡的作用,为超声治疗的临床应用提供实验依据。方法以人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562为研究对象,用频率为1.8MHz的超声波辐照白血病细胞K562,用光学显微镜观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果超声辐照K562细胞后24h,8mV×5min组及8mV×10min组细胞凋亡率分别为2.3%和8.28%;10mV×5min及10mV×10min组细胞凋亡率分别为9.36%和21.46%。电压为7mV时,超声辐照K562细胞后0.5h,1h,3h,5h细胞凋亡率分别为1.9%,3.6%,5.7%,7.7%。同时光学显微镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变。结论超声可以诱导白血病K562细胞凋亡。

芒果甙对白血病K562细胞端粒酶活性和凋亡的影响

目的:探讨芒果甙对K562细胞端粒酶活性及凋亡的影响,以进一步研究芒果甙抗白血病作用的分子机制。方法:用光学显微镜及透射电镜观察经芒果甙作用后K562细胞具有的凋亡形态学改变;采用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;采用多聚酶链式反应-酶联免疫测定法(PCR-ELISA)检测白血病细胞端粒酶活性。结果:芒果甙能抑制K562细胞端粒酶活性,随药物浓度增加和利用时间的延长,其抑制作用增强;并能诱导K562细胞凋亡,使Fas蛋白水平上调。结论:芒果甙能显著抑制K562细胞端粒酶活性,其作用可能与诱导细胞凋亡有关。在此过程中,Fas也可能参与了细胞凋亡的调节。

芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A、细胞周期素B1表达的影响

目的:观察芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A(CyclinA)、细胞周期素B(CyclinB1)表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法:应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,用RT-PCR方法检测Cyclin A及Cyclin B1 mRNA表达水平。结果:芒果苷作用24 h后,K562细胞G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性;Cyclin A mRNA和Cyclin B1 mRNA的表达随作用浓度的增加而逐渐增强,呈显著的剂量依赖性。结论:芒果苷阻滞白血病K562细胞周期于G2/M期,明显上调K562细胞Cyclin A和Cyclin B1 mRNA表达水平,芒果苷诱导K562细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。

四物合剂对人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用研究

目的 :观察四物合剂对人红白血病细胞株K5 6 2 /ADM多药耐药性的逆转作用。方法 :以维拉帕米为阳性对照 ,MTT法观察耐药细胞株K5 6 2 /ADM的耐药倍数及四物合剂的逆转倍数 ;采用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)检测细胞内的ADM浓度 ;免疫荧光法测定细胞膜P 糖蛋白 (Pgp)表达。结果 :四物合剂和ADM合用时 ,对K5 6 2 /ADM耐药性的逆转倍数及细胞内的ADM含量比ADM单独使用时明显增高 (P <0 .0 1) ;但对K5 6 2 /ADM细胞膜Pgp表达的影响差异不显著 (P >0 .0 5 )。结论 :四物合剂在无毒性剂量时能逆转细胞株K5 6 2 /ADM对ADM的耐药性 ,但对细胞膜Pgp表达影响不大 ,其逆转作用可能与降低Pgp药物外排作用。

蒜头果蛋白对人白血病K562细胞体外生长的抑制作用

从蒜头果种子中提取蒜头果蛋白并测定其对人白血病K562细胞体外生长的抑制作用。结果表明,蒜头果蛋白具有明显抑制K562细胞体外增殖的作用,且存在时间和剂量依赖性,其半数抑制浓度IC50值为1.58×10-8mol·L-1。蒜头果蛋白与顺铂联用表现出了明显的协同抑制效应,两药联用效应会增加。此外,蒜头果蛋白的热稳定性较好,非常便于贮存。本文为蒜头果蛋白在肿瘤治疗方面的开发利用提供依据和思路,也为该蛋白作为新药的研发奠定基础。